阳离子肽和这类肽抑制外毒素产生的用途

阳离子肽和这类肽抑制外毒素产生的用途
【专利摘要】描述了阳离子肽和使用这些阳离子肽在不显著抑制细菌生长的条件下抑制细菌外毒素的产生。
【专利说明】阳离子肽和这类肽抑制外毒素产生的用途
[0001] 相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求2011年12月21日提交的美国临时申请号61/578, 570的优先权。在 先申请的公开内容被认为是本申请公开的部分（且通过引用纳入本文）。

【技术领域】
[0003] 本发明涉及对细菌外毒素产生的抑制，更具体而言涉及阳离子肽和这些阳离子肽 在不显著抑制细菌生长的条件下抑制细菌外毒素的产生的用途。
[0004] 背景
[0005] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)是一种革兰氏阳性细菌，也是 世界上许多疾病的主要原因。该生物普遍存在，预计几乎40 %人类的粘膜表面有菌 落附着。参见 Lowy，N Engl J Med339:520-32 (1988);以及 McCormick 等，Annu Rev Micr〇bi〇155:77-104(2001)。该生物引起的疾病涉及从相对良性的感染（如疔疮和软组织 脓肿）到威胁生命的疾病（如中毒性休克综合征（TSS)、败血症和感染性心内膜炎）。金黄色 葡萄球菌主要通过细胞表面表达和分泌产生大量毒力因子诱发疾病。主要分泌的外毒素之 一是超抗原 TSS 毒素-1 (TSST-1)。参见 Bergdoll 等，Lancetl: 1017-21 (1981) ;Bergdoll 和 Schlievert，Lancet ii :691(1984);以及 Schlievert 等，J Infect Disl43:509-16 (1981)。 TSST-1是经液TSS的病因，这是一种通常与使用某些卫生棉塞且阴道中有金黄色葡萄球 菌建群的健康女性相关的疾病。参见Schlievert，Lancetl:1149_50(1986) ;Schlievert 等，J Clin Microbiol，42:2875-6(2004)。此外，TSST-1 是高达 50%非经液 TSS 的病因， 大多数情况下与上呼吸道感染相关，剩下的非经液TSS中的大部分与超抗原葡萄球菌肠毒 素 B和C相关。超抗原通过诱发生成大量细胞因子导致严重的人类疾病，引发以发热和 呕吐为特征的急性发作疾病以及腹泻（流感样症状）、低血压、晒伤样皮疹、恢复后脱皮和 可变的多器官组分（variable multi-organ component)。参见 Davis 等，N Engl J Med， 303:1429-35(1980) ;Marrack 和 Kappler，Science，248:705-ll(1990);以及 Shands 等，N Engl J Med303:1436-42(1980)。
[0006] 概述
[0007] 本发明基于以下发现，即阳离子肽能够在不明显抑制细菌生长的条件下抑制细菌 外毒素的产生。本文所描述的阳离子肽可用于抑制外毒素产生，并可被含有医疗或卫生装 置的组合物所包括。例如，可使用本文所描述的一种或多种肽包被或浸渍医疗或卫生装置 的全部或部分表面。所述肽无毒性、无炎症性且无刺激性，适用于治疗脊椎动物对象或者包 被或浸渍用于脊椎动物对象的医疗或卫生装置。
[0008] 在一个方面，本发明描述了长度为10至50个氨基酸（例如长度为18至30个氨 基酸）的肽的特征，其特征在于，带正电荷的氨基酸所占百分比比带负电荷的氨基酸所占 百分比多15%或更高（例如18%或更高、25%或更高、50%或更高、70%或更高或90%或 更高）。这类肽能够在不明显抑制细菌生长的条件下抑制细菌外毒素的产生。所述细菌外 毒素来自以下细菌属组成的组：葡萄状球菌（Staphylococci)、奈瑟氏球菌（Neisseriae)、 链球菌（Streptococci)、沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis)、密螺旋体（Treponemae)、 嗜血菌（Haemophilus)、博德特氏菌（Bordetellae)、阴道加德纳菌（Gardnerella vaginalis)、芽抱杆菌（Bacillus)、梭菌（Clostridium)、大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli)、霍乱弧菌（Vibrio cholerae)、沙门氏菌（Salmonella)、志贺氏菌（Shigellaa)、 分枝杆菌（Mycobacteria)、弗朗西斯氏菌（Francisella)、耶尔森菌（Yersinia)、伯克霍 尔德氏菌（Burkholderia)、假单胞菌（Pseudomonas)和布鲁氏菌（Brucella)。所述带 正电荷的氨基酸可包括一种或多种赖氨酸、赖氨酸类似物、精氨酸、精氨酸类似物、组氨 酸或组氨酸类似物。肽的氨基酸序列可以是SFPTTKTYFPHFDLSHGSAQVK(SEQ ID N0:3)、 STKPFFYFLHTQVKASPTSHDG(SEQ ID N0:4)、SKPKKKKYKPHKKKSHKSAKKK(SEQ ID N0:5)或 SKPKKKTYKPHKDLSHGSAKKK(SEQ ID N0:6)〇
[0009] 在另一个方面，本发明描述了包含一种或多种肽和一种药学上可接受运载体的组 合物的特征，其特征在于，每种肽均为上文所述肽，以及一种抑制细胞外毒素产生的方法， 所述方法包括将脊椎动物对象与这类组合物接触。可制备所述组合物用于皮下给药、肌肉 内给药、口服给药、局部给药或阴道给药。
[0010] 本发明还描述了包括一种医学或卫生装置（例如阴道棉塞、外科缝合线、外科绷 带、外科敷料、渗透泵或造口术装置）的组合物；以及任何一种或多种上文所述肽的特征。 可使用一种或多种肽浸渍全部或部分所述装置或者包被所述装置的全部或部分表面。
[0011] 本发明还描述了一种抑制外毒素产生的方法的特征。所述方法包括将上文所述的 一种或多种肽递送至脊椎动物对象的某一组织或器官，其特征在于，所述组织或器官被一 种细菌感染，或存在被其感染的风险。
[0012] 除非另外定义，否则，本文中使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域普通 技术人员通常所理解的含义相同。虽然在本发明的实施或测试中可以采用类似于或等同于 本文所述的那些方法和材料，但是下文描述了示例性的方法和材料。本文中述及的所有出 版物、专利申请、专利、Genbank?登录号和其他参考文献都通过引用全文纳入本文。在抵 触的情况下，以本申请（包括定义在内）为准。材料、方法和实施例都仅是说明性的，并不 意在构成限制。
[0013] 能够从下文中的详述和所附权利要求很容易地了解本发明的其他特征和优点。
[0014] 发明详述
[0015] 本发明描述了阳离子肽、包含一种或多种阳离子肽的组合物、包括这类组合物的 制造制品以及使用所述阳离子肽抑制细菌外毒素产生的方法的特征。如实施例中阐述的， 所述阳离子肽具有TSST-1抑制活性，独立于抗微生物活性，且无炎症性、无刺激性。不受特 定机制的限制，本文所述阳离子肽被认为能够通过两种组分系统抑制信号传导，与血红蛋 白的α-珠蛋白链类似，结果是在不抑制细菌生长的条件下减少TSST-1的产生。对金黄色 葡萄球菌所产生外毒素的抑制会导致该生物无法在人体表面建群，从而防止金黄色葡萄球 菌疾病的发生。本文所述阳离子肽代表了一类能够干扰金黄色葡萄球菌功能的分子，但缺 乏抗微生物效果。此外，超抗原（如TSST-1)对于金黄色葡萄球菌引发严重疾病（如坏死 性肺炎）的能力十分关键（参见例如Schlievert，J Infect Dis，200:676-8 (2009);以及 Strandberg等，J Infect Dis，202:1690-7 (2010))。同样，预计抑制超抗原产生的药剂能 够防止金黄色葡萄球菌引发感染的能力。
[0016] 可使用本文所述方法以抑制来源于多种细菌属的外毒素的产生，包括与医 疗和/或卫生装置的使用相关的细菌。例如，本文所述肽能够抑制以下细菌属所产 生的外毒素：葡萄状球菌（staphylococci)(如金黄色葡萄球菌（S. aureus)、中间葡 萄球菌（S. intermedius)、表皮葡萄球菌（S. epidermidis)和其他凝固酶阴性葡萄状 球菌）、奈瑟氏球菌（Neisseriae)(如淋病奈瑟氏球菌（N. gonorrheae)和脑膜炎奈 瑟氏球菌（N. meningitides))、链球菌（Streptococci)(如A群链球菌（如酿脓链球 菌（S. pyogenes))、B群链球菌（如无乳链球菌（S. agalactiae))、C群链球菌、G群链 球菌、肺炎链球菌（S. pneumoniae)和绿色链球菌（viridans Streptococci))、衣原体 (Chlamydia)(如沙眼衣原体（C. trachomatis))、密螺旋体（Treponemae)(如苍白密螺旋 体（T. pallidum)、极细密螺旋体（T.pertenue)和角藻密螺旋体（T.cerateum))、嗜血细 菌（Haemophilus bacteria)(如杜氏嗜血菌（H. ducreyi)、流感嗜血菌（H. influenzae) 和流感嗜血菌埃及生物群（H. aegyptius))、博德特氏菌（Bordetellae)(如百日咳博德 特氏菌（B. pertussis)、副百日咳博德特氏菌（B. parapertussis)和支气管炎博德特氏 菌（11131'011(311丨86。1：；^3))、加德纳菌（631(1116代113)(如阴道加德纳菌（6.￥38；[仙1丨8))、 芽孢杆菌（Bacillus)(如炭疽芽孢杆菌（B. anthracis)和錯状芽孢杆菌（B. cereus))、 梭菌（Clostridium)(如产气荚膜梭菌（C.perfringens)、败毒梭菌（C.septicum)、诺氏 梭菌（C.novyi)和破伤风梭菌（C.tetani))、埃希氏杆菌（Escherichia)(如大肠埃希 氏杆菌（E.coli))、弧菌（Vibrio)(如霍乱弧菌（V. cholera))、沙门氏菌（Salmonella) (如肠炎沙门氏菌（S. enteriditis)、鼠伤寒沙门氏菌（S. typhimurium)和伤寒沙门氏 菌（S.typhi))、志贺氏细菌（Shigella bacteria)、分枝杆菌（Mycobacteria)、弗朗西斯 氏细菌（Francisella bacteria)、耶尔森细菌（Yersinia bacteria)(如鼠疫耶尔森菌 (Y.pestis))、伯克霍尔德氏细菌（Burkholderia bacteria)、假单胞细菌（Pseudomonas bacteria)和布鲁氏细菌（Brucella bacteria)。
[0017] 例如，本文所述肽能够抑制细菌外毒素的产生，如TSST-1、葡萄球菌α、β、γ和 S溶血素、链球菌热原外毒素（SPE)、链球菌溶血素0、链球菌溶血素 S、葡萄球菌肠毒素 (SE ;如SEA、SEB、SEC或SEE)、A-B毒素、白喉外毒素、霍乱外毒素、百日咳外毒素、志贺菌外 毒素、类志贺菌外毒素、炭疽（炭疽杆菌（B. anthracis))毒素、肉毒杆菌外毒素、破伤风类 外毒素、气管细胞毒素、螺杆菌毒素、α毒素（卵磷脂酶）、κ毒素（胶原酶）、μ毒素（透 明质酸酶）、杀白细胞素、弹性蛋白酶及其他蛋白酶、Panton Valentine杀白细胞素组分（S 或F组分）、膜孔蛋白、单核细胞增生利斯特菌溶细胞素、气溶素、炭疽杆菌保护性抗原和核 酸酶。
[0018] 本文所述阳离子肽长度为10至50个氨基酸，例如长度为12至48个、15至45个、 15至40个、15至35个、18至30个或20至30个氨基酸，其特征在于，带正电荷的氨基酸所 占百分比（相对于氨基酸总数计算）比带负电荷的氨基酸所占百分比多15%或更高（例如 18%或更高、25%或更高、50%或更高、70 %或更高、75 %或更高、80 %或更高、85 %或更高、 90 %或更高或95 %或更高）。例如，如果一条肽的长度为40个氨基酸且包含8个带负电荷 的氨基酸，只有肽中存在14个或更多个带正电荷的氨基酸时才能将其称为"阳离子肽"。另 一个例子是，如果一条肽的长度为40个氨基酸且肽中仅包含2个带负电荷的氨基酸，那么 肽中只需存在8个或更多个带正电荷的氨基酸即可被称为"阳离子肽"。通常，在4. 0至8. 0 的pH范围（如生理pH)内评估带正电荷的氨基酸所占百分比。带正电荷的氨基酸包括赖 氨酸或其类似物、精氨酸或其类似物、或者组氨酸或其类似物。赖氨酸、精氨酸和组氨酸的 类似物包括例如高赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸、二氨基庚二酸、二氨基丙酸和高精氨酸以 及三甲基赖氨酸和三甲基鸟氨酸、4-氨基哌啶-4-羧酸、4-氨基-1-甲脒基哌啶-4-羧酸 和4-胍基苯丙氨酸。
[0019] 本文所述阳离子肽包括α-、β-和/或Y -氨基酸、天然或非天然氨基酸以及氨 基酸的D-和/或L-立体化学形式，可在固相上合成并纯化至>95 %纯度（如通过高效液相 色谱（HPLC))。可在氨基酸的名称或缩写前添加适当的"D"或"d"或"L"或"1"符号以表 示氨基酸的立体化学形式。在一些实施方式中，一条阳离子肽包含的氨基酸全部是D-对映 异构体。在其他实施方式中，所述阳离子肽同时包含D和L对映异构体。用于多肽固相合 成的带多种不同保护基团（如Boc)的氨基酸市售可得。
[0020] 术语"天然"或"天然产生"的氨基酸指20种最常见氨基酸中的一种。本文中天然 氨基酸的表示形式为其标准的单字母缩写。术语"非天然氨基酸"或"非天然"表示天然氨 基酸任何形式的衍生物，包括D型以及β和γ氨基酸衍生物。能够整合至阳离子肽中的 非天然氨基酸或氨基酸衍生物的非限制性示例如下所述（括号中为常见缩写）：β-丙氨酸 (β -Ala)、γ -氨基丁酸（GABA)、2_ 氨基丁酸（2_Abu)、α，β -脱氢-2-氨基丁酸（Δ -Abu)、 氨基丁酸（Y-Abu)、l-氨基环丙烷-1-羧酸（ACPC)、氨基异丁酸（Aib)、2-氨基-噻 唑啉-4-羧酸，5-氨基戊酸（5-Ava)、6-氨基己酸^-Ahx)、8-氨基辛酸（8-Aoc)、ll-氨基 i 烧酸（ll-Aun)、12-氨基十二烧酸（12-Ado)、2_氨基苯甲酸（2-Abz)、3_氨基苯甲酸 (3-Abz，又名间-氨基苯甲酸（mABA))、4-氨基苯甲酸（4-Abz)、4-氨基-3-轻基-6-甲基 庚酸（Statine，Sta)、氨基氧乙酸（Aoa)、2_氨基四氢化萘-2-羧酸（Ate)、4_氨基-5-环 己基-3-羟基戊酸（ACHPA)、对-氨基苯丙氨酸（4-NH2-Phe)、联苯基丙氨酸（Bip)、对-溴 苯丙氨酸（4-Br-Phe)、邻-氯苯丙氨酸（2-Cl-Phe)、间-氯苯丙氨酸（3-Cl-Phe)、对-氯 苯丙氨酸（4-Cl-Phe)、间-氯酪氨酸（3-Cl-Tyr)、对-苯甲酰基苯基丙氨酸（Bpa)、叔丁基 甘氨酸（Tie)、环己基丙氨酸（Cha)、环己基甘氨酸（Chg)、二氨基庚二酸（DAP)、2, 3-二氨 基丙酸（Dpr)、2, 4-二氨基丁酸（Dbu)、3, 4-二氯苯丙氨酸（3, 4_C12_Phe)、3, 4-二氟苯丙 氨酸（3, 4-F2-Phe)、3, 5-二碘酪氨酸（3, 5-I2-Tyr)、邻-氟苯丙氨酸（2-F-Phe)、间-氟 苯丙氨酸（3-F-Phe)、对-氟苯丙氨酸（4-F-Phe)、间-氟酪氨酸（3-F-Tyr)、高精氨酸 (Har)、高赖氨酸（Hly)、高丝氨酸（Hse)、高苯丙氨酸（Hfe)、高酪氨酸（Htyr)、5_轻色氨酸 (5-0H-Trp)、轻基脯氨酸（Hyp)、对-碘苯丙氨酸（4-I-Phe)、3-碘酪氨酸（3-I-Tyr)、二氢 口引哚-2-羧酸（Idc)、异哌陡酸（Inp)、间-甲基酪氨酸（3-Me-Tyr)、1_萘基丙氨酸（Ι-Nal)、 2萘基丙氨酸（2-Nal)、对-硝基苯丙氨酸（4-N02-Phe)、3_硝基酪氨酸（3-N02-Tyr)、正亮 氨酸（Nle)、正缬氨酸（Nva)、鸟氨酸（Orn)、邻-磷酸酪氨酸（H2P03-Tyr)、八氢吲哚-2-羧 酸（Oic)、青霉胺（Pen)、五氟苯丙氨酸（F5-Phe)、苯基甘氨酸（Phg)、哌陡酸（Pip)、炔丙基 甘氨酸（Pra)、焦谷氨酸（pGlu)、肌氨酸（Sar)、四氢异喹啉-3-羧酸（Tic)、噻唑烷-4-羧 酸（噻莫西酸，Th)、三甲基赖氨酸、三甲基鸟氨酸、4-氨基哌啶-4-羧酸、4-氨基-1-甲脒 基哌啶-4-羧酸和4-胍基苯丙氨酸。应注意，某些在本文中被归类为非天然氨基酸的氨基 酸（如羟基脯氨酸）也可以在天然环境中的某个生物或特定蛋白质内找到。
[0021] 组合物
[0022] 本发明还描述了包括一个或多个本文所述阳离子肽的组合物的特征。例如，一 种组合物可包括两种、三种、四种或更多种肽。可以将一种或多种肽与多种本领域已知 的药学上可接受的运载体、乳化剂、赋形剂和/或稳定剂（Remington's Pharmaceutical Sciences(《雷明顿药物科学》），第16版，Osol，A.主编，1980)中的任意一种或多种混合 以制备用于任意给药途径的所述组合物。可接受的运载体、乳化剂、赋形剂或稳定剂在所用 剂量和浓度下应对接受者无毒，且包括：缓冲液（如磷酸盐、柠檬酸盐和其他无毒有机酸）； 抗氧化剂（如抗坏血酸）；低分子量（少于10个残基）多肽；蛋白质（如血清白蛋白、明胶 或免疫球蛋白）；亲水性聚合物（如聚乙烯基吡咯烷酮）；氨基酸（如甘氨酸、谷氨酰胺、天 冬酰胺、精氨酸或赖氨酸）；单糖、二糖和其他碳水化合物（包括葡萄糖、甘露糖或葡聚糖）； 螯合剂（如EDTA);糖醇（如甘露醇或山梨糖醇）；成盐的抗衡离子（如钠）；和/或非离子 表面活性剂（如吐温、普流罗尼克或PEG)。在一些实施方式中，可使用一种水性凝胶（例如 包含96. 3%H20、2. 7%Natrosol 250HX药用羟乙基纤维素（赫克里斯有限公司（Hercules Inc.))、0· 85% NaCl、0. 1%山梨酸和0 - 0· 02%焦糖色素（重量百分比）；用氢氧化钠调节 pH至4. 4)作为肽的乳化剂。在一些实施方式中，所述肽可以是一种在受感染区域或有感 染风险区域外敷使用的乳膏或溶液的组分，可选与任何已知的无毒递送剂和/或渗透剂联 用。
[0023] 本文所述组合物的给药方式可以是口服给药或通过静脉内输注、或者皮下、肌肉 内、鞘内、腹膜内、直肠内、阴道内、鼻内、胃内、气管内或肺内注射。所需剂量取决于给药方 式的选择；制剂的性质；患者所患疾病的性质；对象的大小、重量、表面积、年龄和性别；同 时给予的其他药物；以及主治医生的判断。适当的剂量在0.001-100. 〇 mg/kg范围内。从 各种给药途径的不同效率来看，预期需要的剂量有很大的变化。可使用标准经验程序调节 这些剂量水平的变化以进行优化，这是本领域所熟知的。肽在合适的递送载体（例如，聚合 微粒或可植入装置）中的包埋可增加递送的效率，尤其是口服递送。
[0024] 本文所述其他组合物包括一种或多种阳离子肽和一种医疗或卫生装置。本文所 用术语"医疗或卫生装置"指一种插入脊椎动物对象的身体通道内、插入脊椎动物对象的 体腔内、或外敷在脊椎动物的组织和器官上的装置，其目的是：(a)伤口保护；(b)避免或减 少不需要的，或者克服受限制的排放，所述排放指脊椎动物对象将体液、身体分泌物或排泄 物（如血液、经液、尿液、淋巴液、脑脊液、精液、唾液、阴道分泌物、粘液或粪便）从身体中释 放出去；（c)向对象递送药物或一些其他治疗或预防剂；（d)代替缺少的或补充有缺陷的器 官功能；或者（e)维持身体通道（如血管）的通畅。感兴趣的装置包括但不限于：直肠装 置（如栓剂、灌肠剂和导管）；鼻、气管或食道递送装置；阴道装置（如阴道棉塞和避孕装置 (如隔膜或子宫内装置（IUD));静脉、动脉、颅内和其他针头、导管和支架；肾透析通道；夕卜 科绷带、缝线或敷料；造口术装置；失禁装置；天然和人工合成的可植入组织基质（参见例 如美国专利号5, 885, 829);起搏器和起搏器电线及导连；人工合成和天然的假体（如臀和 膝假体和心脏瓣膜）；植入体腔（如腹腔）内并缓慢递送药物或一些其他治疗或预防剂的 渗透泵（如小型渗透泵）。
[0025] 在这些组合物内，可单独提供所述肽和所述装置。因此，可以试剂盒或制品的形式 提供这些组合物，可选包含包装材料。可选择将所述装置和所述一种或多种多肽置于单独 的容器内。在试剂盒或制品内，可选择放置说明书（如在包装材料上或包装插页内），用于 说明如何使用所述装置以及如何给予所述肽。可如上文所述配制这类组合物中的肽。但通 常以组合的形式提供所述肽和装置。因此，可使用一种或多种肽浸渍全部或部分所述装置 或者包被所述装置的全部或部分表面。
[0026] 本文中，对脊椎动物对象"使用一项装置"表示将装置的全部或部分插入对象的身 体通道（如阴道）或体腔（如腹膜或胸膜腔）内，或者将装置的全部或部分与对象的组织 或器官的表面或内部接触。
[0027] 本发明还提供了使用包括一种或多种肽和一种装置的组合物的方法。可单独使用 所述装置和肽，也可在使用前将其混合。如果单独使用，可使用上文所述任何方法给予所述 肽，并如上文所述对脊椎动物对象使用所述装置。以组合形式提供所述装置和肽时，组合物 的使用方式与单独使用所述装置时一致。
[0028] 在上文所述任何方法中，所述对象可以是一种脊椎动物，例如：哺乳动物（如人 类、非人类灵长类动物（如猴）、小鼠、大鼠、仓鼠、沙鼠、豚鼠、奶牛、绵羊、山羊、马、猪、兔、 狗或猫）；或鸟类（如鸡、火鸡、金丝雀、鹰或雕）。例如，可以将包含一种或多种肽的本文所 述组合物递送至受细菌感染或有感染风险的脊椎动物对象（如人类）的组织或器官，以抑 制对象中外毒素的产生。在一些实施方式中,可通过在对象中插入、外敷或植入包含一种或 多种本文所述肽的医疗或卫生装置抑制外毒素的产生（例如一种浸渍或者全部或部分表 面包被有一种或多种肽的医疗或卫生装置）。
[0029] 制品
[0030] 本文所述的组合物能与包装材料和固体结合作为制品或试剂盒。生产制品的组分 和方法是已知的。制品可与本文所述的一种或多种治疗组合物联用。另外，制品还可包括 无菌水、药物运载体、缓冲液、抗体、指示分子和/或其他有用的检测微生物疾病的试剂。这 类试剂盒中可包括说明书，该说明书描述了组合物和疫苗如何有效防止感染的发生、防止 感染的临床信号出现、缓解感染的临床信号、降低感染的临床信号的风险、降低感染的临床 信号的发生和/或减少感染的扩散。能以包装前形式提供足够单次给药的量的本文所述的 组合物。
[0031] 以下是本发明实践的实施例。不应将其理解为以任何方式对本发明范围的限制。 实施例
[0032] 实施例1-材料与方法
[0033] 本文所述所有实验均使用金黄色葡萄球菌MN8,这是一种来自于经液TSS患者的 对甲氧西林敏感（MSSA)的临床分离株，并代表75%的经液TSS分离株（参见Schlievert 等，J Infect Disl43:509-16(1981))。在实验室中以冻干状态保存该生物。为进行实验， 在Todd Hewitt培养基（迪菲克实验室（Difco Laboratories)，密歇根州底特律）中将MN8 培养过夜。第二天，在新鲜的Todd Hewitt培养基中将该生物稀释为约104菌落形成单位 (CFU)/mL，用于接种。在潜在外毒素抑制肽存在的条件下，振荡培养该生物9个小时（200 转/分钟）。
[0034] 外毒素抑制肽。所有研究所用的肽均由明尼苏达大学微化学实验室（University of Minnesota Microchemical Facility)合成并纯化至均勻，除了防御素肽（人嗜中性 肽-1 (HNP-1)和人嗜中性肽-2(HNP-2))，其购自西格玛-奥德里奇公司（Sigma-Aldrich) (密苏里州圣路易斯市）。所有肽均在培养基中稀释至5. 0至彡5χ1(Γ6 μ g/mL的浓度范围。 肽的序列见表1，括号中显示了带正电荷残基所占百分比。
[0035]表 1
[0036] 测试外毒素抑制活性所用的肽
[0037]

【权利要求】
1. 一种分离的肽，所述肽抑制细菌外毒素的产生且基本不抑制细菌生长，所述肽长度 为10至50个氨基酸，且带正电荷的氨基酸所占百分比比带负电荷的氨基酸的数目高15% 或更1?。
2. 如权利要求1所述的肽，所述细菌外毒素来自选自以下所述的细菌属：葡萄状球 菌（Staphylococci)、奈瑟氏球菌（Neisseriae)、链球菌（Streptococci)、沙眼衣原体 (Chlamydia trachomatis)、密螺旋体（Treponemae)、嗜血菌（Haemophilus)、博德特氏 菌（Bordetellae)、阴道加德纳菌（Gardnerella vaginalis)、芽抱杆菌（Bacillus)、梭 菌（Clostridium)、大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli)、霍乱弧菌（Vibrio cholerae)、 沙门氏菌（Salmonella)、志贺氏菌（Shigellaa)、分枝杆菌（Mycobacteria)、弗朗西斯氏 菌（Francisella)、耶尔森菌（Yersinia)、伯克霍尔德氏菌（Burkholderia)、假单胞菌 (Pseudomonas)和布鲁氏菌（Brucella)。
3. 如权利要求1或2所述的肽，所述肽的长度为18至30个氨基酸。
4. 如权利要求1-3中任一项所述的肽，其中带正电荷的氨基酸所占百分比比带负电荷 的氨基酸的数目高18 %或更高。
5. 如权利要求1-3中任一项所述的肽，其中带正电荷的氨基酸所占百分比比带负电荷 的氨基酸的数目高25%或更高。
6. 如权利要求1-3中任一项所述的肽，其中带正电荷的氨基酸所占百分比比带负电荷 的氨基酸的数目高50%或更高。
7. 如权利要求1-3中任一项所述的肽，其中带正电荷的氨基酸所占百分比比带负电荷 的氨基酸的数目高70%或更高。
8. 如权利要求1-7中任一项所述的肽，所述带正电荷的氨基酸包含赖氨酸、赖氨酸类 似物、精氨酸、精氨酸类似物、组氨酸或组氨酸类似物中的一种或多种。
9. 如权利要求1-3中任一项所述的肽，所述肽的氨基酸序列为 SFPTTKTYFPHFDLSHGSAQVK(SEQ ID NO:3), STKPFFYFLHTQVKASPTSHDG(SEQ ID NO :4), SKPKKKKYKPHKKKSHKSAKKK(SEQ ID N0:5)或 SKPKKKTYKPHKDLSHGSAKKK(SEQ ID N0:6)〇
10. -种组合物，其包含一种或多种肽和药学上可接受的运载体，每种肽均为权利要求 1-9中任一项所述的肽。
11. 如权利要求10所述的组合物，所述组合物被配制成用于皮下给药。
12. 如权利要求10所述的组合物，所述组合物被配制成用于肌肉内给药。
13. 如权利要求10所述的组合物，所述组合物被配制成用于口服给药。
14. 如权利要求10所述的组合物，所述组合物被配制成用于局部给药。
15. 如权利要求10所述的组合物，所述组合物被配制成用于阴道给药。
16. -种组合物，所述组合物包含一种医疗或卫生装置以及权利要求1-9中任一项所 述的肽。
17. 如权利要求16所述的组合物，可使用一种或多种肽浸渍全部或部分所述装置或者 包被所述装置的全部或部分表面。
18. 如权利要求16或权利要求17所述的组合物，所述装置为阴道棉塞。
19. 如权利要求16或权利要求17所述的组合物，所述装置为外科缝合线、外科绷带、夕卜 科敷料或渗透泵。
20. 如权利要求16或权利要求17所述的组合物，所述装置为造口术装置。
21. -种抑制外毒素产生的方法，所述方法包括将权利要求1-9中任一项所述的肽递 送至脊椎动物对象的组织或器官，所述组织或器官受到细菌感染或有细菌感染的风险。
22. -种抑制外毒素产生的方法，所述方法包括使权利要求16-20中任一项所述的组 合物接触脊椎动物对象。
【文档编号】A61L29/04GK104093734SQ201280069162
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2012年12月21日 优先权日:2011年12月21日
【发明者】P·M·施利弗特 申请人:明尼苏达大学董事会