专利名称：去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法
技术领域：
本发明涉及液体混合物分离提纯技术，尤指一种去除美洲大蠊提取物中油脂的方法及其检测方法。
背景技术：
美洲大蠊(Periplaneta americana)是蜚蠊科中体积最大的昆虫,成虫体长29 35毫米，红褐色，翅长于腹部末端。触角很长，前胸背板中间有较大的蝶形褐色斑纹，斑纹的后缘有完整的黄色带纹，原产于南美洲，食性广泛，喜食糖和淀粉，污染食物。美洲大蠊是传统的中药材，以成虫入药。性寒味咸，有毒，有辛辣味、有散瘀、消积、解毒、利水、消肿等功能。现代研究发现，美洲大蠊表皮含有巩膜质、甲壳质、溴、锌、镍、猛、 钾、钙、钛、氯、硫、硅、铝、镁等元素，肌肉水解13种氨基酸，身体贮藏微生素BI、B2、烟酸和抗坏血酸等，淋巴含海藻糖、海藻糖酶、糖蛋白、肌醇、原儿茶酸葡萄甙等，全体含麦角硫因、龙虾肌碱、胡芦巴碱、甘氨酸、甜菜碱、肛碱、三甲胺、腺嘌呤等。美洲大蠊干燥虫体提取物药物功效及作用机制
美洲大蠊干燥虫体提取物，含有WHF(多元醇类、表皮生长因子)、粘氨酸、粘糖氨酸及多种氨基酸等活性物质，具有抗炎、消肿、促进细胞增殖和新生肉芽组织增长，加速病损组织修复，加快坏死组织脱落，提高机体免疫功能等作用，临床应用日益广泛。用于炎症反应期抗炎、消除炎性水肿，抗感染，促使坏死组织脱落，为组织修复创造条件；用于细胞增殖期能显著促进肉芽组织生长，促进血管新生，加速坏死组织脱落，为迅速修复各类溃疡及创伤创面做好基础；用于组织重建期加速创面愈合，促使结构功能恢复，提高机体免疫功能，能提高巨噬细胞的吞噬能力，提高淋巴细胞及血清溶菌酶的活性，使体内SOD值回升，调节机体的生理平衡。本品还对幽门结扎型胃溃疡及无水乙醇型胃溃疡有明显的保护作用，能明显减少胃液分泌量，总酸排出量及胃蛋白酶排出量，对消化性溃疡有疗效，能有效预防慢性结肠炎。JL科应用小儿湿疹，新生儿尿布疹，小儿口腔溃疡，小JL包皮环切术后，小儿口唇干裂、脸裂、手裂和冻疮，小儿急性软组织感染创面，婴幼儿肠道疾病保留灌肠。妇科应用宫颈糜烂，尖锐湿疣术后，霉菌性阴道炎(配合抗真菌药)，产褥期感染换药，妇科手术后创面修复。皮肤科应用各种急慢性体表溃疡、糖尿病性皮肤溃疡、放射性溃疡、褥疮、瘘窦等，尖锐湿疣、单纯疱疹物理治疗术手，烧伤、烫伤等各类外伤创面、手术后伤口、激光创面，湿疹、新生儿尿布疹、新生儿皮下坏疽，口唇干裂、脸裂、手裂和冻疮，激素使用后胃黏膜保护。口腔科应用口腔溃疡、复发性阿弗它溃疡，放化疗后口腔炎、口腔溃疡，牙槽干槽症、拔牙并发症，牙周炎、慢性根尖周炎，口腔颌外手术后恢复。肿瘤科应用放化疗致口腔粘膜损害、口腔溃疡，放射性直肠炎，褥疮，减轻放化疗副作用，热疗皮损，直肠癌术后保留灌肠，消化性溃疡。
外科应用急慢性体表溃疡、如糖尿病性溃疡、放射性溃疡、褥疮、瘘窦等，手术后伤口、激光创面、医学美容术后创面、外伤等，快速修复因手术后插入导管对消化道粘膜的损伤，各种类型的瘘管、窦道、口唇干裂、脸裂、手裂、脚裂和冻疮等，各种烧烫伤；包括浅II度、深II度，肉芽创面等。消化科应用消化性溃疡“新四联疗法”溃疡性结肠炎保留灌肠替代疗法，久治不愈的胃及十二脂溃疡或经过手术治疗的胃肠道溃疡，溃疡性结肠炎，胃痛、胃出血，直肠癌保留灌肠(术前准备、术后恢复)，萎缩性胃炎、慢性浅表性胃炎、糜烂性出血性胃炎，胃肠道功能紊乱，食管炎、食管溃疡，激素使用后胃黏膜保护。因美洲大蠊喜食下水道带油脂排放物，所以体内油脂含量较高。虫体油脂含量过高既会影响提取过程的提取效率，又会因其油脂有毒而影响其提取物的药用效果并危害患者的身体健康，故在提取过程中，必须对其进行除脂处理
发明内容
本发明目的是提供一种去除美洲大蠊提取物中油脂以及快速定性和定量检测美洲大蠊提取物油脂含量的方法。为达到以上目的，本发明采用以下技术方案
去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，
(I)去除美洲大蠊提取物中油脂的方法，包括以下步骤
A、粉碎将干燥的美洲大蠊虫体粉碎，过24目筛，制得美洲大蠊粗粉；
B、浸泡将步骤A所得美洲大蠊粗粉加入美洲大蠊粗粉重量2 3倍量浓度为90% 95%的乙醇浸泡密闭保存，制得粗粉混合液；
C、提取浓缩将步骤B的美洲大蠊和乙醇粗粉混合液投入多功能提取浓缩机组的提取罐内，再加入美洲大蠊干燥粗粉重量4 8倍量浓度为90% 95%的乙醇，罐内蒸汽加热至75 80°C，经过45 60分钟后，将部分提取液放入浓缩器中，在真空度-O. 05 -O. 06MPa、温度50 60°C的条件下减压浓缩，浓缩得到的回收酒精再返回提取罐中，如此边常压热回流提取边减压浓缩，连续提取浓缩10 15小时后至提取液色淡时提取结束，提取液浓缩至比重为I. 05 I. 15时，得乙醇浓缩液；
D、脱脂将步骤C所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入乙醇浓缩液重量7 10倍量的纯化水，边搅拌边升温至85-95°C后搅拌10 60分钟，搅拌速度为20 60转/分，然后保温静置I 5小时使油水分层；
E、浓缩将步骤D所得下层水层放出，经滤纸过滤后，滤液移入浓缩器，在温度60 80°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa条件下减压浓缩至比重为I. 25 I. 35时，即得美洲大蠊提取物；
优选地，所述步骤C可以按照以下方法进行处理将步骤B的美洲大蠊和乙醇粗粉混合液投入多功能提取浓缩机组的提取罐内，再加入美洲大蠊粗粉重量6倍量浓度为90% 95%的乙醇，罐内蒸汽加热至75 80°C，经45分钟后，将部分提取液放入浓缩器中，在温度50 60°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa的条件下减压浓缩，浓缩得到的回收酒精再返回提取罐中，如此边常压热回流提取边减压浓缩，连续提取浓缩12小时后至提取液色淡时提取结束，提取液浓缩至比重为I. 05 I. 15时，得乙醇浓缩液。
更优选地，所述步骤D可以按照以下方法进行处理将步骤C所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入乙醇浓缩液重量7 10倍量的纯化水，边搅拌边升温至85-95°C后，搅拌40分钟，搅拌速度为40转/分，然后保温静置4小时使油水分层。(2)油脂快速定性检测方法
在上述步骤D脱脂工序中，取中间层液体20ml，加入适当有机溶剂10ml，振摇混匀，静置I 2分钟使分层，若有机溶剂层变色浑浊，证明脱脂不充分，继续保温静置脱脂并每隔30分钟按上法检查油脂；若有机溶剂层未变色浑浊则证明油脂已经分离完全，则趁热分离下层清液；
优选地，所述油脂定性快速检测方法中所使用的有机溶剂包括乙醚、石油醚、三氯甲烧。·
更优选地，所述油脂定性快速检测方法中所使用的有机溶剂为沸程60 90°C的·
石油醚。(3)美洲大蠊提取物中油脂定量检测方法
取上述步骤E所得美洲大蠊提取物约2g，精密称定，加水50ml充分溶解后转移至250ml分液漏斗中，加沸程60 90°C的石油醚50ml，静置5分钟使其分层，将水层放入IOOml烧杯中备用；石油醚层倒入蒸发皿中，于80 90°C的水浴上蒸干；然后将备用的水层倒入分液漏斗中，再加30ml沸程60 90°C的石油醚，如此重复操作4次，每次均将石油醚层倒入蒸发皿中蒸干；将蒸发皿放冷后用O. 5mg/ml的吐温-80溶液温热溶解并定容至200ml，摇匀，过滤，弃去初滤液，续滤液照分光光度法检验，在204±2nm波长处，以相同
O.5mg/ml的吐温-80溶液为空白，测定吸收度，计算，即得，
Α·λ 204±2ηιιι
计算式油脂含量(石油醚提取物，A/W)=-----------------------------------
W (浸膏重量，折干，g)
油脂含量(石油醚提取物)以A/W计不得过O. 30 (以Αλ2(ι4±2ηω计)。有益效果
I、浸泡用浓度90% 95%的乙醇可防止微生物繁殖使美洲大蠊粗粉腐败变质，并可长期保存达1-2年之久。2、采用本方法分离油脂后，有效醇提取物提取收率可达8% 15%，油脂在提取物中含量不超过O. 30吸收度/重量。3、美洲大蠊提取物中含有WHF (多元醇类、表皮生长因子)、粘氨酸、粘糖氨酸及多种氨基酸等活性物质，回流提取时温度不超过80°C，可防止活性物质的水解。4、提取浓缩时至比重为I. 05-1. 15是比较经济的。5、提取分离过程中采用无任何危害的纯化水，不会因除脂引入其他杂质，可以提高产品最终安全性，同时降低了生产成本。6、该方法充分考虑温度、醇浓度、搅拌转速等综合因素，充分平衡各提取物中有效成份对提取环境的需要，在提取、分离过程中既保证提取物的质量，又做到快速分离油脂。
具体实施例实施例I去除美洲大蠊提取物中油脂的方法，包括以下步骤
A、粉碎将干燥的美洲大蠊虫体200kg粉碎，过24目筛，制得美洲大蠊粗粉；
B、浸泡加入400kg浓度为95%的乙醇浸泡密闭保存，制得粗粉混合液；
C、提取浓缩将步骤B的美洲大蠊和乙醇粗粉混合液投入多功能提取浓缩机组的提取罐内，再加入800kg浓度为95%的乙 醇，罐内蒸汽加热至75 80°C，经过45分钟后，将部分提取液放入浓缩器中，在真空度-O. 05 -O. 06MPa、温度50 60°C的条件下减压浓缩，浓缩得到的回收酒精再返回提取罐中，如此边常压热回流提取边减压浓缩，连续提取浓缩10小时后至提取液色淡时提取结束，提取液浓缩至比重为I. 09时，得乙醇浓缩液；
D、脱脂将步骤C所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入322kg纯化水，边搅拌边升温至85-95°C后搅拌10分钟，搅拌速度为60转/分，然后保温静置I小时使油水分层；
E、浓缩取中间层液体20ml，加入沸程60 90°C的石油醚10ml，振摇混匀，静置I 2分钟使分层，石油醚层未变色浑浊时将步骤D所得下层水层放出，经滤纸过滤后，滤液移入浓缩器，在温度60 80°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa条件下减压浓缩至比重为I. 27时，即得美洲大蠊提取物；
所得美洲大蠊提取物总提取收率为13. 6%，油脂定量检测方法，取上述步骤E所得美洲大蠊提取物约2g，精密称定，加水50ml充分溶解后转移至250ml分液漏斗中，加沸程60 90°C的石油醚50ml后，静置5分钟使其分层，将水层放入IOOml烧杯中备用；石油醚层倒入蒸发皿中，于80 90°C的水浴上蒸干；然后将备用的水层倒入分液漏斗中，再加30ml沸程60 90°C的石油醚，如此重复操作4次，每次均将石油醚层倒入蒸发皿中蒸干；将蒸发皿放冷后用O. 5mg/ml的吐温-80溶液温热溶解并定容至200ml，摇匀，过滤，弃去初滤液，续滤液照分光光度法检验，在204±2nm波长处，以相同O. 5mg/ml的吐温-80溶液为空白，测定吸收度，计算，即得油脂含量(石油醚提取物)以A/W计为O. 16。实施例2
去除美洲大蠊提取物中油脂的方法，包括以下步骤
A、粉碎将干燥的美洲大蠊虫体200kg粉碎，过24目筛，制得美洲大蠊粗粉；
B、浸泡加入500kg浓度为92%的乙醇浸泡密闭保存，制得粗粉混合液；
C、提取浓缩将步骤B的美洲大蠊和乙醇粗粉混合液投入多功能提取浓缩机组的提取罐内，再加入1200kg浓度为92%的乙醇，罐内蒸汽加热至75 80°C，经过50分钟后，将部分提取液放入浓缩器中，在真空度-O. 05 -O. 06MPa、温度50 60°C的条件下减压浓缩，浓缩得到的回收酒精再返回提取罐中，如此边常压热回流提取边减压浓缩，连续提取浓缩12小时后至提取液色淡时提取结束，提取液浓缩至比重为I. 11时，得乙醇浓缩液；
D、脱脂将步骤C所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入320kg纯化水，边搅拌边升温至85-95°C后搅拌40分钟，搅拌速度为40转/分，然后保温静置3小时使油水分层；
E、浓缩取中间层液体20ml，加入沸程60 90°C的石油醚10ml，振摇混匀，静置I 2分钟使分层，石油醚层未变色浑浊时将步骤D所得下层水层放出，经滤纸过滤后，滤液移入浓缩器，在温度60 80°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa条件下减压浓缩至比重为I. 28时，即得美洲大蠊提取物。所得美洲大蠊提取物总提取收率为12. 2%，油脂定量检测方法，取上述步骤E所得美洲大蠊提取物约2g，精密称定，加水50ml充分溶解后转移至250ml分液漏斗中，加沸程60 90 °C的石油醚50ml后,静置5分钟使其分层,将水层放入IOOml烧杯中备用；石油醚层倒入蒸发皿中，于80 90°C的水浴上蒸干；然后将备用的水层倒入分液漏斗中，再加30ml沸程60 90°C的石油醚，如此重复操作4次，每次均将石油醚层倒入蒸发皿中蒸干；将蒸发皿放冷后用O. 5mg/ml的吐温_80溶液温热溶解并定容至200ml，摇匀，过滤，弃去初滤液，续滤液照分光光度法检验，在204±2nm波长处，以相同O. 5mg/ml的吐温-80溶液为空白，测定吸收度，计算，即得油脂含量(石油醚提取物)以A/W计为O. 21。实施例3
去除美洲大蠊提取物中油脂的方法，包括以下步骤
A、粉碎将干燥的美洲大蠊虫体200kg粉碎，过24目筛，制得美洲大蠊粗粉；B、浸泡加入600kg浓度为90%的乙醇浸泡密闭保存，制得粗粉混合液；
C、提取浓缩将步骤B的美洲大蠊和乙醇粗粉混合液投入多功能提取浓缩机组的提取罐内，再加入1600kg浓度为90%的乙醇，罐内蒸汽加热至75 80°C，经过60分钟后，将部 分提取液放入浓缩器中，在真空度-O. 05 -O. 06MPa、温度50 60°C的条件下减压浓缩，浓缩得到的回收酒精再返回提取罐中，如此边常压热回流提取边减压浓缩，连续提取浓缩15小时后至提取液色淡时提取结束，提取液浓缩至比重为I. 06时，得乙醇浓缩液；
D、脱脂将步骤C所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入414kg纯化水，边搅拌边升温至85-95°C后搅拌60分钟，搅拌速度为20转/分，然后保温静置5小时使油水分层；
E、浓缩取中间层液体20ml，加入沸程60 90°C的石油醚10ml，振摇混匀，静置I 2分钟使分层，石油醚层未变色浑浊时将步骤D所得下层水层放出，经滤纸过滤后，滤液移入浓缩器，在温度60 80°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa条件下减压浓缩至比重为I. 33时，即得美洲大蠊提取物。所得美洲大蠊提取物总提取收率为12. 5%，油脂定量检测方法，取上述步骤E所得美洲大蠊提取物约2g，精密称定，加水50ml充分溶解后转移至250ml分液漏斗中，加沸程60 90 °C的石油醚50ml后,静置5分钟使其分层,将水层放入IOOml烧杯中备用；石油醚层倒入蒸发皿中，于80 90°C的水浴上蒸干；然后将备用的水层倒入分液漏斗中，再加30ml沸程60 90°C的石油醚，如此重复操作4次，每次均将石油醚层倒入蒸发皿中蒸干；将蒸发皿放冷后用O. 5mg/ml的吐温-80溶液温热溶解并定容至200ml，摇匀，过滤，弃去初滤液，续滤液照分光光度法检验，在204±2nm波长处，以相同O. 5mg/ml的吐温-80溶液为空白，测定吸收度，计算，即得油脂含量(石油醚提取物)以A/W计为O. 17。
权利要求
1.去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，其特征在于，(I)去除美洲大蠊提取物中油脂的方法，包括以下步骤A、粉碎将干燥的美洲大蠊虫体粉碎，过24目筛，制得美洲大蠊粗粉；B、浸泡将步骤A所得美洲大蠊粗粉加入美洲大蠊粗粉重量2 3倍量浓度为90% 95%的乙醇浸泡密闭保存，制得粗粉混合液；C、提取浓缩将步骤B的美洲大蠊和乙醇粗粉混合液投入多功能提取浓缩机组的提取罐内，再加入美洲大蠊粗粉重量4 8倍量浓度为90% 95%的乙醇，罐内蒸汽加热至75 80°C，经过45 60分钟后，将部分提取液放入浓缩器中，在真空度-O. 05 -O. 06MPa、温度50 60°C的条件下减压浓缩，浓缩得到的回收酒精再返回提取罐中，如此边常压热回流提取边减压浓缩，连续提取浓缩10 15小时后至提取液色淡时提取结束，提取液浓缩至比重为I. 05 I. 15时，得乙醇浓缩液；D、脱脂将步骤C所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入乙醇浓缩液重量7 10倍量的纯化水，边搅拌边升温至85-95°C后搅拌10 60分钟，搅拌速度为20 60转/分，然后保温静置I 5小时使油水分层；E、浓缩将步骤D所得下层水层放出，经滤纸过滤后，滤液移入浓缩器，在温度60 80°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa条件下减压浓缩至比重为I. 25 I. 35时，即得美洲大蠊提取物；(2)油脂快速定性检测方法在上述步骤D脱脂工序中，取中间层液体20ml，加入适当有机溶剂10ml，振摇混匀，静置I 2分钟使分层，若有机溶剂层变色浑浊，证明脱脂不充分，继续保温静置脱脂并每隔30分钟按上法检查油脂；若有机溶剂层未变色浑浊则证明油脂已经分离完全，则趁热分离下层清液； (3)美洲大蠊提取物中油脂定量检测方法取上述步骤E所得美洲大蠊提取物约2g，精密称定，加水50ml充分溶解后转移至250ml分液漏斗中，加沸程60 90°C的石油醚50ml后，静置5分钟使其分层，将水层放入IOOml烧杯中备用；石油醚层倒入蒸发皿中，于80 90°C的水浴上蒸干；然后将备用的水层倒入分液漏斗中，再加30ml沸程60 90°C的石油醚，如此重复操作4次，每次均将石油醚层倒入蒸发皿中蒸干；将蒸发皿放冷后用O. 5mg/ml的吐温-80溶液温热溶解并定容至200ml，摇匀，过滤，弃去初滤液，续滤液照分光光度法检验，在204±2nm波长处，以相同O. 5mg/ml的吐温-80溶液为空白，测定吸收度，计算，即得，
2.根据权利要求I所述的去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，其特征在于，所述步骤C可以按照以下方法进行处理将步骤B的美洲大蠊和乙醇粗粉混合液投入多功能提取浓缩机组的提取罐内，再加入美洲大蠊粗粉重量6倍量浓度为90% 95%的乙醇，罐内蒸汽加热至75 80°C，经45分钟后，将部分提取液放入浓缩器中，在温度50 60°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa的条件下减压浓缩，浓缩得到的回收酒精再返回提取罐中，如此边常压热回流提取边减压浓缩，连续提取浓缩12小时后至提取液色淡时提取结束，提取液浓缩至比重为I. 05 I. 15时，得乙醇浓缩液。
3.根据权利要求I或2所述的去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，其特征在于，所述步骤D可以按照以下方法进行处理将步骤C所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入乙醇浓缩液重量7 10倍量的纯化水，边搅拌边升温至85-95°C后，搅拌40分钟，搅拌速度为40转/分，然后保温静置3小时使油水分层。
4.根据权利要求2所述的去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，其特征在于，所述步骤D可以按照以下方法进行处理将步骤C所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入乙醇浓缩液重量7 10倍量的纯化水，边搅拌边升温至85-95°C后，搅拌40分钟，搅拌速度为40转/分，然后保温静置3小时使油水分层。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，其特征在于，所述油脂定性快速检测方法中所使用的有机溶剂包括乙醚、石油醚、三氯甲烧。
6.根据权利要求1-4中任意一项所述的去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，其特征在于，所述油脂定性快速检测方法中所使用的有机溶剂为沸程60 90°C的石油醚。
7.根据权利要求5所述的去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，其特征在于，所述油脂定性快速检测方法中所使用的有机溶剂为沸程60 90°C的石油醚。
全文摘要
本发明提供一种去除美洲大蠊提取物中的油脂及其检测方法，包括(1)去除美洲大蠊提取物中油脂的方法；(2)油脂快速定性检测方法；(3)美洲大蠊提取物中油脂定量检测方法。去除美洲大蠊提取物中油脂的方法包括以下步骤A、粉碎；B、浸泡；C、提取浓缩；D、脱脂；E、浓缩。本发明用浓度90%～95%的乙醇浸泡美洲大蠊粗粉，可长期保存达1-2年之久；在提取、分离过程中既保证提取物的质量，又做到快速分离油脂；分离油脂后，有效醇提取物提取收率可达8%～15%，油脂在提取物中含量不超过0.30吸收度/重量。采用本方法提取浓缩时至比重为1.05-1.15是比较经济的，且产品安全性高，生产成本低。
文档编号A61P37/04GK102895263SQ20121044661
公开日2013年1月30日 申请日期2012年11月10日 优先权日2012年11月10日
发明者何道峰, 郝振平 申请人:昆明赛诺制药有限公司