人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，将以上五种碱基应用于肿瘤的治疗领域，制成口服制剂、注射剂、缓释剂或靶向制剂，经过标准品抗肿瘤作用对照证明：参与人体代谢的五种正常碱基，在体内、外达到一定浓度时，具有不同程度的诱导肿瘤细胞凋亡和抗肿瘤血管生成作用；本发明的优点在于：五种碱基与其它抗肿瘤药相比，具有广谱、低毒的抗肿瘤作用，可用于胃癌、肺癌、肝癌、结肠癌、乳腺癌和生殖系统等恶性肿瘤的化学治疗，抗肿瘤作用明显，常规用量无骨髓抑制和重要脏器损害，与正常核苷相比其抗肿瘤作用增强。
【专利说明】人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用
[0001]本申请为申请号2011103613136、申请日2011年11月15日、发明名称“人体五种
正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用”的分案申请。
【技术领域】
[0002]本发明涉及一种抗肿瘤药物，具体地说是人体代谢的五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，属于肿瘤药物领域。
【背景技术】
[0003]人正常碱基包括腺嘌呤(Adenine ) CAS =73-24-5,分子式:C5H5N5，分子量:135.13 ;鸟嘌呤(Guanine )CAS:73-40-5,分子式:C5H5N50,分子量:151.13 ；胞嘧啶(Cytosine) CAS:71-30_7，分子式:(C4H5N30)，分子量:111.11 ;胸腺嘧啶(Thymin) CAS:65-71-4，分子式:C5H6N202,分子量:126.11 ;尿嘧啶(Uracil) CAS =66-22-8,分子式:C4H4N202，分子量:112.09。
[0004]碱基在DNA和RNA中多以一磷酸核苷的形式存在，但是其配对关系的形成主要取决于碱基。人正常的碱基在核酸类物质消化吸收过程中可以产生，也是核酸类物质补救合成的重要原料。但是正常的核苷酸代谢可以不经过碱基出现直接形成代谢废物排出体外，如:腺苷一次黄嘌呤核苷一黄嘌呤核苷一尿酸排出体外。
[0005]以上五种碱基均可以在体外用不同方法得到，是重要的药物和保健品中间体。其中腺嘌呤，又称维生素 B4，在体内参与RNA和DNA合成。当白细胞缺乏时，它能促进白细胞增生，一般用药2~4周，白细胞数目可增加，是肿瘤化疗病人白细胞降低时用于升高白细胞的药物。人体五种碱基之一的腺嘌呤因为能够参入DNA和RNA等核酸的合成，能够在合成ATP等物质中其重要作用，目前腺嘌呤，又称维生素B4，可用于肿瘤病人化疗等所致的白细胞下降的治疗。体外可用于血液的保存。
[0006]目前，在学术界中普遍认可的治疗肿瘤理论是:通过在正常碱基上添加不同元素或取代基，形成正常碱基类似物来阻滞细胞DNA或RNA的合成，从而抑制肿瘤的扩散。例如，名称为“协同抗癌组合物”、专利号为“CN200480036362.0”的专利申请，公开了使用抗代谢碱基类似物作为抗肿瘤的成分，抗肿瘤抗代谢碱基类似物通过抑制细胞核酸合成酶，抑制或预防癌症的生长以及干扰细胞核酸合成。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于，提供了人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，这五种碱基分别是腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶；将上述五种碱基制成口服制剂、注射剂、缓释剂或靶向制剂，抗治肿瘤效果明显，且多种碱基组合作为治疗肿瘤的药物成分使用，较单独应用能够达到明显提高抗肿瘤效果，减少毒副作用和延缓耐药性发生的目的。
[0008]本发明的技术方案为:人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，所述的碱基包括:腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶。
[0009]优选地，所述的碱基为腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶中的一种或多种；
优选地，所述的碱基为鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿嘧啶中的一种或两种与腺嘌呤的组合。
[0010]所述的药物为口服片剂、注射剂或缓释剂。
[0011]所述的口服片剂的制备方法为:将所述的碱基加入不同辅料如淀粉，碱基和辅料的重量比例为1:1，制成口服片剂，所述的碱基总含量为10-30mg/片，片剂的重量大小例如可以是lg、2g或5g等，对其治疗和使用不会产生影响；
所述的注射剂的制备方法为:将所述的碱基溶解于浓度为5-25mg/mL的磷酸缓冲溶液，制成碱基总浓度为5-25mg/mL的注射剂，每只注射剂体积为2_10mL ；
所述的缓释剂的制备方法为:用药物脂质体、微囊或胶束释药系统将所述的碱基制成5-25mg/mL缓释剂，然后将缓释剂做成注射剂。
[0012]进一步地，上述各碱基组合的摩尔数相同。
[0013]所述的肿瘤包括胃癌、肺癌、肝癌、结肠癌、乳腺癌、白血病、生殖系统肿瘤等多种常见恶性肿瘤。
[0014]通过研究发现:鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶抗肿瘤作用低于腺嘌呤，因腺嘌呤的副作用很小可与其它碱基组合作为抗肿瘤药。不同的腺嘌呤组合用药比单一用药血液中的单一药物浓度降低，因而毒副作用下降。同时多种药组合用药可延缓肿瘤耐药性的发生。通过组合用药，能够降低各成分单一用药时的用药量，而每种具体核苷的绝对浓度明显下降，药物对机体的毒副作用就下降；同时，二种或多种化疗药物组合用药可大大降低耐药性的发生。将腺苷与其它人正常碱基组合后，用在制备治疗上述肿瘤的药物中，可加辅料制成口服制剂或者加缓冲盐等增加其溶解度制成注射剂，进行注射使用；注射剂可以是常规注射剂，也可是各种类型的缓释注射剂。
[0015]不同肿瘤有不同的核酸代谢与组成特点，对不同肿瘤细胞每种碱基有不同的抑制强度，但腺嘌呤的抗肿瘤作用最强，体外实验当浓度达到0.3mg/mL时，72小时肿瘤抑制率在90%以上。单一腺嘌呤治疗肿瘤瘤体大小的30%完全缓解，有效率在93.0%以上。
[0016]使用剂量低，为0.001~0.05mmol/Kg/天，肌注或静脉点滴；口服给药可增加药量
0.5-1.5 倍。
[0017]本发明的优点在于:
1、腺嘌呤与其它人正常碱基组合用于制备治疗胃癌、肺癌、肝癌、结肠癌、乳腺癌、生殖系统肿瘤等多种常见恶性肿瘤的药物，抗肿瘤效果明显，具有高效、广谱、低毒的特点；
2、腺嘌呤与其它人正常碱基组合的抗肿瘤作用明显高于各类核苷及其组合；
3、腺嘌呤与其它 人正常碱基组合用药比单一用药血液中的单一药物浓度降低，从而毒副作用降低；
4、腺嘌呤与其它人正常碱基组合用药可延缓肿瘤耐药性的发生。
【具体实施方式】[0018]以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0019]实施例1
不同浓度的腺嘌呤与5-FU体外抑瘤对照实验。
[0020]一、试验方法
将人宫颈癌Hela肿瘤细胞(中国科学院上海细胞所提供)，用含10%新生牛血清的RPMI1640培养基培养，取对数生长期的细胞，用0.25%胰蛋白酶消化后以3X IO3个/孔接种于96孔板,置于37°C、5%C02培养箱中培养24小时,每组设8个复孔,试验组分别设复孔药物浓度为 0.005,0.01,0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64mg/mL 共 8 个总浓度，培养液每孔200 μ L，对照组的5-FU与试验组浓度相同，用无血清培养基稀释，0.22 μ m的无菌微孔滤膜过滤。在拟定的测量时间48小时，倒置显微镜观察细胞形态并拍照，然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置于37°C、5%C02培养箱中继续培养4小时，终止培养，吸弃孔内培养的上清液，每孔加入150 μ L DMS0，震荡10分钟，使结晶物充分溶解后，以自动酶标仪(Thermo，型号MULTISKAN MK3)测量570mn处吸光度。每一板每组设8个复孔，每个实验重复3次，表1中数据为三次实验的平均数。
[0021]肿瘤细胞生长抑制率计算公式如下:
肿瘤细胞存活率(%)=加药孔的实际OD值/阴性对照孔的OD值；
肿瘤细胞生长抑制率(%)=100% —细胞存活率。
[0022]表1:腺嘌呤对Hela细胞的48小时抑制率(％)
药物浓度 0,005 0.01 0.02 0.04 0.08 0.16 0,32.0,64 Adenine 6M 12 28 I 33 51 63 75 89 5-FU 7.5 13 30 32 48 60` 77 90
其中:Adenine为腺嘌呤，5-FU为5-氟尿嘧啶。
[0023]二、结果与分析
经计算腺嘌呤与5-FU在0.005至0.64浓度范围内48小时对Hela细胞的抑制率无统计学差异0°>0.5);腺嘌呤IC50为70ug/mL左右。
[0024]实施例2
五种人正常碱基的体外抑瘤实验。
[0025]一、试验方法
将人肺癌SPC肿瘤细胞(中国科学院上海细胞所提供)，用含10%新生牛血清的RPMI1640培养基培养，取对数生长期的细胞，用0.25%胰蛋白酶消化后以3 X IO3个/孔接种于96孔板,置于37°C、5%C02培养箱中培养24小时,每组设8个复孔,试验组加入五种碱基,五种碱基及对照组5-FU的每个复孔药物浓度为0.5mg/mL,培养液每孔200 yL,0.22 μ m的无菌微孔滤膜过滤。在拟定的测量时间48小时，倒置显微镜观察细胞形态并拍照，然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置于37°C、5%C02培养箱中继续培养4小时，终止培养，吸弃孔内培养的上清液，每孔加入150 μ L DMS0，震荡10分钟，使结晶物充分溶解后，以自动酶标仪(Thermo，型号MULTISKAN MK3)测量570mn处吸光度。每一板每组设8个复孔，每个实验重复3次，表2中数据为三次实验的平均数。
[0026]肿瘤细胞生长抑制率计算公式如下:
肿瘤细胞存活率(%)=加药孔的实际OD值/阴性对照孔的OD值；
肿瘤细胞生长抑制率(%)=100% —细胞存活率。
[0027]表2:人正常五种碱基对人肺癌SPC肿瘤细胞48、72小时抑制率(％)
【权利要求】
1.人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，所述五种碱基包括腺嘌呤、鸟嘌呤。
2.根据权利要求1所述的人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中，所述碱基为腺嘌呤或/和鸟嘌呤。
3.根据权利要求1所述的人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中，所述肿瘤为肺癌、结肠癌、胃癌、食管癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、生殖系统肿瘤或胶质瘤。
4.根据权利要求1-3所述的人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中所述药物为口服片剂、注射剂、缓释剂或靶向制剂。
5.根据权利要求4所述的人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，所述口服片剂的制备方法是将所述的碱基加入辅料中，碱基和辅料的重量比例为1:1，制成碱基含量为10-30mg/片口服片剂。
6.根据权利要求4所述的人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，所述注射剂的制备方法为将所述的碱基直接溶解于磷酸缓冲溶液中，制成碱基总浓度为5-25mg/mL的注射剂，每只注射剂体积为2-10mL。
7.根据权利要求4 所述的人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用，所述缓释剂的制备方法为:用药物脂质体、微囊或胶束释药系统将所述的碱基制成缓释剂，然后将缓释剂做成注射剂。
【文档编号】A61K31/52GK103720693SQ201310713021
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2011年11月15日 优先权日:2011年11月15日
【发明者】张始状, 程鑫, 高志琴, 韩明, 赵荣荣, 赵瑶 申请人:张始状