专利名称：威灵仙总皂苷在制备抗高尿酸血症及痛风药物中的应用的制作方法
技术领域：
:本发明属于制药领域，涉及威灵仙总皂苷的新用途，具体涉及威灵仙总皂苷在制备抗高尿酸血症及痛风药物中的应用。
背景技术：
:痛风是由长期嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少所引起的一组异质性、代谢性疾病，发病率很高。据美国风湿病学会(ACR2010)年度会议公布的数据，美国痛风患者已超过800万人。在我国，上海中年男性中高尿酸血症发病率为25% (Villegas R.MetabolicSyndrome and Related Disorders, 2010,8 (3):263-270);在山东(Miao Z.Journal ofRheumatology, 2008, 35 (9): 1859-1864)，高尿酸血症与痛风的发病率分别为13.19 %与
1.14%;并呈逐年上升趋势。临床上缺乏特效药物，常用治疗药物如秋水仙碱、别嘌醇、苯溴马隆等具有严重的肝、肾毒性及骨髓抑制作用，不适合长期使用。从植物中寻找高效、低毒的抗高尿酸血症及痛风药物成为国内外药物研究热点。威灵仙是一种常用中药，在古代及现代医方和临床上应用广泛。我国药典收载的品种为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck,棉团铁线莲Clematis hexapetalaPall.或东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根及根莖。含有挥发油、阜苷、生物碱、黄酮、香豆素、木脂素等丰富的化学成分，具有抗菌消炎、镇痛、松弛平滑肌、抗肿瘤等药理作用(李佳等.中药威灵仙的化学成分及药理作用研究进展[J]，特产研究，2011(1):67-71)。威灵仙皂苷类化合物是一类重要的天然活性成分，具有抗炎镇痛(徐先祥等.威灵仙总皂苷抗炎镇痛作用研究，中药药理与临床，2005，21 (4):34-35)、抗免疫性炎症(专利号:ZL200510040824.2)等作用；但未见威灵仙皂苷在治疗高尿酸血症及痛风方面的生物活性和临床研究的报道。 发明内容:本发明的目的是提供威灵仙总皂苷的一种新用途。本发明所提供的威灵仙总皂苷的新用途是威灵仙总皂苷在制备抗高尿酸血症及痛风药物中的应用；所述威灵仙总皂苷是按如下方法制备得到:威灵仙药材采用乙醇水溶液提取，提取液浓缩后，离心或过滤；滤液或离心液溶剂萃取，萃取液浓缩后大孔树脂富集，制备得到威灵仙总皂苷。其中，所述的威灵仙药材为《中国药典》2010年版收载的品种:毛莨科植物威灵仙 Clematis chinensis Osbeck,棉团铁线莲 Clematis hexapetala Pall.或东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根及根莖。所述的乙醇水溶液提取条件为:提取剂乙醇溶液浓度为60% 95%，料液比为
1: 8 1: 12,加热回流提取45min 90min。所述的溶剂萃取是指提取液浓缩除去乙醇后，离心或过滤，滤液或离心液稀释至浓度0.1 0.2kg/L后依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集正丁醇萃取部位，减压浓缩得到粗皂苷。所述的大孔树脂富集，优选AB-8型，DA-201型或D-101大孔树脂。20%、60%、95%乙醇梯度洗脱，收集60%洗脱部分，减压干燥，粉碎过筛后即可得到威灵仙总皂苷。本发明提供的威灵仙总皂苷提取物，由上述提纯方法制备所得，主要为五环三萜齐墩果烷型皂苷；总皂苷含量达70%以上。动物实验显示，该提取物具有较强的抗炎和降低动物血液尿酸水平作用，可制备成治疗高尿酸血症及痛风的药物。
具体实施方式
:下面的实施例可以使本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1:提取物的制备称取威灵仙药材10kg，加入60%浓度乙醇120L，回流提取60min，提取液浓缩后，离心；离心液稀释至浓度0.2kg/L后依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集正丁醇萃取部位，减压浓缩得到粗皂苷。粗皂苷用水溶解后AB-8大孔树脂吸附，20%,60%,95%乙醇梯度洗脱，收集60%洗脱部分，减压蒸干得225g提取物，总皂苷含量72.4%。实施例2:提取物的制备称取威灵仙药材10kg，加入80%浓度乙醇80L，回流提取90min，提取液浓缩后，离心；离心液稀释至浓度0.15kg/L后依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集正丁醇萃取部位，减压浓缩得到粗皂苷。粗皂苷用水溶解后DA-201大孔树脂吸附，20%，60%,95%乙醇梯度洗脱，收集60%洗脱部分，减压蒸干得192g提取物，总皂苷含量80.8%。实施例3:提取物的制备称取威灵仙药材10kg，加入95%浓度乙醇100L，回流提取45min，提取液浓缩后，过滤；过滤液稀释至浓度0.lkg/L后依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集正丁醇萃取部位，减压浓缩得到粗皂苷。粗皂苷用水溶解后D-101大孔树脂吸附，20^,60%,95%乙醇梯度洗脱，收集60%洗脱部分，减压蒸干得176g提取物，总皂苷含量78.3%。实施例4:药效学研究实验动物:昆明种，清洁级小鼠，100只，雄性，15-20g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证编号:2007000524284 ;实验前先饲养适应1周。4.1小鼠耳肿胀实验方法与结果雄性小鼠50只随机进行分组，每组10只，即空白组、三个样品组和阳性药物阿司匹林组，空白组给予0.4%的吐温-80，样品组给予相应供试品，阳性组给予阿司匹林为
0.2g/kg,灌胃容积均为15ml/kg体重,连续给予7天,末次给药后1h,小鼠右耳均勻涂上25 μ l 二甲苯致炎，15min后处死动物。剪下左右两耳，用直径8mm打孔器在同一部位冲下耳片，称重，以左右耳片重量差值表示炎性肿胀程度，将其耳肿胀度进行组间比较，t检验。肿胀度(g)=右耳片重量-左耳片重量表1对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(-x±S，n = 10)
权利要求
1.种威灵仙总皂苷在制备治疗高尿酸血症及痛风药物中的应用，其特征在于威灵仙总皂苷是由下列方法制备得到: ①提取:威灵仙药材采用60% 95%浓度的乙醇溶液加热回流提取45min 90min，料液比为1: 8 1: 12 ; ②萃取:提取液浓缩、除去乙醇后，过滤或离心，滤液或离心液稀释至0.1 0.2kg/L ；依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃取； ③纯化:正丁醇萃取部分浓缩后，大孔树脂分离；优选AB-8型，DA-201型或D-101大孔树脂；20%、60%、95%乙醇梯度洗脱，收集60%洗脱部分，减压浓缩； ④干燥:浓缩液真空干燥，粉碎过100目筛，制备得到威灵仙总皂苷。
2.权利要求1所述 的威灵仙总皂苷在制备治疗高尿酸血症及痛风药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了威灵仙总皂苷的新用途，具体涉及威灵仙总皂苷在制备抗高尿酸血症及痛风药物中的应用。所述威灵仙总皂苷是由以下方法制备得到乙醇溶液回流提取，提取液浓缩，离心或过滤，离心液或过滤液溶剂萃取，萃取液浓缩后大孔树脂富集，制备得到的提取物中总皂苷含量达70％以上。药理学研究表明，本发明的提取物具有较强的抗炎作用和降低动物血液尿酸水平作用，可以用于制备治疗高尿酸血症及痛风的药物。
文档编号A61P19/06GK103083419SQ20111034015
公开日2013年5月8日 申请日期2011年11月1日 优先权日2011年11月1日
发明者温尧林, 李坤 申请人:苏州凯祥生物科技有限公司