专利名称：多棘海盘车多糖提取物的制备方法及其医药用途的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及多棘海盘车多糖提取物的制 备方法及其医药用途。本发明产品可提高肝脏中谷胱甘肽(GSH)的含量，提高肝脏解毒能 力，具有保护肝脏作用，本发明产品适合工业化生产。
背景技术：
多棘海盘车(Asterias amurensis)为棘皮动物门(Echinodermata)，海星纲 (Asteroidea)，钳棘目(Forcipulata)，海盘车科(Asteriidae)，是我国北方海域的主要品 种，具有平肝和胃、止痛、镇惊等功效。威海近几年海星屡次泛滥(主要为多棘海盘车)，严 重危害贝类养殖，因此开发利用海星资源，具有巨大的经济和社会效益。海星中皂苷、甾醇 等活性物质已被深入研究，但目前对海星中多糖类物质的研究较少。多糖是一种广谱的生 物效应调节剂，其来源广泛，具有抗氧化、调节免疫等多种生物活性。谷胱甘肽是在动物机 体内有效的自由基清除剂，可以保护细胞免受活性氧复合物的损伤，肝脏中的谷胱甘肽具 有解毒作用，具有保护肝脏作用，能与毒素(如自由基、重金属)等结合，参与生物转化作 用。谷胱甘肽还与免疫反应中一些重要的细胞因子关系密切。例如白细胞三烯是重要的炎 症介质，它在淋巴细胞增殖等免疫过程中发挥重要作用，有研究证明谷胱甘肽参与白细胞 三烯的合成过程。实验结果表明，多棘海盘车多糖(AAP)可以增加肝脏中谷胱甘肽含量，提 高肝脏解毒能力，具有保护肝脏作用。
发明内容
1、多棘海盘车多糖提取物的制备方法，其特征在于包括以下过程步骤(一)取多棘海盘车去除内脏，体壁干燥，粉碎过60目筛，粉末用乙醇在渗 漉装置中渗漉，得滤渣；步骤(二)将步骤(一)中的滤渣加入0. lmol/L NaOH溶液中，室温搅拌过夜， 离心，得上清液；步骤(三)将步骤(二)中的上清液调pH至7.0，加入枯草杆菌中性蛋白酶 酶解过夜，离心，得上清液；步骤(四)将步骤(三)中的上清液调pH至8. 0，加入5%双氧水，50°C脱色至 浅黄色，减压浓缩，得浓缩液；步骤(五)将步骤(四)中的浓缩液用kvage试剂除蛋白2次，再加入无水乙 醇，离心，得沉淀；步骤(六)将步骤(五)中的沉淀减压干燥，粉碎，得到粉末状的多棘海盘车多 糖提取物。2、权利要求1所述的多棘海盘车多糖提取物的用途，其特征在于可提高肝脏中谷 胱甘肽(GSH)的含量，提高肝脏解毒能力，具有保护肝脏作用。根据本发明，本发明中的“ ％ ”是重量百分比。
具体实施例方式本发明所述的涉及多棘海盘车多糖提取物的制备方法及其医药用途包括以下实 施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1 步骤(一)取多棘海盘车去除内脏，体壁干燥，粉碎过60目筛，IOOOg粉末用 4000mL乙醇在渗漉装置中渗漉，得滤渣；步骤(二)将步骤(一)中的滤渣加入5000mL 0. lmol/L NaOH溶液中，室温搅 拌过夜，离心，得上清液；步骤(三)将步骤(二)中的上清液调pH至7.0，加入枯草杆菌中性蛋白酶 酶解过夜，离心，得上清液；步骤(四)将步骤(三)中的上清液调pH至8.0，加入5%双氧水，50°C脱色至 浅黄色，减压浓缩，得浓缩液；步骤(五)将步骤(四)中的浓缩液用kvage试剂除蛋白2次，再加入5倍量 无水乙醇，离心，得沉淀；步骤(六)将步骤(五)中的沉淀减压干燥，粉碎，得到粉末状的多棘海盘车多 糖提取物。多棘海盘车多糖提取物可提高肝脏中谷胱甘肽(GSH)的含量，提高肝脏解毒能 力，具有保护肝脏作用。实施例2:步骤(一)取多棘海盘车去除内脏，体壁干燥，粉碎过60目筛，800g粉末用 3200mL乙醇在渗漉装置中渗漉，得滤渣；步骤(二)将步骤(一)中的滤渣加入4000mL 0. lmol/L NaOH溶液中，室温搅 拌过夜，离心，得上清液；步骤(三)将步骤(二)中的上清液调pH至7.0，加入枯草杆菌中性蛋白酶 酶解过夜，离心，得上清液；步骤(四)将步骤(三)中的上清液调pH至8. 0，加入5%双氧水，50°C脱色至 浅黄色，减压浓缩，得浓缩液；步骤(五)将步骤(四)中的浓缩液用kvage试剂除蛋白2次，再加入4倍量 无水乙醇，离心，得沉淀；步骤(六)将步骤(五)中的沉淀减压干燥，粉碎，得到粉末状的多棘海盘车多 糖提取物。多棘海盘车多糖提取物可提高肝脏中谷胱甘肽(GSH)的含量，提高肝脏解毒能 力，具有保护肝脏作用。药理试验多棘海盘车多糖提取物提高肝脏解毒能力的试验1材料与仪器1.1试验样品自制多棘海盘车多糖(ΑΑΡ)。1.2实验动物清洁级昆明种小鼠，购自山东绿叶制药有限公司，合格证号SCXK (鲁)20090009，体重18 22g，雌雄兼用。环境温度(22士2)°C，在12h光照周期的动 物室内饲养，自由饮水、进食，适应性饲养1周后用于本试验。1.3试剂与仪器谷胱甘肽(GSH)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号分 别为 20110302,20110119 ；黄芪多糖(Astragalus Polysacharin, APS)由山东大学威海分 校海洋学院生药学实验室提供，批号20110227，含量为60. 1% ；其余试剂均为国产分析纯。 PL303型分析大平(METTLER-T0LED0仪器(上海)有限公司)，752型紫外可见分光光度计 (上海光谱仪器有限公司)，MC0-15AC型(X)2培养箱(SANYO)。2 方法2. 1动物分组与给药方法分别以蒸馏水配制黄芪多糖(APS)、多棘海盘车多糖 (AAP)低、中、高剂量的溶液。昆明种小鼠随机分为5组，每组10只多棘海盘车多糖(AAP) 低、中、高剂量组，分别ig 50,100,200!^.! 1剂量的(AAP)；黄芪多糖(APS)阳性对照组， ig IOOmg · kg—1剂量的APS ；空白对照组，ig相同体积的蒸馏水。每日给药1次，连续7d。2. 2多棘海盘车多糖(AAP)对小鼠肝脏谷胱甘肽含量的影响小鼠处死后，解剖取 肝脏，制成10%勻浆，按照谷胱甘肽试剂盒说明书测定肝脏谷胱甘肽含量。3 结果多棘海盘车多糖(AAP)对小鼠肝脏解毒能力的影响见表1。表1多棘海盘车多糖(AAP)对小鼠肝脏解毒能力的影响
权利要求
1.多棘海盘车多糖提取物的制备方法，其特征在于包括以下过程步骤(一)取多棘海盘车去除内脏，体壁干燥，粉碎过60目筛，粉末用乙醇在渗漉装 置中渗漉，得滤渣；步骤(二)将步骤(一)中的滤渣加入0. lmol/L NaOH溶液中，室温搅拌过夜，离心， 得上清液；步骤(三)将步骤(二)中的上清液调PH至7.0，加入枯草杆菌中性蛋白酶酶解 过夜，离心，得上清液；步骤(四)将步骤(三)中的上清液调PH至8.0，加入5%双氧水，50°C脱色至浅黄 色，减压浓缩，得浓缩液；步骤(五)将步骤(四)中的浓缩液用kvage试剂除蛋白2次，再加入无水乙醇，离 心，得沉淀；步骤(六)将步骤(五)中的沉淀减压干燥，粉碎，得到粉末状的多棘海盘车多糖提 取物。
2.权利要求1所述的多棘海盘车多糖提取物的用途，其特征在于可提高肝脏中谷胱甘 肽(GSH)的含量，提高肝脏解毒能力，具有保护肝脏作用。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及多棘海盘车多糖提取物的制备方法及其医药用途。取多棘海盘车去除内脏，体壁干燥，粉碎过60目筛，粉末用乙醇在渗漉装置中渗漉，滤渣加入0.1mol/LNaOH溶液中，室温搅拌过夜，离心，上清液调pH至7.0，加入1％枯草杆菌中性蛋白酶酶解过夜，离心，调pH至8.0，加入5％双氧水，50℃脱色至浅黄色，减压浓缩，浓缩液用Sevage试剂除蛋白2次，再加入无水乙醇，离心，沉淀减压干燥，粉碎，得到粉末状的多棘海盘车多糖提取物。本发明产品可提高肝脏中谷胱甘肽(GSH)的含量，提高肝脏解毒能力，具有保护肝脏作用，本发明产品适合工业化生产。
文档编号A61K35/56GK102138939SQ201110083408
公开日2011年8月3日 申请日期2011年3月28日 优先权日2011年3月28日
发明者刘铁铮, 吴泽华, 张崇禧, 王桂春, 王韶莉, 褚福龙, 郭爱洁 申请人:山东大学威海分校