相关申请要求2013年11月4日提交的临时美国申请No.61/899,800的优先权，所述临时美国申请通过引用整体并入本文。序列表本申请通过EFS-Web进行电子提交并且包括以.txt形式存在的电子提交的序列表。所述.txt文件含有2013年11月1日创建的标题为\PC72005_Sequence_Listing.txt\的具有56KB大小的序列表。在该.txt文件中包含的序列表为本说明书的部分并且其通过引用整体并入本文。发明领域本发明涉及肝配蛋白-A4配体(EFNA4)抗体和抗体-药物缀合物。本发明还涉及使用这样的抗体和抗体-药物缀合物治疗癌症的方法。背景肝配蛋白受体(EPH)(受体酪氨酸激酶的最大家族)是与肝配蛋白配体(EFN)结合的I型跨膜蛋白质。EPH亚家族中的受体通常具有单个激酶结构域和含有富含Cys的结构域和2个纤连蛋白III型重复序列的胞外区。基于序列分析，肝配蛋白配体可分为两组：肝配蛋白-A配体(EFNA)和3个肝配蛋白-B配体(EFNB)。EFNA配体(即，EFNA1、EFNA2、EFNA3、EFNA4、EFNA5、EFNA6)通常经由糖基磷脂酰肌醇(GPI)键联锚定至细胞表面，尽管一些非GPI锚定的蛋白质通过肝配蛋白mRNA的选择性剪接来产生，例如EFNA4。EFNB配体(即EFNB1、EFNB2、EFNB3)含有跨膜结构域和具有保守酪氨酸残基和PDZ结合基序的短胞质区。EFNA配体优先与9种不同的肝配蛋白A受体(EPHA)(即，EPHA1、EPHA2、EPHA3、EPHA4、EPHA5、EPHA6、EPHA7、EPHA8、EPHA9)的任一种结合，然而EFNB配体优选与6种不同的肝配蛋白B受体(EPHB)(即，EPHB1、EPHB2、EPHB3、EPHB4、EPHB5、EPHB6)的任一种结合，虽然已报道了一些交叉反应性。EFN-EPH信号转导可以是双向的(影响表达配体和表达受体的细胞)，并且调节广泛的生物活性，包括神经发育、细胞图案化、血管生成以及细胞运动性和侵袭。在癌症的情况下，各种EPH和EFN的表达已被观察到，并且已报道了各种功能(Hafner等，ClinicalChemistry50(3):490-499,2004；Surawska等，Cytokine&GrowthFactorReviews15(6):419-433,2004；Pasquale,E.B,NatureReviewsCancer10(3):165-180,2010)。由于配体-受体结合混杂性以及功能重叠，因此难以精确地确定每一种EFN和EPH的作用。虽然已开发治疗性靶向EPH受体用于癌症治疗，但EFN配体的靶向未被追寻至任何较大的程度(Pasquale,E.B.,NatureReviewsCancer10(3):165-180,2010)。仍然存在对用于癌症的另外的治疗选择的显著需要。为此目的，本发明提供了靶向EFNA4-阳性癌症的新型抗体-药物缀合物。概述本发明提供了EFNA4抗体-药物缀合物及其用于EFNA4相关病症的检测、预防和治疗的用途。本发明的EFNA4抗体-药物缀合物一般为式：Ab-(L-D)，其中Ab为结合EFNA4的抗体或其抗原结合片段，或其EFNA4结合片段；并且L-D为接头-药物部分，其中L为接头，D为药物。公开的抗体-药物缀合物的Ab可以是任何EFNA4-结合抗体。在本发明的一些方面，Ab是嵌合抗体、CDR移植的抗体、人源化抗体或重组人抗体或其EFNA4结合片段。在本发明的一些方面，Ab为内化抗体和/或中和抗体。本发明还提供了EFNA4抗体-药物缀合物及其用于EFNA4相关病症的检测、预防和治疗的用途。本发明的EFNA4抗体-药物缀合物一般为式：Ab-(L-D)，其中Ab为结合EFNA4的抗体或其抗原结合片段或其EFNA4-结合片段，并且L-D为接头-药物部分，其中L为接头，D为加里刹霉素。在本发明的特定方面，Ab为huE22或hu47抗体，或与huE22或huE47竞争结合人EFNA4的抗体，和/或结合与huE22或huE47抗体所结合的表位相同的表位的抗体。例如，Ab可与包含(a)SEQIDNO:13所示的重链可变区和SEQIDNO:27所示的轻链可变区；或(b)SEQIDNO:39所示的重链可变区和SEQIDNO:53所示的轻链可变区的抗体竞争结合人EFNA4，和/或结合与所述抗体所结合的表位相同的表位。在与huE22竞争结合人EFNA4和/或结合与huE22所结合的表位相同的表位的Ab中，可用于制备本发明的EFNA4抗体-药物缀合物的代表性Ab包括含有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体，其中所述至少一个重链可变区包含由SEQIDNO:15、19和23定义的3个CDR。另外的Ab包括含有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体，其中所述至少一个轻链可变区包含如SEQIDNO:29、33和35定义的3个CDR。另外的Ab包括含有(a)包含如SEQIDNO:15、19和23所示的3个CDR的重链可变区；和(b)包含如SEQIDNO:29、33和35所示的3个CDR的轻链可变区的抗体。在本发明的其它EFNA4抗体-药物缀合物中，所述Ab包含具有与SEQIDNO:13具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区和具有与SEQIDNO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区，例如，如SEQIDNO:13所示的重链可变区和如SEQIDNO:27所示的轻链可变区。在与huE47竞争结合人EFNA4和/或结合与huE47所结合的表位相同的表位的Ab中，可用于制备本发明的EFNA4抗体-药物缀合物的代表性Ab包括含有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体，其中所述至少一个重链可变区包含由SEQIDNO:41、45和49定义的3个CDR。另外的Ab包括含有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体，其中所述至少一个轻链可变区包含如SEQIDNO:55、59和61定义的3个CDR。另外的Ab包括含有(a)包含如SEQIDNO:41、45和49所示的3个CDR的重链可变区；和(b)包含如SEQIDNO:55、59和61所示的3个CDR的轻链可变区的抗体。在本发明的其它EFNA4抗体-药物缀合物中，所述Ab包含具有与SEQIDNO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区和具有与SEQIDNO:53具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区，例如，如SEQIDNO:39所示的重链可变区和如SEQIDNO:53所示的轻链可变区。在本发明的一些方面，EFNA4抗体-药物缀合物包含含有IgG1重链恒定区、κ轻链恒定区或IgG1重链恒定区和κ轻链恒定区的Ab。例如，可用于制备本发明的EFNA4抗体-药物缀合物的Ab包括包含如SEQIDNO:25所示的重链、如SEQIDNO:37所示的轻链或如SEQIDNO:25所示的重链和如SEQIDNO:37所示的轻链的抗体。另外的实例包括包含如SEQIDNO:51所示的重链、如SEQIDNO:63所示的轻链或如SEQIDNO:51所示的重链和如SEQIDNO:63所示的轻链的抗体。在本发明的其它方面，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物包含具有如SEQIDNO:13或39所示的重链可变区的抗体。在本发明的其它方面，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物包含具有如SEQIDNO:27或53所示的轻链可变区的抗体。在本发明的特定方面，所述Ab为huE5或hu15抗体，或与huE5或huE15竞争结合人EFNA4的抗体和/或结合与huE5或huE15抗体所结合的表位相同的表位的抗体。例如，所述Ab可与包含(a)如SEQIDNO:5所示的重链可变区和如SEQIDNO:7所示的轻链可变区；或(b)如SEQIDNO:9所示的重链可变区和如SEQIDNO:11所示的轻链可变区的抗体竞争结合人EFNA4，和/或结合与所述抗体所结合的表位相同的表位。在本发明的另一个方面，所述Ab为人源化抗体诸如huE5、huE15、huE22或hu47抗体。可用包含4-(4'乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)的接头制备本文中公开的EFNA4抗体-药物缀合物的任一种。本文中公开的EFNA4抗体药物缀合物的任一种可利用加里刹霉素药物，包括加里刹霉素的N-乙酰基衍生物，诸如N-乙酰基-γ-加里刹霉素和N-乙酰基-γ-加里刹霉素二甲基酰肼(CM)来制备。本文中公开的EFNA4抗体-药物缀合物的任一种可具有1至12的药物对抗体的比率(DAR)。在本发明的特定方面，式Ab-(L-D)的EFNA4抗体-药物缀合物包含(a)含有如SEQIDNO:25所示的重链和如SEQIDNO:37所示的轻链的抗体或其抗原结合片段，Ab；和(b)接头-药物部分，L-D，其中L为接头，D为药物，其中所述接头为4-(4'乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)，并且其中所述药物为N-乙酰基-γ-加里刹霉素二甲基酰肼(CM)。在本发明的另一个方面，式Ab-(L-D)的EFNA4抗体-药物缀合物包含(a)含有如SEQIDNO:51所示的重链和如SEQIDNO:63所示的轻链的抗体或其抗原结合片段，Ab；和(b)接头-药物部分，L-D，其中L为接头，D为药物，其中所述接头为4-(4'乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)，并且其中所述药物为N-乙酰基-γ-加里刹霉素二甲基酰肼(CM)。本发明提供了包含多种本文中公开的抗体-药物缀合物和任选地药物载体的组合物，其中所述组合物具有在1至12的范围内的平均DAR。在本发明的特定方面，所述组合物具有在3至5的范围内的平均DAR。在本发明的另一个方面，所述组合物可具有在3至4的范围内的平均DAR。在本发明的另一个方面，所述组合物可具有在4至5的范围内的平均DAR。在本发明的另一个方面，所述组合物可具有约4的平均DAR。本发明还提供了包含多种本文中公开的抗体-药物缀合物和任选地药物载体的组合物，其中所述组合物具有至少50％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物。在本发明的另一个方面，所述组合物具有至少60％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物。在本发明的另一个方面，所述组合物具有至少70％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物。在本发明的另一个方面，所述组合物具有至少75％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物。在本发明的另一个方面，所述组合物具有约70％至80％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物。本发明还提供了一般为式：Ab-(L-D)的EFNA4抗体-药物缀合物，其中Ab为结合EFNA4的抗体或其抗原结合片段，或其EFNA4-结合片段；并且L-D为接头-药物部分，其中L为vc或mc，D为药物。本发明还提供了一般为式：Ab-(L-D)的EFNA4抗体-药物缀合物，其中Ab结合为EFNA4的抗体或其抗原结合片段，或其EFNA4-结合片段；并且L-D为接头-药物部分，其中L为接头，D为0101或8261。本发明还提供了用于制备本文中公开的EFNA4抗体-药物缀合物的方法。例如，用于产生抗体-药物缀合物的方法可包括以下步骤：(a)将接头连接于药物部分；(b)将接头-药物部分缀合于抗体；和(c)纯化抗体-药物缀合物。本发明的另一个方面包括产生本文中公开的抗体-药物缀合物的方法、制备所述抗体-药物缀合物的方法、合成所述抗体-药物缀合物的方法、缀合所述抗体-药物缀合物的方法和纯化所述抗体-药物缀合物的方法，以及用于本文中公开的抗体-药物缀合物的制备、合成和缀合的中间物。还提供了包含本文中公开的EFNA4抗体-药物缀合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在其它方面提供了通过施用治疗有效量的包含本文中公开的EFNA4抗体-药物缀合物的组合物治疗EFNA相关病症的方法。代表性EFNA相关病症包括过度增殖性病症，诸如肿瘤性疾病，诸如实体瘤(例如，乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、肝癌、肺癌等)和恶性血液病(例如，白血病等)。还提供了所公开的EFNA4抗体-药物缀合物用于制备用于治疗受试者的EFNA相关病症的药剂的用途。还提供了用于治疗EFNA相关病症的EFNA4抗体-药物缀合物。在其它方面，本发明提供了用于通过施用治疗有效量的包含本文中公开的EFNA4抗体-药物缀合物和化疗剂的组合物治疗受试者的EFNA相关病症的方法。本发明的另一个方面包括用本文中公开的抗体-药物缀合物治疗特征在于EFNA4在患者中的过表达的病症的方法。在其它方面，本发明提供了用本文中公开的抗体-药物缀合物治疗特征在于EFNA4在患者中的过表达的癌症的方法。在其它方面，本发明提供了减少肿瘤细胞群体中的肿瘤起始细胞的方法。例如，该方法可包括将肿瘤细胞群(其中所述群体包含肿瘤起始细胞和除肿瘤起始细胞外的肿瘤细胞)与EFNA4抗体-药物缀合物接触；由此，肿瘤细胞群中的肿瘤起始细胞的频率降低。可在体外或体内进行接触步骤。本发明的另一个方面包括用于本文中公开的化合物和组合物的诊断和治疗用途。本发明的其它方面包括制品，即试剂盒，其包含本文中公开的抗体-药物缀合物、容器和标明治疗的包装插页或标签。本发明的这些和其它方面将通过将本申请视为一个整体来理解。附图概述图1提供了显示氨基酸差异的人EFNA4a、b和c同种型序列(SEQIDNO:2-4)的比对。图2提供了EFNA4抗体的遗传排列以及重和轻链CDR序列(来源于VBASE2数据库的分析)。图3A和3B分别提供了举例说明针对EFNA4的结合特异性的huE22和huE47抗体的结合数据。图4A和4B分别提供了缀合于抗体(X)的AcBut-CM和AcBut-CM的结构。图5提供了huE22-AcBut-CM的疏水相互作用层析(HIC)分析。图6提供了就未缀合的抗体的存在而言TSKgelButyl-NPR上进行的纯化的huE22-AcBut-CM的UPLC-HIC分析。图7提供了就聚集体和二聚体的存在而言在BEH200SEC上进行的纯化的huE22-AcBut-CM的UPLC-SEC分析。图8提供了就游离药物的存在而言在Zorbax300SB-CN上进行的纯化的huE22-AcBut-CM的反相分析。图9提供就DAR分布特征谱而言在iCE280上进行的纯化的huE22-AcBut-CM的cIEF分析。图10提供了多次冻融对huE22-AcBut-CM的稳定性的作用。图11显示huE22-AcBut-CM在乳腺-5(BR5)三阴性乳腺癌(TNBC)PDX中的功效。图12显示huE22-AcBut-CM在乳腺-13(BR13)TNBCPDX中的功效。图13显示huE22-AcBut-CM在乳腺-22(BR22)PDX中的功效。图14显示huE22-AcBut-CM在乳腺-31(BR31)TNBCPDX中的功效。图15显示huE22-AcBut-CM在卵巢-45(OV45)卵巢癌PDX中的功效。图16显示huE22-AcBut-CM在卵巢-55(OV55)卵巢癌PDX中的功效。图17显示huE22-AcBut-CM在卵巢-44(OV44)卵巢癌PDX中的功效。图18显示huE22-AcBut-CM在卵巢-63(OV63)卵巢癌PDX中的功效。图19显示缀合于微管抑制剂(MTI)vc0101和mc8261的huE15、huE22和huE47在BR22TNBCPDX中的功效。图20显示缀合于MTIvc0101的huE15、huE22和huE47在BR31TNBCPDX中的功效。图21显示huE22-AcBut-CM在表达EFNA4的293T细胞(空心棱形)相对于对照-AcBut-CMADC(加以对角阴线影的圆圈)中的体外细胞毒性。图22显示利用抗-hIgG1抗体(加以对角线阴影的圆圈)和抗--H2A.X抗体(空心棱形)进行的暴露于huE22-AcBut-CM的BR5TNBCPDX肿瘤的免疫组织化学。图23显示植入了从解离的BR22TNBCPDX肿瘤分离的ESA+CD46+CD324+(加以对角线阴影的圆圈)或ESA+CD46+CD324-(空心圆圈)细胞的小鼠的肿瘤生长曲线。图24显示植入了从解离的BR31TNBCPDX肿瘤分离的ESA+CD46+CD324+(加以对角线阴影的圆圈)或ESA+CD46+CD324-(空心圆圈)细胞的小鼠的肿瘤生长曲线。图25显示使用TCGA数据的EFNA4mRNA在正常相邻乳腺、TNBC、非TNBC乳腺中的表达。图26显示来自TCGA和METABRIC数据集的乳腺癌肿瘤样品中的EFNA4拷贝数。图27显示来自TCGA和METABRIC数据集的卵巢癌肿瘤样品中的EFNA4拷贝数。图28显示来自TCGA和METABRIC数据集的肝细胞癌(HCC)肿瘤样品中的EFNA4拷贝数。图29显示从4m/m和6m/m的CM对huE22Ab的比率产生的纯化的huE22-AcBut-CMADC的分析HIC的比较。图30显示从4m/m和6m/m的CM对huE22Ab的比率产生的纯化的huE22-AcBut-CMADC的分析HIC的进一步比较。发明详述本发明提供了结合肝配蛋白-A配体(或EFNA)诸如EFNA4的抗体-药物缀合物。本发明还提供了用于使用EFNA4抗体、接头和药物制备所述缀合物的方法。本发明的抗体-药物缀合物用于制备和制造可用于特征在于EFNA4表达的过度增殖病症的诊断、预防和/或治疗的组合物，诸如药剂。在本发明的一些方面，公开的抗体-药物缀合物可减少肿瘤起始细胞(TIC)的频率，所述肿瘤起始细胞包括肿瘤维持细胞(tumorperpetuatingcell)(TPC)和高度增殖性肿瘤祖细胞(TProg)。I.EFNA生理学PCT国际公开No.WO2012/118547描述了，与所有细胞表面受体-配体相互作用一样，肝配蛋白配体(EFN)与肝配蛋白受体(EPH)的衔接最终导致细胞内信号转导级联的激活。虽然受体-配体相互作用可在同一细胞的表面上的分子之间发生(顺式相互作用)，但通常认为顺式相互作用不导致信号转导级联的触发，或顺式相互作用可实际上拮抗由反式相互作用(例如，分开的细胞上的受体与配体之间)引发的信号转导级联。EPH-EFN反式相互作用的一个方面是在受体-配体衔接后触发两个信号转导级联(表达EPH的细胞中的正向信号转导级联和表达EFN的细胞中的反向信号转导级联)的能力。两个分开的信号转导级联的激活可反映EPH和EFN进化至在动物胚胎发育中协同作用的细胞分选和细胞定位过程。EPH-EFN信号转导通常激活调节细胞骨架动力学和导致不同类型细胞之间的粘附和排斥相互作用的调节的细胞信号转导途径。一般地，EPH和EFN蛋白在胚胎发生过程中以相对于在成人组织中观察到的那些水平高得多的水平被发现，虽然成体中持续低水平的表达可反映这些分子在组织诸如成人肠的正常功能中的作用，所述成人肠具有由正在分化的细胞从它们在隐窝中的组织干细胞上的源头至它们在面向肠腔的绒毛表面上的最终位置的迁移产生的良好确定的体系结架。由于首先在肝细胞癌中鉴定出EPH，并且EPH和EFN表达在成人中通常是有限的，因此人癌症中的EFN和/或EPH表达的再激活可与癌细胞的去分化和/或这些癌细胞侵入周围正常组织和从原发性肿瘤的位置至远端位置的迁移的能力相关联。其它的研究已表明，EPH-EFN相互作用也在血管生成中具有作用。与非淋巴样组织中的EPH-EFN相互作用通过在细胞间产生(通过整联蛋白和细胞骨架重排)粘附或排斥力调节细胞相互作用的发现一致，已显示在淋巴样细胞上发现的EPH和EFN分子介导至细胞外基质组分的细胞附着、趋化性和细胞迁移。例如，已发现原代CD4和CD8T细胞上的EFNA1(其结合于EPHA2受体并且包含例如Genbank登录NM_004428中的氨基酸序列)衔接刺激细胞迁移和增强趋化性。与EFNA1一样，EFNA4在原代CD4T细胞上表达，但是，由于EPH-EFN相互作用的混杂性，不清楚EFNA4衔接对这些细胞是否具有类似的作用。然而，已证明成熟人B淋巴细胞在活化后表达EFNA4并分泌其。进一步，与任何其它EFN或EPH分子不同，EFNA4还始终在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者的B细胞上表达或由所述B细胞表达。有趣的是，如通过Q-PCR测量的EFNA4同种型的表达可能与该病症的临床表现相关。同样地，已知具有增加的EFNA4表达的CLL患者的B细胞显示相较于健康个体的B细胞跨内皮迁移潜能的受损。很明显，EFNA4的衔接减弱了CLL细胞粘附于细胞外基质分子的能力，并减小了其对CCL1的趋化反应。这些报告一起表明了EFNA4在B和T细胞运输中的作用并且，当结合上述细胞内信号数据考虑时，使EFNA，尤其是EFNA4成为用于抗癌治疗剂的开发的非常吸引人的靶。此外，EFNA4的表达在各种癌症干细胞群体中被升高。与大块肿瘤中的几种EPHA受体的伴随上调一起，这产生EFNA4介导的配体-受体相互作用可触发与肿瘤增殖、血管生成和/或肿瘤转移相关联的细胞信号转级联的可能性。然而不希望受任何特定理论的束缚，据认为，本发明的EFNA4抗体和EFNA4抗体-药物缀合物至少部分地通过降低或消除肿瘤起始细胞(TIC)的频率从而以与常规标准护理(SOC)治疗方案(例如，多柔比星和依立替康)不同的方式干扰肿瘤增殖或存活或通过免疫治疗信号转导或递送能够杀伤EFNA4表达细胞的有效载荷来起作用。参见实施例8和9。代表性EFNA4蛋白直向同源物包括，但不限于，人(NP_005218,NP_872631或NP_872632)、小鼠(NP_031936)、黑猩猩(XP_001153095,XP_001152971,XP_524893和XP_001152916)和大鼠(NP_001101162)。转录的人EFNA4基因最少包括来自染色体1的5817bp。表1中显示了3个人EFNA4mRNA转录变体和编码的蛋白质，其每一个产生自转录的RNA的选择性剪接：(1)编码201个氨基酸的前蛋白(NP_005218；EFNA4同种型a；SEQIDNO:2)的1276个碱基对变体(NM_005227；EFNA4转录变体1；SEQIDNO:1)；(2)编码207个氨基酸的前蛋白(NP_872631；EFNA4同种型b；SEQIDNO:3)的1110个碱基对变体(NM_182689；EFNA4转录变体2；SEQIDNO:2)；和(3)编码193个氨基酸的前蛋白(NP_872632；EFNA4同种型c；SEQIDNO:4)的1111个碱基对的变体(NM_182690；EFNA4转录变体3)。表1.人EFNA4mRNA转录变体和编码的蛋白质应当理解，每一个人EFNA4蛋白包括含有SEQIDNO：2的氨基酸1-25的预测的信号或前导序列，所述信号或前导序列被切掉以提供该蛋白质的成熟形式(即，长度为168-182个氨基酸)。该信号肽将多肽靶向至细胞表面/分泌途径。术语“信号序列”，也称为信号肽、前导肽，是指使得蛋白质能够被分泌(穿过细胞膜)的蛋白质的N末端上的约15至30个氨基酸的区段。当蛋白质被分泌时，信号序列被除去。由于mRNA的选择性剪接对蛋白质编码序列造成影响，因此蛋白质同种型被细胞差异地加工。同种型a是膜定位的，并且通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)键联锚定至细胞表面，然而同种型b和c缺乏GPI-锚定信号序列，从而预期被细胞分泌。人EFNA4的3个蛋白质同种型的比对示于图1中。如先前所指出的，除非由直接的参考文献或上下文必然性另外指出，否则术语EFNA4将涉及人EFNA4的同种型和免疫反应性等同物。还应理解，术语还可指含有抗体或免疫反应性片段可特异性结合的表位的EFNA4的天然或变异形式的衍生物或片段。II.EFNA4抗体-药物缀合物本发明提供式Ab-(L-D)的抗体-药物缀合物，其中(a)Ab为结合EFNA4的抗体或其抗原结合片段，和(b)L-D为接头-药物部分，其中L为接头，D为药物。与被开发来抑制Eph受体信号转导的TKI相反，抗体-药物缀合物(ADC)诸如抗-EFNA4ADC可靶向特定的表面分子和表达它们的细胞而不论它们的信号转导功能，只要所述分子有效内化。还提供了制备和制造这样的抗体-药物缀合物的方法以及所述抗体-药物缀合物在临床应用中的用途。“抗体-药物缀合物”或“ADC”是指结合EFNA4并且缀合于药物诸如细胞毒性剂、细胞生长抑制剂和/或治疗剂的抗体，或其抗原结合片段，包括抗体衍生物，如在本文下文中进一步描述的。例如，可将细胞毒性剂连接或缀合于本文中描述的抗-EFNA4抗体以用于细胞毒性剂至肿瘤(例如，表达EFNA4的肿瘤)的靶向局部递送。如本文中所用，术语“EFNA4”包括变体、同种型、同源物、直向同源物和旁系同源物。EFNA4在本领域中也被称为肝配蛋白-A4、肝配蛋白-A4配体、EPH-相关受体酪氨酸激酶配体4、Eph-相关激酶4的配体、EFL4、EPLG4和LERK4。在本发明的一些方面，抗体和抗体-药物缀合物与来自除人外的物种的EFNA4(诸如小鼠、大鼠或灵长类动物的EFNA4)，以及不同形式的EFNA4(例如，糖基化EFNA4)交叉反应。在其它方面，所述抗体和抗体-药物缀合物对于人EFNA4可以是完全特异的并且可以不表现物种或其它类型的交叉反应性。如本文中所用，除非上下文另有所指，否则术语EFNA4是指天然存在的人EFNA4。因此，\EFNA4抗体\、“抗-EFNA4抗体”、\肝配蛋白-A4抗体\或\肝配蛋白-A4配体抗体\或其它类似名称意指与EFNA4型配体或同种型缔合、结合或反应的任何抗体(如本文中定义的)或其片段或衍生物。另外，\EFNA4抗体-药物缀合物\、“抗-EFNA4抗体-药物缀合物”、\肝配蛋白-A4抗体-药物缀合物\或\肝配蛋白-A4配体抗体-药物缀合物\意指与EFNA4型配体或同种型缔合、结合或反应的任何抗体-药物缀合物或ADC(如本文中定义的)或其片段或衍生物。“接头(L)”描述抗体至药物的直接或间接连接。接头至抗体的附接可以以多种方式来实现，诸如通过表面赖氨酸，还原性偶联至氧化的糖类，和通过半胱氨酸残基(通过还原链间二硫键释放)。多种ADC键联系统在本领域中是已知的，包括基于腙、二硫化物和肽的键联。“药物(D)”为具有生物学或可检测活性的任何物质，例如，治疗剂、可检测的标记物、结合剂等，和前药，其在体内被代谢成活性剂。术语药物、有效载荷和化合物可互换使用。“L-D”为由药物(D)连接至接头(L)产生的接头-药物部分。结合本发明使用的另外的科学和技术术语，除非在本文中另有所指，否则将具有由本领域普通技术人员通常理解的含义。另外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。通常地，与本文所述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白质和核酸化学和杂交结合使用的术语及其技术是本领域中公知的和通常使用的那些术语和技术。在本发明的特定方面，式Ab-(L-D)的EFNA4抗体-药物缀合物包括(a)包含SEQIDNO:13所示的重链可变区和SEQIDNO:27所示的轻链可变区的抗体(Ab)或其抗原结合片段；和(b)接头-药物部分(L-D)，其中L为接头，D为药物，其中接头为4-(4'乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)，并且其中药物为N-乙酰基-γ-加里刹霉素二甲基酰肼(CM)。在本发明的其它方面，式Ab-(L-D)的EFNA4抗体-药物缀合物包括(a)具有如SEQIDNO:39所示的重链可变区和SEQIDNO:53所示的轻链可变区的抗体(Ab)或其抗原结合片段；和(b)接头-药物部分(L-D)，其中L为接头，D为药物，其中接头为4-(4'乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)，并且其中药物为N-乙酰基-γ-加里刹霉素二甲基酰肼(CM)。在本发明的特定方面，式Ab-(L-D)的EFNA4抗体-药物缀合物包括(a)包含如SEQIDNO:25中所示的重链和如SEQIDNO:37中所示的轻链的抗体(Ab)或其抗原结合片段；和(b)接头-药物部分(L-D)，其中L为接头，D为药物，其中接头为4-(4'乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)，并且其中药物为N-乙酰基-γ-加里刹霉素二甲基酰肼(CM)。在本发明的其它方面，式Ab-(L-D)的EFNA4抗体-药物缀合物包括(a)具有如SEQIDNO:51中所示的重链和SEQIDNO:63中所示的轻链的抗体(Ab)或其抗原结合片段；和(b)接头-药物部分(L-D)，其中L为接头，D为药物，其中接头为4-(4'乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)，并且其中药物为N-乙酰基-γ-加里刹霉素二甲基酰肼(CM)。本发明还提供了具有优化的平均DAR和狭窄的DAR分布的抗体-药物缀合物。进一步参见下面第IIC节药物中的描述。平均DAR和DAR分布可对ADC的临床功效具有作用，尤其是对ADC的潜能和潜在毒性具有作用，并且可对ADC的性质诸如稳定性和聚集具有显著作用。DAR(药物对抗体的比率)或药物载荷(表示每抗体缀合的药物分子的数目)可为1至12。多种抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂可通过平均DAR来表征。DAR和平均DAR可通过各种常规方法诸如UV光谱学、质谱法、ELISA测定、放射测量法、疏水相互作用层析(HIC)、电泳和HPLC来测定。DAR分布提供了各种ADC种类例如DAR1至12的百分比或分数，所述ADC种类可存在于ADC的组合物、批次和/或制剂中。ADC的组合物、批次和/或制剂的DAR分布可通过本领域中已知的方法诸如毛细管等电聚焦(cIEF)来测定。ADC的组合物、批次和/或制剂的DAR分布可被表征为具有广泛的DAR分布的高度异质的混合物，通常含有宽范围的具有DAR1至12的ADC种类。ADC的组合物、批次和/或制剂的DAR分布可被表征为具有狭窄的DAR分布的高度同质的混合物，通常含有窄范围的具有特定DAR诸如DAR3至5的ADC种类。在本发明的特定方面，本文中公开的改进的缀合和纯化条件提供了具有在约3至5的范围内，优选为约4的优化的平均DAR和狭窄的DAR分布(例如较少异质性)的抗-EFNA4ADC，其中具有3至5的DAR的种类(其为最期望的)组成至少60％，或至少70％，或约70％至80％，或优选约75％至80％的总共的抗-EFNA4ADC。参见图9。在本发明的特定方面，在缀合和纯化过程中，有益的是消除具有高DAR(DAR>5)的ADC，所述具有高DAR的ADC更加疏水并且显示更快的清除，这可促成较高的毒性和降低治疗指数(TI)。在本发明的其它方面，有益的是消除具有低DAR(DAR<2)的ADC，所述具有低DAR的ADC对功效几乎无贡献，然而，提供未缀合的抗体的量的增加，所述未缀合的抗体可与ADC竞争靶抗原诸如EFNA4，以及导致较低的TI。在本发明的另一个方面，有益的是消除具有高DAR(DAR>5)的ADC和具有低DAR(DAR<2)的ADC。在本发明的特定方面，用于制备缀合反应混合物的CM对huE22的比率可以为4-5比1(相较于较高的比率)，以产生具有优化的DAR的抗-EFNA4ADC和消除较高DAR种类。在本发明的其它方面，在添加接头-药物部分(AcBut-CM)的过程中进行高度搅拌和充分混合，例如，如部分地通过将接头-药物部分添加至混合涡旋的中间部分来实现，这有助于获得低量的未缀合的抗体，这是优于先前的方法的改进。在本发明的其它方面，反应的温育时间相较于60-90分钟可被减少至2-5分钟，以提供抗-EFNA4ADC的低聚集体和增加其稳定性。在本发明的另一个方面，反应混合物中的乙醇(EtOH)的量相较于9％可被减少至6-8％，以提供抗-EFNA4ADC的低聚集体和增加其稳定性。在本发明的特定方面，在纯化过程中，可优化洗脱梯度来提供抗-EFNA4ADC的狭窄DAR分布。在本发明的特定方面，纯化的抗-EFNA4ADC可不具有未缀合的抗体(游离抗体)存在，参见图6。在本发明的其它方面，纯化的抗-EFNA4ADC可以是单体ADC，并且聚集体和二聚体不存在，参见图7。在本发明的其它方面，纯化的抗-EFNA4ADC可不具有游离药物存在，参见图8。在本发明的其它方面，纯化的抗-EFNA4ADC可以是单体ADC并且不具有游离药物存在。IIA.EFNA4抗体为了本发明的EFNA4抗体-药物缀合物的制备，抗体或其抗原结合片段可以是特异性结合EFNA4的任何抗体或其抗原结合片段。在PCT国际公开WO2012/118547(其通过引用整体并入本文)中进一步公开和表征本发明的抗体。可分离、纯化或衍生抗体或其抗原结合片段以用于制备EFNA抗体-药物缀合物。“抗体”或“Ab”为免疫球蛋白分子，其能够通过至少一个位于免疫球蛋白分子的可变区中的抗原识别位点识别和结合特定的靶或抗原诸如糖类、多核苷酸、脂质、多肽等。如本文中所用，术语“抗体”可包括任何类型的抗体，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、保留特异性结合给定的抗原(例如EFNA4)的能力的完整抗体的“抗原结合片段”(或部分)诸如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、Fc等、分离的互补决定区(CDR)、双特异性抗体、异源缀合的抗体、其突变体、具有抗体或其抗原结合片段(例如，结构域抗体)的融合蛋白、单链(ScFv)和单结构域抗体(例如，鲨鱼和骆驼抗体)、巨型抗体、微型抗体、胞内抗体、双抗体、三抗体、四抗体、v-NAR和双-scFv(参见，例如，Holliger和Hudson,2005,NatureBiotechnology23(9):1126-1136)、人源化抗体、嵌合抗体和包括具有所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它修饰的构型(包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体)。所述抗体可以是鼠类、大鼠、人或任何其它来源(包括嵌合或人源化抗体)。在本发明的一些方面，公开的EFNA4抗体-药物缀合物的抗体或其抗原结合片段为嵌合抗体、人源化抗体或重组人抗体或其EFNA4-结合片段。“特异性结合”或“优先结合”(在本文中可互换使用的)靶或抗原(例如，EFNA4蛋白)的抗体、抗体-药物缀合物或多肽为本领域中良好理解的术语，并且测定这样的特异性或优先结合的方法在本领域中也是公知的。如果分子与特定的细胞或物质相较于其与另一选择的细胞或物质以更大的频率、更快的速度、以更长的持续时间和/或以更大的亲和力反应或缔合，则所述分子被认为表现出“特异性结合”或“优先结合”。如果抗体相较于其结合其它物质以更大的亲和力、亲合力、更容易和/或以更长的持续时间结合靶或抗原，则所述抗体“特异性结合”或“优先结合”靶或抗原。例如，特异性或优先结合EFNA4表位的抗体为相较于其结合其它EFNA4表位或非-EFNA4表位以更大的亲和力、亲合力、更容易和/或以更长的持续时间结合该表位的抗体。如本文中所用，术语\结合亲和力\或“KD”旨在指特定抗原-抗体相互作用的平衡解离常数。KD为解离的速率(也称为\解离速率”或“kd\)对缔合的速率或\缔合速率(on-rate)”或“ka\的比率。因此，KD等于kd/ka，并且以摩尔浓度(M)表示。由此，KD越小，结合亲和力越强。因此，1μM的KD表示相较于1nM的KD的弱的结合亲和力。抗体的KD值可使用本领域中良好建立的方法来测定。用于测定抗体的KD的一个方法是通过使用表面等离子体共振技术(通常使用生物传感器系统诸如系统)。公开的EFNA4抗体-药物缀合物的特异性结合是指抗体与具有多种不同抗原的异质样品中的人EFNA4抗原的优先结合。通常地，如果结合亲和力为至少约10-7M或更高，诸如至少约10-8M或更高，包括至少约10-9M或更高，至少约10-11M或更高或至少约10-12M或更高，则特异性结合发生。例如，本发明的抗体与人EFNA4抗原的特异性结合包括在至少约1X10-7M至约1X10-12M的范围内，诸如约1X10-8M至约1X10-12M的范围内，或约1X10-8M至约1X10-11M的范围内，或约1X10-8M至约1X10-10M的范围内，或约1X10-9M至约1X10-10M的范围内的结合。特异性结合还指在向受试者施用抗体后，EFNA4抗体或其抗原结合片段对EFNA4表达细胞的选择性靶向。如本文中所用，“表位”包括能够特异性结合免疫球蛋白或T细胞受体或以其它方式与分子相互作用的任何蛋白质决定簇。表位决定簇通常由分子诸如氨基酸或糖类或糖侧链的化学活性表面组群(chemicallyactivesurfacegrouping)组成，并且通常具有特定的三维结构特征，以及特定的电荷特征。表位可以是“线性的”或“构象的”。在线性表位中，蛋白质与相互作用分子(诸如抗体)之间的所有相互作用点沿着蛋白质的一级氨基酸序列线性存在。在构象表位中，相互作用点跨蛋白质上的彼此分开的氨基酸残基存在。一旦抗原上的期望的表位被确定，则可能例如使用本发明中描述的技术产生针对该表位的抗体。或者，在发现过程中，抗体的产生和表征可阐明关于期望的表位的信息。根据该信息，则有可能竞争性地筛选用于结合同一表位的抗体。实现该目的方法是进行交叉竞争研究来发现彼此竞争性结合的抗体，即竞争与抗原的结合的抗体。在PCT国际公开No.WO03/48731中描述了用于基于它们的交叉竞争“框并(binning)”抗体的高通量方法。如本文中所用，术语“框并”是指基于它们的抗原结合特征和彼此之间的竞争来分类抗体的方法。然而，特异性结合EFNA4的分离的抗体可具有与其它抗原诸如来自其它物种(即，直系同源物)或具有EFNA4的不止一种同种型的EFNA4分子的交叉反应性。如本文中所用，\分离的抗体\是指基本上不含具有不同的抗原特异性的其它抗体的抗体(例如，特异性结合EFNA4的分离的抗体基本上不含特异性结合除EFNA4外的抗原的抗体)。此外，分离的抗体可以基本上不含其它细胞材料和/或化学物质。还应理解，通过阅读本定义，例如，特异性或优先结合第一靶的抗体(或部分或表位)可以或可以不特异性或优先结合第二靶。像这样，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要(虽然其可包括)专一结合。通常地，但非必需地，提及结合意指优先结合。在本发明的一些方面，EFNA4抗体-药物缀合物包括与具有(a)如SEQIDNO:13所示的重链可变区和如SEQIDNO:27所示的轻链可变区；或(b)如SEQIDNO:39所示的重链可变区和如SEQIDNO:53所示的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段竞争结合人EFNA4和/或结合与所述抗体或其抗原结合片段所结合的表位相同的表位的抗体。如本文中关于抗体所用的，术语“竞争”意指第一抗体或其抗原结合片段以与第二抗体或其抗原结合片段的结合充分类似的方式结合表位，以使得在第二抗体存在的情况下第一抗体与其同源表位的结合的结果，相较于在第二抗体不存在的情况下第一抗体的结合可检测地减少。其中第二抗体与其表位的结合在第一抗体存在的情况下也可检测地减少的备选项可以(但不必)如此。即，第一抗体可抑制第二抗体与其表位的结合而无需第二抗体抑制所述第一抗体与其各自表位的结合。然而，当每一种抗体可检测地抑制另一种抗体与其同源表位或配体的结合时，无论至相同、较高还是较低的程度，抗体被认为彼此“交叉竞争”与它们各自的表位的结合。本发明包括竞争性和交叉竞争性抗体。无论这样的竞争或交叉竞争发生的机制(例如，位阻、构象变化或与共同表位或其部分的结合)如何，本领域技术人员基于本文提供的教导应当理解，这样的竞争性和/或交叉竞争性抗体被包括在本文中并且可用于本文中公开的方法。天然或天然存在的抗体和天然免疫球蛋白通常是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。每一条轻链通过一个共价二硫键连接于重链，然而在不同免疫球蛋白同种型的重链中二硫键的数目可变化。每一条重链和轻链还具有规律间隔的链内二硫键。每一条重链在一个末端具有后接多个恒定结构域的可变结构域(VH)。每一条轻链在一个末端具有可变结构域(VL)并且在其另一末端具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。特定的氨基酸残基据信形成轻链可变结构域与重链可变结构域之间的界面。术语“可变的”是指可变结构域的某些部分在抗体之间在序列上广泛地存在差异的事实。抗体和上述抗体结构域可被描述为“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白质”，即具有任何长度，优选地相对短的(例如，10-100个氨基酸)氨基酸的链。所述链可以是线性的或分枝的，其可包含经修饰的氨基酸，和/或可被非氨基酸中断。该术语还包含已被天然地或通过干预修饰(例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰，诸如利用标记组分的缀合)的氨基酸链。还包括在定义中的是例如含有一个或多个氨基酸的类似物(包括，例如，非天然的氨基酸等)以及本领域中已知的其它修饰的多肽。应理解，多肽可作为单链或缔合的链存在。氨基酸在本文中可通过它们的通常已知的三字母符号或通过由IUPAC-IUBBiochemical推荐的单字母符号来提及。抗体的“恒定区”是指单独的或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区。嵌合和人源化EFNA4抗体的恒定区可来源于IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、其任意同种型(例如，IgG的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型)以及其亚类和突变形式的任一种的恒定区。取决于其重链的恒定区的抗体氨基酸序列，免疫球蛋白可被分配至不同种类。存在五大类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些种类中的几种还可被细分成亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同种类的免疫球蛋白的重链恒定区分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同种类的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是公知的。恒定结构域不直接参与将抗体与抗原结合，但表现出各种效应子功能，诸如Fc受体(FcR)结合、抗体参与抗体-依赖性细胞毒性、调理素作用、补体依赖性细胞毒性的起始和肥大细胞脱粒。如本领域中已知的，术语\Fc区\用于定义免疫球蛋白重链的C末端区。\Fc区\可以是天然序列Fc区或变体Fc区。虽然免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能变化，但人IgG重链Fc区通常被定义成从位置Cys226上的氨基酸残基或从Pro230延伸至其羧基端。Fc区中的残基的编号为如Kabat中的EU索引的编号。Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.,1991。免疫球蛋白的Fc区通常具有两个恒定区CH2和CH3。如本领域中所用的，\Fc受体\和“FcR”描述了结合抗体的Fc区的受体。优选的FcR为天然序列人FcR。此外，优选的FcR为结合IgG抗体(一种γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体(包括这些受体的等位基因变体和选择性剪接的形式)的FcR。FcγRII受体包括FcγRIIA(一种\激活性受体\)和FcγRIIB(一种\抑制性受体\)，其具有主要在其细胞质结构域中相异的相似的氨基酸序列。FcR综述于Ravetch和Kinet,Ann.Rev.Immunol.,9:457-92,1991；Capel等，Immunomethods,4:25-34,1994；以及deHaas等，J.Lab.Clin.Med.,126:330-41,1995中。“FcR”还包括新生儿受体FcRn，其负责母源IgG至胎儿的转移(Guyer等，J.Immunol.,117:587-593(1976)；和Kim等，EuropeanJ.Immunol.,24:2429-2434(1994))。在本发明的一些方面，公开的EFNA4抗体-药物缀合物的抗体或其抗原结合片段包括IgG1重链恒定区，例如如SEQIDNO:25中所示的huE22重链或如SEQIDNO:51所示的huE47重链。在其它方面，公开的EFNA4抗体-药物缀合物的抗体或其抗原结合片段包括κ轻链恒定区，例如如SEQIDNO:37中所示的huE22轻链或如SEQIDNO:63所示的huE47轻链。在本发明的特定方面，EFNA4抗体-药物缀合物可包括IgG1重链恒定区和κ轻链恒定区，例如，如SEQIDNO:25中所示的重链和如SEQIDNO:37中所示的轻链，或作为另一个实例，如SEQIDNO:51中所示的重链和如SEQIDNO:63中所示的轻链。抗体的“可变区”是指单独的或组合的抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区。如在本领域中已知的，重链和轻链的可变区各自由通过3个互补决定区(CDR)(也称为高变区)连接的4个框架区(FR)组成。每一条链中的CDR通过FR紧密地保持在一起并且与来自另一条链的CDR一起促成抗体的抗原结合部位的形成。存在至少2个用于确定CDR的技术：(1)基于跨种序列变异性的方法(即，Kabat等SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,(第5版，1991,NationalInstitutesofHealth,BethesdaMD))；和(2)基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法(Al-Lazikani等，J.Molec.Biol.273:927-948(1997))。如本文中所用，CDR可指由任一方法或由两种方法的组合确定的CDR。可变结构域的CDR是按照Kabat、Chothia、Kabat和Chothia的堆积、VBASE2、AbM、contact定义和/或构象定义或本领域中公开的任何CDR确定方法鉴定的可变区内的氨基酸残基。抗体CDR可被定义为最初由Kabat等人确定的高变区。参见，例如，Kabat等，1992,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版，PublicHealthService,NIH,WashingtonD.C。CDR的位置还可被鉴定为最初由Chothia和其他人描述的结构性环结构。参见，例如，Chothia等，Nature342:877-883,(1989)。CDR位置还可来源于VBASE2数据库的分析。(参见，例如，Retter等，NucleicAcidsRes.33(DatabaseIssue):D671-D674,2005和http://www.vbase2.org/)。CDR鉴定的其它方法包括“AbM定义”，其为Kabat与Chothia之间的折衷，并使用OxfordMolecular'sAbM抗体建模软件(现为)或基于观察到的抗原接触的CDR的“接触定义(contactdefinition)”(MacCallum等，J.Mol.Biol.,262:732-745,(1996)所示的)衍生。在另一个方法(在本文中称为CDR的“构象定义”)中，CDR的位置可被鉴定为对抗原结合作出焓贡献的残基。参见，例如，Makabe等，JournalofBiologicalChemistry,283:1156-1166,2008。仍有其它CDR边界定义可以不严格遵照上述方法之一，但尽管如此还是将与KabatCDR的至少一部分重叠，虽然鉴于特定残基或残基组或甚至整个CDR不显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可被缩短或延长。如本文中所用，CDR可指由本领域中已知的任何方法包括方法的组合定义的CDR。本文中使用的方法可利用根据这些方法的任何方法定义的CDR。对于本文所述的EFNA4抗体-药物缀合物，可按照Kabat、Chothia(扩展的)、VBASE2、AbM、contact和/或构象定义的任一种确定CDR。在本发明的其它方面，EFNA4抗体或其抗原-结合片段包括抗体的一个或多个CDR(诸如1、2、3、4、5或所有6个CDR)。对于本发明，下文表2中所示的CDR(SEQIDNO:5-64)使用Kabat和Chothia法来产生，图2中所示的CDR从VBASE2数据库的分析产生。因此，具有由所有这样的命名法定义的CDR的抗体明确地包括在本发明的范围内。更广泛地，术语“可变区CDR氨基酸残基”包括如使用上文所示的任何基于序列或结构的方法鉴定的CDR中的氨基酸。在本发明的一些方面，EFNA4抗体-药物缀合物包括具有huE22抗体的CDR的抗体或其抗原结合片段。例如，EFNA4抗体-药物缀合物可包括包含至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，其中至少一个重链可变区具有如SEQIDNO:15、19和23所示的3个CDR。在本发明的一些方面，EFNA4抗体-药物缀合物包括具有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，其中至少一个轻链可变区具有如SEQIDNO:29、33和35所示的3个CDR。本发明的EFNA4抗体-药物缀合物还可包括含有(a)具有如SEQIDNO:15、19和23所示的3个CDR的重链可变区和(b)具有如SEQIDNO:29、33和35所示的3个CDR的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段。在本发明的其它方面，EFNA4抗体-药物缀合物包括具有一个或多个按照Chothia定义的或从VBASE2数据库的分析产生的huE22CDR的抗体或其抗原结合片段。例如，EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，其中至少一个重链可变区包括3个按照Chothia定义的huE22CDR(参见表2)或3个从VBASE2数据库的分析产生的huE22CDR(参见图2)。作为另一个实例，EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，其中至少一个轻链可变区包含3个按照Chothia定义的huE22CDR(参见表2)或3个从VBASE2数据库的分析产生的huE22CDR(参见图2)。在本发明的一些方面，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有(a)拥有3个按照Chothia定义的huE22CDR(参见表2)的重链可变区和(b)拥有3个按照Chothia定义的huE22CDR(参见表2)的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段。在本发明的一些方面，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有(a)拥有3个从VBASE2数据库的分析产生的huE22CDR(参见图2)的重链可变区和(b)拥有3个从VBASE2数据库的分析产生的huE22CDR(参见图2)的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段。在本发明的其它方面，EFNA4抗体-药物缀合物包含具有huE47抗体的CDR的抗体或其抗原结合片段。例如，EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，其中至少一个重链可变区包括如SEQIDNO:41、45和49所示的3个CDR。在本发明的一些方面，EFNA4抗体-药物缀合物包括具有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，其中至少一个轻链可变区包括如SEQIDNO:55、59和61所示的3个CDR。本发明的EFNA4抗体-药物缀合物还可包含(a)具有SEQIDNO:41、45和49所示的3个CDR的重链可变区；和(b)具有如SEQIDNO:55、59和61所示的3个CDR的轻链可变区。在本发明的其它方面，EFNA4抗体-药物缀合物包括具有一个或多个按照Chothia定义的或从VBASE2数据库的分析产生的huE47CDR的抗体或其抗原结合片段。例如，EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，其中至少一个重链可变区包括3个由Chothia定义的huE47CDR(参见表2)或3个从VBASE2数据库的分析产生的huE47CDR(参见图2)。作为另一个实例，EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，其中至少一个轻链可变区包括3个由Chothia定义的huE47CDR(参见表2)或3个从VBASE2数据库的分析产生的huE47CDR(参见图2)。在本发明的一些方面，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有(a)包括3个按照Chothia定义的huE47CDR(参见表2)的重链可变区和(b)包括3个按照Chothia定义的huE47CDR(参见表2)的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段。在本发明的一些方面，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有(a)拥有3个从VBASE2数据库的分析产生的huE47CDR(参见图2)的重链可变区和(b)拥有3个从VBASE2数据库的分析产生的huE47CDR(参见图2)的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段。在本发明的一些方面，用于制备本发明的EFNA4抗体-药物缀合物的抗体将为单克隆抗体。术语\单克隆抗体\或“mAb”是指获自基本上均质的抗体群体的抗体，即除可能的可少量存在的天然发生的突变外包含在该群体中的个体抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异的，针对单个抗原位点。此外，与多克隆抗体制剂(其通常包括针对不同的决定簇(表位)的不同抗体)相反，每一个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。修饰词\单克隆的\表示抗体的特征为获自抗体的基本上均质的群体，并且不被解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，待根据本发明使用的单克隆抗体可通过由Kohler和Milstein,Nature256:495-497,1975首先描述的杂交瘤产生，或通过重组DNA方法(诸如美国专利No.4,816,567中描述的)产生。还可例如从使用McCafferty等，Nature348:552-554,1990中描述的技术产生的噬菌体文库分离单克隆抗体。在本发明的一些方面，用于制备本发明的抗体-药物缀合物的抗体将是单价的，即每分子具有一个抗原结合部位(例如，IgG或Fab)。在一些情况下，单价抗体可具有不止一个抗原结合部位，但所述结合部位来自不同的抗原。在本发明的一些方面，本发明的抗体-药物缀合物的抗体或其抗原结合片段可包括“双价抗体”，即每分子具有两个抗原结合部位(例如，IgG)。在一些情况下，两个结合部位具有相同抗原特异性。或者，双价抗体可以是双特异性的。“双特异性”、“双重特异性”或“双功能性”抗体是具有两个不同抗原结合部位的杂合抗体。双特性抗体的两个抗原结合部位结合两个不同的表位，所述两个不同的表位可存在于相同的或不同的蛋白质靶上。术语“嵌合抗体”旨在指其中可变区序列的部分或全部来源于一个物种并且恒定区序列来源于另一个物种的抗体，诸如其中可变区序列来源于小鼠抗体并且恒定区序列来源于人抗体的抗体。如本文中所用，\人源化\或“CDR移植”抗体是指非人(例如鼠)抗体的形式，其为含有来源于非人免疫球蛋白的最小限度的序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab’、F(ab')2或抗体的其它抗原结合子序列)。优选地，人源化抗体为其中来自接受者的一个或多个互补决定区(CDR)的残基被具有所需特异性、亲和力和能力的来自非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或兔的一个或多个CDR的残基替代的人免疫球蛋白(接受者抗体)。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被对应的非人残基替代。此外，人源化抗体可包括未在接受者抗体中也未在引入的CDR或框架序列中发现的，但被包括来进一步改善和优化抗体性能的残基。通常地，人源化抗体将包括基本上所有的至少1个、通常2个可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，并且所有或基本上所有的FR区为人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗体最佳地还将包括至少一部分免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)(通常地人免疫球蛋白的恒定区或结构域)。在本发明的一些方面，抗体具有如PCT国际公开No.WO99/58572中所述修饰的Fc区域。人源化抗体的其它形式具有可相对于原始抗体被改变的一个或多个CDR(CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2或CDRH3)，其也被称为“来源于”一个或多个来自原始抗体的CDR的一个或多个CDR。可基本下按照Winter及同事(Jones等Nature321:522-525(1986)；Riechmann等Nature332:323-327(1988)；Verhoeyen等Science239:1534-1536(1988))的方法，通过用啮齿类动物或突变的啮齿类动物的CDR或CDR序列替代人抗体的对应序列来进行人源化。也参见，美国专利No.5,225,539、5,585,089、5,693,761、5,693,762、5,859,205，所述美国专利通过引用整体并入本文。在一些情况下，人免疫球蛋白的一个或多个可变区的框架区内的残基被对应的非人残基替代(参见，例如，美国专利No.5,585,089、5,693,761、5,693,762和6,180,370)。此外，人源化抗体可包括未在接受者抗体或供体抗体中发现的残基。这些修饰被进行以进一步改善抗体性能(例如，以获得所需的亲和力)。通常地，人源化抗体将包括基本上所有的至少1个、通常2个可变区，其中所有或基本上所有高变区对应于非人免疫球蛋白的那些高变区，并且所有或基本上所有框架区是人免疫球蛋白序列的那些框架区。人源化抗体任选地还将包括至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常地人免疫球蛋白的恒定区)。关于进一步的详细内容，参见Jones等Nature321:522-525(1986)；Riechmann等Nature332:323-327(1988)；和PrestaCurr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)；所述文献通过引用整体并入本文。因此，这样的“人源化”抗体可包括其中远少于完整人可变结构域已被来自非人物种的对应序列替代的抗体。在实践中，人源化抗体通常是其中一些CDR残基和可能地一些框架残基被来自啮齿类动物抗体中的类似位点的残基取代的人抗体。参见，例如，美国专利No.5,225,539、5,585,089、5,693,761、5,693,762、5,859,205。也参见美国专利No.6,180,370和PCT国际公开No.WO01/27160，其中公开了人源化抗体和用于产生具有提高的针对预定抗原的亲和力的人源化抗体的技术。“重组人抗体”或“完全人抗体”是指具有对应由人产生的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体和/或已使用本领域技术人员已知的或本文中公开的任何用于产生人抗体的技术产生的抗体。人抗体的该定义包括具有至少一个人重链多肽或至少一个人轻链多肽的抗体。一个这样的实例是具有鼠轻链和人重链多肽的抗体。人抗体可使用本领域中已知的各种技术来产生。例如，人抗体选自噬菌体文库，其中该噬菌体文库表达人抗体(Vaughan等，NatureBiotechnology,14:309-314,(1996)；Sheets等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95:6157-6162,(1998)；Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388,(1992)；Marks等，J.Mol.Biol.,222:581-597,(1991))。人抗体还可通过免疫已将人免疫球蛋白基因座转基因地引入其中替代内源基因座的动物，例如其中内源免疫球蛋白基因已被部分或完全灭活的小鼠来产生。该方法描述于美国专利No.5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425和5,661,016中。或者，可通过永生化产生针对靶抗原的抗体的人B淋巴细胞(这样的B淋巴细胞可从个体或从cDNA的单细胞克隆回收或可以在体外进行免疫接种)来制备。参见，例如，Cole等MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,p.77,(1985)；Boerner等，J.Immunol.,147(1):86-95,(1991)；和美国专利No.5,750,373。本发明的抗体可使用本领域中公知的技术例如重组技术、噬菌体展示技术、合成技术或这样的技术的组合或本领域中容易知道的其它技术(参见，例如，Jayasena,S.D.,Clin.Chem.,45:1628-50(1999)和Fellouse,F.A.，等，J.MoI.Biol.,373(4):924-40(2007))来产生。另外的指导可见于SambrookJ.&RussellD.MolecularCloning:ALaboratoryManual，第3版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(2000)；Ausubel等，ShortProtocolsinMolecularBiology:ACompendiumofMethodsfromCurrentProtocolsinMolecularBiology,Wiley,John&Sons,Inc.(2002)；HarlowandLaneUsingAntibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1998)；和Coligan等，ShortProtocolsinProteinScience,Wiley,John&Sons,Inc.(2003)中。在本文的下文中的实施例1-3中也描述了代表性方法。一般地，对于杂交瘤细胞系的产生，通常使宿主动物的免疫接种的途径和方案与用于抗体刺激和产生的已建立的和常规的技术保持一致。预期可操作任何哺乳动物受试者(包括人或来自其的抗体产生性细胞)以用作用于哺乳动物包括人和杂交瘤细胞系的产生的基础。通常地，用一定量的免疫原(包括如本文中描述的免疫原)腹膜内，肌内、经口、皮下、足底内和/或皮内接种宿主动物。可使用Kohler,B.和Milstein,C.,Nature256:495-497,1975的或如由Buck,D.W.,等，InVitro,18:377-381,1982改进的一般体细胞杂交技术从淋巴细胞和永生化骨髓瘤细胞制备杂交瘤。可将可获得的骨髓瘤细胞系，包括但不限于X63-Ag8.653和来自SalkInstitute,CellDistributionCenter,SanDiego,Calif.,USA的那些细胞系用于杂交。通常地，所述技术包括使用促融剂诸如聚乙二醇，或通过本领域技术人员公知的电装置融合骨髓瘤细胞和淋巴样细胞。融合后，从融合介质分离细胞，将其在选择性生长培养基诸如次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸苷(HAT)培养基中生长，以消除未杂交的亲代细胞。可将补充有或未补充血清的本文所述的任何培养基用于培养分泌单克隆抗体的杂交瘤。作为对细胞融合技术的另一种替代，可将EBV永生化的B细胞用于产生本发明的EFNA4单克隆抗体。如果需要，扩增和亚克隆杂交瘤，以及通过常规免疫测定法(例如，放射免疫测定、酶免疫测定或荧光免疫测定)测定上清液的抗免疫原活性。可用作抗体的来源的杂交瘤包括产生特异于EFNA4或其部分的单克隆抗体的亲代杂交瘤的所有衍生物、后代细胞。可使用已知的方法在体外或体内生长产生这样的抗体的杂交瘤。如果需要，可通过常规免疫球蛋白纯化方法诸如硫酸铵沉淀、凝胶电泳、透析、层析和超滤法，从培养基或体液分离单克隆抗体。可以例如通过将制剂在由附着至固相的免疫原制成的吸附剂上流动，并从免疫原洗脱或释放出所需抗体来除去不想要的活性(如果存在的话)。用人EFNA4或含有靶氨基酸序列的片段免疫宿主动物可产生抗体(例如，单克隆抗体)的群体，通过使用双功能或衍生剂，例如马来酰亚胺基苯甲酰基磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基的缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酐、SOCl2或R1N＝C＝NR(其中R和R1是不同的烷基)，所述靶氨基酸序列缀合于在待免疫的物种中具有免疫原性的蛋白质，例如钥孔血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂。如果需要，可对目标EFNA4抗体(单克隆或多克隆的)进行测序，随后将多核苷酸序列克隆入用于表达或扩增的载体。可将编码目标抗体的序列维持在宿主细胞中的载体中，随后可扩增宿主细胞并将其冷冻以待将来使用。在细胞培养物中产生重组单克隆抗体可通过利用本领域中已知的方法克隆来自B细胞的抗体基因来进行。参见，例如，Tiller等，J.Immunol.Methods329:112-124,2008；美国专利No.7,314,622。“宿主细胞”包括可以是或已具有用于掺入多核苷酸插入片段的载体的接受者的个体细胞或细胞培养物。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且所述后代可因天然、偶然或有意的突变而不必与原始亲代细胞完全相同(在形态学上或在基因组DNA互补物上)。宿主细胞包括利用本发明的多核苷酸体内转染的细胞。术语\载体\意指能够递送一个或多个目标基因或序列并且优选地在宿主细胞中表达其的构建体。载体的实例包括，但不限于，病毒载体、裸露DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子凝聚剂缔合的DNA或RNA表达载体、包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体和某些真核生物细胞诸如生产细胞。术语\表达控制序列\意指指导核酸的转录的核酸序列。表达控制序列可以是启动子，诸如组成型或诱导型启动子，或增强子。表达控制序列可操作地连接于待转录的核酸序列。或者，多核苷酸序列可用于基因操作以“人源化”抗体或改善抗体的亲和力或其它特征。例如，如果将抗体用于人的临床试验和治疗，则可将恒定区工程化来更近似地相似于人恒定区，以避免免疫应答。可期望遗传操作抗体序列以获得更大的针对EFNA4的亲和力和更大的抑制EFNA4的功效。存在4个可用于人源化单克隆抗体的一般步骤：(1)测定起始抗体的轻链和重链可变结构域的核苷酸序列和预测的氨基酸序列，(2)设计人源化抗体，即决定在人源化过程中使用哪个抗体框架区，(3)实际人源化方法学/技术和(4)人源化抗体的转染和表达。参见，例如，美国专利No.4,816,567、5,807,715、5,866,692、6,331,415、5,530,101、5,693,761、5,693,762、5,585,089和6,180,370。人源化抗体可使用多种方法的任一种方法来制备，所述方法包括饰面(veneering)、互补决定区(CDR)的移植、缩短的CDR的移植、特异性决定区(SDR)的移植和Frankenstein组装，如下文中描述的。人源化抗体还包括超人源化抗体，其中一个或多个变化已被引入CDR。例如，人残基可替代CDR中的非人残基。可将这些一般方法与标准诱变和合成技术组合以产生具有任何所需序列的抗-EFNA4抗体。饰面基于通过用人氨基酸序列对抗体的溶剂可及的外部进行表面重修来减少啮齿类动物或其它非人抗体中的潜在地具有免疫原性的氨基酸序列的概念。因此，饰面抗体表现出相较于未修饰的非人抗体较少的针对人细胞的外来性。参见Padlan(1991)Mol.Immunol.28:489-98。通过鉴定与人抗体的框架区中相同位置上的那些残基不同的非人抗体中的暴露的外部框架区残基，和用通常占据人抗体中的这些相同位置的氨基酸替代所述鉴定的残基来对非人抗体进行饰面。通过用供体抗体(例如，非人抗体)的CDR替代受体抗体(例如，人抗体或具有所需框架残基的其它抗体)的一个或多个CDR来进行CDR的移植。基于候选受体抗体与供体抗体之间的框架残基的相似性选择受体抗体。例如，按照Frankenstein法，人框架区被鉴定为与相关非人抗体的每一个框架区具有实质序列同源性，和将非人抗体的CDR移植至不同人框架区的复合物上。还可用于制备本发明的抗体的相关方法描述于美国专利申请公开No.2003/0040606中。缩短的CDR的移植是相关的方法。缩短的CDR包括特异性决定残基和相邻的氨基酸，包括轻链中的位置27d-34、50-55和89-96上和重链中的位置31-35b、50-58和95-101上的那些氨基酸((Kabat等(1987)的编号规则)。参见(Padlan等(1995)FASEBJ.9:133-9)。特异性决定残基(SDR)的移植以这样的理解为前提，即抗体组合位点的结合特异性和亲和力由每一个互补决定区(CDR)内的最高度可变的残基决定。与可获得的氨基酸序列数据的分析组合的抗体-抗原复合物的三维结构的分析可用于基于存在于CDR内的每一个位置上的氨基酸残基的结构相异性对序列变异性建模。SDR被鉴定为由接触残基组成的最小免疫原性多肽序列。参见Padlan等(1995)FASEBJ.9:133-139。一般地，人受体框架基于它们与供体抗体的框架区基本上相似或与可变区亚家族的共有序列最相似来选择。在移植后，可在供体和/或受体序列中进行另外的变化来优化抗体结合、功能性、密码子使用、表达水平等，包括非人残基至框架区内的引入。参见，例如，PCT国际公开No.WO91/09967。对于CDR至重链可变框架区上的移植，有用的框架序列可来源于DP-21(VH7)、DP-54(VH3-07)、DP-47(VH3-23)、DP-53(VH-74)、DP-49(VH3-30)、DP-48(VH3-13)、DP-75、DP-8(VH1-2)、DP-25、VI-2b和VI-3(VH1-03)、DP-15和V1-8(VH1-08)、DP-14和V1-18(VH1-18)、DP-5和V1-24P(VH1-24)、DP-4(VH1-45)、DP-7(VH1-46)、DP-10、DA-6和YAC-7(VH1-69)、DP-88(VH1-e)、DP-3和DA-8(VH1-f)。对于CDR至轻链可变框架区上的移植，有用的框架序列可来源于DPK24亚组IV种系克隆、Will亚组(DPK23、DPK22、DPK20、DPK21)或VκI亚组种系克隆(DPK9、DPK1、O2、DPK7)。抗原结合片段或抗体片段可通过抗体的蛋白水解或其它降解，通过如上所述的重组方法(即，单个或融合多肽)，或通过化学合成来产生。抗体的多肽，尤其是最多约50个氨基酸的较短的多肽，可通过化学合成来方便地产生。化学合成的方法在本领域中是已知的并且是商购可得的。例如，可通过使用固相方法的自动化多肽合成仪来产生抗体或抗体片段。也参见，美国专利No.5,807,715、4,816,567和6,331,415。在本发明的其它方面，EFNA4抗体-药物缀合物包括具有huE5、huE15、huE22或huE47的重链和/或轻链可变区或与huE5、huE15、huE22或huE47的重链或轻链可变区基本上相似的可变区的抗体或其抗原结合片段。当用于多肽时，术语\基本上同一\或\基本上相似\意指当诸如通过程序GAP或BESTFIT，使用随程序一起提供的默认缺口权重进行最佳比对时，两个氨基酸序列共有至少70％、75％或80％序列同一性，优选至少90％或95％序列同一性，更优选至少97％、98％或99％序列同一性。在一些基本上相似的氨基酸序列中，不相同的残基位置相异于保守氨基酸取代。基本上相似的多肽还包括其中一个或多个残基已被功能相似的残基保守取代的保守取代的变体。保守取代的实例包括一个非极性(疏水性)残基诸如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸对另一个非极性氨基酸的取代；一个极性(亲水性)残基对另一个极性残基的取代，诸如精氨酸与赖氨酸之间、谷氨酰胺与天冬酰胺之间、甘氨酸与丝氨酸之间的取代；一个碱性残基诸如赖氨酸、精氨酸或组氨酸对另一个碱性残基的取代；或一个酸性残基诸如天冬氨酸或谷氨酸对另一个酸性残基的取代。两个蛋白质基本上相同的另外的指标是它们共有整体三维结构，或为生物功能等同物。在本发明的一些方面，结合EFNA4的抗体-药物缀合物包括具有如SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:13和SEQIDNO:39的任一个所示的重链可变区和/或如SEQIDNO:7、SEQIDNO:11、SEQIDNO:27和SEQIDNO:53的任一个所示的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段。例如，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有拥有与SEQIDNO:13具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区和拥有与SEQIDNO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段；或具有拥有如SEQIDNO:13所示的重链可变区和拥有如SEQIDNO:27的氨基酸序列的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段。作为另一个实例，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物可包括具有拥有与SEQIDNO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区和拥有与SEQIDNO:53具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段；或具有如SEQIDNO:39所示的重链可变区和拥有如SEQIDNO:53所示的氨基酸序列的轻链可变区的抗体或其抗原结合片段。为了表达本发明的EFNA4抗体，可首先使用上述方法的任何方法获得编码VH和VL区的DNA片段。如本领域中已知的，“多核苷酸”、“核酸/核苷酸”和\寡核苷酸\在本文中可互换使用，并且包括具有任何长度的核苷酸(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸、其类似物，或可被DNA或RNA聚合酶掺入链中的任何底物)的聚合物形式。多核苷酸可具有任何三维结构，并且可进行任何功能(已知的或未知的)。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转运RNA、核糖体RNA、核酶、DNA、cDNA、基因组DNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、具有任意序列的分离的DNA、具有任意序列的分离的RNA、核酸探针和引物。多核苷酸可以是天然存在的、合成的、重组的或其任意组合。多核苷酸可以包括经修饰的核苷酸，诸如甲基化核苷酸及其类似物。如果存在的话，对核苷酸结构的修饰可在链的组装之前或之后赋予。核苷酸的序列可被非核苷酸组分间断。还可在聚合后，诸如通过利用标记组分的缀合来进一步修饰多核苷酸。其它类型的修饰包括，例如，“封端”，利用类似物对一个或多个天然存在的核苷酸的取代，核苷酸间修饰诸如，例如，利用不带电荷的键联(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和利用带电荷的键联(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些修饰，含有侧基部分诸如例如蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、多聚-L-赖氨酸等)的那些修饰，具有嵌合剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些修饰，含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些修饰，含有烷化剂的那些修饰、利用经修饰的键联(例如，α异头核酸等)的那些修饰以及多核苷酸的未修饰的形式。另外，通常存在于糖中的羟基的任何羟基可以例如被膦酸基团、磷酸基团替代，被标准保护基团保护，或被活化以制备与另外的核苷酸的另外的键联，或可被缀合至固相支持物。5’和3’末端OH可被磷酸化或被胺或具有1至20个碳原子的有机封端基团取代。其它羟基也可被衍生成标准保护基团。多核苷酸还可含有本领域通常已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括，例如，2’-O-甲基-、2’-O-烯丙基、2’-氟-或2’-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-或β-异头糖、差向异构糖诸如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物和无碱基核苷类似物诸如甲基核苷。一个或多个磷酸二酯键联可被备选连接基团替代。这些备选连接基团包括，但不限于，其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯”)、P(S)S(“二硫代酸酯”)、(O)NR2(“酰胺化物”)、P(O)R、P(O)OR’、CO或CH2(“formacetal”)替代的特征，其中每一个R或R’独立地是H或取代或未取代的烷基(1-20C)，任选地含有醚(-O-)键联、芳基、烯基、环烷基、环烯基或araldyl。并非多核苷酸中所有的建联需要是相同的。上述描述用于本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。编码抗-EFNA4抗体重链和轻链可变区的代表性DNA是如SEQIDNO:6(huE5VHDNA)、8(huE5VLDNA)、10(huE15VHDNA)、12(huE15VLDNA)、14(huE22VHDNA)、28(huE22VLDNA)、40(huE47VHDNA)和54(huE47VLDNA)所示的。编码抗-EFNA抗体重链和轻链的代表性DNA是如SEQIDNO:26(huE22HC)、SEQIDNO:28(huE22LC)、SEQIDNO:52(huE47HC)和SEQIDNO:64(huE47LC)所示的。参见本文下文中的表2。huE5和huE15抗体的CDR在表2中通过加以下划线来标示。huE22和huE47抗体的CDR是如表2(按照Kabat或Chothia定义的)或图2(从VBASE2数据库的分析产生的)中的分开的序列和序列标识符所示的。还可使用本领域技术人员已知的标准方法向huE5、huE15、huE22和huE47DNA序列中引入各种修饰例如突变、取代、缺失和/或添加。例如，可使用标准方法诸如PCR-介导的诱变或定点诱变来进行诱变，在所述PCR-介导的诱变中将突变的核苷酸掺入PCR引物以使得PCR产物含有所需的突变。因此，基于本申请的公开内容，本领域技术人员将容易地识别与huE5、huE15、huE22和huE47DNA基本上相似的DNA的序列。术语\基本上相似\或\基本上序列相似\当指核酸或其片段时意指当将适当的核苷酸插入或缺失与另一个核酸(或其互补链)最佳比对时，在至少约85％，优选至少约90％，更优选至少约95％、96％、97％、98％或99％的核苷酸碱基中存在核苷酸序列同一性，如通过任何公知的序列同一性算法，诸如FASTA、BLAST或Gap测量的。在核酸序列的背景下，术语\百分比序列同一性\意指当就最大对应性比对时两个序列中为相同的残基。序列同一性比较的长度可在至少约9个核苷酸，通常至少约18个核苷酸，更通常至少约24个核苷酸，通常至少约28个核苷酸，更通常至少约32个核苷酸，优选至少约36个、48个或更多个核苷酸的区段的范围内。存在许多不同的可用于测量核苷酸序列同一性的本领域中已知的算法。例如，多核苷酸序列可使用FASTA、Gap或Bestfit比较，其是WisconsinPackage10.0版,GeneticsComputerGroup(GCG),Madison,Wisconsin中的程序。包括例如程序FASTA2和FASTA3的FASTA提供查询与搜索序列之间的最佳重叠的区域的比对和百分比序列同一性(Pearson,MethodsEnzymol.183:63-98(1990)；Pearson,MethodsMoI.Biol.132:185-219(2000)；Pearson,MethodsEnzymol.266:227-258(1996)；Pearson,J.MoI.Biol.276:71-84(1998)；所述文献通过引用整体并入本文)。除非另有所指，否则使用用于特定程序或算法的默认参数。例如，可使用FASTA利用其默认参数(6的字长和用于打分矩阵的NOPAM因子)或使用Gap利用如在GCG6.1版中提供的其默认参数测定核酸序列之间的百分比序列同一性，所述FASTA或Gap通过引用整体并入本文。两个核酸序列是基本上相同的另外的指标是由核酸编码的蛋白质是基本上相同的、共有整体三维结构、或为生物功能等同物。在本文的下文中进一步定义这些术语。如果对应的蛋白质是基本上相同的，则在严格条件下彼此不杂交的核酸分子仍然是基本上相同。这可例如在两个核苷酸序列包含如由遗传密码允许的保守取代变体时发生。保守取代的变体是具有简并密码子取代(其中一个或多个选定的(或全部)密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧次黄苷取代)的核酸序列。参见Batzer等(1991)NucleicAcidsRes.19:5081；Ohtsuka等(1985)J.Biol.Chem.260:2605-2608；和Rossolini等(1994)Mol.CellProbes8:91-98。一种类型的取代(例如可被产生的取代)是改变抗体中的一个或多个可以是化学反应性的半胱氨酸至另一种残基诸如但不限于丙氨酸或丝氨酸。例如，可存在非典型半胱氨酸的取代。可在抗体的可变结构域的CDR或框架区中或恒定区中产生取代。作为另一个实例，半胱氨酸可以是典型的。还可例如在重和/或轻链的可变结构域中修饰抗体，例如，以改变抗体的结合性质。例如，可在一个或多个CDR区域中产生突变以增加或减小抗体针对EFNA4的KD，以增加或减小koff，或以改变抗体的结合特异性。定点诱变的技术在本领域中是公知的。参见，例如，Sambrook等和Ausubel等，同上。还可在框架区或恒定区中产生修饰或突变，以延长EFNA4抗体的半衰期。参见，例如，PCT国际公开No.WO00/09560。还可在框架区或恒定区中产生突变以改变抗体的免疫原性，以提供用于与另一个分子共价或非共价结合的位点，或以改变这样的性质如补体结合、FcR结合和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。根据本发明，单个抗体可在可变结构域的CDR或框架区的任一个或多个中或在恒定区中具有突变。在称为“种系化(germlining)”的方法中，可突变VH和VL序列中的某些氨基酸以匹配在种系VH和VL序列中天然发现的那些氨基酸。具体地，可突变VH和VL序列中的框架区的氨基酸序列来匹配种系序列，以在施用抗体时减小免疫原性的风险。如本文中所用，术语\种系\是指抗体基因和基因区段的核苷酸序列和氨基酸序列，因为它们通过生殖细胞从亲代传递至后代。该种系序列与成熟B细胞中的编码抗体的核苷酸序列不同，所述核苷酸序列已在B细胞成熟过程中被重组和超突变事件改变。“利用”特定种系的抗体具有与该种系核苷酸序列或与其规定的氨基酸序列最紧密对齐的核苷酸或氨基酸序列。这样的抗体相较于种系序列被频繁突变。人VH和VL基因的种系DNA序列在本领域中是已知的(参见例如，\Vbase\人种系序列数据库；也参见Kabat,E.A.,等，1991,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242；Tomlinson等，J.Mol.Biol.227:776-798,1992；和Cox等，Eur.J.Immunol.24:827-836,1994。可被产生的另一种类型的氨基酸取代是除去抗体中的潜在蛋白水解位点。这样的位点可存在于抗体的可变结构域的CDR或框架区中或恒定区中。半胱氨酸残基的取代和蛋白水解位点的去除可降低抗体产物中的异质性的风险，从而增加其同质性。另一种类型的氨基酸取代是消除天冬酰胺-甘氨酸对(通过改变所述残基之一或两者)，所述天冬酰胺-甘氨酸对形成潜在的脱酰胺位点。在另一个实例中，可切割本发明的EFNA4抗体的重链的C末端赖氨酸。在本发明的不同方面，EFNA4抗体的重链和轻链可任选地包括信号序列。一旦获得编码本发明的VH和VL区段的DNA片段，就可通过标准重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如以将可变区基因转变成全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，将编码VL或VH的DNA片段可操作地连接于另一个编码另一种蛋白质诸如抗体恒定区或柔性接头的DNA片段。术语\可操作地连接的\，如本说明书中所用，旨在意指连接两个DNA片段以使得由所述两个DNA片段编码的氨基酸序列保持在框内。可通过将编码VH的DNA可操作地连接至编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一个DNA分子来将编码VH区的分离的DNA转变成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列在本领域中是已知的(参见例如，Kabat,E.A.,等，1991,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)，并且包含这些区域的DNA片段可通过标准PCR扩增来获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但最优选为IgG1或IgG2恒定区。IgG恒定区序列可以是已知存在于不同个体之间的各种等位基因或同种异型的任一种，诸如Gm(1)、Gm(2)、Gm(3)和Gm(17)。这些同种异型代表IgG1恒定区中的天然存在的氨基酸取代。对于Fab片段重链基因，可将编码VH的DNA可操作地连接至只编码重链CH1恒定区的另一个DNA分子。CH1重链恒定区可来源于重链基因的任一种。可通过将编码VL的DNA可操作地连接至编码轻链恒定区CL的另一个DNA分子来将编码VL区的分离的DNA转变成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列在本领域中是已知的(参见例如，Kabat,E.A.,等，1991,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)，并且包含这些区域的DNA片段可通过标准PCR扩增来获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。κ恒定区可以是已知存在于不同个体之间的各种等位基因的任一种，诸如Inv(1)、Inv(2)和Inv(3)。λ恒定区可来源于3种λ基因的任一种。为了产生scFv基因，将VH-编码和VL-编码DNA片段可操作地连接于另一个编码柔性接头的片段，以使得VH和VL序列可被表达为连续单链蛋白质，其中VL和VH区通过该柔性接头连接(参见例如，Bird等，1988,Science242:423-426；Huston等，1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883；McCafferty等，1990,Nature348:552-554。如果只使用单个VH和VL，则该单链抗体可以是单价的，如果使用两个VH和VL，则其可以是双价的，如果使用超过两个VH和VL，则其可以是多价的。可产生特异性结合EFNA4和另一种分子的双特异性或多价抗体。在本发明的另一个方面，可制造包括连接于另一个多肽的本发明的EFNA4抗体的全部或部分的融合抗体或免疫粘附素。在另一个方面，仅将EFNA4抗体的可变结构域连接于多肽。在另一个方面，将EFNA4抗体的VH结构域连接于第一多肽，而EFNA4抗体的VL结构域连接于第二多肽，所述第二多肽以使得VH与VL结构域可彼此相互作用以形成抗原结合部位的方式与第一多肽缔合。在另一个方面，通过接头将VH结构域与VL结构域分开，以使得VH与VL结构域可彼此相互作用。随后将VH-接头-VL抗体连接于目标多肽。另外，可产生其中两个(或更多个)单链抗体彼此连接的融合抗体。如果想要在单条多肽链上产生二价或多价抗体，或者如果想要产生双特异性抗体，这是有用的。其它经修饰的抗体可使用编码EFNA4抗体的核酸分子来制备。例如，“κ体”(Ill等，ProteinEng.10:949-57,1997)、“微型抗体”(Martin等，EMBOJ.,13:5303-9,1994)、“双抗体”(Holliger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448,1993)或“Janusin”(Traunecker等，EMBOJ.10:3655-3659,1991和Traunecker等，Int.J.Cancer(Suppl.)7:51-52,1992)可按照本说明书的教导，使用标准分子生物学技术来制备。双特异性抗体或抗原结合片段可通过多种方法(包括杂交瘤的融合或Fab’片段的连接)来产生。参见，例如，Songsivilai&Lachmann,Clin.Exp.Immunol.79:315-321,1990,Kostelny等，J.Immunol.148:1547-1553,1992。另外，双特异性抗体可被形成为“双抗体”或“Janusin”。在本发明的一些方面，双特异性抗体结合EFNA4的两个不同表位。在其它方面，上述经修饰的抗体使用一个或多个来自本文中提供的EFNA4抗体的可变结构域或CDR区来制备。为了用于制备抗体-药物缀合物，本文所述的EFNA4抗体可以是基本上纯的，即，至少50％的纯度(即，不含污染物)，更优选，至少90％的纯度，更优选，至少95％的纯度，更优选，至少98％的纯度，最优选，至少99％的纯度。表2提供了本发明的人源化抗-EFNA4抗体的氨基酸(蛋白质)序列和相关核酸(DNA)序列。huE5VH、huE5VL、huE15VH和huE15VL的CDR(如按照Kabat定义的)被加以下划线。huE22VH、huE22VL、huE47VH和huE47VL的CDR(如按照Kabat和Chothia定义的)是作为分开的序列示出的。表2.人源化抗-EFNA4抗体的序列II.B.接头本发明的抗-EFNA4抗体-药物缀合物可使用接头将药物连接或缀合于抗-EFNA4抗体来制备。在本发明的特定方面，本发明的EFNA4抗体-药物缀合物的接头包括，但不限于，4-(4'乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)。接头分子可以是稳定的(不可切割的)或可水解的(可切割的)，由此其在进入细胞后被释放。从抗体切割药物的主要机制包括在溶酶体的酸性pH中的水解(腙类、缩醛和顺-乌头酸酯-样酰胺类)、通过溶酶体酶(组织蛋白酶类和其它溶酶体酶)的肽切割以及二硫化物的还原。作为这些用于切割的多样机制的结果，将药物连接至抗体的机制也广泛变化并且可使用任何合适的接头。合适的缀合方法的实例依赖于酰肼类和其它亲核物质与通过天然存在于抗体上的糖类的氧化产生的醛类的缀合。可用引入的提供所需药物-释放性质的羰基产生含腙缀合物。还可用在一个末端具有二硫化物、中间具有烷基链以及在另一个末端具有肼衍生物的接头产生缀合物。蒽环类是可使用该技术缀合至抗体的细胞毒素的一个实例。含除腙类外的官能团的接头具有在溶酶体的酸性环境中被切割的潜能。例如，可从含有除腙外的在细胞内可被切割的位点诸如酯、酰胺和缩醛/缩酮的硫醇反应性接头产生缀合物。喜树碱是可使用这些接头缀合的一种细胞毒性剂。还可使用从5至7-元环酮产生的并且具有一个氧附接于细胞毒性剂且另一个氧附接于用于抗体附接的接头的缩酮。蒽环类也是与这些接头一起使用的适合的细胞毒素的实例。pH敏感性接头的种类的另一个实例是顺-乌头酸酯，其具有与酰胺键并置的羧酸。羧酸在酸性溶酶体中加速酰胺水解。还可使用利用几种其它类型的结构实现相似类型的水解速率加速的接头。美登木素生物碱是可用在C-9上附接的接头缀合的细胞毒素的实例。用于药物缀合物的另一个潜在释放法是通过溶酶体酶的肽的酶促水解。在一个实例中，肽经由酰胺键附接至对-氨基苄醇，随后在苄醇与细胞毒性剂之间产生氨基甲酸酯或碳酸酯。肽的切割导致氨基苄氨基甲酸酯或碳酸酯的崩解或自我牺牲(self-immolation)。以该策略为例的细胞毒性剂包括蒽环类、紫杉烷类、丝裂霉素C和阿里他汀。在一个实例中，苯酚还可通过接头而非氨基甲酸酯的崩解而释放。在另一种变化中，将二硫化物还原用于启动对-巯基苄氨基甲酸酯或碳酸酯的崩解。许多缀合于抗体的细胞毒性剂在水中具有极低的(如果有的话)溶解度，并且这可因缀合物的聚集而限制缀合物上的药物载荷。一种克服该问题的方法是将增溶基团添加至接头。可使用利用由PEG和二肽组成的接头产生的缀合物，包括具有附接至抗体的PEG-二酸、硫醇酸或马来酰亚胺-酸、二肽间隔物以及与蒽环类或多卡米星类似物的胺形成的酰胺键的那些。另一个例子是利用二硫键合至细胞毒性剂和酰胺键合至抗体的含PEG的接头制备的缀合物。掺入PEG基团的方法在克服凝聚和药物载荷的限制中有是益的。在本发明的一些方面，用于制备本发明的抗体-药物缀合物的接头包括具有式：(CO-Alk1-Sp1-Ar-Sp2-Alk2-C(Z1)＝Q-Sp)的接头其中Alk1和Alk2独立地为键或分枝的或不分枝的(C1-C10)烯烃链；Sp1为键，—S—、—O—、—CONH—、—NHCO—、—NR′—、—N(CH2CH2)2N—、或—X—Ar′—Y—(CH2)n—Z，其中X、Y和Z独立地为键，—NR′—、—S—或—O—，前提是当n＝0时，则Y和Z的至少一个必须是键并且Ar′为任选地被(C1-C5)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)硫代烷氧基、卤素、硝基、—COOR′、—CONHR′、—(CH2)nCOOR′、—S(CH2)nCOOR′、—O(CH2)nCONHR′或—S(CH2)nCONHR′的1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，前提是当Alk′为键时，Sp1为键；n为0至5的整数；R′为任选地被—OH、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)硫代烷氧基、卤素、硝基、(C1-C3)二烷基氨基或(C1-C3)三烷基铵-A-的一个或两个基团取代的分枝的或不分枝的(C1-C5)链，其中A-为完成盐的药学上可接受的阴离子；Ar为任选地被(C1-C6)烷基、(C1-C5)烷氧基、(C1-C4)硫代烷氧基、卤素、硝基、—COOR′、—CONHR′、—O(CH2)nCOOR′、—S(CH2)nCOOR′、—O(CH2)nCONHR′或—S(CH2)nCONHR′的1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，其中n和R′是如上文中定义的或为1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基或每一个亚萘基或吩噻嗪任选地被类(C1-C6)烷基、(C1-C5)烷氧基、(C1-C4)硫代烷氧基、卤素、硝基、—COOR′、—CONHR′、—O(CH2)nCOOR′、—S(CH2)nCOOR′或—S(CH2)nCONHR′的1、2、3或4个基团取代，其中n和R′是如上文中定义的，前提是当Ar为吩噻嗪时，Sp1为只连接于氮的键；Sp2为键，—S—或—O—，前提是当Alk2为键时，Sp2为键，Z1为H、(C1-C5)烷基或任选地被(C1-C5)烷基、(C1-C5)烷氧基、(C1-C4)硫代烷氧基、卤素、硝基、—COOR′、—ONHR′、—O(CH2)nCOOR′、—S(CH2)nCOOR′、—O(CH2)nCONHR′或—S(CH2)nCONHR′的1、2或3个基团取代的苯基，其中n和R′是如上文中定义的；Sp为直链或支链二价或三价(C1-C18)基、二价或三价芳基或杂芳基、二价或三价(C3-C18)环烷基或杂环烷基、二价或三价芳基-或杂芳基-芳基(C1-C18)基、二价或三价环烷基-或杂环烷基-烷基(C1-C18)基或二价或三价(C2-C18)未饱和的烷基，其中杂芳基优选为呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、噁唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-methylcarbazoyl、aminocourmarinyl或吩嗪基，并且其中如果Sp为三价基团，则Sp可另外被低级(C1-C5)二烷基氨基、低级(C1-C5)烷氧基、羟基或低级(C1-C5)烷硫基取代；以及Q为＝NHNCO—、＝NHNCS—、＝NHNCONH—、＝NHNCSNH—或＝NHO—。优选地，Alk1为分枝的或不分枝的(C1-C10)烯烃链；Sp′为键，—S—、—O—、—CONH—、—NHCO—、或—NR′，其中R′是如上文中定义的，前提是当Alk′为键时，Sp1为键；Ar为任选地被(C1-C6)烷基、(C1-C5)烷氧基,(C1-C4)硫代烷氧基、卤素、硝基、—COOR′、—CONHR′、—O(CH2)nCOOR′、—S(CH2)nCOOR′、—O(CH2)nCONHR′,或—S(CH2)nCONHR′的1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，其中n和R′是如上文中定义的，或Ar为各自任选地被(C1-C6)烷基、(C1-C5)烷氧基、(C1-C4)硫代烷氧基、卤素、硝基、—COOR′、—CONHR′、—O(CH2)nCOOR′、—S(CH2)nCOOR′、—O(CH2)nCONHR′或—S(CH2)nCONHR′的1、2、3或4个基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基。Z1为(C1-C5)烷基或任选地被(C1-C5)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)硫代烷氧基、卤素、硝基、—COOR′、—CONHR′、—O(CH2)nCOOR′、—S(CH2)nCOOR′、—O(CH2)nCONHR′或—S(CH2)nCONHR′的1、2或3个基团取代的苯基；Alk2和Sp2一起为键；并且Sp和Q是如上文中刚刚定义的。美国专利No.5,773,001(其通过引用整体并入本文)公开了可与从加里刹霉素制备的亲核药物尤其是酰肼类和相关亲核物质一起使用的接头。这些接头在其中当在药物与接头之间形成的键联是可水解时获得更好的活性的那些情况下尤其有用。这些接头含有两个官能团，包括(1)用于与抗体反应的基团(例如，羧酸)和(2)用于与药物反应的羰基(例如，醛或酮)。羰基可与药物上的酰肼基团反应以形成腙键联。该键联是可水解切割，从而允许在与靶细胞结合后治疗剂从缀合物释放。在本发明的一些方面，所使用的可水解的接头是4-(4-乙酰基苯氧基)丁酸(AcBut)。在本发明的其它方面，可使用(3-乙酰基苯基)乙酸(AcPAc)或4-巯基-4-甲基-戊酸(Amide)作为接头分子来制备抗体-药物缀合物。N-羟基琥珀酰亚胺(OSu)酯或其它可比较地活化的酯可用于产生活化的可水解的接头-药物部分。其它合适的活化酯的实例包括NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)、磺基-NHS(磺化的NHS)、PFP(五氟苯基)、TFP(四氟苯基)和DNP(二硝基苯基)。在本发明的一些方面，通过使加里刹霉素或其衍生物、AcBut接头和本发明的抗-EFNA4抗体反应来制备抗体-药物缀合物。参见例如，美国专利No.5,773,001。AcBut接头产生在循环中基本上稳定的缀合物，所述缀合物当在37℃于体外在人血浆中测定时释放据估计2％的加里刹霉素/天。所述缀合物在酸性溶酶体中释放加里刹霉素。在本发明的一些方面，可使用本领域中诸如PCT国际公开No.WO08/147765和美国专利No.8,273,862(所述国际公开和美国专利通过引用整体并入本文)中描述的方法和流程来产生AcBut-CM部分。在本发明的一些方面，可使用如美国临时申请No.61/899,682(其通过引用整体并入本文)中描述的改进的合成法来产生AcBut-CM部分。如下描述了用于合成接头中间物(化合物10)的方法：方案1在方案1中，将化合物1与化合物2在2-甲基四氢呋喃(2-MeTHF)和四丁基氟化铵(Bu4NF)中反应。添加水中的氯化钙二水合物的溶液，在搅拌后除去下部的水相。向上部的有机相中添加甲醇和水中的3个当量的NaOH。搅拌反应混合物直至观察到中间酯3的完全消耗。使反应物冷却至15℃，添加2-甲基四氢呋喃，随后添加水。缓慢地添加浓HCl，将反应维持在15-30℃的范围内。从有机层产生酸4。方案2在方案2中，用适当的有机溶液诸如四氢呋喃(THF)和唑类活化剂诸如羰基二咪唑(CDI)使化合物4带电荷，从而形成中间物5。可使用其它唑类活化剂，例如硫代羰基二咪唑；羰基双-吡唑，其中吡唑任选地被1至3个(C1-C6)烷基取代；羰基双-1,2,3-三唑；羰基双-苯并三唑，和羰基双-1,2,4-三唑，其从而可形成类似于化合物5但包含除咪唑基外的不同唑类部分的中间化合物。将中间物5与肼(优选肼的含水来源诸如肼一水合物)反应，产生中间物6。在PCT国际公开No.WO08/147765(其通过引用整体并入本文)中描述了中间物6。方案3在方案3中，将中间物6与中间物7在惰性(非反应性)溶剂(诸如甲醇(MeOH))中反应，任选地利用酸催化剂(诸如乙酸(HOAc))，以产生中间物8。方案4anisole：茴香醚在方案4中，通过任选地在加热下使用强酸，诸如在加热下使用三氟乙酸(TFA)，对中间物8进行脱保护，以形成中间物9。可使用其它强酸例如硫酸来替代三氟乙酸。方案5在方案5中，将中间物9转变成接头中间物10。可如本领域中，诸如美国专利8,273,862(其通过引用整体并入本文)中所述，将中间物9转变成接头中间物10。然而，优选地，如方案5中所述，在惰性溶剂诸如四氢呋喃存在的情况下，将中间物9与叔胺碱诸如三乙胺(TEA)和与三甲基乙基氯化物(PivCl)反应。随后，引入N-羟基琥珀酰亚胺(OSu)以提供接头中间物10。本文中上述的用于合成接头中间物10的方法提供了优于PCT国际公开No.WO08/147765和美国专利No.8,273,862中描述的那些方法的改进，因为本文中上述的方法避免使用二氯甲烷和与此采取的安全措施，并且提供了更好的接头中间物10的产率。在接头中间物10合成后，可如现有技术中，例如美国专利No.8,273,862中所述，将接头中间物10缀合至加里刹霉素分子。然而，优选地，在碳二亚胺存在的情况下将接头中间物10与加里刹霉素组合，这提高了所得的加里刹霉素衍生物的产率。可使用的碳二亚胺的实例包括，但不限于，1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)；N,N’-二环已基碳二亚胺(DCC)；N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)；N-环已基-N’-(2-吗啉乙基)碳二亚胺；N-环已基-N’-[2-(4-甲基吗啉-4-ium-4-基)乙基]碳二亚胺甲苯磺酸盐；N-环已基-N’-[4-(二乙基甲基铵基)环已基]碳二亚胺甲苯磺酸盐；N,N’-双(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基]碳二亚胺；和N-苄基-N’-异丙基碳二亚胺。可在与单克隆抗体(例如抗-EFNA4抗体)反应之前纯化和分离由接头中间物10至加里刹霉素的缀合产生的加里刹霉素衍生物。可如先前在美国专利No.8,273,862中所描述的，进行纯化和分离。或可以通过使用反相高效液相色谱纯化方案进行纯化。用于10的纯化的反相高效液相色谱纯化方案可包括利用包含含水和有机混合物的相的洗脱，所述相在约4至约6的pH的范围内。例如，由55％20mM乙酸钠，pH5和45％乙腈组成的流动相是可用于反相高效液相色谱纯化的含水/有机流动相。可在利用反相高效液相色谱纯化方案的纯化之后进行固相萃取方案。在本发明的其它方面，接头可以是二肽接头，诸如缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)、苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)接头或马来酰亚胺己酸酰-缬氨酸-瓜氨酸-对-氨基苄氧羰基(vc)接头。在另一个方面，接头是磺基琥珀酰亚胺-4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧酸酯(smcc)。磺基-smcc缀合通过马来酰亚胺基团发生，所述马来酰亚胺基团与巯基(硫醇，-SH)反应，同时其磺基-NHS酯具有朝向伯胺(如在赖氨酸和蛋白质或肽N端中发现的)的反应性。另外，接头可以是马来酰亚胺己酰基(mc)。可用于放射性同位素的缀合的代表性接头包括二亚乙基三胺五乙酸酯(DTPA)-异硫氰酸酯、琥珀酰亚胺基-6-肼基烟酸酯盐酸盐(SHNH)，和六甲基丙烯胺肟(HMPAO)(Bakker等(1990)J.Nucl.Med.31:1501-1509,Chattopadhyay等(2001)Nucl.Med.Biol.28:741-744,Dewanjee等(1994)J.Nucl.Med.35:1054-63,Krenning等(1989)Lancet1:242-244,Sagiuchi等(2001)Ann.Nucl.Med.15:267-270)；美国专利No.6,024,938)。或者，可衍生靶向分子，以使得放射性同位素可直接结合于其(Yoo等(1997)J.Nucl.Med.38:294-300)。碘化法在本领域中也是已知的，并且代表性方案可见于例如Krenning等(1989)Lancet1:242-244和Bakker等(1990)J.Nucl.Med.31:1501-1509中。II.C.药物可用于公开的EFNA4抗体-药物缀合物的制剂的药物包括任何具有生物活性或可检测活性的物质，例如，治疗剂、可检测标记物、结合剂等，和前药，所述前药在体内可被代谢成活性剂。药物还可以是药物衍生物，其中药物已被官能化来使得能够与本发明的抗体缀合。按照公开的方法，将药物用于制备式Ab-(L-D)的抗体-药物缀合物，其中(a)Ab为结合EFNA4的抗体或其抗原结合片段，以及(b)L-D为接头-药物部分，其中L为接头，D为药物。药物对抗体的比率(DAR)或药物载荷(表示每抗体缀合的药物(D)分子的数目)可为DAR1至12。因此，在本发明的方面，EFNA4抗体-药物缀合物可具有为1的DAR、为2的DAR、为3的DAR、为4的DAR、为5的DAR、为6的DAR、为7的DAR、为8的DAR、为9的DAR、为10的DAR、为11的DAR、或为12的DAR。因此，在本发明的方面，EFNA4抗体-药物缀合物可包括一个药物分子，或2个药物分子，或3个药物分子，或4个药物分子，或5个药物分子，或6个药物分子，或7个药物分子，或8个药物分子，或9个药物分子，或10个药物分子，或11个药物分子，或12个药物分子。DAR可通过各种常规方法诸如UV光谱学、质谱法、ELISA测定、放射测量法、疏水相互作用层析(HIC)、电泳和HPLC来测定。式Ab-(L-D)的抗体-药物缀合物(ADC)的组合物、批次和/或制剂可包括多个缀合有不同数目的药物分子(从DAR1至12)的抗体。在本发明的特定方面，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征可在于在约1至约12的范围内的平均DAR，例如在约2至约4的范围内的平均DAR，或在约3至约5的范围内的平均DAR，或在约4至约6的范围内的平均DAR，或在约5至约7的范围内的平均DAR，或在约6至约8的范围内的平均DAR，或在约7至约9的范围内的平均DAR，或在约8至约10的范围内的平均DAR，在约9至约11的范围内的平均DAR。在一些实话方案中，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂可具有约1的平均DAR，或约2的平均DAR，或约3的平均DAR，或约4的平均DAR，或约5的平均DAR，或约6的平均DAR，或约7的平均DAR，或约8的平均DAR，或约9的平均DAR，或约10的平均DAR，或约11的平均DAR。如在前述平均平均DAR的范围内中使用的，术语“约”意指+/-0.5％。此外，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征可在于优选范围的平均DAR，例如在约3至约5的范围内的平均DAR，约3至约4的范围内的平均DAR，或约4至约5的范围内的平均DAR。另外，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征可在于优选范围的平均DAR，例如在3至5的范围内的平均DAR，在3至4的范围内的平均DAR，或在4至5的范围内的平均DAR。在本发明的一些方面，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征可在于约3.0的平均DAR，或3.0的平均DAR，或3.1的平均DAR，或3.2的平均DAR，或3.3的平均DAR，或3.4的平均DAR，或3.5的平均DAR，或3.6的平均DAR，或3.7的平均DAR，或3.8的平均DAR，或3.9的平均DAR。在本发明的另一个方面，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征可在于约4.0的平均DAR，或4.0的平均DAR，或4.1的平均DAR，或4.2的平均DAR，或4.3的平均DAR，或4.4的平均DAR，或4.5的平均DAR，或4.6的平均DAR，或4.7的平均DAR，或4.8的平均DAR，或4.9的平均DAR，或5.0的平均DAR。在本发明的另一个方面，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征在于12或更少的平均DAR，11或更少的平均DAR，10或更少的平均DAR，9或更少的平均DAR，8或更少的平均DAR，7或更少的平均DAR，6或更少的平均DAR，5或更少的平均DAR，4或更少的平均DAR，3或更少的平均DAR，2或更少的平均DAR，1或更少的平均DAR。在本发明的其它方面，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征在于11.5或更少的平均DAR，10.5或更少的平均DAR，9.5或更少的平均DAR，8.5或更少的平均DAR，7.5或更少的平均DAR，6.5或更少的平均DAR，5.5或更少的平均DAR，4.5或更少的平均DAR，3.5或更少的平均DAR，2.5或更少的平均DAR，1.5或更少的平均DAR。式Ab-(L-D)的ADC的组合物、批次和/或制剂的特征在于DAR分布。DAR分布提供了可存在于ADC的组合物、批次和/或制剂中的各种ADC种类DAR1至12的百分比或分数。ADC的组合物、批次和/或制剂中的DAR分布可通过本领域已知的方法诸如毛细管等电聚焦(cIEF)来测定。在本发明的一个方面，式Ab-(L-D)的ADC的组合物、批次和/或制剂中的DAR分布的特征在于具有宽DAR分布的ADC的高度异质的混合物(通常含有宽范围的具有DAR1至12的ADC种类)。在本发明的另一个方面，ADC的组合物、批次和/或制剂中的DAR分布的特征在于具有窄DAR范围的高度同质的混合物(通常含有窄范围的具有特定DAR，诸如DAR3至5的ADC种类)。在本发明的特定方面，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂中的DAR分布的特征在于具有至少50％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少55％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少60％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少65％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少70％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少75％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少80％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少85％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少90％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或至少95％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物。在本发明的另一个方面，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征在于具有50％至60％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或60％至70％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或70％至80％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或80％至90％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物，或90％至100％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物。在本发明的另一个方面，抗体-药物缀合物的组合物、批次和/或制剂的特征在于具有约50％，或约55％，或约60％，或约65％，或约70％，或约75％，或约80％，或约85％，或约90％，或约95％，或约100％的具有3至5的DAR的抗体-药物缀合物。例如，治疗剂为对癌细胞或活化的免疫细胞产生细胞毒性、细胞生长抑制和/或免疫调节作用的试剂。治疗剂的实例包括细胞毒性剂、化疗剂、细胞抑制剂和免疫调节剂。化疗剂是用于癌症治疗的化合物。治疗剂是可用于治疗或预防有此需要的受试者的病症的组合物。在本发明中有用的治疗剂包括抗癌剂，即，在表达EFNA4的细胞(诸如来自三阴性乳腺癌(TNBC)；卵巢癌；大肠癌；白血病，诸如慢性淋巴细胞白血病(CLL)；肝癌，诸如肝细胞癌(HCC)；和肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)的细胞)中具有抗癌活性的试剂。代表性治疗剂包括细胞毒素、细胞毒性剂和细胞抑制剂。细胞毒效应是指靶细胞的耗尽、消除和/或杀伤。细胞毒性剂是指对细胞具有细胞毒性和/或细胞生长抑制用的试剂。细胞抑制效应是指细胞增殖的抑制。细胞抑制剂是指具有对细胞的细胞生长抑制效应，从而抑制特定亚组的细胞的生长和/或扩增的试剂。另外的代表性治疗剂包括放射性同位素、化疗剂、免疫调节剂、抗-血管生成剂、抗-增殖剂、促凋亡剂和溶细胞酶(例如，RNA酶)。试剂还可包括治疗性核酸，诸如编码免疫调节剂、抗-血管生成剂、抗-增殖剂或促凋亡剂的基因。这些药物的描述符并不是相互排斥的，因而治疗剂可使用一个或多个上面提及的术语进行说明。例如，选择的放射性同位素也是细胞毒素。治疗剂可作为任何上述试剂的药学上可接受的盐、酸或衍生物来制备。一般地，以放射性同位素作为药物的缀合物被称为放射免疫缀合物和以化疗剂作为药物的那些缀合物被称为化学免疫缀合物。细胞毒性剂的实例包括，但不限于蒽环类、阿里他汀、CC-1065、多拉司他汀、多卡米星、烯二炔、格尔德霉素、美登素、嘌呤霉素、紫杉烷、长春花生物碱，SN-38、tubulysin、哈米特灵以及其立体异构体、等排物、类似物或衍生物。还可使用植物毒素、其它生物活性蛋白、酶(即，ADEPT)、放射性同位素、光敏剂(即，用于光动力学疗法)。所述蒽环类来源于细菌链霉菌属(Strepomyces)并且已被用于治疗多种癌症，诸如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌和肺癌。示例性蒽环类包括但不限于柔红霉素、多柔比星(即，多柔比星)、表柔比星、伊达比星、戊柔比星和米托蒽醌。多拉司他汀及其肽类似物和衍生物，阿里他汀类，是已显示具有抗癌和抗真菌活性的高度有效的抗有丝分裂剂。见，例如，美国专利No.5,663,149和Pettit等，Antimicrob.AgentsChemother.42:2961-2965,(1998)。示例性多拉司他汀类和阿里他汀类包括，但不限于，多拉司他汀10、阿里他汀E、阿里他汀EB(AEB)、阿里他汀EFP(AEFP)、MMAD(单甲基阿里他汀D或单甲基多拉司他汀10)、MMAF(单甲基阿里他汀F或N-甲基缬氨酸-缬氨酸–多拉异亮氨酸-多拉脯氨酸-苯丙氨酸)、MMAE(单甲基阿里他汀E或N-二甲基缬氨酸-缬氨酸-多拉异亮氨酸-多拉脯氨酸-去甲麻黄碱)、5-苯甲酰戊酸-AE酯(AEVB)以及其它新型治疗剂。在本发明的一些方面，本文中使用PCT国际公开No.WO2013/072813(其通过引用整体并入本文)中描述的阿里他汀类和用于生产这些阿里他汀类的方法。例如，阿里他汀0101，(2-甲基丙氨酰-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]氨基