鲍式不动杆菌的新靶标的制作方法
【专利摘要】本发明提供在病原性生物体(例如不动杆菌(Acinetobacter))感染过程中表达的抗原性多肽，以及包含这些多肽的组合物。本发明还提供用于治疗、预防或检测细菌感染的组合物，具体是采用所述抗原性多肽的疫苗组合物。本发明还提供针对所述抗原性多肽的抗体。
【专利说明】鲍式不动杆菌的新靶标
【技术领域】
[0001] 本发明涉及在病原性生物体（例如不动杆菌（Acinetobacter)感染过程中表达的 抗原性多肽，以及包含这些多肽的组合物。本发明还涉及其用于治疗、预防或检测细菌感染 的应用，具体涉及所述抗原性多肽在疫苗接种中的应用。本发明还涉及针对所述抗原性多 肽的抗体。
【背景技术】
[0002] 不动杆菌种（Acinetobacterspp.)在自然中广泛分布。不动杆菌属被分为约20 个种。其为革兰氏阴性、氧化酶阴性、非运动性、硝酸盐阴性、非发酵细菌。
[0003] 鲍式不动杆菌（Acinetobacterbaumannii)是该属中最常被分离的种。其能够在 医院环境中的各种表面（湿润和干燥表面）上存活。鲍式不动杆菌在最近才被鉴定为医院 病原体。侵入型技术（例如手术）和肺部换气联合免疫功能不全的患者已致所述不动杆菌 属作为医院病原体的重要程度增加。
[0004] 医院和社区带来的感染频率已逐年稳定增高。并且，因为出现了（多重）抗药菌 株，对于这些感染的治疗变得越来越具挑战性。
[0005] 通常通过好氧细菌感染的症状结合对源自感染组织的体液的微生物培养来诊断 不动杆菌感染。然后，体外鉴定培养的细菌。已开发出并应用多种遗传型性方法来研宄该 属的多样性或种系发生。这些方法包括采用AFLP的高分辨率指纹识别、采用消化PCR扩增 序列的PCR-RFLP、以及对不同DNA序列的分析。
[0006] 近期医学史上的最重要发展之一是疫苗的发展，其提供来自广泛多样病原性生物 体的预防性保护。许多疫苗由失活或减毒的病原体产生，其被注射进入个体。被免疫的个 体通过产生体液（抗体）应答和细胞（溶细胞型T细胞和/或辅助T细胞和/或调节型T 细胞等）应答来作出响应。
[0007] 然而，减毒生物体在针对某些疾病的疫苗中的应用仍有问题，这归因于缺乏关于 所述减毒条件和性质的病理学知识。利用失活或减毒病原体的另一种应用是鉴定特别引起 免疫系统敏感的病原体表位。就这点而言，在感染过程中由病原性生物体产生的多种病原 性毒素均特别有用于开发保护该个体不受特定病原性生物体侵害的疫苗。
[0008] 所谓亚单位疫苗对免疫系统呈递抗原而不引入病原性颗粒（例如完整病毒或其 它）。大多数情况下，此类亚单位疫苗通过在宿主生物体中重组表达抗原，从该宿主生物体 纯化然后制备成疫苗组合物来产生。
[0009] 一般而言，认为不动杆菌种对于健康个体是非病原性的。最近认识到的不动杆菌 种的临床重要性刺激了对这些疾病发病机理中涉及的各种细菌和宿主成分进行研宄的兴 趣。对于该相互作用的了解在控制所述感染中具有重要作用。不动杆菌感染通常涉及高液 体含量的器官系统（例如，呼吸道、CSF(脑脊髓液）、腹膜液、尿道），体现为医院获得性肺 炎（nosocomialpneumonia)、与持续性非卧床腹膜透析（CAPD)相关联的感染，或导管相关 的菌尿。
[0010] Pantophlet等描述了不动杆菌脂多糖类（LPS)的0抗原和用于鉴定不动杆 菌分离物的相应抗体（PantophletR?等，ClinicalandDiagnosticLaboratory Immunology, 9, 60-65(2002))〇
[0011] Tomarasz等.鉴定了多顺反子csuAB基因簇并显示其在pili生成和组装以及后 续生物膜（例如在医院表面和医用装置上）形成中的重要性（TomaraszA.P.等，Microbio logy, 154, 3398-3409(2008))〇
[0012]US6, 562, 958公开了关于鲍式不动杆菌的约4000种核酸和氨基酸序列，但是，这 些序列中大多数的功能未经鉴定。US6, 713, 062公开了OmpA和OmpA样蛋白能够刺激胃泌 素和IL-8基因表达。然而，迄今为止没有开发疫苗。因缺乏有效可行的靶标，尚未开发针 对不动杆菌感染的基于表面暴露型蛋白质和分泌型蛋白质的疫苗。
[0013] 因此，本领域对在不动杆菌（优选鲍式不动杆菌）感染过程中表达的，并且适于开 发疫苗且易于产生诊断性、预防性和治疗性抗体的抗原性多肽有高度医用需求。
[0014] 已开发多种方法以从各种病原体鉴定有潜力的抗原性多肽，但是，他们不具有证 明此类多肽适合作为疫苗组合物中的免疫原性靶标的一般手段。
[0015] 因此，本发明要解决的技术问题是提供待用于疫苗组合物和/或用于产生诊断 性、预防性和治疗性有用抗体的具有临床优势的鲍式不动杆菌靶标。
[0016] 该技术问题通过提供抗原性多肽编码核酸和与所述抗原性多肽结合的抗体或抗 体结合片段来解决。
【发明内容】
[0017] 本发明提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含由核酸分子编码的至少一种多 肽，所述核酸分子包含选自下组的多核苷酸：
[0018] 8)具有5￡〇10勵:1、3、5、7、9、11、13和15中任一所示核酸序列的多核苷酸；
[0019]b)编码由（a)的多核苷酸编码的多肽的片段、类似物或功能衍生物的多核苷酸， 其中所述片段、类似物或功能衍生物具有免疫刺激活性；
[0020]c)编码所具有的氨基酸序列与SEQIDN0:2、4、6、8、10、12、14和16中任一所示氨 基酸序列有至少80%相同性并且具有免疫刺激活性的多肽的多核苷酸；
[0021] d)与（a)的多核苷酸具有至少80%相同性并且编码具有免疫刺激活性的多肽的 多核苷酸；
[0022] e)在严谨条件下与（a)?（d)中任一种多核苷酸杂交的多核苷酸；和
[0023]f)与（a)?（d)中任一种全长多核苷酸互补的多核苷酸。
[0024] 优选所述核酸分子是基因组DNA。
[0025] 在本发明的一个实施方式中，所述多核苷酸源自不动杆菌属；优选所述多核苷酸 源自鲍式不动杆菌种。
[0026] 在本发明的另一个实施方式中，所述疫苗组合物还包含药学上可接受的运载体和 /或佐剂。
[0027]在另一个实施方式中，本发明提供一种抗原性多肽，所述抗原性多肽由SEQID NO:2、4、6、8、10、12、14和16中所示任一种氨基酸序列组成；或其片段、类似物或功能衍生 物，其中所述片段、类似物或功能衍生物具有免疫刺激活性。
[0028] 在其它实施方式中，本发明提供编码本发明抗原性多肽的核酸分子，包含所述核 酸分子的表达载体和包含本发明所述载体和/或所述分子的宿主细胞。
[0029] 在另一个实施方式中，本发明提供与本发明抗原性多肽特异性结合的抗体或其抗 原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够诱导针对鲍式不动杆菌的效应子功能。 本发明提供的抗体是多克隆或单克隆抗体；优选人抗体。所述抗体可以是N末端修饰、内部 修饰和/或C末端修饰（例如通过寡聚化修饰），并且可接合至药物和/或标记物的抗体。
[0030] 本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段能够诱导针对鲍式不动杆菌的效应子功 能。最优选地，本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合SEQIDNO:36中所示的 表位共有基序PVDFTVAI。
[0031] 本发明的单克隆抗体优选通过人B细胞产生或由所述人B细胞与骨髓瘤或异源骨 髓瘤细胞融合获得的杂交瘤产生。因此，本发明提供能够产生本发明单克隆抗体的杂交瘤。 本发明还提供编码本发明抗体的轻链和重链的核酸，包含所述核酸的载体，以及包含所述 载体和/或所述核酸的宿主细胞。
[0032] 在另一个实施方式中，本发明提供用于产生本发明单克隆抗体的方法，所述方法 包括：如本文所述在允许抗体分泌的条件下培养所述杂交瘤，和任选地从所述培养物上清 液纯化所述抗体。
[0033] 在另一个实施方式中，本发明提供包含本发明所述抗原性多肽或抗体以及药学上 可接受的运载体的药物组合物。在另一个实施方式中，本发明提供用于检测患者内细菌感 染的包含本发明所述抗原性多肽或抗体的诊断型组合物。提供本发明抗体用于治疗、预防 和/或检测哺乳动物中的细菌感染；所述哺乳动物优选是人。
[0034] 在另一个实施方式中，本发明提供用于治疗和/或预防哺乳动物中的细菌感染的 多肽，所述多肽由包含选自下组的多核苷酸的核酸分子编码：
[0035] 8)具有5￡〇10勵:1、3、5、7、9、11、13和15中任一所示核酸序列的多核苷酸；
[0036] b)编码由（a)的多核苷酸编码的多肽的片段、类似物或功能衍生物的多核苷酸， 其中所述片段、类似物或功能衍生物具有免疫刺激活性；
[0037]c)编码所具有的氨基酸序列与SEQIDN0:2、4、6、8、10、12、14和16中任一所示氨 基酸序列有至少80%相同性并且具有免疫刺激活性的多肽的多核苷酸；
[0038]d)与（a)的多核苷酸具有至少80%相同性并且编码具有免疫刺激活性的多肽的 多核苷酸；
[0039]e)在严谨条件下与（a)?（d)中任一种多核苷酸杂交的多核苷酸；和
[0040]f)是（a)?（d)中任一种全长多核苷酸的互补体的多核苷酸。
[0041] 优选的哺乳动物是人。在本发明的另一个实施方式中，待治疗、预防和/或检测的 细菌感染由鲍式不动杆菌引起，所述细菌感染可以是医院获得性的。用于本发明应用的抗 原性多肽组合物还可包含递送载剂；优选是病毒颗粒。
【专利附图】
【附图说明】
[0042] 图1显示来自康复期鲍式不动杆菌患者（左）和普通随机挑选的血液供者（右） 的血清的IgG效价。
[0043] 本发明的抗原性多肽经重组表达、纯化并采用来自康复期鲍式不动杆菌患者和普 通随机选择的血液供者的血清以不同稀释度进行ELISA测试。图表中的数字反应测试血清 的数量，并且与抗原性多肽（A-H)反应的稀释度如图例中指定的不同颜色指示。
[0044] 效价定义为产生对应空白信号两倍的抗原特异性ELISA信号的最高血清稀释度。 测试的患者血清大多数包含针对本发明鉴定靶标的抗体。相较于健康血液供者而言，患者 血清一般包含较高效价。就所有抗原而言，个别患者血清可由极高抗体效价（多1/6400) 鉴定，前提是抗原在人中具有免疫原性并且在感染过程中表达。这强烈暗示这些新鉴定的 靶标是可用于疫苗开发和预防性/治疗性抗体生产。
[0045]A:His-AB023(对应于SEQIDNO:2) ;B:His-AB024(对应于SEQIDN0:4); C:His-AB025(对应于SEQIDN0:6);D:His-AB030(对应于SEQIDN0:8);E:His-AB031 Ll(对应于SEQIDN0:10) ;F:His-FimA(对应于SEQIDNO:12) ;G:His-CsuAB(对应于SEQ IDN0:14) ;H:His-〇mpA(对应于SEQIDNO:16)。
[0046] 图2显不米用兔血清进彳丁的ELISA。
[0047] 兔用重组的带his标签的抗原性多肽免疫。在分别被覆有不同抗原性多肽的 ELISA板上通过ELISA测试终血血清和免疫前血清。此外，通过ELISA在被覆有如下对照试 剂的板上测试终血：带His标签的OmpA，其作为A-G的对照，以及His-CsuAB，其作为H的对 照。该图显示主要免疫应答由所述靶标而非His标签引起，所述His标签也在对照中存在。 免疫兔的重复组获得相当的结果。所用的免疫和免疫前血清稀释度是：
[0048]A:a-His-AB023(1:6400);B:a-His-AB024 (1:6400);C:a-His-AB025 (1:6400); D:a-His-AB030(l: 25600) ;E:a-His-AB031LI(1:12800) ;F:a-His-FimA(l:400) ;G: a-His-CsuAB(1:3200);H:a-His-〇mpA(1:6400)〇
[0049] 图3显示免疫印迹分析。
[0050] 测试所述兔抗血清的特异性。分别制备来自不同鲍式不动杆菌（AB)和铜绿假单 胞菌（P.aeruginosa) (PA)菌株的细胞裂解物（作为阴性对照），在SDS-PAGE上分离蛋白质 并印迹至硝酸纤维素上。以1:1000的稀释度使用针对不同多肽的兔血清（免疫血清）和 免疫前血清（示例性的细节于实施例6中给出）。
[0051]细菌裂解物：1:AB:ATCC19606 野生型；2 :AB:ATCC19606OmpAK. 0 ;3 : AB:ATCC19606；CsuEK. 0；4：PAOil；5 ：AB:AB-N；6 ：AB:Luh8168 ；7 ：AB:Ruhl34；8 ： AB:SAN；
[0052]免疫血清：A:a-His-AB023;B:a-His-AB024;C:a-His-AB025;D:a-His-CsuAB;E: a-His-OmpA;F:a-His-AB030;G:a-His-FimA;H:a-His-AB031Ll;
[0053] 图4显示另一项免疫印迹分析。
[0054] 测试在培养物上清液中的兔抗血清针对多肽FimA的特异性。图4显示代表性的 鲍式不动杆菌（AB-Non-类粘蛋白）、铜绿假单胞菌（PA011)和大肠杆菌（E.coli) (DH5a) 菌株的免疫印迹。
[0055] 将过夜细菌培养物离心并使上清液中的蛋白质沉淀。等培养物体积的细胞团块 (P)和经沉淀的上清液（SN)通过免疫印迹分析采用a-His-FimA兔抗血清检测FimA的存 在。总计29株鲍式不动杆菌菌株通过免疫印迹分析上清液和细菌团块中FimA的存在。细 胞团块中包含45%的可检测的量，而SN中包含55%的可检测的量。
[0056]AB:鲍式不动杆菌菌株AB-NM(无-类粘蛋白）；PA:铜绿假单胞菌011;EC:大肠杆 菌DH5a
[0057] 图5显示另一项免疫印迹分析。
[0058] 通过免疫印迹分析测试所选人血清的特异性。重组蛋白质在SDS-PAGE上分离并 印迹至硝酸纤维素上。以1:500的稀释度使用针对不同多肽（1-7)的不同患者血清（A-F) (实验细节在实施例6中给出）。为了排除针对His标签的抗体伪影（artefacts)，选择重 组抗原的组合以在各免疫印迹中包含带His标签的蛋白质作为不被对应患者血清识别的 阴性对照。
[0059]重组蛋白：1-His-AB023 ;2-His-AB024 ;3-His-AB025 ;4-His-AB030 ;5-His-FimA; 6-His-CsuAB;7-His-〇mpA;8-AB031-Ll(还未在免疫印迹上鉴定针对AB031L1的人血清）。
[0060] 图6显示FACS分析；其中
[0061] 图A显示以1:200的稀释度使用患者血清的对鲍式不动杆菌菌株ATCC19606野生 型（wt)、OmpAKO(OmpA-)和CsuEKO(CsuE-)的FACS分析。采用正向和侧向散射对细菌群 进行门选，并检测20000个细菌。
[0062] 图B显示采用与A中相同的患者血清和仪器设置对鲍式不动杆菌菌株ATCC19606 野生型（wt)进行的FACS分析。所用的患者血清不采用（S)或采用重组OmpA(S+rOmpA)作 为抑制剂；和
[0063]图C显示采用患者血清对鲍式不动杆菌ATCC19606野生型（1)、OmpAK0(2)作为 阴性对照和CsuEK0(3)的细胞裂解物的免疫印迹分析。对印迹进行丽春红染色确认细胞 裂解物的等量上样。经丽春红染色很明显地显示ATCC19606野生型和CsuEK0的细胞裂解 物中的OmpA蛋白质条带。
[0064] 图7涉及另一项FACS分析；其中
[0065] 图A显示采用间接荧光标记的aCsuAB兔免疫血清（IS)或对应的免疫前血清 (PIS)对鲍式不动杆菌菌株ATCC19606(wt)和CsuE-KO(CsuE-)的FACS分析。采用FITC标 记的山羊-抗-兔-IgG作为二抗。由门选的细菌制得绘出荧光信号强度对事件数量的直 方图。采用正向和侧向散射对细菌群进行门控，并检测5000个细菌。
[0066] 图B显示对不同鲍式不动杆菌菌株（ATCC19606、CsuEKO、Luh9415、Ruhl34、 Ruh875)的FACS分析。图表显示采用aCsuAB兔免疫血清（IS)或对应的免疫前血清（PIS) 的荧光间接标记的细菌的百分比。当FL1-H信号强度>20时，认为细菌是阳性的。
[0067] 图8显示凝集试验和免疫荧光分析的结果；其中
[0068] 图A显示采用1.5mg/ml总兔IgG的活鲍式不动杆菌（菌株ATCC19606)的凝集， 所述兔IgG纯化自aCsuAB兔免疫血清或未处理的兔血清；和
[0069] 图B显示对鲍式不动杆菌（菌株ATCC19606和CsuEK0)的免疫荧光分析。使细 菌在含10%FCS的细胞培养基（MDM)中于载玻片上生长24小时。细菌用DAPI标记以定 位细菌DNA(上图），并采用aCsuAB兔免疫血清（IS)或对应的免疫前血清（PIS)和FITC 标记的二抗进行荧光间接标记（下图）。
[0070] 图9显示杀菌试验和免疫印迹分析；其中
[0071] 图A和B显示杀菌试验。图表显示用来自兔CsuAB免疫血清（灰色短线）或来自 未处理兔血清（黑色短线）的纯化的IgG的孵育后集落形成单位（cfu)的数量；其中
[0072]A关于对数生长的鲍式不动杆菌、ATCC19606和CsuEKO(CsuE-)，其与抗体 (〇. 5yg/孔）在37°C孵育20分钟。添加作为补充来源的婴儿兔血清（BRS)并孵育2小时。 最终通过在LBA上铺板来定量cfu;和
[0073]B关于对数生长的鲍式不动杆菌Ruh134,其与抗体（5yg/孔）在37°C孵育20分 钟。添加作为补充来源的婴儿兔血清（BRS)或作为对照的热失活BRS(HBRS)，并且用或不用 先前转化成中性白细胞的HL-60细胞（+HL60)补足。使混合物另孵育2小时。最终通过铺 板至LBA上来定量cfu。
[0074] A和B:误差线显示三个独立孔的标准偏差；斯氏T检验（等方差，双侧）显示如下 比较有〈〇. 05的统计学显著性：
[0075] ATCC19606/ctCsuAB相较于CsuE-/aCsuAB;ATCC19606/aCsuAB相较于 八丁〇：19606/未处理的1§6;1^1134+81?+见60/(3(^81^8相较于1^1134+耶1?+见60/(1〇811八8 ; Ruhl34+BRS+HL60/aCsuAB相较于Ruhl34+BRS+HL60/ 未处理的IgG;Ruhl34+BRS/aCsuAB 相较于Ruhl34+HBRS/aCsuAB;Ruhl34+BRS/aCsuAB相较于Ruhl34+BRS/ 未处理的IgG。
[0076] 图C显示野生型和CsuEKO鲍式不动杆菌菌株ATCC19606的免疫印迹分析；和
[0077] 图10显示FimA蛋白质沉淀试验的结果；其中将来自FimA兔免疫血清⑴的总 IgG(lOyg)被覆至蛋白质A珠上（20yI床体积）并用于从菌株Luh9415的鲍式不动杆菌 培养物上清液（0. 4mL)捕获未处理的FimA，所述菌株Luh9415已知分泌FimA进入SN。采 用等量的来自未处理兔血清（2)的总IgG作为阴性对照。通过煮沸10分钟使捕获的总蛋 白质释放进入SDS-PAGE样品缓冲液，而7%通过SDS-PAGE分离。以1:1000的稀释度采用 aFimA免疫血清通过免疫印迹分析观察未处理的FimA。
[0078] 图11显示采用CsuAB兔免疫血清的被动免疫。
[0079] 中性白细胞减少症小鼠在i.p?注射0?15mL免疫血清（实线）或来自未处理动物 的等体积血清（虚线）后用鲍式不动杆菌感染。记录4?5天的小鼠存活率。不同菌株间 和不同致死时间的鲍式不动杆菌菌株毒力不同。实验B和C平行进行，而A中所示实验在 另一天进行。
[0080] 图A显示菌株AB-M，10只动物/组；图B显示菌株AB-M，14只动物/组，且图C显 示菌株AYE，14-15只动物/组。
[0081] 图12显示主动免疫实验。主动免疫之后的鲍式不动杆菌诱导的肺炎模型中的死 亡率。小鼠用抗原（实线A-F:A:AB025-9只动物，B:AB030-10只动物，C:AB031L1-9只 动物，D:FimA-9只动物，E:CsuAB-10只动物，F:0mpA-9只动物）接种疫苗，并随后通过气 管内接种鲍式不动杆菌（菌株AB-M)来诱导肺炎。一组小鼠仅用佐剂接种疫苗以作为对照 (虚线A-G;10只动物）。在第二对照组中，采用PBS替代疫苗或佐剂（实线G;9只动物）。 就所有测试的抗原（A-F)而言，相较于佐剂对照组观察到疫苗的有利效果。对于AB030观 察到了统计学显著效果，而其它抗原差一点就达到统计学显著性的5%阈值。可能有两个 原因造成该效果。第一，动物数量少，第二，相较于先前实验而言对照组（G)的死亡率较低。 所示死亡率较低最可能归因于主动免疫实验中的动物比被动免疫中所用的那些年长很多。 这是因为主动免疫的方案需要历时数周。
[0082] 图13显示被动免疫实验。小鼠通过在鲍式不动杆菌接种前第4天和第3天腹膜 内注射环磷酰胺来呈现暂时性的中性白细胞减少症。在第〇天，对鲍式不动杆菌接种之前 3小时的小鼠腹膜内被动疫苗接种0. 15mL兔抗血清、未处理兔血清或PBS。与主动免疫方 案类似地诱导肺炎。监测存活率、临床评分和体重。
[0083] 发明详述
[0084] 根据本发明，提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含由核酸分子编码的至少 一种多肽，所述核酸分子包含选自下组的多核苷酸：
[0085] 8)具有5￡〇10勵:1、3、5、7、9、11、13和15中任一所示核酸序列的多核苷酸；
[0086] b)编码由（a)的多核苷酸编码的多肽的片段、类似物或功能衍生物的多核苷酸， 其中所述片段、类似物或功能衍生物具有免疫刺激活性；
[0087]c)编码所具有的氨基酸序列与SEQIDN0:2、4、6、8、10、12、14和16中任一所示氨 基酸序列有至少80%相同性并且具有免疫刺激活性的多肽的多核苷酸；
[0088]d)与（a)的多核苷酸具有至少80%相同性并且编码具有免疫刺激活性的多肽的 多核苷酸；
[0089]e)在严谨条件下与（a)?（d)中任一种多核苷酸杂交的多核苷酸；和
[0090] f)与（a)?（d)中任一种全长多核苷酸互补的多核苷酸。
[0091] 本文提及的本发明多肽归纳于下表1:
[0092] ^1
【权利要求】
1. 一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含由含有选自下组的多核苷酸的核酸分子编码 的至少一种多肽： ￡〇具有5￡〇10勵:1、3、5、7、9、11、13和15中任一所示核酸序列的多核苷酸； b) 编码由（a)的多核苷酸编码的多肽的片段、类似物或功能衍生物的多核苷酸，其中 所述片段、类似物或功能衍生物具有免疫刺激活性； c) 编码所具有的氨基酸序列与SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14和16中任一所示氨基酸 序列有至少80%相同性并且具有免疫刺激活性的多肽的多核苷酸； d) 与（a)的多核苷酸具有至少80%相同性并且编码具有免疫刺激活性的多肽的多核 苷酸； e) 在严谨条件下与（a)?（d)中任一种多核苷酸杂交的多核苷酸；和 f) 与（a)?（d)中任一种全长多核苷酸互补的多核苷酸。
2. 如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述核酸分子是基因组DNA。
3. 如权利要求1或2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述多肽源自不动杆菌 (Acinetobacter)属。
4. 如权利要求1?3中任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述多肽源自鲍式不动 杆菌（Acinetobacter baumanii)种。
5. 如权利要求1?4中任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物还包含 药学上可接受的运载体和/或佐剂。
6. -种抗原性多肽，所述抗原性多肽由SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12、14和16中任一所 示氨基酸序列组成；或其片段、类似物或功能衍生物，其中所述片段、类似物或功能衍生物 具有免疫刺激活性。
7. -种编码如权利要求6所述抗原性多肽的核酸分子。
8. -种表达载体，所述表达载体包含如权利要求7所述的核酸分子。
9. 一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求8所述的载体和/或如权利要求7所 述的核酸。
10. -种特异性结合权利要求6所述的多肽的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体 或其抗原结合片段能够诱导针对鲍式不动杆菌的效应子功能。
11. 如权利要求10所述的抗体，其特征在于，所述抗体是多克隆抗体。
12. 如权利要求10所述的抗体，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体。
13. -种单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结 合SEQ ID N0:36中所示的表位共有基序PVDFTVAI。
14. 如权利要求13所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结 合片段能够诱导针对鲍式不动杆菌的效应子功能。
15. 如权利要求10?14中任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体是人抗体。
16. 如权利要求10?15中任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体有N末端修饰、内 部修饰和/或C末端修饰。
17. 如权利要求16所述的抗体，其特征在于，所述修饰选自寡聚化、与药物和/或标记 物偶联中的至少一种。
18. 如权利要求12?15中任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体由人B细胞产生 或由将所述人B细胞与骨髓瘤或异源骨髓瘤细胞融合获得的杂交瘤产生。
19. 一种杂交瘤，所述杂交瘤能够产生如权利要求12?15中任一项所述的抗体。
20. -种核酸，所述核酸编码如权利要求10?15或18中任一项所述的抗体的轻链和 重链。
21. -种包含权利要求20所述核酸的载体。
22. -种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求21所述的载体和/或如权利要求20 所述的核酸。
23. -种用于产生如权利要求12?15中任一项所述抗体的方法，所述方法包括在允许 抗体分泌的条件下培养如权利要求19所述的杂交瘤，和任选地从所述培养物上清液纯化 所述抗体。
24. -种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求6所述的抗原性多肽或如权利 要求10?18中任一项所述的抗体以及药学上可接受的运载体。
25. -种诊断组合物，所述诊断组合物包含如权利要求6所述的抗原性多肽或如权利 要求10?18中任一项所述的抗体，其用于检测患者中的细菌感染。
26. 如权利要求10?18中任一项所述的抗体，所述抗体用于治疗和/或预防哺乳动物 中的细菌感染。
27. 如权利要求26所述应用的抗体，其特征在于，所述哺乳动物是人。
28. 如权利要求26或27所述应用的抗体，其特征在于，所述感染由鲍式不动杆菌引起。
29. 如权利要求26?28中任一项所述应用的抗体，其特征在于，所述感染是医院获得 性的。
30. -种用于治疗和/或预防哺乳动物中的细菌感染的多肽，所述多肽由包含选自下 组的多核苷酸的核酸分子编码： ￡〇具有5￡〇10勵:1、3、5、7、9、11、13和15中任一所示核酸序列的多核苷酸； b) 编码由（a)的多核苷酸编码的多肽的片段、类似物或功能衍生物的多核苷酸，其中 所述片段、类似物或功能衍生物具有免疫刺激活性； c) 编码所具有的氨基酸序列与SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14和16中任一所示氨基酸 序列有至少80%相同性并且具有免疫刺激活性的多肽的多核苷酸； d) 与（a)的多核苷酸具有至少80%相同性并且编码具有免疫刺激活性的多肽的多核 苷酸； e) 在严谨条件下与（a)?（d)中任一种多核苷酸杂交的多核苷酸；和 f) 是（a)?（d)中任一种全长多核苷酸的互补体的多核苷酸。
31. 如权利要求30所述应用的多肽，其特征在于，所述哺乳动物是人。
32. 如权利要求30或31所述应用的多肽，其特征在于，所述感染由鲍式不动杆菌引起。
33. 如权利要求30?32中任一项所述应用的多肽，其特征在于，所述感染是医院获得 性的。
34. 如权利要求1?5中任一项所述的疫苗组合物或如权利要求30?33中任一项所 述应用的多肽，其还包含递送载剂。
35. 如权利要求34所述应用的疫苗组合物或多肽，其特征在于，所述递送载剂是病毒 颗粒。
【文档编号】A61K39/40GK104507499SQ201280068294
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2012年11月29日 优先权日:2011年11月30日
【发明者】S·厄威乐, M·哈克, M·鲁道夫 申请人:阿瑞迪思医药品股份有限责任公司