专利名称：吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及其制备的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种吸附无细胞百日咳、白喉、破伤风和Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗及其制备工艺，属于医学生物技术领域。
背景技术：
百日咳是由百日咳杆菌引起的小儿呼吸道传染病，传染性很强。临床特征为咳嗽逐渐加重、呈阵发性痉挛性咳嗽，未经治疗的病人，病程可延续2 3月，百日咳病是影响儿童健康和导致死亡的主要疾病之一，在未实行计划免疫前，5岁以下儿童发病率达到 20-60%。白喉是由白喉杆菌引起的急性呼吸道传染病，以咽、喉等处粘膜充血、肿胀并有灰白色伪膜形成为突出临床特征，严重者可引起心肌炎与末梢神经麻痹。因呼吸道堵塞和心脏衰竭的致死率高达10%。破伤风是由破伤风杆菌侵入伤口，并在伤口内繁殖、分泌毒素而引起的急性特异性感染，主要表现为全身或局部肌肉的持续性收缩和阵发性痉挛。破伤风杆菌是一种革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌，广泛存在于泥土、粪便之中，对环境有很强的抵抗力。破伤风杆菌主要通过其在繁殖过程中所产生的外毒素对人体造成危害的，外毒素分为痉挛毒素和溶血毒素两种，前者对人体神经有特别亲和力，会引起全身横纹肌群的紧张性收缩和阵发性痉挛；后者则会引起组织局部坏死和心肌损害，死亡率高达10-20%。自二十世纪70年代后期实施计划免疫后，全菌体百白破(Daphtheria Tetanus and whole Pertussis Combined Vaccine，，简称DTwP)联合疫苗覆盖率大大提高。近年来，吸附无细胞白百破联合疫苗(Diphtheria, Tetanus and acellular Pertusis Combined Vaccine, absorbed，简称DTaP)，因具有良好的免疫原性和安全性，而广泛用于儿童的预防接种。 DTaP是经培养，提纯百日咳抗原成分、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素，用氢氧化铝吸附制成，DTaP联合疫苗的人群血清学效果和人群保护率与DTwP疫苗相近，副反应明显低于 DTwP疫苗。随着免疫规划工作的深入开展，2007年中国政府将DTaP纳入国家免疫规划， 以取代DTwP常规免疫。脊髓灰质炎(WPV)是由脊髓灰质炎病毒I、II、III型引起的传播广泛且危害极大的急性传染病，能侵袭任何年龄段人群，但主要是3岁以下的儿童(占所有病例的50%)，严重造成肢体不可逆转的麻痹甚至死亡。在疫苗问世前，该病在全世界范围内流行。50年代中后期，美国的两位科学家Mlk和Sabin先后研制成功脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated Poliovirus Vaccine,，简称IPV)和口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(Oral Poliovirus Vaccine，简称0PV)。从此人们有了预防和消灭脊髓灰质炎的有力武器，实践证明这两种疫苗都是安全有效的。世界卫生组织(World Health Organization, WHO) 1988年发起全球范围内消灭脊髓灰质炎的倡议，此后，消灭脊髓灰质炎的活动在降低脊髓灰质炎的发病率和减少脊髓灰质炎病毒的传播范围方面都取得了重大进展。2007年1月 2008年6月，16个国家从AFP病例的粪便标本中检测到野毒株(wPV)，只检测到wPVI型和wPVIII型，自1999年以来在全球范围内未检测到wPVII型，这些进步的取得归功于全世界共同实施的消灭脊髓灰质炎策略。在全球消灭脊髓灰质炎(wPV)行动中，口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(。PV)得到广泛应用，已大幅度降低全球脊髓灰质炎的发病率。然而，由于疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎(VaCCine ASS。Ciated ParalytiC P。“0mye“tiS，VAPP)和疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(VaCCine—deriVed P。“。ViruS， VDPV)风险，今后必须停止口服脊髓灰质炎减毒活疫苗。PV的使用，以彻底根除脊髓灰质炎。只有使用脊髓灰质炎灭活疫苗IPV才能避免VAPP和VDPV风险。脊髓灰质炎灭活疫苗IPV可预防脊髓灰质炎爆发，并能产生群体免疫力，是消灭脊髓灰质炎后续阶段的最佳选择。目前全球有6个厂商在生产IPV，但所使用的生产毒种均为野毒株。用野毒株生产IPV需达到生物安全水平3级(BS[+一3)的要求，全世界消灭脊髓灰质炎后，甚至BS[+一4的条件亦非绝对保证。对于疫苗生产厂家难以达到如此严格的生物安全要求，因而wH。鼓励疫苗生产厂家研发减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗SabinIPV (InaCtiVated P。l i。ViruS VaCCine， Sabin Strain，简称SIPV)。
在我国实施的儿童计划免疫中，无细胞百白破疫苗、脊髓灰质炎灭活疫苗都是分开接种的，较多的接种针次，复杂化的免疫程序，不仅给家长们带来诸多麻烦，给儿童带来痛苦，且增加各种费用，而且会影响接种率，增加交叉感染机会，不利于计划免疫的推进。发明内容
本发明的目的在于提供一种方便、安全、有效的吸附无细胞百白破一Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP—SIPV)，以彻底消灭脊髓灰质炎和预防白百破，保障儿童健康成长。
本发明提供的是这样一种吸附无细胞百白破一Sabin脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于每lOO ml联合疫苗中含有下列组份无细胞百曰咳原液AP400…1800u旷N破伤风类毒素TT300—700Lf白喉类毒素DT100…0”2500 LfAl(。H)s126一154 mgSIPV I型3000…6000 DUSIPV II型5’700…7100[)USIPV III型4500…9000I)UNaCl765…935mg2一苯氧乙醇o…600mgH，。余量。
所述AP、TT、DT、Al(。H)，、I型SIPV、II型SIPV、III型SIPV、NaCl、2一苯氧乙醇均是常规产品。
所述H，。为医用注射用水。
本发明提供的吸附无细胞百白破一Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗经过下列方法制得1)制备DTaP和SIPV原液按常规方法分别制备无细胞百曰咳病毒原液(AP)、破伤风类毒素(TT)和白喉类毒素(DT)，以及I、II、III型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液sIPV I型、sIPV II型、sIPV III型；
2)按下列配方取料 无细胞百日咳原液AP 破伤风类毒素TT 白喉类毒素DT Al (OH)3 sIPV I 型 sIPV II 型 sIPV III型 NaCl
2-苯氧乙醇 H2O
3)氢氧化铝吸附
按步骤2)的配比，将Al (OH) 3 (终浓度为1.沈 1. 54mg/ml), NaCl (终浓度为 7. 65、. 35mg/ml)及注射用水混合后，进行高压灭菌；在室温及连续搅拌状态下，依次加 Λ DT (终浓度为10 25Lf/ml)、TT (终浓度为3 7Lf/ml)、AP (终浓度为4 18ugPN/ml)及 sIPV I型(终浓度为3(T60DU/ml)、sIPV II型(终浓度为57 71DU/ml)、sIPV III型(终浓度为 45 90DU/ml)；调节pH值为5. 8 7. 2，加入2-苯氧乙醇(终浓度为(T6mg/ml)防腐剂，分装，得IOOml吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。所述步骤1)的常规方法是根据中华人民共和国药典2010年版要求来制备各原液的，其中所用的百日咳I相CS菌株(菌号为58003-3)、破伤风梭状芽孢杆菌(菌号为64008) 和白喉杆菌PW8株(菌号为38007)均购自中国食品药品检定研究院血清室；所用脊髓灰质炎病毒I型为SabinS0+2, II型为SabinS0+2，III型为PfizerSOR+Ι，均购自世界卫生组织 WHO。所述步骤2 )的PH值控制用pH8. 0的PB液进行调节。本发明与传统疫苗相比具有以下优点和效果
1、联合疫苗为儿童免疫规划的连续、简化和扩大所必需，具有预防多种目标疾病，减少接种针次，简化免疫程序，提高接种率，降低交叉感染机会，为广大家长和儿童乐于接受，而且节约各种费用，有利于扩大免疫计划(Expanded Program on Immunization, EPI)的推广等优越性，因此，制备多价联合疫苗是当今世界疫苗研究的发展方向。2、国内外疫苗的生产厂家尚未研发出DTaP-sIPV，该新型疫苗的研发成功，在生物安全性及疫苗副反应等方面优于现有产品，能够进一步推进SlPV的使用，对全球和中国最终消灭脊髓灰质炎和预防白百破具有重要意义，并为进一步开发以DTaP-SlPV为基础的多价联合疫苗打下良好基础。
具体实施例方式实施例1
1)将购自中国食品药品检定研究院血清室的百日咳I相CS菌株(菌号为58003-3)、 破伤风梭状芽孢杆菌(菌号为64008)和白喉杆菌PW8株(菌号为38007)，以及购自世界卫生
400 1800ugPN 300 700Lf 1000^2500 Lf 126 154 mg 3000 6000 DU 5700 7100DU 4500 9000DU 765"935mg 0 600mg 余量；组织WHO的脊髓灰质炎病毒I型SabinS0+2，II型SabinS0+2，III型PfizerSOR+Ι，分别按中华人民共和国药典2010年版要求，制备成无细胞百日咳原液AP、破伤风类毒素TT、白喉类毒素DT、I、II、III型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液sIPV I型、sIPV II型、sIPV III型，备
2)按下列配方取料无细胞百日咳原液AP400ugPN破伤风类毒素TT700Lf白喉类毒素DT2500LfAl (OH)3154mgsIPV I 型6000DUsIPV II 型7100DUsIPV III型9000DUNaCl935mg2-苯氧乙醇600mgH2O28. Ig ；
3)氢氧化铝吸附
按步骤2)的配比，取154mg Al(OH)3 (终浓度为1. 54mg/ml)、935mgNaCl (终浓度为 9.Ig注射用水混合后，进行高压灭菌；在室温及连续搅拌状态下，依次加入
2500Lf 的 DT (终浓度为 25Lf/ml)、700Lf 的 TT (终浓度为 7Lf/ml )、400ugPN 的 AP (终浓度为 4ugPN/ml)及 6000DU 的 sIPV I 型(终浓度为 60DU/ml )、7100DU 的 sIPV II 型(终浓度为 71DU/ml)、9000DU的sIPVIII型(终浓度为90DU/ml);加pH8. 0的PB液调节pH值为5. 8，加入 600mg的2-苯氧乙醇(终浓度为6mg/ml)防腐剂，分装，得IOOml吸附无细胞百白破-Sabin 株脊髓灰质炎联合疫苗。
实施例2
1)同实施例1的步骤1);
2)按下列配方取料
无细胞百日咳原液AP1800ugPN
破伤风类毒素TT300Lf
白喉类毒素DTIOOOLf
Al (OH)3126mg
sIPV I 型6000DU
sIPV II 型5700DU
sIPV III型9000DU
NaCl765mg
H2O8. 6g ；
3)氢氧化铝吸附
按步骤2)的配比，取126mgAl (OH)3 (终浓度为1. 26mg/ml),935mgNaCl (终浓度为 9. 35mg/ml)及8. 6g注射用水混合后，进行高压灭菌；在室温及连续搅拌状态下，依次加入 IOOOLf 的 DT (终浓度为 10Lf/ml)、300Lf 的 TT (终浓度为 3Lf/ml )、1800ugPN 的 AP (终浓度为18ugPN／m1)及6000DU的sIPV I型(终浓度为60DU／m1)、5700DU的sIPV II型(抗原浓度为57DU／m1)、9000DU的sIPV III型(抗原浓度为90DU／m1)；加pH8．OPB液调节pH值为7．2，分装，得lOOml吸附无细胞百白破一Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。[OOl 7] 实施例31)同实施例l的步骤1)；2)按下列配方取料无细胞百曰咳原液APllOOugPN破伤风类毒素TT500Lf白喉类毒素DT1800LfAl(OH)，140mgsIPV I型4500DUsIPV II型6400DUs IPV III型6600DUNaCl850mg2一苯氧乙醇300mgH027．2g；3)氢氧化铝吸附按步骤2)的配比，取140mgAl(OH)，(终浓度为1．40mg／m1)、850mgNaCl(终浓度为8．50mg／m1)及27．2g注射用水混合后，进行高压灭菌；在室温及连续搅拌状态下，依次加入1800Lf的DT(终浓度为18Lf／m1)、500Lf的TT(终浓度为5Lf／m1)、llOOugPN的AP(终浓度为l lugPN／m1)及4500DU的sIPV I型(终浓度为45DU／m1)、6400DU的sIPV II型(终浓度为64DU／m1)、6600DU的sIPV III型(终浓度为66DU／m1)；加pH8．OPB液调节pH值为6．8，加入300mg的2一苯氧乙醇(终浓度为3mg／m1)防腐剂，分装，得lOOml吸附无细胞百白破一Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。[OOl 8] 实施例41)同实施例l的步骤1)；2)按下列配方取料无细胞百曰咳原液AP1600ugPN破伤风类毒素TT700Lf白喉类毒素DT2500LfAl(OH)，145mgsIPV I型3000DUsIPV II型6400DUs IPV III型4500DUNaCl850mg2一苯氧乙醇400mgH025g；3)氢氧化铝吸附按步骤2)的配比，取145mgAl(OH)，(终浓度为1．45mg／m1)、850mgNaCl(终浓度为8. 50mg/ml)及25g注射用水混合后，进行高压灭菌；在室温及连续搅拌状态下，依次加入 2500Lf 的 DT (终浓度为 25Lf/ml)、700Lf 的 TT (终浓度为 7Lf/ml )U600ugPN 的 AP (终浓度为 18ugPN/ml)及 3000DU 的 sIPV I 型(终浓度为 30DU/ml )、6400DU 的 sIPV II 型(终浓度为64DU/ml)、4500DU的sIPV III型(终浓度为45DU/ml);加pH8. OPB液调节pH值为6. 2，加入 400mg的2-苯氧乙醇(终浓度为％ig/ml)防腐剂，分装，得IOOml吸附无细胞百白破-Sabin 株脊髓灰质炎联合疫苗。各实施例成品检定
实施例1-4制备的各DTaP-sIPV联合疫苗分别按《中国药典》三部(2005版)要求进行毒性试验、抗原效力试验、无菌检查及热原质试验，结果见表1、表2。表1疫苗检定结果
权利要求
1.一种吸附无细胞百白破一Sabin脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于每100 ml联合疫苗中含有下列组份 无细胞百曰咳原液AP400…1800ugPN 破伤风类毒素TT300—700Lf 白喉类毒素DT1000…2500 Lf Al(。H)，126一154 mg sIPV I型3000…6000 DU SIPV II型5700.7100DU S IPV III型4500.9000DU NaCl765..935mg 2一苯氧乙醇0"600mg H20余量。
2.如权利要求l所述的吸附无细胞百白破一Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于经过下列方法制得 1)制备DTaP和sIPV原液 按常规方法分别制备无细胞百曰咳病毒原液AP、破伤风类毒素TT和白喉类毒素DT，以及I、II、III型Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活液； 2)按下列配方取料 无细胞百曰咳原液AP400…1800ugPN 破伤风类毒素TT300—700Lf 白喉类毒素DT1000…2500 Lf Al(。H)，126一154 mg sIPV I型3000…6000 DU SIPV II型5700.7100DU S IPV III型4500.9000DU NaCl765..935mg 2一苯氧乙醇0"600mg H20余量； 3)氢氧化铝吸附 按步骤2)的配比，将Al(OH)，(终浓度为1.26一1.54mg／m1)、NaCl(终浓度为7.65…9.35mg／m1)及注射用水混后合，进行高压灭菌；在室温及连续搅拌状态下，依次加入DT(终浓度为10…25Lf／m1)、TT(终浓度为3…7Lf／m1)、aP(终浓度为4…18ugPN／m1)及sIPV I型(终浓度为30…60DU／m1)、sIPV II型(终浓度为57…71DU／m1)、sIPV III型(终浓度为45…90DU／m1)；调节PH值为5.8—7.2，加入2一苯氧乙醇(终浓度为0"6mg／m1)防腐剂，分装，得100ml吸附无细胞百白破一Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗。
3.如权利要求2所述的吸附无细胞百白破一Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于所述步骤2)的PH值控制用PH8.0的PB液进行调节。
全文摘要
本发明提供一种吸附无细胞百白破-Sabin脊髓灰质炎联合疫苗，其特征在于每100ml联合疫苗中含有下列组份无细胞百日咳原液AP400～1800ugPN，破伤风类毒素TT300～700Lf，白喉类毒素DT1000~2500Lf，Al(OH)3126～154mg，sIPVⅠ型3000~6000DU，sIPVⅡ型5700~7100DU，sIPVⅢ型4500~9000DU，NaCl765~935mg，2-苯氧乙醇0~600mg，余量为H2O。其生物安全性及疫苗副反应等优于现有产品，并具有预防多种目标疾病，减少接种针次，简化免疫程序，提高接种率，降低交叉感染机会，为广大家长和儿童乐于接受，而且节约各种费用，有利于免疫计划的顺利推进。
文档编号A61P31/04GK102178949SQ201110123949
公开日2011年9月14日 申请日期2011年5月13日 优先权日2011年5月13日
发明者周健, 奚光跃, 姜莉, 姜述德, 姬光, 孙明波, 宋霞, 廖国阳, 杨净思, 梁疆莉, 衡燮, 陈洪波, 马艳, 高娜 申请人:中国医学科学院医学生物学研究所