专利名称：鲎素肽在制备抗血栓药物和保健品的应用及其制备方法
技术领域：
本发明属于一种鲎素肽(tachyplesin)在制备抗血栓药物和保健品的应用及其制备方法。
背景技术：
血栓性疾病是一种常见病，常表现为心肌梗死、缺血性脑梗死、静脉血栓栓塞。每年每千人中有ι 3人发生不同形式的血栓性疾病，这是一类严重影响健康的疾病。目前临床上治疗血栓性疾病的药物主要分为抗血小板类药物、抗凝血药物和溶血栓药物。抗血小板类药物具有抑制血小板的粘附、聚集和释放功能，从而防止血栓形成。抗血小板药物可以有效地防止心血管疾病的发生，并可延长患者的生存期，抗血小板药物在临床应用日益广泛。从天然活性物质中寻找新的抗血小板药物是筛选新型抗血小板聚集药物或药物前体的一个重要策略。鲎也称马蹄蟹，属肢口纲(Merostomata)剑尾目(Xiphosura)的海洋节肢动物，共 4种，分布于亚洲和北美东海岸，具有很高的药用价值。鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否感染细菌；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。鲎的肉、卵均可食用，其壳、 尾、卵、肉和血均可入药。鲎素肽来源于鲎血细胞提取物，是含有17个氨基酸残基的多肽，氨基酸序列NH 2-k-w-c-f-r-v-c-y-r-g-i-c-y-r-r-c-r-conh2。含两对二硫键第三位半胱氨酸残基与第十六个半胱氨酸残基，第七位半胱氨酸残基与第十二个半胱氨酸残基各形成一对二硫键。 化学性质稳定，耐高温。各种研究资料显示鲎素肽具有强烈抗菌作用，抑制革兰氏阴性菌， 革兰氏阳性菌，真菌生长，同时还发现鲎素具有抗肿瘤作用，国内外均有文献报道对白血病细胞，肺癌细胞，肝癌细胞，胃癌细胞具有抑制作用，毒副作用低。我们用自己建立的提取纯化方法从鲎血细胞或鲎试剂生产废料中纯化鲎素肽，并发现获得的鲎素肽具有显著的抗血小板聚集，延长出血时间及凝血时间，防止血栓形成的功效。经检索发现，目前暂无文献报道鲎素肽抗血栓的功能，在国内外均未发现用鲎血细胞来源的鲎素肽作抗血栓药物或保健品使用的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鲎素肽的新用途抗血小板聚集，抗血栓。这种鲎素肽可用鲎血细胞或鲎试剂生产废料制备，这种多肽能够显著地抑制血小板聚集，防止血栓形成。本发明的另一目的是提供一种鲎素肽的制备方法。为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案是鲎素肽在制备抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品中的应用，或作为抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品组分，或利用鲎素肽作为抗血小板聚集、抗血栓药物前体改造。
鲎素肽的制备方法，其工艺步骤如下(1)从鲎血细胞的裂解产物或鲎试剂生产的废料中用20mmol/L HCl溶液勻浆制备成粗制液；(2)将步骤(1)所得粗制液用8000转/分钟离心15分钟，收集上清液，将上清液用三层纱布过滤，用葡聚糖G-50(S印hadex G-50) (1. 5cmX90cm)分离，20mmol/L HCl溶液洗脱，流速1. OmL/分钟，洗脱峰有三组，收集第三组洗脱产物，调节溶液至pH6. 0 7. 0， 10000转/分钟离心15分钟，上清液冷冻干燥备用；经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实是单一电泳条带，分子量约在2KDa。鲎素肽具有很好的抗血小板聚集，延长出血时间(BT)和凝血时间(CT)的作用，本发明可以用于涉及利用该成分制备抗血栓的药物或药物组分或药物前体。抗血栓实验过程简介1.鲎素肽对全血血小板聚集的影响兔血用塑料管收集和用A⑶(86mmol/L柠檬酸钠，lllmmol/L葡萄糖，53mmol/L 柠檬酸)0. 15体积比抗凝，取全血0. 5ml与药物孵育5分钟，然后用凝血酶(500U/L)或 20ymol/L腺苷二磷酸(ADP)处理，用全血血小板聚集仪记录聚集情况，记录数据。实验数据进行t检验。表1.鲎素肽对凝血酶诱导的兔全血血小板聚集的影响(n = 4)
权利要求
1.鲎素肽在制备抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品中的应用。
2.鲎素肽在制备抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品组分的应用。
3.鲎素肽在作为抗血小板聚集、抗血栓药物的前体改造中的应用。
4.一种鲎素肽的制备方法，其工艺步骤如下(1)从鲎血细胞的裂解产物或鲎试剂生产的废料中用20mmol/LHCl溶液勻浆制备成粗制液；(2)将步骤(1)所得粗制液用8000转/分钟离心15分钟，收集上清液，将上清液用三层纱布过滤，用葡聚糖G-50分离，20mmol/L HCl溶液洗脱，流速1. OmL/分钟，洗脱峰有三组，收集第三组洗脱产物，调节溶液至PH6. 0 7. 0，10000转/分钟离心15分钟，上清液冷冻干燥备用；经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实是单一电泳条带，分子量约在 2KDa。
5.根据权利要求4所述鲎素肽的制备方法，其特征在于所述葡聚糖G-50的层析柱长 90厘米，直径1.5厘米。
全文摘要
本发明属于一种鲎素肽在制备抗血栓药物和保健品的应用及其制备方法。鲎素肽在制备抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品中的应用，或作为抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品组分，或利用鲎素肽作为抗血小板聚集、抗血栓药物前体改造。这种鲎素肽用鲎血细胞或鲎试剂生产废料制备，能够显著地抑制血小板聚集，防止血栓形成，具有很好的抗血小板聚集，延长出血时间(BT)和凝血时间(CT)的作用。
文档编号A61K38/10GK102188691SQ20111010133
公开日2011年9月21日 申请日期2011年4月19日 优先权日2011年4月19日
发明者刘 文, 张海涛 申请人:广东医学院