肠道病毒71型的vp2抗原的中和表位多肽及其用途
【专利摘要】本发明属于免疫生物学领域，涉及一种肠道病毒71型的VP2抗原的中和表位多肽及其用途。具体地，涉及一种抗原表位多肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1－7中任一序列所示。本发明还涉及所述中和表位多肽在制备治疗和/或预防和/或诊断手足口病的药物中的用途。本发明的中和表位多肽具有良好的中和活性和免疫原性，具有应用于治疗和/或预防和/或诊断手足口病的药物的潜力。
【专利说明】肠道病毒71型的VP2抗原的中和表位多肽及其用途
【技术领域】
[0001]本发明属于免疫生物学领域，涉及一种肠道病毒71型的VP2抗原的中和表位多肽及其用途。
【背景技术】
[0002]手足口病是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报道。早期发现的手足口病的病原体主要为柯萨奇病毒A16型(以下简称CA16)，肠道病毒71型(以下简称EV71)最早是在1969年首次从美国加利福尼亚患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中分离获得，但一直到1974年EV71才被鉴定并命名。此后EV71与CA16交替出现，成为手足口病的主要病原体。
[0003]EV71传染性强，易引起暴发或流行。自病毒发现以来在全世界已至少造成十多次爆发流行，波及到美洲、欧洲、澳洲和亚洲的四十多个国家和地区。20世纪70年代中期，保加利亚、匈牙利相继暴发以中枢神经系统为主要临床特征的EV71流行，1975年保加利亚报告病例750例，其中149人致瘫，44人死亡。20世纪90年代后期，EV71开始东亚地区流行。1997年马 来西亚发生了主要由EV71引起的手足口病流行，4 一 8月共有2628人发病，4 一6月有29例病人死亡。1998年，我国台湾地区发生EV71感染引起的手足口病和疱疹性咽峡炎流行，监测哨点共报告129106例病例，80%有手足口病和中枢神经症状。其中重症病人405例，死亡78例。
[0004]我国大陆地区自1995年武汉病毒研究所首次从手足口病人中分离出EV71病毒以来，全国很多地区均有报道。2008年3月在安徽阜阳地区流行的也是EV71。由于疫情的严重性和社会的广泛关注，卫生部已经将手足口病列入传染病防治法规定的丙类传染病，并紧急成立了防控组。
[0005]EV71病毒颗粒大致呈球形，为正二十面体结构，无包膜和突起，直径约27nm，其蛋白外壳由结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4构成，抗原决定因子基本上位于暴露在病毒颗粒表面的VP1、VP2、VP3上，VP4序列高度保守，包裹在衣壳内部。
[0006]近年来，EV71引起的手足口病，发病率和死亡率呈逐年上升趋势，因此，开发针对手足口病的快速诊断试剂与安全有效的预防和治疗性药物(例如疫苗)具有重大意义。
【发明内容】
[0007]本发明人经过了深入的研究和创造性的劳动，例如利用不同时间、不同地点分离到的EV71不同的代表株免疫小鼠，进行单克隆抗体的制备，已制备出790株杂交瘤细胞株，其均能够产生对EV71有特异性反应的单抗(单克隆抗体)。本发明人进一步利用基于ELISP0T的EV71高通量中和实验方法对上述单抗的中和活性进行鉴定，发现有2株单抗对部分目前所用的EV71各代表株均有中和活性，说明EV71病毒可能存在高保守性的中和位点，这为EV71的中和表位鉴定提供了突破口，具有制备抗EV71抗体或疫苗的潜力。由此提供了下述发明:[0008]本发明的一个方面涉及一种多肽，其氨基酸序列如下面的SEQ IDNO:1 — 8中任一序列所示:
[0009]
【权利要求】
1.一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1 — 8中任一序列所示。
2.—种中和表位多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1 - 8中任一序列所示。
3.一种多核苷酸，其编码权利要求1所述多肽或者权利要求2所述中和表位多肽；具体地，所述多核苷酸的序列分别如SEQ ID NO:9 — 16中任一项所不。
4.一种重组载体，其含有权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种重组宿主细胞，其含有权利要求4所述的重组载体。
6.一种中和表位多肽偶联物，包括中和表位多肽和偶联部分，其中，所述中和表位多肽为权利要求2所述的中和表位多肽，所述偶联部分为选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体蛋白、脂类、和生物素中的一种或多种；具体地，所述中和表位多肽偶联物为融合蛋白或类病毒颗粒；在一个实施方案中，所述偶联部分为HBcAg蛋白。
7.—种药物组合物,其包含一种或多种权利要求2所述的中和表位多肽、和/或一种或多种权利要求6所述的中和表位多肽偶联物；具体地，所述组合物为疫苗组合物；可选地，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体或辅料。
8.权利要求2所述的中和表位多肽或者权利要求6所述的中和表位多肽偶联物或者权利要求7所述的药物组合物在制备治疗和/或预防和/或诊断EV71病毒所致疾病特别是手足口病的药物或者抗EV71病毒的药物中的用途；具体地，所述药物为疫苗。
9.一种杂交瘤细胞株A15B3，其保藏编号为CCTCC NO: C201226，保藏日期为2012年2月20日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。
10.一种杂交瘤细胞株BB1A5，其保藏编号为CCTCC NO: C201228，保藏日期为2012年2月20日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。
11.权利要求9或10所述的杂交瘤细胞株产生的抗体。
12.—种抗体，其能够特异性地结合权利要求2所述的中和表位多肽或者权利要求6所述的中和表位多肽偶联物；具体地，所述抗体为单克隆抗体；更具体地，为广谱中和单克隆抗体。
13.根据权利要求12所述的抗体，其为鼠源或人源或羊源或其它动物来源，或为基因工程抗体，例如人源抗体、人源化抗体、嵌合抗体或单链抗体。
14.一种抗体偶联物，包括抗体部分和偶联部分，其中，所述抗体部分为权利要求11至13中任一项所述的抗体，所述偶联部分为选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体蛋白、脂类、和生物素中的一种或多种。
15.一种药物组合物，其包含权利要求11至13中任一项所述的抗体或者权利要求14所述的抗体偶联物；可选地，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体或辅料。
16.一种试剂盒，其包含权利要求11至13中任一项所述的抗体或者权利要求14所述的抗体偶联物。
17.权利要求11至13中任一项所述的抗体或者权利要求14所述的抗体偶联物或者权利要求15所述的药物组合物在制备治疗和/或预防和/或诊断EV71所致疾病特别是手足口病的药物或者抗EV71病毒的药物中的用途。
18.—种在体内或体外抗EV71病毒的方法，包括使用有效量的权利要求11至13中任一项所述的抗体或者权利要求14所述的抗体偶联物或者权利要求15所述的药物组合物的步骤。
【文档编号】A61P31/14GK103539839SQ201310291205
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2013年7月12日 优先权日:2012年7月13日
【发明者】程通, 徐龙发, 杨立生, 陈毅歆, 杜海莲, 张军, 夏宁邵 申请人:厦门大学, 厦门万泰沧海生物技术有限公司