专利名称：蚂蟥提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物，特别是涉及一种蚂蟥提取物及其制备方法和应用。
技术背景
心脑血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，并已成为人类死亡病因最高的头号杀手。目前，我国正逐步步入老龄化社会，抗凝药物的需求越来越大，但传统的脲激酶和肝素均有给药后出血的弊端，限制了其临床应用。
蚂蟥(Whitmania pigra)干燥体,是《中华人民共和国药典》2010版一部收载的水蛭药材的品种之一，其性平、味咸苦，具有破血、逐瘀、通经之功效，在我国有着悠久的药用历史,是经典的中药理血之药。
随着现代对蚂蟥活性成分的深入研究，相继发现了蚂蟥中含有许多具有抗凝活性的蛋白质多肽类，但由于蛋白质多肽类结构的特殊性和复杂性，为这类活性物质的发现带来了很多挑战和困难，除了对从日本医蛭中提取到的水蛭素有非常丰富地研究，文献少有其他活性蛋白质多肽类的深入研究和应用。公开号为101332211A的中国专利公开的一种水蛭提取物及其制备方法与运用，以水作为提取溶剂，也是对水蛭中的蛋白质及多肽类化合物的运用。发明内容
基于此，本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种蚂蟥提取物的制备方法。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案
在蚂蟥药材中加入蚂蟥药材4-8倍体积量的石油醚，回流提取6_16h，得到提取液；回收上述提取液中的石油醚，得到蚂蟥提取物。
一般来说，石油醚的量 少于4倍无法充分浸泡药材，使提取不充分；而多余8倍，一方面对于索氏提取器来说可行性低，另一方面也增加了溶剂回收量。而提取时间小于6小时提取不充分，但结合实际操作需求，应在16小时内较为合适。
在其中一个实施例中，加入蚂蟥药材6倍体积量的石油醚。
在其中一个实施例中，所述回流提取的时间为12h。
在其中一个实施例中,所述回流提取的速度为每秒1-3滴。
在其中一个实施例中，包括对蚂蟥药材的前处理，所述前处理方法为，先在 35-45°C下干燥蚂蟥药材12-36h，进行粉碎，再过60 100目筛。
在其中一个实施例中，所述石油醚为60°C 90°C段石油醚。采用该段沸程的石油醚，可以节约提取时间。
在其中一个实施例中，所述回流提取采用索式回流提取方式。
在其中一个实施例中，回收石油醚时采用减压蒸馏方式。
本发明还提供一种采用上述的制备方法制备而得的蚂蟥提取物。
本发明还提供上述的蚂蟥提取物在制备抗凝血药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果
本发明提供的蚂蟥提取物的制备方法，是采用与现有技术中所用的水不同极性的溶剂石油醚进行回流提取而获得的，由于石油醚的极性远小于水的极性，因此提取出来的提取物类别也大不相同，经衍生化后进行气相-质谱联用分析其组成，发现该蚂蟥提取物多为脂肪酸类成分。且所得的蚂蟥提取物经过血浆复钙试验后表明，不同质量浓度的蚂蟥提取物均能显著延长家兔血浆复钙时间，与生理盐水对照组相比，具有统计学意义上的显著性差异，并且各质量浓度呈显著量效关系，证明蚂蟥药材石油醚提取物具有体外抗凝血作用。本发明从中药现代化的活性要求出发，得到不同于传统的蚂蟥活性蛋白质多肽类的具有抗凝活性的脂肪酸类提取物，为蚂蟥药材的活性研究提供了比蛋白质多肽类更稳定， 更简单的活性成分方向，也大大提高了蚂蟥药材的研究深度。
图1为采用气相质谱联用仪分析本发明实施例1的蚂蟥提取物得到的总离子流-1'Tfe P曰。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例来详细说明本发明。
实施例1蚂蟥提取物的制备方法
取在40°C下干燥18h后的蚂蟥干燥药材，粉碎(过60目筛)，取IOg药材粉末，加入滤纸筒内，连接索式提取器，烧瓶，倾入60ml石油醚(60°C、0°C )，至虹吸管高度2/3处，连接冷凝管并在顶端加塞少许脱脂棉，打开冷却水，并开启97°C水浴加热，使抽提管内石油醚处于微沸状态，控制回流速度为每秒3滴，提取12h，提取液真空旋干回收石油醚，最终得到蚂蟥提取物3. 12g。
实施例2蚂蟥提取物的制备方法
取在35°C下干燥36h后的蚂蟥干燥药材，粉碎(过100目筛)，取IOg药材粉末，加入滤纸筒内，连接索式提取器，烧瓶，倾入40ml石油醚(30°C飞(TC )，至虹吸管高度2/3处， 连接冷凝管并在顶端加塞少许脱脂棉，打开冷却水，并开启97°C水浴加热，使抽提管内石油醚处于微沸状态，控制回流速度为每秒I滴，提取16h，提取液真空旋干回收石油醚，最终得到蚂蟥提取物2. 9g。
实施例3蚂蟥提取物的制备方法
取在45°C下干燥12h后的蚂蟥干燥药材，粉碎(过80目筛)，取IOg药材粉末，加入滤纸筒内，连接索式提取器，烧瓶，倾入80ml石油醚(60°C、0°C )，至虹吸管高度2/3处，连接冷凝管并在顶端加塞少许脱脂棉，打开冷却水，并开启97°C水浴加热，使抽提管内石油醚处于微沸状态，控制回流速度为每秒2滴，提取6h，提取液真空旋干回收石油醚，最终得到蚂蟥提取物2. 8g。
实施例4对实施例1的蚂蟥提取物进行气相-质谱联用分析及成分鉴定
1.1 试剂
石油醚(60°C 90°C)，天津百世化工；甲醇，天津百世化工；正己烷，天津市富产精细化工有限公司。氢氧化钾，广州化学试剂厂；乙醚，广州化学试剂厂。
1. 2 仪器
美国热电公司TRACE DSQ气相色谱质谱联用仪。
1. 3方法与结果
1. 3.1 方法
精密称取实施例1制备的蚂蟥提取物O. 2g于IOml容量瓶中，加入Iml乙醚正己烷(2:1)混合溶剂溶解，再依次加入Iml甲醇、2%(w/v)K0H-甲醇溶液2ml，摇匀，于60°C 水浴lOmin，取出，冷却至室温，加入正己烷至刻度萃取，震荡混匀，静置分层，取上清液进行 GC-MS测定。
GC-MS条件DB-5 (25mmX0. 25mm)石英毛细管柱，初始温度100°C，保持2min，再以2°C /min程序升温至200°C,保持30min,流速1. Oml/min,检测器FID,载气氮气,进样量2μ 1，去溶剂峰8min。离子源温度210°C;气化室温度130°C;电离方式EI ;电子能量 70eV ;扫描范围10-650质量单位；发射电流300uA。
1. 3. 2 结果
通过气相质谱联用仪分析得蚂蟥提取物总离子流谱，见图1，其中横坐标表示出峰时间，纵坐标表示相对丰度；对各峰经质谱图，通过Xcalibur工作站NIST标准质谱图库进行检索，确认各化合物，共鉴定出15个脂肪酸成分；通过Xcalibur工作站数据处理系统， 按面积归一化法计算各化合物相对的量，结果见下表I。
表I蚂蟥提取物的成分分析
权利要求
1.一种蚂蟥提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤在蚂蟥药材中加入蚂蟥药材4-8倍体积量的石油醚，回流提取6-16h，得到提取液；回收上述提取液中的石油醚，得到蚂蟥提取物。
2.根据权利要求1所述的蚂蟥提取物的制备方法，其特征在于，加入蚂蟥药材6倍体积量的石油醚。
3.根据权利要求1所述的蚂蟥提取物的制备方法，其特征在于，所述回流提取的时间为 12h。
4.根据权利要求1所述的蚂蟥提取物的制备方法，其特征在于，所述回流提取的速度为每秒1-3滴。
5.根据权利要求1-4任一项所述的蚂蟥提取物的制备方法，其特征在于，还包括对蚂蟥药材的前处理，所述前处理方法为，35-45°C下干燥蚂蟥药材12-36h后，粉碎，再过 60 100目筛。
6.根据权利要求1所述的蚂蟥提取物的制备方法，其特征在于，所述石油醚为 600C 90°C段石油醚。
7.根据权利要求1所述的蚂蟥提取物的制备方法，其特征在于，所述回流提取采用索式回流提取方式。
8.根据权利要求1所述的蚂蟥提取物的制备方法，其特征在于，采用减压蒸馏回收石油醚。
9.权利要求1-8任一项所述的制备方法制备而得的蚂蟥提取物。
10.权利要求9所述的蚂蟥提取物在制备抗凝血药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种蚂蟥提取物及其制备方法和应用。在蚂蟥药材中加入蚂蟥药材4-8倍体积量的石油醚，回流提取6-16h，得到提取液；回收上述提取液中的石油醚，得到蚂蟥提取物。本发明采用石油醚进行回流提取，获得了不同于传统的蚂蟥活性蛋白质多肽类的脂肪酸类的蚂蟥提取物。所得的蚂蟥提取物具有体外抗凝血作用。
文档编号A61K35/62GK103054905SQ20121058388
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月27日 优先权日2012年12月27日
发明者钟山, 尹玉华, 杨得坡 申请人:中山大学