专利名称：低分子肝素铁纳米颗粒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及到一种低分子肝素铁纳米颗粒生物制品。本发明还涉及该低分子肝素铁纳米颗粒的制备方法。
背景技术：
肝素是一类糖胺聚糖，由糖醛酸和葡萄糖胺以1 — 4糖苷键连接起来的重复二糖单位组成的多糖链的混合物。肝素通过结合抗凝血酶III (AT-III)高效的抑制凝血酶，从而延缓血液凝固防治血栓形成，促使血栓溶解。肝素的分子量约3000 15000，平均16000。低分子肝素(LMWH)分子量低于 6000 10000，LMWH具有选择性抗凝血因子X a活性的作用，对凝血酶及其他凝血因子无明显影响。而普通肝素其抗凝作用主要是与AT- III结合，加速AT- III对凝血因子的灭活作用， 使凝血酶因子II a、X a灭活，并抑制因子IX a、XI a、XH a和VDI a的活性，对因子X a也有直接抑制作用，但作用较弱。LMWH与普通肝素比较，其半衰期较长，抗血栓效果好，而抗凝出血倾向较弱，有取代普通肝素的趋势。近年临床常用的有达肝素钠(法安明)、依诺肝素钠 (克赛)、低分子肝素钙(速避凝、那屈肝素钙)。临床常用的肝素和LMWH，需要每天多次的给药，给住院、非住院病人用药带来不便，如果一次给药，药效能够持续数天，那将带来巨大的经济和社会效应。纳米颗粒具有比表面积大，具有良好的缓释功能；纳米粒径小于200nm以下，体内细胞对纳米颗粒的吞噬作用明显下降，同时纳米颗粒kta电位为负值时，也不利于吞噬细胞对纳米颗粒的吞噬，有利于纳米颗粒在机体内长时间存在。低分子肝素纳米颗粒将有利于药物在体内的缓慢释放，可以有效的减少给药次数和延长给药时间。LMWH是富含硫酸根的带负电荷的直链生物大分子化合物，精确结构还不清楚，一般认为它是由α -L-艾杜糖醛酸-2-硫酸酯、N-磺基-α -D-氨基葡萄6_硫酸酯、β -D-葡萄醛酸和N-磺基-α -D-氨基葡萄糖-6-硫酸酯由糖苷键连接成“四糖”作为结构单元，再由“四糖”聚合成多糖。在一个LMWH分子上就含有大量的羧基、羟基、氨基、磺酸基等基团。铁离子是机体必需的微量元素，对机体无毒副作用。一个铁离子和六个水分子形成配合物，向水合铁离子中加入碱(Off)能够中和电离出来的氢离子(H+)，配位的水分子就相应的分解，从而在铁离子上产生更多的羟基使溶液变深。本实验将NaOH溶液缓慢加入 FeCl3溶液中，按摩尔比!^3+ OH-=I 2混合后，形成二羟基铁(III)离子([Fe (OH)2]+) 溶液(缩写为 DHOF)。其水解方程式为[Fe (H2O) 6] 3+20H_ = [Fe (OH) 2 (H2O) 4] ++2H20。带正电荷的DHOF能够和肝素分子中的磺酸根、羧酸根结合，通过离子键形成难解离的铁盐；铁离子能够提供多个空轨道，可以和多个提供孤对电子的配体通过配位键形成螯合物，所以DHOF还能够与肝素分子中提供孤对电子的基团(羧基、磺酸基、羟基、氨基) 通过静电力、配位键结合，形成LMWH/DHOF螯合物
发明内容
本发明提供的是低分子肝素纳米缓释颗粒，通过以二羟基铁(简称DH0F)为交联齐U，利用低分子肝素(简称LMWH)含有大量羟基、羧基、胺基和硫酸根等基团，通过静电吸附、配位键、离子键作用力，在一定的条件下形成具有优良的缓释性能的纳米颗粒。本发明提供的低分子肝素纳米缓释颗粒具有以下特点纳米颗粒为矩形纳米晶体，平均粒径在100纳米以内，Zeta电位约在_19mV _35mV之间，包封率在25% 93%。目前有文献报道普通肝素铁纳米颗粒的制备，但是与我们制作的纳米颗粒使用的物质，纳米颗粒的制作方法、纳米颗粒的形态和粒径，纳米颗粒的^ta电位都有很大的差已升。本发明还发现，Zeta电位和包封率随加入不同的量的DHOF而改变。本发明提供的是低分子肝素纳米缓释颗粒的制作方法，步骤如下A. DHOF溶液的配置用去离子水溶解!^eCl3 ·6Η20;在磁力搅拌的条件下，按!^3+ 0Η_摩尔比1 2， 将NaOH溶液缓慢滴入FeCl3溶液中，再加入适量的水调整DHOF的浓度，制备ρΗ值3. 0质量浓度在1 20g/L之间的DHOF溶液；B. LMWH溶液的配制低分子肝素钠溶解到去离子水中，质量浓度在1 20g/L之间，并在低分子肝素钠溶液中加入氯化钠，使氯化钠的浓度在1 5g/L之间；C.低分子肝素铁纳米颗粒的制作在超声震荡的条件下，DHOF与LMWH按一定质量按一定质量比例0. 2 2，将DHOF 溶液加入到LMWH溶液中，并在超声震荡条件下置放10-30分钟；D、低分子肝素铁纳米溶液中加入冻干粉辅料，制备成冻干粉保存。在上述制备步骤中，DHOF与LMWH在离子键、配位键、和静电吸附等的作用力的作用下，形成纳米晶体颗粒。上述方法中将DHOF与LMWH混合时，采用超声振荡是形成合格纳米粒径的关键因素之一。如果采用通常的搅拌方式，则达不到要求的粒径。本发明提供的是具有优良缓释功能的低分子肝素纳米颗粒的制备方法，通过此方法可以获得能够在体内缓慢释放LMWH的低分子肝素铁纳米颗粒，该药物能够有效地减少肝素的给药时间和给药次数。
图1低分子肝素铁纳米颗粒粒径检测2低分子肝素铁纳米颗粒zeta电位检测3低分子肝素铁纳米颗粒扫描电镜图片图4低分子肝素铁纳米颗粒与低分子肝素钠傅立叶红外吸收光谱图
具体实施例实施例1低分子肝素铁纳米颗粒的制备与检测方法⑴配制二羟基(III)铁离子(DHOF)溶液
DHOF溶液质量浓度在1 20g/L，其中在5 10g/L之间比较合适。用去离子水将!^eCl3 ·6Η20溶解到所需浓度的两倍；再按摩尔数!^e OH = 1 2称量NaOH的量，用同样体积的去离子水溶解。在磁力搅拌的条件下，将NaOH溶液缓慢滴入!^eCl3溶液中，配成 ρΗ值3. 0 二羟基(III)铁离子溶液。(2)低分子肝素(简写为LMWH)溶液的配制LMWH的质量浓度在1 20g/L，其中在5 10g/L之间比较合适。并在LMWH溶液中加入氯化钠，氯化钠的浓度在1 5g/L。(3)低分子肝素铁纳米颗粒的制备在常温超声震荡条件下，按DHOF与LMWH的质量比分别为0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0、 1. 2、1. 4、1. 6、2. 0比例，将DHOF溶液快速均勻加入到LMWH溶液中，超声震荡10 30分钟。(4)低分子肝素铁纳米颗粒检测取2ml纳米溶液分别行纳米粒径和zeta电位检测。将纳米溶液经HOOOrpm高速离心45分钟后，将上清液稀释500倍，用甲苯胺蓝比色法检测上清液中残余LMWH的含量，计算纳米颗粒的包封率。将离心后的沉淀物自然干燥后Nova NanoSEM230扫描电镜检测。结果扫描电镜显示低分子肝素铁颗粒呈矩形纳米结构。纳米颗粒平均粒径低于100nm，zeta电位为负值。随着加入DHOF量的增加，zeta电位逐渐增大，包封率增加；当质量比DH0F/LMWH低于1. 2时，形成纳米颗粒平均粒径低于IOOnm ；当质量比DH0F/LMWH钠大于1.2时，出现微米级颗粒(其结果见表1)。颗粒径和zeta电位分别见附图1、附图2， 扫描电镜检测结果见附图3。表1不同量的DHOF对低分子肝素铁纳米颗粒粒径、zeta电位以及其包封率的比较
权利要求
1.低分子肝素纳米缓释颗粒，其特征在于纳米颗粒为矩形纳米晶体，平均粒径在100 纳米以内，Zeta电位约在-19mV _35mV之间，包封率在25% 93%。
2.低分子肝素纳米缓释颗粒的制作方法，其特征在于包括如下步骤 DDHOF溶液的配置用去离子水溶解!^eCl3 ·6Η20;在搅拌条件下，按!^3+ 0Η_摩尔比1 2，将NaOH溶液缓慢滴入I^eCl3溶液中，再加入适量的水调整DHOF的浓度，制备ρΗ值3. 0浓度在1 20g/ L之间的DHOF溶液；2)LMWH溶液的配制低分子肝素钠溶解到去离子水中，质量浓度在1 20g/L之间，并在低分子肝素钠溶液中加入氯化钠，使氯化钠的浓度在1 5g/L之间。3)低分子肝素铁纳米颗粒的制作在超声震荡的条件下，DHOF与LMWH按一定质量比例0. 2 2，将DHOF溶液快速均勻加入到LMWH溶液中，并在超声震荡条件下置放10 30分钟；4)低分子肝素铁纳米溶液中加入一定量的冻干粉辅料制备成冻干粉保存。
全文摘要
本发明涉及到一种低分子肝素铁纳米颗粒生物制品。本发明还涉及该低分子肝素铁纳米颗粒的制备方法。本发明提供的是具有优良缓释功能的低分子肝素纳米颗粒的制备方法，通过此方法可以获得能够在体内缓慢释放LMWH的低分子肝素铁纳米颗粒，该药物能够有效地减少肝素的给药时间和给药次数。
文档编号A61K9/14GK102475686SQ20101056347
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月29日 优先权日2010年11月29日
发明者吴忠仕, 陶运明 申请人:吴忠仕, 陶运明