专利名称：用于药用胰腺酶制剂中的病毒灭活的β-丙内酯的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有减少的病毒感染性(viral infectivity)的胰腺酶制剂,特别涉及此种用β_丙内酯(BPL)处理过的制剂，含有它们的药用组合物，以及制备它们的方法。
背景技术：
胰外分泌功能不全是胰腺疾病(例如，慢性胰腺炎、囊性纤维病、严重的急性坏死性胰腺炎和胰腺癌)，胰腺外疾病(例如腹腔疾病和克罗恩氏病)以及胃肠和胰腺的外科切除术的一个主要后果。胰外分泌功能的置换(replacement)对于消除与营养不良有关的发病率和死亡率是重要的。一种胰外分泌功能不全的治疗是口服胰腺酶以在胃排空营养物质的时候为十二指肠腔提供充足的活性脂肪酶。在过去的70年，已经以各种形式使用从动物源获得的胰腺酶制剂(PEP)，以部分地治疗病人的酶缺乏症，这些病人患有各种胰腺酶缺乏症和消化障碍。PEP典型地含有至少三类酶(包括脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶)的一个组合，它们对于消化脂肪、蛋白和糖是重要的。一种被称为胰脂肪酶的PEP以结合在胶囊内的肠溶颗粒的形式市售，它含有高达35，000USP单位/胶囊的胰脂肪酶(例如，PANCRECARB4 (消化治疗公司(Digestive Care, Inc. )) >ULTRASE* (艾肯斯制药公司(Axcan Scandipharm Inc.))、PANCREAZE (麦克尼尔制药公司(McNeil Pharmaceutical)) ,COTAZYME (美国研究公司(Organon USA, Inc.)) >ZENPEPR (尤兰德制药公司(EurandPharmaceuticals))以及CREONr'(苏威制药公司(Solvay Pharmaceuticals, Inc.)))。由于这些酶是从动物源分离的，它们很容易被病毒污染，对于来自猪的材料，例如无包膜病毒(例如，猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪脑心肌炎病毒(EMCV))，以及有包膜病毒(例如，水疱性口炎病毒(VSV)、和A型流感病毒(IFA))。见于2008年12月召开的美国食品和药物管理局(FDA)抗病毒药物咨询委员会大会(Antiviral Drugs AdvisoryCommittee Meeting)的信息，这些信息可以在万维网 WorldWideWebfda. gov/ohrms/dockets/ac/cder08.html#AntiviralDrugs 网址上找到。参见，例如Mayr，从减毒的痘病毒开发非免疫性的类特异性的疫苗一种新的疫苗类型(Development of non-immunizing, paraspecificvaccine from attenuated poxviruses:a new type of vaccine), Berl Munch Tierarztlffochenschr. 2001, 114:184-7;Argiiello Villares,兔病毒性出血性疾病接种和免疫应答(Viral haemorrhagic diseaseof rabbits: vaccination and immuneresponse), Rev Sci Tech. 1991，10:459-80;发现的使用血衆蛋白的病毒灭活Horowitz, (Inactivation of viruses found with plasmaproteins),生物工程(Biotechnology) 1991，19:417-30;Epstein and Frickej 目前的凝血因子浓缩物的安全性(Current safety of clotting factor concentrates), Arch PatholLab Med. 1990，114:335-40; Stephan，通过用β _丙内酯处理和UV照射来灭活血浆和血楽■衍生物中的肝炎病毒和 HIV(Inactivation of hepatitis viruses and HIV inplasmaand plasma derivatives by treatment with beta-propiolactone/UVirradiation),Curr Stud Hematol Blood Transfus. 1989, 56:122-7; Stephan,关于不稳定的血衆制品的病毒安全性的德国的观点(Virus safety of labile plasmaproducts from theGerman viewpoint), Beitr Infusionsther. 1989, 24:40-5; Anderson 等人特异性 IgE 和β-丙内酯在由加强剂量的人二倍体细胞狂犬疫苗导致的反应中的作用(The role ofspecific IgE and beta-propiolactone inreactions resulting from booster doses ofhuman diploid cell rabies vaccine), JAllergy Clin Immunol. 1987，80:861-8;Prince等人，β -丙内酯/紫外线照射用于灭活血液衍生物中的病毒的效力的综述(Beta-propiolactone/ultravioletirradiation:a review of its effectiveness forinactivation of viruses in bloodderivatives), Rev Infect Dis. 1983，5:92-107;美国公开号 2006/0115376。目前，需要无病毒的或病毒感染性减少的口服PEP，它们含有多个剂量的活性酶补充剂。
发明概述本发明的诸位发明人发现了可以通过用一种化学剂(β -丙内酯，BPL)处理胰腺酶制剂(PEP)来有效地使该PEP中的病毒灭活，而不消除该PEP的酶活性。不希望受任何理论的限制，通过BPL使病毒灭活是基于该病毒的基因组的烷基化作用。诸位发明人还发现了除了这些病毒以外的PEP组分，例如胰腺酶或者核酸类，它们可能减少BPL的烷基化活性，不干扰PEP中的病毒的灭活。本发明的一个实施方案是一种具有减少的病毒感染性的PEP。该制剂包括(i) 一种或多种经BPL处理过的胰腺酶以及(ii)3-羟基丙酸(即BPL的水解产物)、BPL、或它们的一种混合物。优选地，该PEP具有小于约103FFID5(l/g PEP的PPV病毒感染性，如通过美国公开号2009/0226414中所描述的PPV FFID感染性分析所测量的，该申请通过引用结合在此。优选地，该PEP的病毒感染性比末用BPL处理过的相似制剂的病毒感染性要低至少llog，其中病毒感染性是无包膜病毒、有包膜病毒、PPV、EMCV、或它们的组合的病毒感染性。另一个实施方案是一种具有减少的病毒感染性的药用组合物，该药用组合物包含(i) 一种或多种经BPL处理过的胰腺酶(或一种PEP)以及(ii)3-羟基丙酸、BPL、或它们的一种混合物。又另一个实施方案是一种对需要治疗的病人进行胰功能不全的治疗的方法，该方法是向该病人给予一个治疗有效量的本发明的该PEP或药用组合物。又另一个实施方案是一种制备PEP的方法，该方法包括以下步骤(a)使BPL与含有一种或多种胰腺酶的一种制剂反应足够的时间，以减少该制剂中的病毒感染性。在一个实施方案中，步骤(a)中的反应通过以下步骤进行(i)将BPL加到含有一种或多种胰腺酶的制剂的一种溶液或悬浮液中，并且(ii)在步骤(a)中使BPL在该溶液中孵育足够的时间，以减少该溶液中的病毒感染性。该方法可以进一步包括以下步骤(b)在步骤(a)的反应后使该BPL灭活。可以通过在一种水溶液中孵育，通过加入一种灭活剂(例如硫代硫酸钠)，或者通过冷冻步骤(a)形成的该溶液然后将它冻干而使该BPL灭活。本发明的任何实施方案中的这些胰腺酶可以是重组形成的或者来自一种动物源(猪、羊和牛)。合适的胰腺酶包括，但不限于，脂肪酶类、蛋白酶类、淀粉酶类、以及上述任何项的任何组合。一种优选的胰腺酶的混合物是猪源的胰脂肪酶。
发明详细说明 定义根据本发明，可以存在在本领域的技术范围内的大量的工具和技术，例如那些常用于分子免疫学、细胞免疫学、药理学、和微生物学的工具和技术。见，例如，Samtoook等人(2001)分子克隆实验手册(MolecularCloning: A Laboratory Manual.)第三版，冷泉港实验室出版社冷泉港，纽约(Cold Spring Harbor Laboratory Press:ColdSpring Harbor, New York) ；Ausubel等人编辑(2005)目前的分子生物学的协议(Current Protocols inMolecular Biology).约翰·威利父子出版公司(John Wileyand Sons, Inc.) Hoboken, NJ; Bonifacino等人编辑(2005)目前的细胞生物学的协议(CurrentProtocoIs in Cell Biology).约翰 威利父子出版公司:Hoboken, NJ; Coligan等人编辑(2005)目前的免疫学的协议(Current Protocols in Immunology),约翰 威利父子出版公司Hoboken, NJ;Coico等人编辑(2005)目前的微生物学的协议(Current Protocols in Microbiology),约翰 威利父子出版公司Hoboken, NJ; Coligan 等人编辑(2005)目前的蛋白科学的协议(CurrentProtocols in Protein Science),约翰 威利父子出版公司Hoboken, NJ;andEnna等人编辑(2005)目前的药物学的协议(CurrentProtocols inPharmacology),约翰 威利父子出版公司Hoboken, NJ.，以及动物细胞培养(Animal Cell Culture) (Freshney,编辑1986)。“病人”是指人或其他动物。对应度量单位、技术、特性或化合物的常用的缩写如下“min”意思是分钟，“h”或“hr”意思是小时，“ μ L”或“ μ I”意思是微升，“mL”或“ml”意思是毫升，“mM”意思是毫摩尔的，“M”意思是摩尔的，并且“mmole”意思是毫摩尔。术语“USP单位”是指用来测量一种维生素或药物的效能(即，它的预期的生物效应)的单位。对于应用这种单位的每种物质，美国食品和药品管理局(U. S. Food and DrugAdministration)已经确定了与IUSP单位的剂量相关的生物效应。然后,可以用这个标准单位来表示该物质的其他量值。.在大多数情况下，该USP单位等于国际单位(IU)。一个USP单位的淀粉酶活性包含在以下胰脂肪酶的量值中，该胰脂肪酶以初始的速度分解淀粉，这样使得在通过引用结合在此的、胰脂肪酶的官方论著(OfficialMonograph for Pancrelipase,美国药典 2009 32/ 国家处方集 27 (The 2009 UnitedStates Pharmacopia 32/National Formulary 27))的淀粉酶活性分析(Assay foramylase activity)的条件下,每分钟水解0. 16 μ Eq的糖苷键。一个USP单位的脂肪酶活性包含在以下胰脂肪酶的量值中，在pH为9. O和37°C温度下以及在通过引用结合与此的、胰脂肪酶的官方论著(美国药典2009 32/国家处方集27)的淀粉酶活性分析的条件下，该胰脂肪酶每分钟释放I. O μ Eq的酸。一个USP单位的蛋白酶活性包含在以下胰脂肪酶的量值中，在通过引用结合与此的、胰脂肪酶的官方论著(美国药典2009 32/国家处方集27)的蛋白酶活性分析的条件下，该胰脂肪酶以初始的速度水解酪蛋白，这样使得每分钟释放一定量的肽类，这些肽类没有被三氯乙酸沉淀，三氯乙酸具有与15nmol的酪氨酸相同的280nm处的吸光度。
胰腺酶制剂(PEP)
合适的胰腺酶制剂(PEP)可以含有消化酶(例如脂肪酶类、蛋白酶类、和淀粉酶类)的混合物。PEP可以来自动物源。动物源的PEP可以被至少一种或多种病毒污染，例如PPV、PCV-2、EMCV, VSVjP A型流感病毒，以及核酸类。PEP还可以含有残余量的异丙醇(IPA)。可以存在于PEP中的活性酶类包括，但不限于，胰腺酶，例如胰脂肪酶(脂肪酶类、蛋白酶类、和淀粉酶类的混合物)或者胰酶。可以存在于PEP中的其他活性酶类包括
(i)活性蛋白酶类，包括，但不限于胰蛋白酶，E. C.(酶学委员会编号)3. 4. 4. 4 ;糜蛋白酶，E. C. 3,4, 4,5 ;糜蛋白酶 B，E. C. 3,4, 5,6 ;胰肽酶 E，E. C. 3. 4. 4.7 ;羧肽酶 A，E. C. 3. 4. 2. I ；和羧肽酶B，E. C. 3. 4.2.2； (ii)活性脂肪酶类，包括，但不限于甘油酯水解酶(Lipase)，E. C. 3. I. I. 3 ;磷脂酶 A2，E. C. 3. I. I. 4 ;和甾醇酯水解酶，E. C. 3. I. I. 13 ； (iii)核酸酶类，例如，但不限于核糖核苷酸酶，E. C. 2. 7. 7. 16和脱氧核糖核酸酶，E. C. 3. I. 4. 5 ;以及(iv)活性淀粉酶类，例如α -淀粉酶，Ε. C. 3. 2. I. I。在一个优选实施方案中，该PEP包括胰腺酶的混合物，这些胰腺酶包括脂肪酶类、 蛋白酶类、和淀粉酶类、以及任选的核酸酶类(例如核糖核苷酸酶)。这些酶类可以来自动物源，例如狗、羊和牛。该PEP中还可以包括共脂肪酶。应该理解的是，如在此所使用的，术语“酶”不仅包括已经活化的形式还有酶原前体，该酶原前体能够在哺乳动物的肠液中被转化为活化的形式。在一个实施方案中，该PEP是胰脂肪酶，该胰脂肪酶具有从约69到约120U USP/mg的脂肪酶活性，大于或等于约216U USP/mg的淀粉酶活性,大于或等于约264U USP/mg的蛋白酶活性，以及大于或等于约264UUSP/mg的总蛋白酶活性。该PEP中的脂肪酶活性的范围(BPL处理之前或之后)可以是从约1，000到约150，000国际单位(U)。该PEP中的淀粉酶活性的范围(BPL处理之前或之后)可以是从约3，000到约500，000U。该PEP中的蛋白酶活性的范围(BPL处理之前或之后)可以是从约3，000到约500，000U。在另一个实施方案中，该PEP包含从约2，000到约75，000USP单位的脂肪酶，从约8，000到约250，000U的蛋白酶类，以及从约8，000到约250，000U的淀粉酶类。在又另一个实施方案中，该PEP包含从约2，000到约40，000USP单位的脂肪酶，从约8，000到约160，000U的蛋白酶类，以及从约8，000到约160，000U的淀粉酶类。该PEP中的脂肪酶活性(BPL处理之前或之后)可以是从约3000到约25，000IU，从约4500到约25，000IU,例如，从约4500到约5500IU,从约9000到约11，000IU,从约13，500到约16，500IU,以及从约18，000到约22，OOOIU0该PEP中的淀粉酶活性(BPL处理之前或之后)可以是从约8100到约180，000IU，例如从约8000到约45，000IU，从约17，000到约90，000IU，从约26，000到约135，000IU，从约35，000到约180，OOOIUo该PEP中的蛋白酶活性(BPL处理之前或之后)可以是从约8000到约134，000IU,例如从约8000到约34，000IU,从约 17，000 到约 67，000IU,从约 26，000 到约 100，000IU,从约 35，000 到约 134，OOOIUo 在一个实施方案中，该脂肪酶活性的范围是从约4500到约5500IU，该淀粉酶活性的范围是从约8000到约45，000IU,并且该蛋白酶活性的范围是从约8000到约34，OOOIU0在另一个实施方案中，该脂肪酶活性的范围是从约9000到约11，000IU，该淀粉酶活性的范围是从约17，000到约90，000IU,并且该蛋白酶活性的范围是从约17，000到约67，OOOIU0在又一个实施方案中，该脂肪酶活性的范围是从约13，500到约16，500IU，该淀粉酶活性的范围是从约26，OOO到约135，000IU,并且该蛋白酶活性的范围是从约26，000到约100，OOOIU0在还一个实施方案中，该脂肪酶活性的范围是从约18，000到约22，000IU，该淀粉酶活性的范围是从约35，000到约180，000IU，并且该蛋白酶活性的范围是从约35，000到约134，OOOIU0在还一个实施方案中，该脂肪酶活性可以是约5，000到约30，000脂肪酶PhEur。该PEP中的淀粉酶/脂肪酶(以USP单位计)的比率的范围(BPL处理之前或之后)可以是从约I. 8到约8. 2，例如从约I. 9到约8. 2，以及约2. O到约8. 2。该PEP中的蛋白酶/脂肪酶的比率的范围(BPL处理之前或之后)可以是从约I. 8到约6. 2，例如从约I. 9到约6. 1，以及约2. O到约6. I。在一个实施方案中，该PEP中的淀粉酶脂肪酶的比率(BPL处理之前或之后)可以在从约I到约10，例如从约2. 38到约8. 75的范围内(其中淀粉酶分析是根据USP进行的)。该PEP中的蛋白酶脂肪酶的比率(BPL处理之前或之后)可以在从约I. 00到约8. 00，例如从约I. 86到约5. 13的范围内(其中蛋白酶分析是根据USP进行的)。
在一个实施方案中，该PEP含有脂肪酶类、蛋白酶类、以及淀粉酶类，其中⑴该PEP中的淀粉酶与脂肪酶的比率的范围是从约3:1到约6:1并且(ii)蛋白酶与脂肪酶的比率的范围是从约3:1到约6:1 (如USP单位所测量的)。下表提供了另外的合适的胰腺酶混合物，其中脂肪酶类、蛋白酶类、以及淀粉酶类的量是以USP单位计。
I混合物D的混合物E ^混合物F—^I—^混合物G^ 法性〖USP单的法性(USP 的话性(USP单的法性 _I 位>单位)位)(USP单位)
m最大最小最大n: I— α — φ最大
-----M--
脂肪酶约 约约 约约19 I约45 约约60 类 2500 6500 12500 1750 500 000 丨 000 000
m ...约 10 约约 30 约——....................................................I-J....................................................I-J约 360
类 000 3500 000 80 50 160 3000 000 _O000 000 000
I..约 I O 约约 30 约 """"".........................................................I.................................约 360
类 000 3500 000 80 50 160 3000 000
_I O000 000 I 000 I _在另一个实施方案中，脂肪酶、蛋白酶、和淀粉酶的活性可以是以下表A和B中所描述的那些
表A
权利要求
1.一种具有减少的病毒感染性的胰腺酶制剂(PEP)，该胰腺酶制剂包含(i) 一种或多种胰腺酶以及(ii)3-羟基丙酸、β-丙内酯(BPL)、或它们的一种混合物。
2.如权利要求I所述的胰腺酶制剂，包含(i)一种或多种胰腺酶以及(ii)3-羟基丙酸。
3.如权利要求I所述的胰腺酶制剂，其中该制剂已经用丙内酯(BPL)预处理过并且所具有的猪细小病毒(PPV)的病毒感染性比末用BPL处理过的制剂的病毒感染性要低至少 llog。
4.如权利要求I所述的胰腺酶制剂，其中该制剂已经用丙内酯(BPL)预处理过并且所具有的无包膜病毒的病毒感染性比末用BPL处理过的制剂的病毒感染性要低至少Ilog0
5.如权利要求I所述的胰腺酶制剂，其中该制剂已经用丙内酯(BPL)预处理过并且所具有的有包膜病毒的病毒感染性比末用BPL处理过的制剂的病毒感染性要低至少Ilog0
6.如权利要求I所述的胰腺酶制剂，其中该制剂已经用丙内酯(BPL)预处理过并且所具有的猪脑心肌炎病毒(EMCV)的病毒感染性比末用BPL处理过的制剂的病毒感染性要低至少llog。
7.如权利要求I所述的胰腺酶制剂，其中该制剂具有小于约103FFID50/gPEP的猪细小病毒(PPV)的病毒感染性。
8.如权利要求I至7中任一项所述的胰腺酶制剂，其中在该制剂中的至少一种胰腺酶来自一种动物源。
9.如权利要求I至8中任一项所述的胰腺酶制剂，其中一种或多种酶是选自以下各项脂肪酶类、蛋白酶类、以及淀粉酶类。
10.如权利要求I至9中任一项所述的胰腺酶制剂，其中该制剂包含胰脂肪酶。
11.一种具有减少的病毒感染性的药用组合物，该药用组合物包含如权利要求I至10中任一项所述的制剂，以及任选的一种药学上可接受的赋形剂。
12.—种固体口服剂型，包括 一种具有减少的病毒感染性的胰腺酶制剂(PEP)，其中(i)该PEP包括从约1，000到约60，OOOUSP单位的脂肪酶类、从约3，000到约360，000USP单位的蛋白酶类、以及从约3，000到约360，000USP单位的淀粉酶类，并且(ii)该PEP已经用β -丙内酯(BPL)预处理过并且具有比没有用BPL处理的PEP的病毒感染性低至少Ilog的猪细小病毒(PPV)的病毒感染性，以及 任选地，一种或多种药学上可接受的赋形剂。
13.如权利要求12所述的固体口服剂型，其中该剂型是处于一种粉末、片剂、微片剂、微球、球粒、或胶囊的形式。
14.一种固体口服剂型，包括 一种具有减少的病毒感染性的胰腺酶制剂(PEP)，其中(i)该PEP包括从约1，000到约60，000USP单位的脂肪酶类、从约3，000到约360，000USP单位的蛋白酶类、以及从约3，000到约360，000USP单位的淀粉酶类，并且(ii)该PEP具有低于约100FFID5(l/g PEP的PPV感染性，以及任选地，一种或多种药学上可接受的赋形剂。
15.一种固体口服剂型，包括 一种具有病毒减少/灭活的胰腺酶制剂(PEP)，其中(i)该PEP包括从约2，500到约.45，000USP单位的脂肪酶类、从约7，500到约270，000USP单位的蛋白酶类、以及从约7，500到约270，000USP单位的淀粉酶类，并且(ii)该PEP已经用β -丙内酯(BPL)预处理过并且具有比没有用BPL处理的PEP的病毒感染性低至少Ilog的猪细小病毒(PPV)的病毒感染性，以及 任选地，一种或多种药学上可接受的赋形剂。
16.如权利要求15所述的固体口服剂型，其中该剂型是处于一种粉末、片剂、微片剂、微球、球粒、或胶囊的形式。
17.—种固体口服剂型，包括 一种具有病毒减少/灭活的胰腺酶制剂(PEP)，其中(i)该PEP包括从约2，500到约.45，000USP单位的脂肪酶类、从约7，500到约270，000USP单位的蛋白酶类、以及从约7，500到约270，000USP单位的淀粉酶类，并且(ii)该PEP具有低于约100FFID5(l/g PEP的PPV感染性，以及 任选地，一种或多种药学上可接受的赋形剂。
18.一种固体口服剂型，包括 一种具有减少的病毒感染性的胰腺酶制剂(PEP)，其中(i)该PEP包括从约1，000到约.60，000USP单位的脂肪酶类、从约3，000到约360，000USP单位的蛋白酶类、以及从约3，000到约360，000USP单位的淀粉酶类，并且(ii)该PEP已经用β -丙内酯(BPL)预处理过并且具有比没有用BPL处理的PEP的病毒感染性低至少Ilog的猪细小病毒(PPV)的病毒感染性， 3-羟基丙酸、β -丙内酯(BPL)、或它们的混合物，以及 任选地，一种或多种药学上可接受的赋形剂。其中该剂型是处于一种粉末、片剂、微片剂、微球、球粒、或胶囊的形式。
19.如权利要求18所述的固体口服剂型，其中该PEP包含从约2，500到约45，000USP单位的脂肪酶类、从约7，500到约270，000USP单位的蛋白酶类、以及从约7，500到约.270，000USP单位的淀粉酶类。
20.一种固体口服剂型，包括 一种具有减少的病毒感染性的胰腺酶制剂(PEP)，其中(i)该PEP包含从约1，000到约.60，000USP单位的脂肪酶类、从约3，000到约360，000USP单位的蛋白酶类、以及从约3，000到约360，000USP单位的淀粉酶类，并且(ii)该PEP具有低于约100FFID5(l/g PEP的PPV感染性， 3-羟基丙酸、β -丙内酯(BPL)、或它们的混合物，以及 任选地，一种或多种药学上可接受的赋形剂。其中该剂型是处于一种粉末、片剂、微片剂、微球、球粒、或胶囊的形式。
21.如权利要求20所述的固体口服剂型，其中该PEP包含从约2，500到约45，000USP单位的脂肪酶类、从约7，500到约270，000USP单位的蛋白酶类、以及从约7，500到约.270，000USP单位的淀粉酶类。
22.一种用于对需要治疗的病人进行胰功能不全的治疗的方法，该方法包括向该病人给予一个治疗有效量的如权利要求11所述的药用组合物。
23.一种制备胰腺酶制剂(PEP)的方法，该方法包括以下步骤(a)使β-丙内酯(BPL)与含有一种或多种胰腺酶的一种制剂反应足够的时间，以减少该制剂中的病毒感染性。
24.如权利要求21所述的方法，其中与BPL反应后该制剂中的无包膜病毒的病毒感染性比与BPL反应前该制剂中的无包膜病毒的病毒感染性低至少llog。
25.如权利要求21或22所述的方法，其中与BPL反应后该制剂中的有包膜病毒的病毒感染性比与BPL反应前该制剂中的有包膜病毒的病毒感染性低至少llog。
26.如权利要求21至23中任一项所述的方法，其中与BPL反应后该制剂中的猪细小病毒(PPV)或猪脑心肌炎病毒(EMCV)的病毒感染性比与BPL反应前该制剂的PPV或EMCV的病毒感染性分别低至少llog。
27.如权利要求21至24中任一项所述的方法，其中步骤(a)包括 (i)将BPL加入一种溶液中，该溶液含有该一种或多种胰腺酶的制剂，并且 (ii)在步骤(i)的溶液中将BPL孵育足够的时间，以减少该溶液中的病毒感染性。
28.如权利要求25所述的方法，其中步骤(i)包括加入到一种溶液或悬浮液中，该溶液或悬浮液包含从约100到约200mg PEP/ml、从约O. 004%到约I. 0% (v/v)的BPL0
29.如权利要求21至26中任一项所述的方法，其中该反应进行约30分钟到约72小时。
30.如权利要求21至27中任一项所述的方法，其中该反应在从约5°C到约50°C的温度下进行。
31.如权利要求21至28中任一项所述的方法，进一步包括以下步骤(b):在BPL与该含有这些胰腺酶的制剂进行反应后，使该BPL灭活。
32.如权利要求29所述的方法，其中步骤(b)包括将一种BPL灭活剂加到步骤(a)中形成的该溶液或悬浮液中。
33.如权利要求29所述的方法，其中步骤(b)包括将步骤(a)中形成的该溶液或悬浮液进行冷冻，然后将它冻干。
34.如权利要求29所述的方法，其中步骤(b)包括将步骤(a)中形成的该溶液或悬浮液孵育足够的时间，以将BPL降解为3-羟基丙酸，并且其中该溶液是一种水溶液。
全文摘要
本发明提供了包含胰腺酶制剂(PEP)的药用组合物，这些胰腺酶制剂具有减少至低于显著水平的病毒感染性并且具有高的酶活性。这些PEP可以包含脂肪酶类，蛋白酶类，淀粉酶类，无包膜病毒(例如，猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪脑心肌炎病毒(EMCV))，以及有包膜病毒(例如，水疱性口炎病毒(VSV)、和A型流感病毒(IF A))。本发明还包括通过给予这些药用组合物治疗胰功能不全的方法以及通过用β-丙内酯(BPL)处理该PEP以减少病毒感染性来制备这些药用组合物的方法。
文档编号A61K47/22GK102884181SQ201180022664
公开日2013年1月16日 申请日期2011年3月18日 优先权日2010年3月19日
发明者彼得·蒂森, 约瑟夫·塞莱伊 申请人:加拿大阿普塔利斯制药公司