一种头孢喹诺脂质体及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种头孢喹诺脂质体，包括以下重量百分比的原料：头孢喹诺或其盐0.01%-50%、磷脂10%-99.99%、胆固醇0-65%、去氧胆酸钠0-60%、阳离子脂质0-89.99%、抗氧化剂0-40%；同时公开了该脂质体的制备方法，本发明所研制的头孢喹诺脂质体，其包封率良好，粒径分布均匀，可达到静脉注射或局部药用标准，其稳定性良好，并且可以通过制成冻干品进一步提高其稳定性。同时，本发明所采用的空白脂质体-硫酸铵梯度载药制备工艺非常适合工业化大生产，有非常广阔的产业化前景。
【专利说明】一种头孢喹诺脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物制剂【技术领域】，具体涉及一种头孢喹诺脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]头孢喹诺又名头孢喹眯或头孢喹肟，商品名为克百特，是德国赫司特动物保健品公司开发研制的第一个动物专用第四代头孢菌素类抗生素，分子式为:c23h24n6o5s2*h2so4，分子量为626。头孢喹诺为类白色粉末，性质稳定。
[0003]头孢喹诺的抗菌作用机理是通过竞争细菌的粘肽合成酶，即青霉素结合蛋白抑制细胞壁的粘肽合成，造成细菌细胞壁缺损，大量的水分涌进细菌内，使细菌肿胀、破裂、死亡，促发自溶酶活性，使细菌溶解。头孢喹诺的抗菌谱很广，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有很强的杀灭作用，尤其对金黄色葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌和大肠杆菌属的成员都有较低的抑菌浓度。另外对耐青霉素的葡萄球菌和肠球菌有活性，对革兰氏阴性厌氧菌的体外活性有限。
[0004]头孢喹诺易溶于有机溶剂，但水溶性极差，生物利用度低，药效无法充分发挥。急需改善头孢喹诺的水溶性，增加药物的生物利用度，降低副作用。
[0005]脂质体作为新型药物载体，是近年来药剂领域的一个研究热点，具有极强的实际应用价值。脂质体作为药物载体，能够增强药物的溶解性、减低药物毒性、赋予药物靶向性、增加药物的缓释作用、保护药物、提高药物的稳定性、通过膜融合作用将药物送入细胞内部，实现细胞内给药。近年来，脂质体作为眼用药物的载体的研究和应用日益受到关注。脂质体释药机制独特，可通过融合作用使药物透过角膜上皮细胞。脂质体能够起到药物储库的作用，实现缓释和长效给药，且脂质体具有一定的生物粘附性，能增加药物与角膜的接触时间，因此有利于药物的角膜·透过；尤其地，脂质体具有优良的生物相容性和可降解性。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种头孢喹诺脂质体，同时提供该脂质体的制备方法。
[0007]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
一种头孢喹诺脂质体，包括以下重量百分比的原料:头孢喹诺或其盐0.01%-50%、磷脂10%-99.99%、胆固醇0-65%、去氧胆酸钠0_60%、阳离子脂质0-89.99%、抗氧化剂0_40%。
[0008]较好的，所述头孢喹诺脂质体，包括以下重量百分比的原料:头孢喹诺或其盐
0.1%-35%、磷脂25%-99.9%、胆固醇0_45%、去氧胆酸钠0_40%、阳离子脂质0_70%、抗氧化剂
O-10%O
[0009]上述脂质体原料还包括重量百分比为0-89.99%的壳聚糖或其衍生物,较好的所述壳聚糖或其衍生物的重量百分比为0-70%。
[0010]所述头孢喹诺盐为盐酸头孢喹诺、乳酸头孢喹诺、硫酸头孢喹诺、硝酸头孢喹诺、枸橼酸头孢喹诺、马来酸头孢喹诺、酒石酸头孢喹诺或重酒石酸头孢喹诺。
[0011]磷脂可以是两条脂肪链各含有8至26个饱和或不饱和碳原子的天然来源、人工合成、人工半合成或人工修饰的磷脂类物质，所述磷脂为大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油或磷脂酰肌醇中的一种或几种，也可以是其中任何一种的衍生物，衍生物可以是聚乙二醇修饰的磷脂等，例如 PEG2000-DSPE。
[0012]所述阳离子脂质为硬脂酰胺、十八胺、2，3- 二油酰氧丙基-1-溴化三甲胺、1，2- 二油酰-3-三甲胺基丙烷、二甲基双十八烷基溴化铵、N’，N’ - 二甲氨基乙基3-氨甲酰基胆固醇中的一种或几种。
[0013]所述抗氧化剂为羟基香豆素、维生素E、维生素C、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸棕榈酸醋、没食子酸烷酯、BHA, BHT、去甲二氢愈创木酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。[0014]上述头孢喹诺脂质体可以通过以下几种方法制得:
1、硫酸铵梯度法:
包括以下步骤:(I)将磷脂、胆固醇、去氧胆酸钠、抗氧化剂和阳离子脂质溶于乙醇中，然后加入到磁力搅拌下的硫酸铵溶液中，在乙醇挥发完全后，进行超声或均质处理得空白脂质体；
(2)将空白脂质体透析袋中，然后再水相中透析除去硫酸铵，向透析过的空白脂质体中加入头孢喹诺或其盐，经后处理得头孢喹诺脂质体。
[0015]2、薄膜分散法
包括以下步骤:(I)将孢喹诺或其盐、磷脂、胆固醇、去氧胆酸钠、阳离子脂质和抗氧剂溶于有机溶剂中，然后置于圆底烧瓶中，蒸发除去有机溶剂，使之在瓶壁上形成一层均匀、干燥的薄膜，充氮气，真空干燥8-12h ；
(2)向薄膜中加入水，水化后超声或匀质处理，即得头孢喹诺脂质体。
[0016]3、乙醇注入法
包括以下步骤:将头孢喹诺或其盐、磷脂、胆固醇、去氧胆酸钠、阳离子脂质和抗氧剂溶于乙醇中，加入到磁力搅拌下的硫酸铵溶液中，使乙醇挥发完全后超声或匀质处理，即得头孢喹诺脂质体。
[0017]4、逆向蒸发法
包括以下步骤:将磷脂、胆固醇、去氧胆酸钠、阳离子脂质和抗氧剂溶于乙醇中，将头孢喹诺或其盐溶于水中，将二者混合，处理形成W/0型乳剂，旋转蒸发使W/0型乳剂达到粘稠的胶态时，再加入水，继续旋转蒸发除去残余乙醇，超声或匀质处理，即得头孢喹诺脂质体。
[0018]当上述方法制的的头孢喹诺脂质体需要用壳聚糖或其衍生物进行包覆时，将壳聚糖或其衍生物在溶解于水中，将此溶液滴加至制成的头孢喹诺脂质体中，在搅拌下，调整体系的PH值至7.0，继续搅拌均匀即得修饰后的头孢喹诺脂质体。
[0019]本发明的头孢喹诺脂质体，可进一步加入渗透压调节剂，渗透压调节剂为:葡萄糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘油、透明质酸等，可选用上述任意一种或任意几种的混合物。
[0020]本发明的头孢喹诺脂质体，可进一步制备注射液，并可加入冻干保护剂(赋形剂)进一步制备成冻干制剂，其中冻干保护剂(赋形剂)为、乳糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇、甘露醇、亮氨酸等，可选用上述任意一种或任意几种的混合物。
[0021]本发明的头孢喹诺脂质体，可进一步制备成凝胶剂，其中凝胶基质为卡波姆(carbomer)、泊洛沙姆(Poloxamer)、轻丙甲纤维素(HPMC)、海藻酸盐、乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、甘油、丙二醇、壳聚糖、琼脂、西黄菁胶、明胶、淀粉等，可选用上述任意一种或任意几种的混合物。
[0022]壳聚糖是天然的阳离子聚多糖，具有良好的生物相容性和生物可降解性，具有良好的生物膜粘附性和渗透促进性。本发明使用壳聚糖或其衍生物对脂质体表面进行修饰，并将其应用于溶液剂，显著提高药物的透过量，相对于普通脂质体具有明显的优势，是非常具有实用价值的给药系统。
[0023]本发明所研制的头孢喹诺脂质体，其包封率良好，粒径分布均匀，可达到静脉注射或局部药用标准，其稳定性良好，并且可以通过制成冻干品进一步提高其稳定性。同时，本发明所采用的空白脂质体-硫酸铵梯度载药制备工艺非常适合工业化大生产，有非常广阔的产业化前景。
[0024]本发明的头孢喹诺脂质体，具有缓释和长效作用，能够提高药物的生物利用度，减少药物浓度的波动。本发明的头孢喹诺脂质体可用于口服、静脉注射和透皮给药等途径，尤其是口服，能够提高药物的生物利用度，降低药物的毒副作用，实现缓释和长效作用，减少用药次数，减少药物浓度的波动。
[0025]本发明首次将头孢喹诺制成脂质体，目前，在国内外均未见头孢喹诺脂质体的报道，更没有相关制剂的上市，因此本发明具有令人瞩目的实际应用前景与潜在经济价值。
【具体实施方式】
[0026]下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
[0027]实施例1
头孢喹诺 25mg 磷脂酰胆碱 120mg 十八胺5mg`
胆固醇5 Omg
制备方法:将处方量的磷脂、胆固醇和十八胺溶于4mL乙醇(体积浓度50%)中，缓慢注入到50°C、磁力搅拌下的8mL、0.125mol/L硫酸铵溶液中，50°C保温搅拌Ih使乙醇挥发完全，置冰浴中探头超声5min，即得空白脂质体。将所得空白脂质体置于透析袋中，两端扎紧，置1000 mL、0.9wt% NaCl溶液中透析24h，除去脂质体外水相中的硫酸铵。将透析好的空白脂质体于60°C下保温，在搅拌下缓慢加入ImL含25mg头孢喹诺的水溶液，继续保温20min，以0.9wt% NaCl溶液调节终体积至10mL，即得头孢喹诺脂质体。
[0028]实施例2
头孢喹诺25mg
磷脂酰胆碱 120mg 十八胺5mg
胆固醇5 Omg
壳聚糖IOmg
制备方法:将处方量的磷脂、胆固醇和十八胺溶于4mL无水乙醇中，缓慢注入到50°C、磁力搅拌下的8mL、0.125mol/L硫酸铵溶液中，50 "€保温搅拌Ih使无水乙醇挥发完全，置冰浴中探头超声5min，即得空白脂质体。将所得空白脂质体置于透析袋中，两端扎紧，置1000mL,0.9wt% NaCl溶液中透析24h，除去脂质体外水相中的硫酸铵。将透析好的空白脂质体于60°C下保温，在搅拌下缓慢加入ImL含25mg头孢喹诺的水溶液，继续保温20min，即得头孢喹诺脂质体。壳聚糖溶于ImL PH6.0醋酸溶液中，在磁力搅拌下，将此溶液加入到头孢喹诺脂质体中，并用0.lmol/L NaOH溶液调节pH至7.0，即得壳聚糖包覆的头孢喹诺脂质体。
[0029]实施例3
头孢喹诺50mg
磷脂酰胆碱 300mg PEG2000-DSPE 1Omg 胆固醇1OOmg
制备方法:取处方量的头孢喹诺、磷脂、PEG2000-DSPE和胆固醇以5mL乙醇(体积浓度为70%)溶解，缓缓注入到50°C、磁力搅拌下的1OmL 0.9wt % NaCl溶液中，50°C保温搅拌30min使乙醇挥发完全，置冰浴中探头超声5min，即得头孢喹诺脂质体。
[0030]实施例4
头孢喹诺50mg
磷脂酰胆碱 300mg 去氧胆酸钠 1OOmg 维生素E1Omg
制备方法:将处方量的磷脂、去氧胆酸钠和维生素E溶于1OmL乙醇(体积浓度为40%)中；将处方量的头孢喹诺溶于5mL、pH7.4磷酸盐缓冲液中，得水相。将二者混合，剧烈振摇、超声使之形成W/0型乳剂，倒入50mL圆底烧瓶中，于30°C下旋转蒸发，当混合物达到粘稠的胶态时，再加入5mL、pH7.4磷酸盐缓冲液，继续在30°C下旋转蒸发30min，置冰浴中探头超声5min，即得头孢喹诺脂质体。
[0031]实施例5
头孢喹诺75mg
二棕榈酰磷脂酰胆碱 400mg 胆固醇20mg
维生素E1Omg
壳聚糖1Omg
制备方法:取处方量的头孢喹诺、磷脂、胆固醇和维生素E，以20mL无水乙醇溶解，置于IOOmL圆底烧瓶中，45°C旋转蒸发除去乙醇，使之在瓶壁上形成一层均匀、干燥的薄膜，充氮气，真空干燥12h。在圆底烧瓶中加入9mL 0.9wt% NaCl溶液，在45°C下水化，使薄膜充分脱落、浸泡，置冰浴中探头超声5min,壳聚糖溶于lmL、pH6.0醋酸溶液中，在磁力搅拌下，将此溶液加入到上述脂质体中，并用。0.lmol/L NaOH溶液调节pH至7.0，即得。
[0032]实施例6
硫酸头孢喹诺1Omg
大豆卵磷脂50mg
胆固醇15mg去氧胆酸钠5mg
羧甲基壳聚糖3mg
硬质酰胺IOmg
维生素C7mg 制备方法:将处方量的大豆卵磷脂、胆固醇和硬质酰胺溶于4mL无水乙醇中，缓慢注入到50°C、磁力搅拌下的8mL、0.125mol/L硫酸铵溶液中，50°C保温搅拌Ih使乙醇挥发完全，置冰浴中探头超声5min，即得空白脂质体。将所得空白脂质体置于透析袋中，两端扎紧，置1000 mL ,0.9 wt% NaCl溶液中透析24h，除去脂质体外水相中的硫酸铵。将透析好的空白脂质体于60°C下保温，在搅拌下缓慢加入ImL含25mg硫酸头孢喹诺的水溶液，继续保温20min,以0.9wt% NaCl溶液调节终体积至IOmL,即得头孢喹诺脂质体。壳聚糖溶于lmL、pH6.0醋酸溶液中，在磁力搅拌下，将此溶液加入到头孢喹诺脂质体混悬液中，并用
0.lmol/L NaOH溶液调节pH至7.0，即得壳聚糖包覆的头孢喹诺脂质体。
[0033]实施例7
硫酸头孢喹诺IOmg
蛋黄卵磷脂(20 mg) +磷脂酰胆碱(30 mg) 50mg 胆固醇IOmg
去氧胆酸钠IOmg
壳聚糖5mg
柠檬酸(2 mg) +苹果酸(3 mg)5mg
硬质酰胺(3 mg) +十八胺(7 mg)IOmg
制备方法:将处方量的蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱、胆固醇、去氧胆酸钠和柠檬酸、苹果酸、硬质酰胺和十八胺溶于IOmL乙醇中；将处方量的硫酸头孢喹诺溶于5mL、pH7.4磷酸盐缓冲液中，得水相。将二者混合，剧烈振摇、超声使之形成W/0型乳剂，倒入50mL圆底烧瓶中，于30°C下旋转蒸发，当混合物达到粘稠的胶态时，再加入5mL、pH7.4磷酸盐缓冲液,继续在30°C下旋转蒸发30min，置冰浴中探头超声5min，即得头孢喹诺脂质体。壳聚糖溶于ImL> pH6.0醋酸溶液中,在磁力搅拌下,将此溶液加入到头孢喹诺脂质体中，并用0.lmol/LNaOH溶液调节pH至7.0，即得壳聚糖包覆的头孢喹诺脂质体。
[0034]对上述实施例中所得产品进行包封率检测，所得产品的包封率≥99.7% ;4°C下充氮气储存，6个月内稳定性良好，其包封率、粒径与外观均无显著变化。
【权利要求】
1.一种头孢喹诺脂质体，其特征在于包括以下重量百分比的原料:头孢喹诺或其盐0.01%-50%、磷脂10%-99.99%、胆固醇0_65%、去氧胆酸钠0_60%、阳离子脂质0-89.99%、抗氧化剂0-40%o
2.如权利要求1所述的头孢喹诺脂质体，其特征在于包括以下重量百分比的原料:头孢喹诺或其盐0.1%-35%、磷脂25%-99.9%、胆固醇0_45%、去氧胆酸钠0_40%、阳离子脂质0-70%、抗氧化剂0-10%。
3.如权利要求1或2所述的头孢喹诺脂质体，其特征在于还包括重量百分比为0-89.99%的壳聚糖或其衍生物。
4.如权利要求1或2所述的头孢喹诺脂质体，其特征在于:所述头孢喹诺盐为盐酸头孢喹诺、乳酸头孢喹诺、硫酸头孢喹诺、硝酸头孢喹诺、枸橼酸头孢喹诺、马来酸头孢喹诺、酒石酸头孢喹诺或重酒石酸头孢喹诺；所述磷脂为大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷月旨、氢化蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇中的一种或几种。
5.如权利要求1或2所述的头孢喹诺脂质体，其特征在于:所述阳离子脂质为硬脂酰胺、十八胺、2，3- 二油酰氧丙基-1-溴化三甲胺、1，2- 二油酰-3-三甲胺基丙烷、二甲基双十八烷基溴化铵、N’，N’ - 二甲氨基乙基-3-氨甲酰基胆固醇中的一种或几种。
6.如权利要求1或2所述的头孢喹诺脂质体，其特征在于:所述抗氧化剂为羟基香豆素、维生素E、维生素C、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸棕榈酸醋、没食子酸烷酯、BHA, BHT、去甲二氢愈创木酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。
7.权利要求1或2所述的头孢喹诺脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将磷脂、胆固醇、去氧胆酸钠、抗氧化剂和阳离子脂质溶于乙醇中，然后加入到磁力搅拌下的硫酸铵溶液中，在乙醇挥发完全后，进行超声或均质处理得空白脂质体； (2)将空白脂质体置于透析袋中，然后在水相中透析除去硫酸铵，向透析过的空白脂质体中加入头孢喹诺或其盐，经后处理得头孢喹诺脂质体。
8.权利要求1或2所述的头孢喹诺脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将头孢喹诺或其盐、磷脂、胆固醇、去氧胆酸钠、阳离子脂质和抗氧剂溶于有机溶剂中，然后置于圆底烧瓶中，蒸发除去有机溶剂，使之在瓶壁上形成一层均匀、干燥的薄膜，充氮气，真空干燥8-12h; (2)向薄膜中加入水，水化后超声或匀质处理，即得头孢喹诺脂质体。
9.权利要求1或2所述的头孢喹诺脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:将头孢喹诺或其盐、磷脂、胆固醇、去氧胆酸钠、阳离子脂质和抗氧剂溶于乙醇中，加入到磁力搅拌下的硫酸铵溶液中，使乙醇挥发完全后超声或匀质处理，即得头孢喹诺脂质体。
10.权利要求1或2所述的头孢喹诺脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:将磷脂、胆固醇、去氧胆酸钠、阳离子脂质和抗氧剂溶于乙醇中，将头孢喹诺或其盐溶于水中，将二者混合，处理形成W/0型乳剂，旋转蒸发使W/0型乳剂达到粘稠的胶态时，再加入水，继续旋转蒸发除去残余乙醇，超声或匀质处理，即得头孢喹诺脂质体。
【文档编号】A61K47/36GK103585109SQ201310584487
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】孙江宏, 付文力, 杨震豪 申请人:河南牧翔动物药业有限公司