专利名称：铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸药物中应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及铁皮石斛的新的应用，尤其涉及铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用。
背景技术：
慢性萎缩性胃炎属于中医“胃脘痛”、“痞满”、“嘈杂”等范畴，目前现代医学仍无特效疗法。中医理论认为其病因病机有虚实两个方面，脾气亏虚或胃阴不足，本虚是其内在原因，病理过程中，或者因虚致实，导致虚实夹杂。因而本虚标实、虚实夹杂是本病的病理特点。在治疗上历代医家有主张以养胃生津，促进通降为主要治法，如叶天士在《临证指南医案》中所谓“胃宜降则和，非用辛开苦降，亦非苦寒下夺，以损胃气，不过甘平或甘凉濡润以养胃阴，则津液来复，使之通降而已矣。此义即宗内经所谓六腑者传化物而不藏，以通为用之理也”。也有少数比例患者中医诊断属于湿困脾胃，表现为泛酸、嗳气、腹胀等，西医检查高胃酸，但这一类型患者并不适用养胃阴治疗方法。现代研究文献各家报告中，有滋阴养胃，健脾益气作为主要治疗方法；也有益气养阴化淤(活血)、益气养阴解毒等兼顾作为主要治疗方法。本研究应用铁皮枫斗颗粒以益气养阴、养胃生津，综合了滋阴养胃和益气的治疗方法，获得较好疗效。这正好符合了相关传统文献记载与现代文献报告。现代研究文献各家报告中存在不少问题如慢性萎缩性胃炎的诊断、分型、疗效评价没有统一标准；临床研究中缺乏严格的对照，研究设计不够严谨，急需制定严格的慢性萎缩性胃炎科研标准以及临床观察标准，使疗效更具客观性及说服力，从而将中医治疗慢性萎缩性胃炎的研究推向更高的水平；慢性萎缩性胃炎的临床治疗中，应用了文献报告中的药物，而实际取得的疗效没有文献报告的那么好，说明必须建立可以重复的研究和评价体系来实事求是地研究慢性萎缩性胃炎的中医药诊疗，以提高临床实际疗效。一般认为从正常胃黏膜发展到癌的病理变化过程是正常胃黏膜一浅表性胃炎一慢性萎缩性胃炎一伴发肠化生一伴发异型(不典型)增生一胃癌。低胃酸是慢性萎缩性胃炎胃黏膜由于炎症破坏、萎缩后的重要病理改变，促进慢性萎缩性胃炎低胃酸恢复，有利于胃内环境恢复正常，提高胃粘膜的抗炎、康复能力，在慢性萎缩性胃炎治疗中具有重要意义。有研究认为，慢性萎缩性胃炎患者中多为低胃酸型，也有正常胃酸型，以及高胃酸型。也有学者认为早期正常胃酸型有一定比例，晚期低胃酸型多见。促进慢性萎缩性胃炎低胃酸恢复，具有重要意义。目前现代医学治疗慢性萎缩性胃炎以及低胃酸还没有疗效较好的方法，只有采用稀盐酸、乳酸菌片等帮组消化的方法，并没有让慢性萎缩性胃炎，以及低胃酸得到有效恢复的手段
发明内容
本发明要解决的问题是，克服现有技术中的不足，提供一种铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用。为解决技术问题，本发明的解决方案是提供一种铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用。本发明所述的药物是掺有西洋参的铁皮枫斗颗粒，该药物通过下述方法制备获得(1)将铁皮石斛炮制为铁皮枫斗后与西洋参备用，备用的铁皮枫斗与西洋参重量比为 0. 67 1. 50 1 ；(2)将铁皮枫斗用温水浸泡半小时后热提取3次，每次提取8小时，每次提取后均将提取液离心、过滤，合并3次滤液得提取液；将提取液减压浓缩为45 55°C下时相对密度为1. 00 1. 20的浓缩液，备用；(3)将西洋参用70%乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液；减压回收乙醇， 减压浓缩为80 90°C下时相对密度为1. 05 1. 25的浓缩液，备用；(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并、混勻，将葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，得到铁皮枫斗颗粒；所述葡萄糖为辅料，其在铁皮枫斗颗粒中的含量为药学上可接受的辅料用量；在上述药物的制备过程中，每IOOOg铁皮枫斗颗粒使用铁皮枫斗120 180g。本发明所述的药物的使用方法是以成人用量计，6 对包/日，3 4次/日， 2 6包/次，3g/包，生药量0. 9g/包，以水冲服。与现有技术相比，本发明的有益效果是(1)本发明的铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎 (伴有异型增生)模型大鼠的胃液分泌实验说明，除具有减轻模型大鼠体重丢失，减轻胃黏膜炎症、萎缩，以及减轻异型增生和肠化的作用以外，有显著增加胃酸分泌量的作用。(2)本发明的铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎 (伴有异型增生)模型大鼠的胃液分泌作用较为显著，对正常大鼠的胃液分泌作用较小，有较好的安全性。(3)本发明的铁皮枫斗颗粒配方平和，适合于脾胃虚弱，或者因虚致实，导致虚实夹杂的脾胃病的调理康复。中医药治疗安全性较好，可以长期服药，具有巩固疗效、防止复发以及全身调整等综合作用，展现了中医药在该研究领域的广阔前景。
具体实施例方式石斛为兰科植物，它分铁皮、金钗、马鞭、黄草、铜皮等几十种。同为石斛，同科同属但不同种，其药效和市场价格也往往有着天壤之别。石斛中以铁皮石斛最为稀有名贵，它因外表呈深绿色或铁青色而得名，中药界有“北有人参，南有枫斗”的说法。谤语称“野山人参壮阳气，像太阳；铁皮石斛滋阴精，似月亮”。新鲜石斛不能久存，经整理、烘焙、加箍、干燥四个步骤将其炮制成螺旋状的干品， 即枫斗。铁皮石斛(其幼茎粗壮、粘汁浓厚、纤维较少)加工后被称为铁皮枫斗。铁皮枫斗的外观饱满、坚实，外表光亮、耐泡，由于铁皮石斛多糖分子量较其它品种的石斛高得多，因而滋阴效果最佳，价格也最贵。实施例1铁皮枫斗颗粒的制备
(1)按处方比例称取铁皮枫斗167g，西洋参133g，备用。(2)将铁皮枫斗药材用温水浸泡半小时，热提取3次，每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤，合并3次滤液，得提取液。提取液减压浓缩，浓缩至相对密度为 1.00(55°C)的浓缩液，备用。(3)将西洋参置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，减压回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.05(90°C )浓缩液，备用。(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并，混勻，将适量葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，制成IOOOg颗粒，即得。实施例2铁皮枫斗颗粒的制备(1)按处方比例称取铁皮枫斗120g，西洋参180g，备用。(2)将铁皮枫斗药材用温水浸泡半小时，热提取3次，每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤，合并3次滤液，得提取液。提取液减压浓缩，浓缩至相对密度为 1. 15(51°C )的浓缩液，备用。(3)将西洋参置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，减压回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 15(87°C )浓缩液，备用。(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并，混勻，将适量葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，制成IOOOg颗粒，即得。实施例3铁皮枫斗颗粒的制备(1)按处方比例称取铁皮枫斗180g，西洋参120g，备用。(2)将铁皮枫斗药材用温水浸泡半小时，热提取3次，每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤，合并3次滤液，得提取液。提取液减压浓缩，浓缩至相对密度为 1.20(45°C)的浓缩液，备用。(3)将西洋参置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，减压回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 25 (80°C )浓缩液，备用。(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并，混勻，将适量葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，制成IOOOg颗粒，即得。以下通过试验实施例证明本发明所述药物铁皮枫斗颗粒在治疗慢性萎缩性胃炎中的应用。1、实验材料与检验统计方法1. 1实验药物1.1.1受试药物铁皮枫斗颗粒，颗粒剂，每袋3g，内含生药铁皮石斛0. 5g、西洋参0. 4g。主要功能益气养阴、养胃生津。由浙江天皇药业有限公司生产，制备方法与实施例中相同。批号 091004，有效期2年。1.1.2对照药物养胃舒颗粒，颗粒剂，每袋10g，内含党参、陈皮、黄精、山药、玄参、乌梅、山楂、北沙参、干姜、菟丝子、白术(炒)等，由合肥神鹿双鹤药业有限公司生产，临床人体用药量20g/ 日。批号0902206，有效期3年。1. 2实验动物
Wistar大鼠，雌雄各半，均由上海斯莱克实验动物有限公司提供。实验动物均饲养于25 士 2°C的屏障实验室内。1. 3实验仪器721可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司生产；HR40-IIA2生物安全柜，青岛海尔特种电器有限公司生产；XQ-280SD高压灭菌器，嘉兴市中新医疗仪器有限公司生产；GS-6R 离心机，Beckman 公司；XT-ISOOiv五分类血细胞分析仪，日本希森美康公司生产；RM2235 LEICA病理切片机，德国莱卡公司；EG1150C LEICA生物组织冷冻机、EG1150H LEICA生物组织包埋机，德国莱卡公司；ASP200 LEICA生物组织自动脱水机，德国莱卡公司；BX41 OLYMPUS显微镜，日本OLYMPUS (才丨J > “ 7 )株式会社；BU200S电子精密天平(0. 001_200g)，北京赛多利斯天平有限公司生产；生物安全动物饲养笼柜，苏州市金净净化设备科技有限公司生产；Nikon ECLIPSE Ti显微摄像系统，日本Nikon株式会社；Leica Qffin彩色<RG>图像分析系统，德国莱卡公司。1. 4实验试剂无水乙醇500ml/瓶，成都市科龙化工试剂有限公司，批号20091124、20100712 ；一次性使用真空采血管2. 0ml，内含乙二胺四乙酸(EDTA 二钾)，浙江康是医疗器械有限公司，批号100821 ；亚硝基胍(MNNG) :5g/瓶，上海蓝季生物公司购买，由日本东京化成工业株式会社生产，批号PL2XF ；碘(Iim)胃泌素放射免疫分析药盒北京北方生物技术研究所，批号110320 ；免疫组化试剂胃黏膜上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA) =NeoMarkers生产，批号MS-106_P0 ；抗凋亡基因(Bcl-2)=Millipore 生产，批号NG1736345 ；抑癌基因(P53):Millipore 生产，批号LBC1794857。
1.5病理组织学检查方法标本标本为全胃，上段留0. 5cm食管，下段留1. 5cm十二指肠；沿胃大弯剪开，用大头针，塑料泡沫板固定，浸于10%中性福尔马林。在浸于福尔马林前大体观拍照。取材从前胃到十二指肠纵向全长、全层取材，侧壁一条取材为标准的病理取材。包埋切片石蜡包埋，作4 μ m切片。染色HE染色、AB染色、银染，以及免疫组化PCNA、Bcl_2、P53的染色，按照相关要求操作HE 染色Harris 染色法；AB染色阿尔辛蓝染色法；银染色:W-S法；PCNA 染色、Bcl-2 染色、P53 染色=Envison 二步法。
光镜观察(1)胃黏膜炎症情况用半定量法，即在低倍镜下观察整个胃黏膜，然后在胃窦部取10个视野，参照1994年美国休斯顿提出的胃炎诊断标准，按炎症细胞浸润的程度分为 0 3七个级别。具体如下0级无炎症；0. 5级镜下观察炎症介于0与1之间；1级在胃小凹区或固有腺底部可见多个慢性炎细胞浸润；1. 5级镜下观察炎症介于1与2之间； 2级在胃黏膜小凹至黏膜肌层均有较多炎细胞浸润；2. 5级镜下观察炎症介于2与3之间；3级胃黏膜内可见成堆炎细胞聚集灶。(2)胃黏膜腺体厚度每张切片取胃窦部黏膜5个视野，用测微器测出每个视野的胃窦黏膜腺体厚度，得出每张切片5个视野的平均值(μ m)。(3)胃腺体数目100倍镜下，找到每只大鼠的幽门环0. 2-1. 2mm(200 1200 μ m) 之间(即Imm范围)胃窦固有腺体总个数，单位以“个/mm”表示。(4)异型增生每张切片取5个高倍镜视野观察胃黏膜上皮细胞有无细胞核多形性，腺体异型增生。(采用轻、中、重级别报告)(5)壁细胞、主细胞数目400倍镜下，每张切片取前胃和胃体部交界以下1.0mm开始的胃体部黏膜5个视野平均值。(6)肠上皮化生表现AB染色，观察胃黏膜的肠化情况(杯状细胞等)。根据正常大鼠胃黏膜AB染色就能见到一定比例的大鼠有1/3以下面积呈现阳性，参照《中药新药治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究指导原则》(2002试行版)，2006中国上海慢性胃炎共识意见，以及文献报告，将临床的人体胃黏膜肠化标准肠化分为无(0)、轻(+)、中(++)、重 (+++)，修改为大鼠的胃黏膜肠化标准肠化分为无(0)-轻(+)、中(++)、重(+++)，即将无 (0)-轻(+)合并为一个等级，为正常大鼠无(0)-轻度⑴无肠化-肠化表面上皮或/和腺体占黏膜总面积的1/3以下 (为正常大鼠)。一般胃窦部黏膜深部有极少量染色呈阳性，胃体部浅表部有染色呈阳性；中(++)肠化表面上皮或/和腺体占黏膜总面积的1/3-2/3 ；重(+++)肠化表面上皮或/和腺体占黏膜总面积的1/3以上。AB染色图象分析方法每个动物切片随机取胃窦部胃黏膜5张照片，采用 NikonECLIPSE Ti显微摄像系统，400倍拍摄，各组在相同条件下操作拍摄。采用Leica Qffin 彩色<RG>图像分析系统分析，各组以相同条件下选取每张照片的阳性总面积与所分析照片总面积的比例(％ )，取每个动物切片5张照片的平均阳性面积比(％ )，进行组间统计比较。1. 6PCNA、Bcl-2、P53读片方法PCNA、P53阳性染色定位于细胞核；Bcl_2阳性染色定位于细胞质内，偶然可以伴有核着色。结果判断标准采用阳性细胞半定量分级法，随机观察5个高倍视野(X400)取平均数，计数细胞总数和阳性细胞数，得出阳性细胞百分比。先根据阳性细胞百分比计分彡5%为0分，6% -25%为1分，沈％ -50%为2分，> 50%为3 分；再根据阳性细胞染色强度计分无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为 3分；然后合计两积分0分为阴性“-”，1-2分为弱阳性“ + ”，3-4分为中度阳性“++”，5-6分为强阳性“+++”。1. 7血细胞分析方法需要取血的大鼠在将胃摘出前，戊巴比妥麻醉，腹主动脉取血，全血放置于一次性
7使用真空采血抗凝管，采用XT-ISOOiV五分类血细胞分析仪(日本希森美康公司生产)检查靴常规，自动生成分析结果报告。1. 8血浆胃泌素检测方法采用添加EDTA的抗凝试管，离心取血浆，按照血浆胃泌素检测放免试剂盒说明书要求操作。1. 9统计方法采用SPSS统计，所有数据以均数(X ) 士标准差( 表示，多组均数比较采用F检验，其中两组比较计量资料采用LSD-t检验，方差不齐时加做Durmett T3检验，计数资料采用X2检验。2、分实验方法与结果2. 1 实验一铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗作用的实验2. 1. IMNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠造模方法以6周龄的雌雄各半Wistar大鼠，在饮水中加入MNNG。每星期先用蒸馏水配成 lg/L浓度的储存液，避光冷藏保存。同时配成167μ g/ml蒸馏水浓度的饮用液，装入200ml 的水瓶，外涂黑色，每日更换，让大鼠尽量饮用。数周后胃黏膜可出现糜烂、炎症变化，逐渐加重，发生萎缩和异型增生等变化。2-3个月可成模，本次实验12周造模。MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎(伴有异型增生)模型大鼠为各种造模方法的慢性胃炎模型大鼠中病情较重、较难治疗后恢复的模型，选用这种模型进行试验，能较可靠地说明药物的治疗作用。2. 1. 2铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠分组治疗造模完成时，取4只模型动物与4只正常动物做胃病理组织学检查，确定成模后， 按照实验的分组要求(每组12只，其中正常组、模型组、高剂量组增加为22只)分组并开始给药。3组为铁皮枫斗颗粒低、中、高剂量组，分别给药折合生药量为0. 6g、1.2g、2. 4g/kg体重/日灌胃，1组为模型生理盐水对照组，给等容量生理盐水灌胃，1组为阳性药物对照组， 给养胃舒颗粒4. Og/kg/日灌胃，此外，另取22只相同条件的大鼠给等容量生理盐水灌胃作为空白(未造模)对照组。根据预实验初步确定的疗程为5-6周，在给药第4、6周完成时， 正常组、高剂量组、模型组分别各取2-4只大鼠，均托颈椎处死，迅速将胃摘出，用福尔马林固定，石蜡包埋，作4 μ m切片，染色，进行组织学检查，了解疗效。(在给药4、6周的实验中发现模型组有一定的胃肠大体观改变，在给药第8周中，模型组再取2只大鼠，处死，观察大体观，未见其它进一步改变)。初步了解有效后，在给药第8周完成时，6组大鼠均麻醉，腹主动脉取血，迅速将胃摘出，用福尔马林固定，石蜡包埋，作4μπι切片，用HE、AB染色，进行组织学检查。2. 1. 3铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗作用的实验结果(1)体重见表1、表2、表3。表1.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周的大鼠体重 (I 士S，单位g)
权利要求
1.铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用，其特征在于，所述的药物是掺有西洋参的铁皮枫斗颗粒，该药物通过下述方法制备获得(1)将铁皮石斛炮制为铁皮枫斗后与西洋参备用，备用的铁皮枫斗与西洋参重量比为 0. 67 1. 50 1 ；(2)将铁皮枫斗用温水浸泡半小时后热提取3次，每次提取8小时，每次提取后均将提取液离心、过滤，合并3次滤液得提取液；将提取液减压浓缩为45 55°C下时相对密度为 1.00 1.20的浓缩液，备用；(3)将西洋参用70%乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液；减压回收乙醇，减压浓缩为80 90°C下时相对密度为1. 05 1. 25的浓缩液，备用；(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并、混勻，将葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，得到铁皮枫斗颗粒；所述葡萄糖为辅料，其在铁皮枫斗颗粒中的含量为药学上可接受的辅料用量；在上述药物的制备过程中，每IOOOg铁皮枫斗颗粒使用铁皮枫斗120 180g。
3.根据权利要求1所述的铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用，其特征在于，所述的药物的使用方法是以成人用量计，6 M包/日，3 4次/日， 2 6包/次，3g/包，生药量0. 9g/包，以水冲服。
全文摘要
本发明涉及铁皮石斛的新用途，旨在提供铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸药物中应用。本发明揭示了铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用，和基于铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物的制备方法。本发明为慢性萎缩性胃炎低胃酸的治疗提供了一种新手段。除具有减轻体重丢失，减轻胃黏膜炎症、萎缩，以及减轻异型增生和肠化的作用以外，有显著增加胃酸分泌量的作用。本发明的铁皮枫斗颗粒配方平和，适合于脾胃虚弱，或者因虚致实，导致虚实夹杂的脾胃病的调理康复。中医药治疗安全性较好，可以长期服药，具有巩固疗效、防止复发以及全身调整等综合作用。
文档编号A61K9/16GK102552702SQ20121002650
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月7日 优先权日2012年2月7日
发明者吴人照, 张旭峰, 张春丽, 张根花, 戴关海, 李珺, 李端阳, 杨兵勋, 杨敏, 杨芳亮, 杨锋, 楼正家, 童晔玲, 郑纯威, 陈宇, 陈武兵, 陈立钻 申请人:浙江天皇药业有限公司