专利名称：叶下珠多糖在制备抗乙肝病毒的药物中的应用的制作方法
叶下珠多糖在制备抗乙肝病毒的药物中的应用技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种叶下珠多糖PUIP III在制备抗乙肝病毒的药物中的应用。
背景技术：
乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)从发现至今已有四十余年。1963年， Blumberg等发现澳大利亚血友病患者血清中含有一种能与美国血友病患者血清起反应的抗原，称其为澳大利亚抗原(即乙型肝炎病毒表面抗原，Hepatitis B Virus Surface Antigen,HBsAg)。1970年Dane等在乙肝病人血清中发现了 42nm大小的HBV颗粒,其外膜成分中含有HBsAg，1986年国际病毒命名委员会正式将HBV归为嗜肝DNA病毒科。
乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个世界性的健康问题，呈世界性分布，它不仅可以导致急、慢性HBV感染与75% — 90%的原发性肝癌相关。全球慢性HBV感染约有3. 5亿人，我国属HBV感染的高流行区。据我国传染病报告和疾病监测统计，乙肝占急性肝炎病例的25% 左右，与HBV感染有关的肝病死亡率约23/10万，其中肝癌死亡率约13/10万，乙肝对人类健康危害最为严重，是我国最重要的公共卫生问题之一。由一些数据估计，我国慢性无症状 HBV携带者(AsC)超过1. 2亿，占全世界HBV感染的1/3，其中慢性乙型肝炎有3000万人， 先、现患率约为2770/10万，这些患者10% — 30%可发展为肝硬化，一部分可进一步发展为肝癌，累计现行的和既往的，我国已有一半以上人口经受HBV感染，所以慢性乙肝的治疗是亟待解决的问题。
目前临床上用于治疗HBV感染的药物除干扰素(Interfeixm，IFN)外，还有少数天然药物及众多化学合成药物如核苷类似物阿糖腺苷(adenine arabinside, Ara_A)、拉米夫定(Iamivudine)、泛昔洛韦(famciclovir)、阿地福韦(adefovir)、恩他卡韦(ontacavir) 等。这些药物已在实验室和临床应用中证实能显著抑制HBV DNA的复制或抑制HBsAg、 HBeAg的表达与分泌。然而这些药物却存在一定的不足，干扰素的缺点主要表现在①价格昂贵；②注射制剂；③对患者的选择有严格的限制性；④明显的不良反应，如发热、血小板减少、暂时性脱发等；⑤在失代偿性肝病患者中应用有一定的风险。核苷类药物的不足表现在①需要长期治疗耐药性病毒变异的发生率高；③停药后发生ALT反跳，甚至发生重症肝炎。上述的种种不足都使得临床应用受到了极大的限制。因此，寻找和开发无污染、低毒副作用、价格低廉、安全有效的新型抗HBV药物具有十分重要的理论、经济和社会意义。
随着天然植物及其提取物或有效成分抗病毒、抗肿瘤、调节免疫等研究的不断深入，人们发现，天然药物具有对人体低毒副作用，不易产生耐药性等显著特点。针对目前病毒性肝炎治疗中的困难，寻找与证实有效天然药物已经成为临床治疗病毒性肝炎的希望与重要手段。传统中草 药品种繁多，已广泛应用于临床治疗慢性乙型肝炎并取得一定疗效，积累了丰富的临床经验，但中草药抗HBV的作用机理还有待于深入研究，所以筛选中草药抗 HBV这方面的工作尚有很大的潜力；而且传统中草药不良反应少，价格低，日益受到国内外研究者的普遍重视，寻求有抗病毒作用的天然药物是当前研究的热点。目前国内外对天然药物生物活性与功能的研究已发展为研究与分析天然药物的活性部位、活性成分及至活性成分的结构或构型，以进一步明确药物的作用机理，真正实现“天然药物现代化”这一目标。 如美国Holk等在天然植物茜草抗HBV作用的深入研究中，发现其抑制HBsAg、HBeAg表达的具体有效成分为三种奈-氢醌化合物。日本学者Nin等研究证明治疗肝炎的传统药物甘草中起免疫调节作用的成分为一种糖类(甘草甜素)。发明内容
本发明的目的在于提供一种叶下珠多糖TOIP III在制备抗乙肝病毒的药物中的应用，PUIP III是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖4个单糖组成，鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖的摩尔比为O. 27:0. 28:0. 1:0. 35，分子量为418793. 5。由药用植物叶下珠经人工提取、分离纯化而成。体外生物活性实验表明，PUIP III具有抑制IfepG2. 2. 2. 15细胞培养中HBsAg、HBeAg的分泌和HBV-DNA的复制，具有一定的体外抗HBV活性作用；体内活性实验表明，PUIP III在鸭体内对DHBV DNA有明显抑制作用，且反弹较小，可用于制备抗乙肝病毒的药物和保肝护肝保健品。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案一种叶下珠多糖PUIPIII在制备抗乙肝病毒的药物和保肝护肝保健品中的应用。
本发明所述的叶下珠多糖TOIP III的提取分离方法，包括如下步骤I)叶下珠全草蒸馏水洗涤去土，干燥后，粉碎，用石油醚浸没药材且液面高出药材 O. 5 1cm，在80°C和常压力回流提取3次，每次2小时，弃去回流液。药渣继续用50 100% 乙醇按同样方法在80°C °C下回流提取3次，每次2小时，弃去回流液。药渣再用90 °〇水浸提3次，每次2小时，合并3次浸提液进行离心分离，离心速度4000r/min，取滤液浓缩至原体积1/4，加入4倍体积的95%乙醇，静置24h，离心，取醇沉物即为粗总多糖；粗总多糖经 2)除蛋白，即用Sevag法脱蛋白将步骤I)得到的醇沉物用蒸馏水复溶得粗多糖溶液，在粗多糖溶液中加入氯仿和正丁醇混合液的优选体系是粗多糖溶液氯仿和正丁醇混合液以体积比计量是3:1，混合液=氯仿正丁醇=4:1 (体积比计量)，磁力搅拌30min，充分静置分层，弃去沉淀。重复7 8次后直至界面无白色沉淀。3)洗涤，除杂在除蛋白后的多糖溶液中加入4倍体积的95%乙醇沉淀24h，离心，弃滤液，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚清洗、重复3次。4)透析，干燥即醇沉洗涤后滤渣加适量蒸馏水，充分复溶后透析，透析在磁力搅拌下进行，样品液与透析液(蒸馏水)体积比优选条件为1:20，8h换一次水，透析72h。 透析完毕后将糖溶液放入冷冻干燥机中干燥得叶下珠总多糖(PULP)，经测定本发明总多糖 (PULP)含量在95%以上。5)总多糖各组分分离纯化经过脱蛋白，透析处理后的叶下珠精总多糖(PULP)溶于适量的重蒸水中(8 mg/mL)，过DEAE-52阴离 子交换柱分离。使用前将 DEAE-52纤维素填料用蒸馏水浸泡48h，期间3h换一次水，并用倾泻法除去悬浮杂质，然后进行碱一酸一碱处理。先用O. 5 mo I/L的NaOH溶液浸泡30 min后蒸馏水洗至中性，再用 O. 5 mo I/L的HCl溶液浸泡30 min后蒸馏水洗至中性，最后用O. 5 mo I/L的NaOH溶液浸泡30 min后蒸馏水洗至中性，得到0H_型纤维素。湿法装柱(柱尺寸为500 X 50mm)，蒸馏水平衡48h，装柱过程中避免气泡及断层现象。将叶下珠精总多糖样液，过O. 45 μ m滤膜后上样。依次用 0、0. 1,0. 25,0. 5,0. 75mol/L NaCl 梯度洗脱，每 IOmin 收集一管，流速 4mL/min， 苯酚一硫酸法跟踪检测。以收集的管序(管数)为横坐标，溶液的光吸收度为纵坐标绘图得洗脱曲线，从曲线上能够明显宣示出四个峰形对称的洗脱峰，分别代表四个组分，按照出峰的顺序分别记为PULP1、PULP I1、PULP III和PULP IV。其中第2个、第3个两个洗脱峰较大，收集第3主峰组分，浓缩，重蒸水透析48h，冷冻干燥得叶下珠多糖I3ULPIII纯组分。纯度在98%以上，符合生物活性试验要求，可直接用于下述的抗病毒活性试验，样品也可干燥后密封保存备用。
本发明的有益效果1、叶下珠多糖PULP III目前未有报道具有抗乙肝病毒作用， 本发明发现叶下珠多糖PULP III能作为抗乙肝病毒药物，此药物其最大优点是天然产物，与现有抗病毒药相比，毒副小，无不良反应，且还有抗氧化、提高机体免疫力等作用，可长期使用；2、与直接使用中草药相比，叶下珠多糖I3ULP III作为具体化学组分的物质直接作为抗病毒的药效成分，用药量少，无其它非药用组分，因而能减少其它成分可能对肌体的伤害(副作用)，临床用药简单；3、叶下珠中草药原料易得，价廉，提取分离工艺简单，生产方便，开发价值高。
图1是葡萄糖标准曲线。
图2是多糖梯度洗脱曲线。
图3是H印G2. 2. 2. 15细胞分泌HBsAg、HBeAg的规律。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明叶下珠多糖的提取叶下珠全草蒸馏水洗涤去土，50°C低温干燥后，粉碎，密封备用。其粉末为黄绿色。
石油醚80 1回流脱脂一95%乙醇80 1回流脱小分子糖一90 °C水回流提取3 次，合并3次滤液4000r/min离心，浓缩至1/4体积一加入4倍体积的95%乙醇，静置24h， 离心，蒸懼水复溶一sevag法除蛋白(氯仿正丁醇=4:1,多糖溶液混合液=3:1),磁力搅拌30min，充分静置分层，重复7 8次操作即可除去游离蛋白质一除蛋白后的多糖溶液加入4倍体积的95%乙醇沉淀24h —依次用无水乙醇、丙酮、乙醚清洗、重复三次一透析72h — 冷冻干燥得叶下珠总多糖(PULP)。
葡萄糖标准液和样品供试液的制备精密称取葡萄糖标准品(在105°C下干燥到重量不再发生变化)10mg，用蒸馏水溶解后， 置于IOOmL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，制成O. lmg/mL的葡萄糖标准液，备用。
精密称取干燥至恒重的叶下珠多糖10mg，用蒸馏水溶解后，置于IOOmL容量瓶中加蒸懼水定容至刻度，摇勻，制成O. lmg/mL的样品供试液备用。
吸收波长的确定取葡萄糖标准液和样品溶液各I mL,分别加入ImL 5%苯酹溶液(取5g重蒸苯酹于 IOOmL棕色容量瓶中加蒸馏水定容)，摇匀后，悬空垂直加入5mL浓 硫 酸，置沸水浴中加热 15min，然后置冷水浴中冷却，在400 600 nm范围内全波长扫描，确定吸收波长。
葡萄糖标准曲线制作精密吸取葡萄糖标准液O. 2,0. 4,0. 6,0. 8、ImL于IOmL具塞刻度试管中，依次添加水使终体积为ImL,空白对照为ImL水,然后加入ImL 5%苯酹溶液摇勻,迅速加入5mL浓硫酸(悬空垂直加入)，置沸水浴中加热15min,然后置冷水浴中冷却，于490nm处测定吸光度。以吸光度为Y轴，葡萄糖质量为X轴，绘制标准曲线，并计算回归方程。
糖含量的计算精密吸取供试液lmL，于490nm处测定吸光度。
按照公式计算糖含量糖含量=C / (C0X V) X 100%C :由标准曲线查得的葡萄糖微克数 C0 :样品溶液的浓度(O.1 mg/mL)V:测定时用的样品溶液体积(1. OmL)多糖的提取率多糖的提取率=多糖的质量/原材料的质量X 100 %样品溶液和葡萄糖标准液的最大吸收峰波长都在490 nm左右处，所以选取490 nm作为多糖含量的测定波长。
以吸光度为Y轴，葡萄糖微克数Ug)为X轴，绘制标准曲线，如图1，可以看出在 20 100 μ g范围内，葡萄糖量与吸光度有良好的线性关 系。
测得样品液的吸光度A为O. 388，根据回归方程计算其相应葡萄糖的微克数为 28. 27 μ g。根据公式得糖含量糖含量=C / (C0X V) X 100%=28. 27/(0. 1X1) X 100%=28. 27%多糖的提取率==1. 5/100X 100 %=1. 5%本实验通过石油醚脱脂，再以95%的乙醇脱去低聚糖等小分子物质，然后以水提醇沉法从叶下珠中分离出多糖，并采用sevag法脱蛋白，苯酚一硫酸法测定其含量，其最大吸收波长为490nm，多糖提取率为1. 5%，糖含量为28. 27%。
叶下珠多糖的分离纯化柱分离DEAE-52填料预处理DEAE-52纤维素填料用蒸馏水浸泡48h，期间4 5h换一次水，并用倾泻法除去悬浮杂质，然后进行碱-酸-碱处理。先用O. 5 mol/L的NaOH溶液浸泡30 min后蒸懼水洗至中性，再用O. 5 mol/L的HCl溶液浸泡30 min后蒸馏水洗至中性，最后用O. 5 mol/L的NaOH 溶液浸泡30 min后蒸馏水洗至中性，得到MT型纤维素。湿法装柱(柱尺寸为500 X 50mm)， 蒸馏水平衡48h，装柱过程中避免气泡及断层现象。
过DEAE-52层析柱分离纯化称取640mg叶下珠总多糖溶于80mL重蒸水中(8 mg/mL),过O. 45 μ m滤膜后上样。依次用 0、0. 1,0. 25,0. 5,0. 75mol/L NaCl 梯度洗脱，每 IOmin 收集一管，流速 4mL/min ;苯酚-硫酸法跟踪检测，收集各主峰组分，浓缩，重蒸水透析48h，冷冻干燥得叶下珠多糖各组分。
SephadexG-200葡聚糖凝胶过滤法的预处理SephadexG-200填料加适量蒸懼水浸泡24h,期间4 5h换一次水，并用倾泻法除去悬浮杂质，然后超声脱气直到凝胶液中没有气泡出现为止。湿法装柱(柱尺寸为 500X25mm)，用O. 05 mol/L的NaCl溶液平衡48 h后备用。
柱层析将上面收集的各组分配制成25mg/mL的样品液，上样2mL，用O. 05 mol/L 的NaCl洗脱。自动部分收集器收集，每管5 mL,每30 min收集一管，苯酚-硫酸法跟踪检测。
HPLC高效液相色谱法将纯化后的各组分多糖配制成lmg/mL的样品液,过O. 45 μ m的滤膜后进样。
高效液相色谱条件色谱柱PolySep-SEC 4000 Part No: 00H-3144-K0 Column Size :300 X 7. 8mm ；检测器示差检测器；柱温30°C;流动相双蒸水；流速0. 8 mL/min ;进样量20 μ L。
柱层析分离结果经过脱蛋白，透析处理后的叶下珠精多糖(PULP)，过DEAE - 52离子交换柱，依次用O、 O. U0. 25,0. 5,0. 75mol/L NaCl溶液梯度洗脱，苯酚一硫酸法跟踪检测，得如图2所示中洗脱曲线。由图2可以看出，TOLP经DEAE-52柱层析分离后，能够明显分离出四个峰形对称的洗脱峰，分别代表四个组分，记为I3ULP1、PULP I1、PULP III和I3ULP IV。收集含量较大的组分PULP III做进一步分析。
柱和HPLC纯度鉴定 SephadexG-200 柱结果取叶下珠多糖组分I3ULP III过S印hadexG-200凝胶柱，NaCl洗脱，苯酚一硫酸法跟踪检测，用吸光度值与洗脱管数作洗脱曲线，PULP III在Sephadex G-200柱上的洗脱曲线是对称的单一峰，说明TOLP III组分是分子量相对均一的多糖组分。
HPLC法纯度鉴定利用HPLC法检测叶下珠多糖组分TOLP III的纯度时，结果显示，经DEAE-52纤维素柱分离纯化后的多糖组分PULP III，在高效液相图谱上峰型比较对称 ，且经过面积归一法计算其纯度达到95%以上，与S印hadex G-200凝胶色谱图结果相吻合，说明纯度比较高，可以用来做结构鉴定。
水提醇沉脱蛋白后的叶下珠多糖经过DEAE-52纤维素柱分离纯化后得到四个组分，分别记为PULP1、PULP I1、PULP III和PULP IV。收集含量较大的组分PULP III，用 SephadexG-200凝胶柱层析法和高效液相色谱法(HPLC)两种方法进行纯度鉴定，证明其组分相对均一，可以进一步做结构分析。
III的理化性质及结构分析状态、溶解性试验称取适量分离纯化后的多糖组分PULP III溶解于纯水、无水乙醇、丙酮、乙醚和乙酸乙酯等溶剂，观察其溶解性。
却三酮反应取1. Omg/mL样品溶液1. OmL于试管中，加入1. OmL O. 5%茚三酮试剂，沸水浴5min，冷却后观察颜色变化，若出现紫红色，则证明有蛋白质，反之则无。以蒸馏水和小牛血清溶液作为对照。
Molish 反应取1. Omg/mL样品溶液1. OmL于试管中，滴加两滴Molish试剂,摇勻。倾斜试管,沿管壁加入约ImL浓硫酸，小心竖直后，2 3min后仔细观察两层液面交界处的颜色变化，若有紫红色出现，则证明有糖类物质。以蒸馏水和淀粉溶液作为对照。
苯酚一硫酸反应取1. Omg/mL样品溶液1. OmL于试管中，加入ImL 5%的苯酹,再加入5mL浓硫酸,振荡， 若呈橙黄色，说明含糖。以蒸馏水为对照。
碘-碘化钾反应取1. OmL1. Omg/mL的样品溶液，滴加250 μ L碘-碘化钾溶液后，若不显蓝色，说明此多糖为非淀粉类。以蒸馏水为阴性对照，O. 5%的淀粉指示液为阳性对照。
硫酸一咔唑反应取1. Omg/mL样品溶液1. OmL于试管中，在冰水浴中向管中加入6mL浓硫酸，摇匀后置于85°C水浴中20min，取出冷却至室温，加入O. 2mL 0.1%的咔唑液，室温下保持2h，若有紫红色物质出现，说明含有糖醛酸，是酸性糖，以蒸馏水为阴性对照。
斐林反应取1. Omg/mL样品溶液1. OmL于试管中,加入过量的斐林试剂,煮沸2 min,若产生红色的氧化亚酮沉淀，则证明含还原糖。
三氯化铁试验取1. Omg/mL样品溶液1. OmL于试管中，调节pH值为4 5，加入1%的三氯化铁水溶液，若出现蓝、墨绿或蓝紫色，则证明含有鞣质类或酚类。
硫酸基定性试验取2mg多糖样品，加入1. OmL lmol/L HCl, 110°C密闭水解3h，然后滴加0. 5mL的氯化钡-明胶试剂，若有白色沉淀生成，说明含有硫酸基。
法测定分子量高效液相色谱条件色谱柱PolySep-SEC 4000 Part No: 00H-3144-K0 Column Size :300 X 7. 8mm ；检测器示差检测器；柱温30°C;流动相双蒸水；流速0. 8 mL/min ;进样量20 μ L。
样品溶液的制备将多糖组分PULP III配制成浓度为lmg/mL的溶液，以10000r/min离心10 min后,过 0.45 μ m滤膜，备用。
标准对照溶液将各种已知分子量的葡聚糖标准品系列(T-10、T-20、T-110、T-500、T-2000)配制成浓度为lmg/mL的溶液，处理方法同样品溶液，备用。
标准曲线的绘制 将各种已知分子量的葡聚糖标准品由小分子到大分子依次平均进样3次，记录相应的保留时间tK和色谱图，以保留时间tK为横坐标，分子量的对数值为纵坐标绘制标准曲线。
I3ULP III相对分子质量的测定将上面配制好的样品溶液各进样三次，HPLC色谱条件同标准品一样，记录相应的保留时间tK和色谱图，根据标准曲线得到的回归方程计算分子量。
标准曲线的绘制采用硫酸咔唑法测定糖醛酸含量。配制0. 2mg/mL的葡萄糖醛酸溶液25mL，依次量取 0. 25,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5mL 上述溶液，定容于 IOmL 容量瓶中，制成 5、10、20、30、40、50 μ g/mL的标准溶液置4°C冰箱中备用。
量取5mL硼砂硫酸溶液(O. 025 mol/L)于具塞试管中，冰浴，然后将ImL葡萄糖醛酸标准溶液小心加入酸液层上方，以蒸馏水作为空白对照，边摇匀(先轻轻摇匀，后剧烈摇晃)边冰浴冷却。然后将试管在沸水浴中加热lOmin，冷却至室温后加入O. 2mL咔唑溶液 (O. 125%的无水乙醇溶液)，摇匀，沸水加热15min，冷却至室温，测定530nm处的吸光值，以葡萄糖醛酸的浓度为横坐标，吸光值纵坐标绘制标准曲线。
样品中糖醛酸含量的测定将多糖组分PULP III配成5 μ g/mL的溶液，操作同上，测定其在530nm处的吸光值。
蛋白质和核酸测定将纯化后的多糖组分PULP III配制成lmg/mL的多糖水溶液，用UV紫外分光光度计在 200 400nm范围内扫描看其在260nm(核酸)，280nm (Pr)处是否有吸收峰，以判定有无蛋白质和核酸的存在。
、H、N元素分析分别称取两份完全干燥的PULP III样品2. 5mg,采用Elementar Vario EL III元素分析仪测定C、H、N的含量。
IR)的检测取2mg多糖样品，用溴化钾(KBr)压片后在400 4000CHT1波长范围内做红外光谱分析。
采用糖腈乙酸酯衍生物的气相色谱法进行单糖组成测定。根据出峰时间可以确定样品的单糖组成成分，根据出峰面积可以确定单糖的组成比例。
单糖糖腈乙酸酯衍生化分别称取鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)、阿拉伯糖(Ara)，甘露糖(Man)各10 mg，分别加入IOmg盐酸轻胺，O. 5 mL卩比唳振荡后，90 °C水浴30 min，并不时振荡，取出冷却至室温后，加入O. 5 mL乙酸酐，于90 °〇水浴中酰化30 mim，得到的产物即是糖腈乙酸酯衍生物，直接注入GC分析。
多糖糖腈乙酸酯衍生化称取多糖10mg，加入2mol/L三氟乙酸5mL，110°C真空封管水解4h后，在40°C下减压浓缩至干，然后加入4mL甲醇，旋转蒸发至干，重复3 4 次，以除去三氟乙酸。然后加入10 mg盐酸羟胺和O. 5 mL吡啶，放入90°C水浴加热反应 30 min，并不时振荡取出后冷至室温，加入0.5 mL醋酸酐，在90°C水浴中继续反应30 min进行乙酰化，反应产物可直接进行气相色谱分析色谱条件`色谱柱0V1701 (30. O mXO. 32 ymXO. 25 μ m)毛细管柱；进样口温度250 V ；(FID )检测器温度240 V ；载气压力0.4 MPa;程序升温150 °C下保持4 min，然后以10 °C /min升至200 °C， 保持 8 min,再以 15 °C/min 升至 280min。
取20mg PULP III多糖组分，用2mL O. 05mol/L三氟乙酸进行部分酸水解，水解16h 后离心，沉淀进行GC分析。上清液中加入甲醇旋转蒸发，重复3 4次除去三氟乙酸，然后用水复溶后，透析袋(分子截留量3500)透析。透析结束后，袋外部分真空干燥后进行GC 分析；袋内部分加入4倍体积的乙醇醇析，上清部分和醇沉部分分别真空干燥后进行GC分析。
smith 降解高碘酸钠标准曲线的制作取6支干燥试管，按下表操作制作标准曲线
权利要求
1.一种叶下珠多糖PUIP III在制备抗乙肝病毒的药物中的应用。
2.—种叶下珠多糖TOIP III在制备保肝护肝保健品中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的叶下珠多糖TOIPIII的应用，其特征在于所述的叶下珠多糖PUIPIII是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖4个单糖组成，鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖的摩尔比为0. 27 :0. 28 :0.1 :0. 35，分子量为418793. 5 ;由药用植物叶下珠经人工提取、分离纯化而成。
全文摘要
本发明公开了一种叶下珠多糖PUIPⅢ在制备抗乙肝病毒的药物中的应用，PUIPⅢ是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖4个单糖组成，鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖的摩尔比为0.27:0.28:0.1:0.35，分子量为418793.5。由药用植物叶下珠经人工提取、分离纯化而成。体外生物活性实验表明，PUIPⅢ具有抑制HepG2.2.2.15细胞培养中HBsAg、HBeAg的分泌和HBV-DNA的复制，具有一定的体外抗HBV活性作用；体内活性实验表明，PUIPⅢ在鸭体内对DHBVDNA有明显抑制作用，且反弹较小，可用于制备抗乙肝病毒的药物和保肝护肝保健品。
文档编号A61K31/715GK103054894SQ201310005909
公开日2013年4月24日 申请日期2013年1月8日 优先权日2013年1月8日
发明者李清禄, 李凌峰, 李宇翔, 张丽丽, 谢勇平, 王玉林, 黄志坚 申请人:福建农林大学