专利名称：薏米红曲的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种以薏米为原料制备的红曲，以及该红曲的制造方法。
背景技术：
红曲也称丹曲，传统红曲的做法是以大米为原料，接种红曲菌经固体发酵而成，具有药食两用价值。红曲菌在分类学上属于真菌界，子囊菌门，真子囊菌纲，散子囊菌目，红曲菌科，红曲菌属。红曲菌虽在生物界犹如九牛一毛，但是它有一定的位置。红曲菌所代谢的生理活性物质除了 monacolins-K外，尚含有麦角固醇、Y _氨基丁酸、多不饱和脂肪酸等。红曲具有健脾健胃、活血化瘀、降血压、降血糖等作用；目前，在食品或医药行业， 红曲品种很多，大都以谷物为原料制备的，但以薏米为原料制备的固体薏米红曲以及制备方法，却未见到报道。薏米，又名薏苡仁、薏仁，属禾本科植物薏苡仁之果，产于福建、江苏、河北等地，它的主要成分是淀粉和葡萄糖，含有大量的蛋白质、氨基酸、维生素、脂肪酸等。薏苡仁与大米比较，淀粉含量较低，但粗蛋白和粗脂肪比大米高，分别是大米含量的1. 97和5. 81倍，尤其是单位重量所提供的氨基酸是大米的2. 2倍；薏苡仁油脂中所含人类营养中最重要的必须脂肪酸亚油酸高达45. 85%，具有中等程度的抗氧性，表现在对超氧自由基消除的SOD样作用，加上对体内氮氧化合物生成的抑制，即对NO合成酶的抑制，这些都被认为是抗衰的标志性指标，经常在抗老化妆品中使用；其中还含有维生素B1，是大米的2. 54倍，矿物质含量也比大米高。薏苡仁有健脾利尿、去热去湿、补血状体至功能，薏苡仁中含有薏苡酯对癌细胞的生长有抑制作用。薏米红曲，是以薏米为原料，接入红曲曲种，经过制备红曲的过程而得；国内有报道薏米红曲液态发酵，主要是考察抗氧化成分，但红曲产品中红曲红素以及Monacolins-K、 Y -氨基丁酸等未见报道(刘畅等，薏苡仁在曲霉发酵过程中成分及抗氧化性变化的研究， 食品科学，Vol. 30, No. 23，2009);美国专利 20070160694 公开了使用 Aspergillus, lactic acid bacteria and yeast.发酵薏米用于预防或治疗肿瘤的方法，但是Aspergillus和 Monascus是两类不同菌种(李忠庆，郭芳编著，红曲菌的形态与分类学，2002)。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备周期短，薏米红曲中莫纳可林K含量高，桔霉素含量低的薏米红曲的制备方法。本发明是这样实现的
本发明薏米红曲的制备方法，包括如下步骤 (1)斜面菌种培养
将红曲菌种经马铃薯葡萄糖琼脂PDA斜面在下培养5—8天得斜面菌种；所述红曲菌种选自红曲红曲菌、紫色红曲菌、红色红曲菌中之一，红曲菌种PDA斜面。(2)在第一培养基中接入斜面菌种，在30— 35°C下，培养48— 72小时，得一级种子，第一培养基包括米粉，
(3)在第二培养基中接入一级种子，在30—35°C，培养48—72小时，得二级种子，第二培养基的组分与第一培养基的差别之一是将米粉改为薏米粉，
(4)取薏米、浸泡、蒸煮熟、接入二级种子，在34— 36°C下培养3天，喷入生理盐水，翻动拌勻后，在四一 31°C培养，薏米全部变红即可。第一培养基的组成如下(g/L)
米粉4. 00—6. 00
黄豆粉1.5—2.5
磷酸ニ氢钾0. 02—0. 04
硫酸镁0. 025—0. 035
硫酸铵0. 15—0. 25
葡萄糖1.5—2.00
碳酸钙0. 35—0. 40
503型蛋白胨0. 15—0. 20
氯化钠0. 40—0. 50 其余为水，
用乳酸将消毒前PH调至5. 5—6. 0，121で灭菌20分钟。第二培养基的组成如下(g/L)
薏米粉5. 00—8. 00
黄豆粉1.5—2.5
硫酸镁0. 03—0. 035
503型蛋白胨0. 05—0. 10
葡萄糖2.00—3.00
磷酸二氢钾0. 04—0. 06
碳酸钙0. 4—0. 5
氯化钠0. 4—0. 5 其余为水，
用乳酸将消毒前PH调至5. 5—6. 0，121で灭菌20分钟。
一级种子接量5 — 30wt%，二级种子接种量为5 — 30^%。
步骤(3)中一级种子接入量为10— 15%wt%，步骤(4)中二级种子接种量为10
15%wt0本发明的红曲菌经第一、二培养基培养，薏米红曲菌体量多、红色素色价高、 Monacolins高以及含有必须脂肪酸亚油酸等抗氧化成分，莫纳可林K含量高，桔霉素含量低，制备周期更短，具有丰富的营养价值和突出的医疗保健作用。
具体实施例方式
下面结合实例，更具体的说明本发明内容。本发明的制备方法，并不局限于以下实例， 对本发明的制备方法有任何形式的变通和/或改变，都将落入本发明的保护范围。实施例1
本发明以薏米为原料，接入制备的曲种，经过制备红曲的过程而得。其制备方法包括以下步骤
1、液态曲种的制备a、斜面菌种培养
红曲菌经PDA斜面在下培养6天，得斜面菌种。b、一级液体种子培养
培养基组成(g/L)米粉4. 00，黄豆粉1. 50，磷酸二氢钾0. 02,硫酸镁0. 025，硫酸铵 0.20，葡萄糖2. 00，碳酸钙0.40，蛋白胨(503型)0. 18，氯化钠0. 40，定容至1L，溶剂为水， 用乳酸将消毒前PH调至5. 7 ；用250ml三角瓶分装，每瓶装液量25ml ；121°C灭菌20分钟； 待培养基温度降至室温后接入步骤a中的斜面菌种，30°C，摇床转速220r. P. Μ,培养50h。得一级液体种子备用。C、二级液体种子培养
培养基组成(g/L)薏米粉5. 00，葡萄糖2. 50，黄豆粉1. 80，硫酸镁0. 03，蛋白胨(503 型)0. 08，磷酸二氢钾0. 04，碳酸钙0. 45，氯化钠0. 40 ；定容至1L，溶剂为水，用乳酸将消毒前PH调至5. 5 ；750ml三角瓶分装，每瓶装液量50ml ； 121°C灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤b中的一级液体种子，接种量10wt%，30°C，摇床转速220r. P. M，培养 50h得二级液体种子备用。2、原料的制备
取8公斤的薏米，用清水浸泡8小时，浙干水分，蒸煮薏米，熟后薏米松散，颗粒均勻。3、原料接种
待熟后的薏米温度降至30°C，接入上述的二级液体种子，接种量10wt%，拌勻，放入已消毒的托盘，盖上灭菌后的7层纱布。4、发酵培养
将接种后的薏米在35°C下培养3天，喷入400ml的生理盐水，翻动拌勻，32 °C培养1天， 薏米全部变深红，即可。5、制成成品
将发酵好的薏米取出，在105°C干燥，即得薏米红曲。6、薏米红曲中莫纳可林K含量HPLC测定方法如下 流动相乙腈水=6 94
流速lML/min
色谱柱4. 6 X 150mm, 5 μ m，C18 柱； 检测波长260nm 进样量25 μ L
样品处理方法准确称量0. Ig薏米红曲置容量瓶，加入纯净水至刻度，超声溶解，微孔滤膜过滤，待测。结果薏米红曲中莫纳可林K含量以干重计11. 2mg/g 7、薏米红曲中桔霉素HPLC控制方法
色谱柱 SHIMADZU Shim-pack VP-ODS, C18 柱温:28°C ,
流动相乙腈甲醇水(磷酸调pH 2. 5) ^ 70:10:20 (ν/ν/ν) 流速为1 mL/min 进样量20 μ L荧光检测波长为λΘΧ=331 nm和λ em=500 nm。经检测，薏米红曲中桔霉素含量低于50ppm。实施例2
本发明以薏米为原料，接入制备的曲种，经过制备红曲的过程而得。其制备方法包括以下步骤
1、液态曲种的制备 a、斜面菌种培养
将紫色红曲菌经PDA斜面在34°C下培养8天，得斜面菌种。b、一级液体种子培养
培养基组成(g/L)米粉5. 00，黄豆粉1.80，磷酸二氢钾0. 02,硫酸镁0. 025, (NH4) 2S04 0. 15，葡萄糖1. 50，碳酸钙0. 35，蛋白胨(503型)0. 15，氯化钠0. 40，定容至1L，用乳酸将消毒前PH调至5.5 ；用250ml三角瓶分装，每瓶装液量25ml ；121°C灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤a中的斜面菌种，接种量为？ 33°C，摇床转速220r. P. Μ,培养50h，得一级液体种子备用。C、二级液体种子培养
培养基组成(g/L):薏米粉6. 00，葡萄糖2. 35，黄豆粉2. 40，硫酸镁0.03，蛋白胨(503 型)0. 05，磷酸二氢钾，0.04，碳酸钙0.45，氯化钠0.40 ；定容至3L，用乳酸将消毒前pH调至5.9 ;750ml三角瓶分装，每瓶装液量50ml ；121°C灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤b中的一级液体种子，接种量10wt%，33°C，摇床转速220r. P. Μ,培养50h得二级液体种子备用。2原料的制备
取M公斤的薏米，用清水浸泡12小时，浙干水分，蒸煮薏米，熟后薏米松散，颗粒均勻。3原料接种
待熟后的薏米温度降至30°C，接入上述的二级液体种子，接种量12wt%，拌勻，放入已消毒的托盘，盖上灭菌后的7层纱布。4发酵培养
将接种后的薏米在35°C下培养3天，喷入1200ml的生理盐水，翻动拌勻，30°C培养2 天，薏米全部变深红，即可。5制成成品
将发酵好的薏米取出，在80°C下真空干燥，即得薏米红曲。6、莫纳可林K含量及桔霉素含量控制方法同实施例1，莫纳可林K含量12. lmg/g ； 桔霉素含量低于50ppm。实施例3
本发明以薏米为原料，接入制备的曲种，经过制备红曲的过程而得。其制备方法包括以下步骤
1、液态曲种的制备 a、斜面菌种培养
将红色红曲菌种经PDA斜面在30°C下培养7天，得斜面菌种。
b、一级液体种子培养
培养基组成(g/L)米粉4. 50，黄豆粉1. 50，磷酸二氢钾0. 02,硫酸镁0. 025，硫酸铵 0.20，葡萄糖1.50，碳酸钙0.35，蛋白胨(503型)0. 15，氯化钠0. 45，定容至1L，用乳酸将消毒前PH调至5.8 ；用250ml三角瓶分装，每瓶装液量25ml ；121°C灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤a中的斜面菌种，35 °C，摇床转速220r. P. M，培养50h。备用。C、二级液体种子培养
培养基组成(g/L)薏米粉6. 00，葡萄糖2. 50，黄豆粉2. 15，硫酸镁0.035，蛋白胨 (503型)0. 07，磷酸二氢钾，0.06，碳酸钙0.50，氯化钠0. 50 ；定容至2L，用乳酸将消毒前 pH调至6.0 ;750ml三角瓶分装，每瓶装液量50ml ；121°C灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤b中的一级种子，接种量10衬％，351，摇床转速2201~^，培养5011。备用。2、原料的制备
取8公斤的薏米，粉碎80目细度，用清水浸泡1小时，浙干水分，蒸煮薏米，至熟透。3、原料接种
待熟后的薏米温度降至30°C，接入上述的二级液体种子，接种量12wt%，放入已消毒的托盘，盖上灭菌后的7层纱布。4、发酵培养
将接种后的薏米在36°C下培养1天，翻动拌勻，32 °C培养2天，喷入200ml的生理盐水，30°C培养1天，薏米全部变深红，即可。5、制成成品
将发酵好的薏米取出，在50°C下真空干燥，即得薏米红曲。6、莫纳可林K含量及桔霉素含量控制方法同实施例1，莫纳可林K含量108mg/g ； 桔霉素含量低于50ppm。实施例4
本发明以薏米为原料，接入制备的曲种，经过制备红曲的过程而得。其制备方法包括以下步骤
1、液态曲种的制备 a、斜面菌种培养
将红色红曲菌经PDA斜面在35°C下培养5-7天，得斜面菌种。b、一级液体种子培养培养基组成(g/L)米粉5.00.，黄豆粉2. 50，磷酸二氢钾0.02，硫酸镁0.025，硫酸铵0.25，葡萄糖2.0，碳酸钙0.40，蛋白胨(503型)0. 20，氯化钠0. 45，定容至1L，用乳酸将消毒前PH调至6.0 ；用250ml三角瓶分装，每瓶装液量25ml ；121°C灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤a中的斜面菌种，35 °C，摇床转速220r. P. M，培养50h。备用。C、二级液体种子培养
培养基组成(g/L)薏米粉8. 00，葡萄糖3.0，黄豆粉2. 5，硫酸镁0.035，蛋白胨(503 型)0. 08，磷酸二氢钾，0.04，碳酸钙0.45，氯化钠0.45 ；定容至4L，用乳酸将消毒前pH调至5. 5-6. 0 ；750ml三角瓶分装，每瓶装液量50ml ； 121 °C灭菌20分钟；待培养基温度降至室温后接入步骤b中的一级液体种子，接种量10衬％，351，摇床转速2201~^，培养5011。备用。2原料的制备取M公斤的薏米，粉碎成80目细度，用清水浸泡2小时，浙干水分，蒸煮薏米，至熟透。 3原料接种
待熟后的薏米温度降至30°C，接入上述的二级液体种子，接种量12wt%，拌勻，放入已消毒的托盘，盖上灭菌后的7层纱布。4发酵培养
将接种后的薏米在36°C下培养2天，翻动拌勻，32 °C培养1天，喷入600ml的生理盐水，30°C培养1天，薏米全部变深红，即可。5制成成品
将发酵好的薏米取出，自然晒干，即得薏米红曲。6、莫纳可林K含量及桔霉素含量控制方法同实施例1，莫纳可林K含量13. 5mg/g ； 桔霉素含量低于50ppm。
权利要求
1.薏米红曲的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)斜面菌种培养将红曲菌种经马铃薯葡萄糖琼脂PDA斜面在下培养5—8天得斜面菌种；所述红曲菌种选自红曲红曲菌、紫色红曲菌、红色红曲菌中之一，(2)在第一培养基中接入斜面菌种，在30—35°C下，培养48—72小时，得一级种子，第一培养基包括米粉，(3)在第二培养基中接入一级种子，在30—35°C，培养48—72小时，得二级种子，第二培养基的组分与第一培养基的差别之一是将米粉改为薏米粉，(4)取薏米、浸泡、蒸煮熟、接入二级种子，在34—36°C下培养3天，喷入生理盐水，翻动拌勻后，在四一 31°C培养，薏米全部变红即可。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于第一培养基的组成如下(g/L) 米粉4. 00—6. 00黄豆粉1.5 — 2. 5磷酸二氢钾 0. 02—0. 04 硫酸镁0. 025—0. 035硫酸铵0. 15—0. 25葡萄糖1.5 — 2. 00碳酸钙0. 35—0. 40503型蛋白胨 0. 15—0. 20 氯化钠0. 40—0. 50其余为水，用乳酸将消毒前PH调至5. 5—6. 0，121°C灭菌20分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于第二培养基的组成如下(g/L)薏米粉5.00--8. 00黄豆粉1.5—■2. 5硫酸镁0.03--0. 035503型蛋白胨0 05-—0. 10葡萄糖2.00--3. 00磷酸二氢钾0.04--0. 06碳酸钙0.4—0. 5氯化钠0.4—0. 5其余为水，用乳酸将消毒前PH调至5. 5—6. 0，121°C灭菌20分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于一级种子接种量5—30wt%，二级种子接种量为 5 — 30wt%。
5.按照权利要求书4所述，其特征在于步骤(3)中一级种子接入量为10—15wt%，步骤 (4)中二级种子接种量为10 — 15wt%。
全文摘要
本发明公开了一种薏米红曲的制备方法，解决已有制备方法工艺复杂，周期长，产品中莫纳可林K含量低，桔霉素含量高的问题。主要是以薏米为原料，接入红曲曲种，经发酵过程而得。制备步骤主要有液态红曲曲种制备，薏米原料制备，接种，发酵培养和成品制备。红曲菌种经第一、二培养基培养该方法制备的薏米红曲莫纳可林K(Monacolin-K)、γ-氨基丁酸(GABA)、红色素含量高，桔霉素含量低，脂肪酸亚油酸含量高，医药保健作用非常明显；本发明工艺简便，适合工业化生产。
文档编号A61P9/12GK102429928SQ201110364139
公开日2012年5月2日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年11月17日
发明者张效实, 胡杨洋, 邹昆, 陈书峰 申请人:成都格蓝洋生物医药科技有限公司