专利名称：抗体组合物制剂及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物制剂技术领域,具体涉及一种曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab形成的抗体组合物制剂及其应用。
背景技术：
人类表皮生长因子受体2 (human epidermal growth factor receptor2,Her-2)是一个由原癌基因CerbB2 (Her2/neu)编码的具有受体酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase，RTK)活性的跨膜糖蛋白。其属于表皮生长因子受体家族，该家族包括HERKerbBl，EGFR)、HER2 (erbB2，NEU)、HER3 (erbB3)及 HER4 (erbB4)。研究表明，Her_2 在 20% 30%的原发性乳腺浸润性导管癌中有基因的扩增和蛋白的过度表达。Her-2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。由罗氏子公司基因泰克生产的曲妥珠单抗Trastuzumab (商 品名赫赛汀，herceptin)是一种针对Her-2/neu原癌基因产物的人源化单克隆抗体,能特异地作用于Her-2过度表达的乳腺癌细胞。1998年，曲妥珠单抗获得美国食品及药物管理局(Food and Drug Administration, FDA)批准上市,用于Her_2表达阳性的乳腺癌治疗。曲妥珠单抗对Her-2阳性乳腺癌的疗效好，患者的无病生存期明显延长，但另有将近50%的Her-2阳性患者对曲妥珠单抗治疗不敏感(Singer CF, Predicting the efficacyof trastuzumab—based therapy in breast cancer: current standards and futurestrategies, Biochim Biophys Acta，2008，1786 (2) :105_113)，并且大部分 Her_2 阳性患者在经过I年的曲妥珠单抗治疗后，即会对其产生耐药性。帕妥珠单抗Pertuzumab是第I个被发现的一类HER2聚化抑制因子，与HER2结合后抑制HER2同其他HER受体的聚化，导致有丝分裂活化蛋白激酶和PI3K通路受抑，进而出现肿瘤细胞生长停滞和凋亡，最终延缓肿瘤的生长。帕妥珠单抗也是结合在!ER胞外域的单克隆抗体，但结合位点不同于曲妥珠单抗；帕妥珠单抗结合在J1ER2受体胞外结构域II区而曲妥珠单抗结合在J1ER2受体细胞外IV区。由异源二聚体诱导的配体活化的下游信号通路可被帕妥珠单抗阻断，但不能被曲妥珠单抗阻断；此外，帕妥珠单抗能够抑制J1ER2不过度表达肿瘤细胞的生长。在J1ER2扩增细胞株及异种移植模型的临床前期试验中发现，帕妥珠单抗能够有效地干扰HER2-HER3 二聚体的形成，导致下游丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和PI3K信号通路的中断，呈现抗肿瘤活性(Werner Scheuer et al. , Strongly EnhancedAntitumor Activity of Trastuzumab andPertuzumab Combination Treatment onHER2-Positive Human Xenograft TumorModeIs,Cancer Res，2009，69 (24):9330_9336)o帕妥珠单抗和曲妥珠单抗联合比单用效果更明显，提示两者有互补机制存在。帕妥珠单抗单药反应率仅3. 4%,但和曲妥珠单抗联合使用反应率可达21. 4%。Baselga等报道，帕妥珠单抗和曲妥珠单抗联合治疗66例曲妥珠单抗耐药转移乳腺癌患者，5例(7. 6%)达完全缓解，11例(16. 7%)达部分缓解，17例(25. 8%)达稳定且时间超过6个月，中位无进展生存时间(progress freesurvival, PFS)为 5. 5 个月(Baselga J. et al. , Phase IITrial of Pertuzumab andTrastuzumab in Patients With Human Epidermal GrowthFactor Receptor2 - Positive Metastatic Breast Cancer That Progressed DuringPrior TrastuzumabTherapy, J Clin Oncol,2010,28 (7) :1138_1144)。美国食品药品管理局(H)A)于2012年6月8日批准帕妥珠单抗作为一线治疗，这一批准令在很大程度是基于CLEOPATRA (帕妥珠单抗与曲妥珠单抗的临床评估)试验的结果。双重HER2阻断可使中位无进展生存期从标准化疗对照组的12. 4个月增至标准化疗+帕妥珠单抗组的18. 5个月。这相当于中位无进展生存期延长6. I个月、疾病进展或死亡的风险降低 38%,具有统计学意义(Baselga J. et al. , Pertuzumab plus Trastuzumab plusDocetaxel for MetastaticBreast Cancer, N Engl J Med2012 ;366 :109_19)。但目前尚无有关曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab形成的抗体组合物制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab形成的抗体组合物制剂。本发明的另一目的是提供上述抗体组合物制剂的应用。曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab形成的抗体组合物制剂，需要解决的技术问题是(I)稳定性一防止抗体非共价聚合物形成；(2)更好地体现曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的协同作用。本发明的第一方面，提供了一种曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab形成的抗体组合物制剂,其包含一10至60mg/ml的曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab组合物，曲妥珠单抗或帕妥珠单抗均不少于5mg/ml ；—I至IOOmM缓冲剂，其提供pH为4. 5至7.0 ；—I至500mM稳定剂或两种以上稳定剂的混合物；—0. 01至0. 08% (w/v)非离子型表面活性剂；和—25 至 IOOOmM 的 L-精氨酸。通过将具有所需纯度的抗体组合与任选的可药用的载体、赋形剂或稳定剂混合，并以冻干制剂或水溶液的形式制备根据本发明使用的抗体的治疗制剂用于储存。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在采用的剂量和浓度对接受者是无毒的。本文所用的术语“缓冲液”指可药用的缓冲液。适宜的可药用的缓冲液包括但不限于L-组氨酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液。优选的缓冲液包括L-组氨酸或L-组氨酸与L-组氨酸盐酸盐和等张剂，并且可能用本领域己知的酸或碱调节pH。最优选的是L-组氨酸。上述的L-组氨酸缓冲液通常以大约ImM至大约lOOmM、优选大约ImM至大约50mM并且还更优选大约20mM的量使用。不依赖所使用的缓冲液，通过用本领域己知的酸或碱调节或者通过使用适当的缓冲成分的混合物或者二者将PH调节至包括4. 5至7. O、优选5. 0至6. 5，并且更优选为6. 0的值。本发明所用的术语“"稳定剂”指可药用的稳定剂，例如但不限于以下的氨基酸、糖或本领域己知的任何种类和分子量的市售的葡聚糖。所述的“氨基酸”指大约I至大约100mg/ml量的氨基酸，其包括但不限于精氨酸、甘氨酸、鸟氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、脯氨酸。所述的“糖”指大约5mM至大约500mM量的可药用的糖。优选的是15至250mM。最优选的是120mM。适宜的糖包括但不限于单糖和二糖。根据本发明的糖的非限制性实例包括海藻糖、鹿糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、葡糖胺、N-甲基葡糖胺(通常所说的“葡甲胺”)、半乳糖胺和神经氨酸及其组合。最优选的是海藻糖或鹿糖。本文所用的术语“表面活性剂”指可药用的表面活性剂。在本发明的制剂中，表面活性剂的量以重量/体积百分比(w/v)表达。最常使用的重量/体积单位是mg/ml。适宜的、可药用的表面活性剂是指非离子表面活性剂，如TWEENtm、PLURONICS 或聚乙二醇(PEG)。优选的聚氧乙烯失水山梨醇一聚氧乙烯(20)失水山梨醇酯(聚山梨酯20，吐温20 )和聚氧乙烯(20)失水山梨醇单油酸酯(聚山梨酯80，吐温80 )时，它们通常的用量是0. 01至0. 08%,优选为0. 02%至0. 04%o本发明所述的L-精氨酸，能防止抗体非共价聚合物的形成。L-精氨酸常用于蛋白质的复性，能有效防止蛋白的聚集，增强蛋白稳定性，提高复性效率。在分子排阻层析中，L-精氨酸能抑制蛋白质与层析基质的非专一性吸附，有助于蛋白的洗脱。在一个优选的实施方案中，本发明的抗体组合物制剂包含一5 至 30mg/ml 的曲妥珠 单抗 Trastuzumab ；一5 至 30mg/ml 的帕妥珠单抗 Pertuzumab ；— I至50mM缓冲剂，其提供pH为5. 0至6. 5 ;—I至500mM稳定剂或两种以上稳定剂的混合物；—0. 01至0. 08% (w/v)非离子型表面活性剂；和一 25 至 700mM 的 L-精氨酸。进一步地，所述的缓冲剂是L-组氨酸，浓度为I至50mM，提供pH优选为5. 0至6. 5，更佳地是20mM的L-组氨酸/HCl缓冲液，pH6. O。所述的稳定剂是糖类，例如二水合a，a -海藻糖或蔗糖，浓度分别是15至250mM，优先为120mM。所述的非离子型表面活性剂是聚山梨酯，如聚山梨酯20或聚山梨酯80，浓度分别是 0. 02% (w/v)或 0.04% (w/v)。所述的L-精氨酸，优选的是50mM、100mM、或200mM。在一个更优选的实施方案中，本发明的抗体组合物制剂包含一10 至 30mg/ml 的曲妥珠单抗 Trastuzumab ；-10 至 30mg/ml 的帕妥珠单抗 Pertuzumab— 20mM的L-组氨酸，提供pH为6. 0 ;— 120mM 蔗糖；一0. 02% (w/v) Tween20 ;和-IOOmM 的 L-精氨酸。在上述实施方案中，IOOmM的L-精氨酸能有效防止抗体制剂在冻融及高温放置条件下蛋白聚合物(HMW)含量的增加。优选地，抗体组合物选自5mg/ml 的曲妥珠单抗 Trastuzumab 和 15mg/ml 的帕妥珠单抗 Pertuzumab、25mg/ml的曲妥珠单抗Trastuzumab和25mg/ml的帕妥珠单抗Pertuzumab、或30mg/ml的曲妥珠单抗 Trastuzumab 和 30mg/ml 的帕妥珠单抗 Pertuzumab。本发明的第二方面，根据本发明的抗体组合物制剂可以是液体形式、冻干形式或由冻干形式重构的液体形式。在一个实施方案中，根据本发明的抗体组合物制剂是冻干制剂。根据本发明的冻干制剂对于更高分子量的颗粒和聚集物的形成具有改善的稳定性的优点。可通过静脉注射(i. V.)、皮下注射(s. c.)或任何其它非肠道给药方式(如药学领域中己知的那些给药方式)施用根据本发明的制剂。本文所用的术语“液体”指一种制剂，其在至少大约2至大约8°C的温度下为液体。 本文所用的术语“冻干的”指一种制剂，其用本领域己知的任何冷冻干燥方法(例如市售的冷冻干燥装置)通过将制剂冷冻然后使冰从冷冻的内容物中升华来干燥。用于体内施用的制剂必须是无菌的。这通过无菌过滤膜过滤容易实现。本发明的第三方面，是提供上述抗体组合物制剂的应用。本发明的抗体组合物制剂在制备用于治疗适合于用抗HER2抗体治疗的疾病或病症的药物中的应用，例如癌症或非恶性疾病。本发明的抗体组合物制剂在制备用于治疗适合于用抗HER2抗体治疗的疾病或病症的药物中的应用，该应用是将本发明的抗体组合物制剂与化疗剂伴随或序贯共施用。适合于用抗HER2抗体治疗的疾病或病症，例如人乳腺癌、胃癌、肺癌或卵巢癌。本发明的有益效果本发明提供的曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的组合制剂具有更佳的治疗肿瘤活性，相比曲妥珠单抗和帕妥珠单抗单独治疗，组合制剂显示了两种抗体具有协同效果，如实施例19所示，组合制剂的肿瘤抑制率达到了 92. 43%，远高于曲妥珠单抗和帕妥珠单抗单独治疗的肿瘤抑制率。而本发明对两种抗体组合在一起的稳定性进行了研究，发现10至60mg/ml的曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab组合物,在pH为4. 5至7. 0的I至IOOmM缓冲剂，加入I至500mM稳定剂或两种以上稳定剂的混合物，以及0. 01至0. 08% (w/v)非离子型表面活性剂和25至IOOOmM L-精氨酸的条件下可行形成相对稳定的制剂。特别是本发明引入适当浓度的L-精氨酸有利于减少聚体的形成，特别是能有效防止抗体制剂在冻融及高温放置条件下蛋白聚合物(HMW)含量的增加。本发明的制剂的稳定更优，有利于组合抗体制剂的长期保存。
图I是本发明用于人乳腺癌BT-474裸小鼠移植瘤的实验治疗效果。
具体实施例方式下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。应理解这些实施例仅用于说明本发明，而不用于限制本发明的应用范围。实施例I :如下根据本发明用于肠胃外施用的液体和冻干药物产品制剂I、液体制剂的制备通过超滤/渗滤方法分别将曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab溶液交换至相应的制剂缓冲液(如20mM L-组氨酸，pH6. O或20mML_组氨酸，0. 02%w/v聚山梨酯20，pH6.0)，并浓缩至一定的蛋白浓度，如70mg/ml。然后用相应的制剂缓冲液将其稀释至所需的蛋白浓度。稳定蛋白的制剂组分如蔗糖、氨基酸如L-精氨酸可以溶解形式或固体形式加入，表面活性剂可以储液形式加入。最后将相同体积的Trastuzumab和Pertuzumab制剂溶液混合均勻。将所有的制剂通过0. 22 ii m过滤器过滤除菌,然后无菌分装至无菌玻璃瓶并用胶塞和铝盖密封。将这些制剂储存在不同的温度以及不同的时间，在相应时间点取出进行质量分析。对制剂进行如下分析I)通过Lowry法，2)通过大小排阻层析(SEC)，3)通过不溶性微粒，4)通过离子交换层析法(IEC)和5)通过溶液的浊度。2、冻干制剂的制备如上文对液体制剂所述制备Trastuzumab和Pertuzumab抗体组合物的制剂溶液，将全部的制剂通过0. 22 y m过滤器过滤除菌，然后按IOml/瓶的装量无菌分装至无菌玻璃 瓶。用适用于冻干过程的胶塞部分密封玻璃瓶，然后转移至冷冻干燥器的干燥室中。本领域中己知的任何冻干方法都包括在本发明的范围内。例如，首先将产物自室温冷却至约5°C(预冷却)，接着以约1°C /分钟的板冷却速率于_40°C进行冷冻步骤，接着于_40°C保温约2小时。于约_20°C的板层温度和约IOOii bar的室压力实施第一个干燥步骤达约48小时。随后，自_25°C至25°C以0. 2V /分钟的温度升温开始第二个干燥步骤，接着于25°C的保持步骤以约100 u bar的室压力持续至少5小时，具体步骤如表I所示。表I :抗体组合物的制剂冻干过程
权利要求
1.一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其包含 一 10至60mg/ml的曲妥珠单抗和帕妥珠单抗组合物，曲妥珠单抗或帕妥珠单抗均不少于 5mg/ml ； —I至IOOmM缓冲剂，其提供pH为4. 5至7. 0 ; 一 I至500mM稳定剂或两种以上稳定剂的混合物； —0. 01至0. 08%w/v的非离子型表面活性剂；和 一25至IOOOmM的L-精氨酸。
2.根据权利要求I所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的缓冲液是指L-组氨酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液。
3.根据权利要求I或2所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的缓冲液是ImM至IOOmM,其提供pH为5. 0至6. 5。
4.根据权利要求I所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的缓冲液是指20mM的L-组氨酸缓冲液，其提供pH为6. O。
5.根据权利要求I所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的稳定剂是指氨基酸、糖或葡聚糖。
6.根据权利要求5所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的氨基酸指I至100mg/ml的精氨酸、甘氨酸、鸟氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸或脯氨酸。
7.根据权利要求5所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的糖是指15至250mM的海藻糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、半乳糖胺或神经氨酸。
8.根据权利要求5所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的糖是指120mM的海藻糖或蔗糖。
9.根据权利要求I所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的非离子表面活性剂是指TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇。
10.根据权利要求I所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的非离子表面活性剂是指0. 02%至0. 04%的聚山梨酯20或聚山梨酯80。
11.根据权利要求I所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，该抗体组合物制剂包含 一 5至30mg/ml的曲妥珠单抗； 一5至30mg/ml的帕妥珠单抗； 一 I至50mM缓冲剂，其提供pH为5.0至6.5 ; 一 I至500mM稳定剂或两种以上稳定剂的混合物； —0. 01至0. 08%w/v的非离子型表面活性剂；和 一 25至700mM的L-精氨酸。
12.根据权利要求11所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的缓冲剂20mM的L-组氨酸/HCl缓冲液，其提供pH为6. O。
13.根据权利要求11所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的稳定剂是120mM的二水合a，a -海藻糖或蔗糖。
14.根据权利要求11所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的非离子型表面活性剂是0. 02%w/v的聚山梨酯20或0. 04%w/v的聚山梨酯80。
15.根据权利要求11所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，所述的L-精氨酸浓度是50mM、IOOmM或200mM。
16.根据权利要求I所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，该抗体组合物制剂包含 -10至30mg/ml的曲妥珠单抗； -10至30mg/ml的帕妥珠单抗； -20mM的L-组氨酸，提供pH为6. 0 ; -120mM 鹿糖；-0. 02%w/v 的 Tween20 ;和 -IOOmM的L-精氨酸。
17.根据权利要求16所述的一种曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，该抗体组合物制剂包含 15mg/ml的曲妥珠单抗和15mg/ml的帕妥珠单抗、 25mg/ml的曲妥珠单抗和25mg/ml的帕妥珠单抗,或 30mg/ml的曲妥珠单抗和30mg/ml的帕妥珠单抗。
18.根据权利要求1-17任一所述的曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂，其特征在于，该抗体组合物制剂是液体形式、冻干形式或由冻干形式重构的液体形式。
19.一种如权利要求1-17任一所述的曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂在制备用于治疗适合于用抗HER2抗体治疗的疾病或病症的药物中的应用。
20.根据权利要求19所述的曲妥珠单抗和帕妥珠单抗形成的抗体组合物制剂在制备用于治疗适合于用抗J1ER2抗体治疗的疾病或病症的药物中的应用，其中的疾病是人乳腺癌、胃癌、肺癌或卵巢癌。
全文摘要
本发明涉及药物制剂技术领域。本发明提供了一种曲妥珠单抗Trastuzumab和帕妥珠单抗Pertuzumab形成的抗体组合物制剂，该抗体组合制剂具有更佳的治疗肿瘤活性，相比曲妥珠单抗和帕妥珠单抗单独治疗，组合制剂显示了两种抗体具有协同效果，肿瘤抑制率达到了92.43%。而且本发明的制剂的稳定更优，有利于抗体组合制剂的长期保存。本发明的抗体组合物制剂在制备用于治疗适合于用抗HER2抗体治疗的疾病或病症的药物中的应用，该应用是将本发明的抗体组合物制剂与化疗剂伴随或序贯共施用。
文档编号A61K39/395GK102961745SQ20121037138
公开日2013年3月13日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者谭靖伟, 王群, 唐瑶 申请人:苏州康聚生物科技有限公司