糖代谢改善剂的制作方法

本发明涉及糖代谢改善剂。进一步详细而言，涉及有效成分为以氨基酸作为组成单元的环状二肽的糖代谢改善剂、以该环状二肽作为有效成分的GLP-1分泌促进剂以及该环状二肽的改善糖代谢的应用。

背景技术：

两个氨基酸键合的“二肽”作为功能性物质而备受关注。期待二肽可附加单体氨基酸所没有的物理性质、新功能，从而具有超出氨基酸的应用范围。其中，已知作为环状二肽的二酮哌嗪具有各种各样的生理活性，预想其在医疗·药理领域中的需求将扩大。

例如，专利文献1报道了具有2，5-二酮哌嗪结构的环状二肽具有抗抑郁作用、学习积极性改善作用等。另外，非专利文献1记载了环状二肽Cyclo(His-Pro)显示降低体温、抑制食欲等的中枢神经系统作用，抑制催乳素分泌、促进生长激素分泌等的激素样作用等多种生理活性，报道了环状二肽Cyclo(Leu-Gly)显示记忆功能改善作用，环状二肽Cyclo(Asp-Pro)显示脂肪嗜好性抑制作用。非专利文献2报道了具有抗菌作用、抗氧化作用的环状二肽。

另外，非专利文献3记载了环状二肽Cyclo(Trp-Pro)具有抗癌作用，环状二肽Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Gly-Pro)具有抗菌作用，环状二肽Cyclo(His-Pro)具有神经保护作用，环状二肽Cyclo(Gly-Pro)具有记忆功能改善作用，环状二肽Cyclo(Tyr-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)具有作为生物性除草剂的作用。另外，报道了将酵母混悬液进行蛋白酶处理所得到的环状二肽的一种环组氨酰脯氨酸Cyclo(His-Pro)使耐糖性增加，且Cyclo(His-Pro)具有抗氧化活性(非专利文献4)。

作为节食激素已知的胰高血糖素样肽(GLP-1)为由30个或31个氨基酸构成的肠促胰岛素(incretin)，其应答来自饮食的脂肪、碳水化合物摄取、及蛋白质而由肠内分泌L细胞释放。发现该肽激素的释放在2型糖尿病的个体中降低，认为在2型糖尿病中促进GLP-1的释放对于糖尿病及其他相关疾病的治疗有效(非专利文献5)。另外，还已知GLP-1具有如下功能：在正常状态下，应答碳水化合物摄取(葡萄糖摄取)而使胰岛素的分泌增加，在脑的特定区域发挥作用从而抑制食欲(非专利文献6)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2012-517998号公报

非特許文献

非专利文献1：Peptides、16(1)、151-164(1995)

非专利文献2：Bioscience&industry,60(7),454-457(2002)

非专利文献3：Chemical Reviews、112、3641-3716(2012)

非专利文献4：J of Food Science,vol76(2)2011

非专利文献5：Nauck等，1993J Clin Invest.1993Jan；91(1):301-7.

非专利文献6：Zander等，2002Lancet,359,824-830(2002)

技术实现要素：

关于环状二肽，虽然也有具有生理活性的报道，但认为未阐明的功能依然还很多。

本发明的课题在于提供安全且具有优异的糖代谢改善作用的糖代谢改善剂，以及在于提供安全且具有优异的GLP-1分泌促进作用的GLP-1分泌促进剂。

本发明者对环状二肽的作用进行了深入研究，结果发现某种特定的环状二肽具有显著的糖代谢改善作用。进一步还发现该特定的环状二肽的糖代谢改善作用源自GLP-1的分泌促进作用，从而完成了本发明。即，本发明在于提供以下内容：

1)一种糖代谢改善剂，有效成分为以氨基酸作为组成单元的环状二肽或其盐，其特征在于，

所述环状二肽或其盐为选自由环苏氨酰酪氨酸、环缬氨酰酪氨酸、环谷氨酰胺酰酪氨酸、环天冬酰异亮氨酸、环精氨酰脯氨酸、环天冬酰甘氨酸、环蛋氨酰缬氨酸、环谷氨酰半胱氨酸、环丝氨酰谷氨酸、环异亮氨酰赖氨酸、环谷氨酰胺酰亮氨酸、环异亮氨酰苏氨酸、环苏氨酰苏氨酸、环蛋氨酰苏氨酸、环丙氨酰半胱氨酸、环甘氨酰半胱氨酸、环天冬氨酰丝氨酸、环精氨酰天冬氨酸、环甘氨酰色氨酸、环组氨酰苯丙氨酸、环天冬氨酰亮氨酸、环异亮氨酰组氨酸、环丝氨酰亮氨酸、环异亮氨酰天冬氨酸、环丝氨酰半胱氨酸、环苯丙氨酰色氨酸、环丙氨酰亮氨酸、环谷氨酰胺酰组氨酸、环精氨酰缬氨酸、环谷氨酰亮氨酸、环亮氨酰色氨酸、环色氨酰色氨酸、环L-丙氨酰脯氨酸、环蛋氨酰精氨酸、环赖氨酰苯丙氨酸、环苯丙氨酰苯丙氨酸、环色氨酰酪氨酸、环天冬酰缬氨酸、环谷氨酰胺酰异亮氨酸、环丙氨酰丝氨酸、环蛋氨酰组氨酸、环蛋氨酰脯氨酸、环精氨酰亮氨酸、环蛋氨酰谷氨酸、环蛋氨酰丙氨酸、环异亮氨酰谷氨酸、环异亮氨酰丝氨酸、环缬氨酰丝氨酸、环蛋氨酰甘氨酸、环缬氨酰苏氨酸、环缬氨酰天冬氨酸、环甘氨酰脯氨酸、环亮氨酰脯氨酸、环谷氨酰胺酰甘氨酸、环色氨酰赖氨酸、环谷氨酰胺酰苯丙氨酸、环赖氨酰甘氨酸、环丝氨酰赖氨酸、环缬氨酰赖氨酸、环天冬酰赖氨酸、环组氨酰组氨酸、环苏氨酰组氨酸、环天冬氨酰组氨酸、环天冬酰组氨酸、环精氨酰丝氨酸、环天冬酰蛋氨酸、环谷氨酰胺酰蛋氨酸、环色氨酰精氨酸、环天冬酰精氨酸、环天冬酰脯氨酸及环精氨酰精氨酸构成的组中的1个或2个以上的环状二肽或其盐。

2)根据1)所述的糖代谢改善剂，其特征在于，环状二肽或其盐为选自1)所述的组中的3个以上的环状二肽或其盐。

3.一种GLP-1分泌促进剂，有效成分为以氨基酸作为组成单元的环状二肽或其盐，其特征在于，

所述环状二肽或其盐为选自由环苏氨酰酪氨酸、环缬氨酰酪氨酸、环谷氨酰胺酰酪氨酸、环天冬酰异亮氨酸、环精氨酰脯氨酸、环天冬酰甘氨酸、环蛋氨酰缬氨酸、环谷氨酰半胱氨酸、环丝氨酰谷氨酸、环异亮氨酰赖氨酸、环谷氨酰胺酰亮氨酸、环异亮氨酰苏氨酸、环苏氨酰苏氨酸、环蛋氨酰苏氨酸、环丙氨酰半胱氨酸、环甘氨酰半胱氨酸、环天冬氨酰丝氨酸、环精氨酰天冬氨酸、环甘氨酰色氨酸、环组氨酰苯丙氨酸、环天冬氨酰亮氨酸、环异亮氨酰组氨酸、环丝氨酰亮氨酸、环异亮氨酰天冬氨酸、环丝氨酰半胱氨酸、环苯丙氨酰色氨酸、环丙氨酰亮氨酸、环谷氨酰胺酰组氨酸、环精氨酰缬氨酸、环谷氨酰亮氨酸、环亮氨酰色氨酸、环色氨酰色氨酸、环L-丙氨酰脯氨酸、环蛋氨酰精氨酸、环赖氨酰苯丙氨酸、环苯丙氨酰苯丙氨酸、环色氨酰酪氨酸、环天冬酰缬氨酸、环谷氨酰胺酰异亮氨酸、环丙氨酰丝氨酸、环蛋氨酰组氨酸、环蛋氨酰脯氨酸、环精氨酰亮氨酸、环蛋氨酰谷氨酸、环蛋氨酰丙氨酸、环异亮氨酰谷氨酸、环异亮氨酰丝氨酸、环缬氨酰丝氨酸、环蛋氨酰甘氨酸、环缬氨酰苏氨酸、及环缬氨酰天冬氨酸、环甘氨酰脯氨酸、环亮氨酰脯氨酸、环谷氨酰胺酰甘氨酸、环色氨酰赖氨酸、环谷氨酰胺酰苯丙氨酸、环赖氨酰甘氨酸、环丝氨酰赖氨酸、环缬氨酰赖氨酸、环天冬酰赖氨酸、环组氨酰组氨酸、环苏氨酰组氨酸、环天冬氨酰组氨酸、环天冬酰组氨酸、环精氨酰丝氨酸、环天冬酰蛋氨酸、环谷氨酰胺酰蛋氨酸、环色氨酰精氨酸、环天冬酰精氨酸、环天冬酰脯氨酸及环精氨酰精氨酸构成的组中的1个或2个以上的环状二肽或其盐。

4)根据3)所述的GLP-1分泌促进剂，其特征在于，环状二肽或其盐为选自3)所述的组中的3个以上的环状二肽或其盐。

5)根据1)～4)中任一项所述的GLP-1分泌促进剂，其特征在于，以氨基酸作为组成单元的环状二肽从大豆中得到。

6)根据1)～4)中任一项所述的GLP-1分泌促进剂，其特征在于，以氨基酸作为组成单元的环状二肽从茶中得到。

7)一种用于改善糖代谢的以氨基酸作为组成单元的环状二肽或其盐的应用，其特征在于，

所述环状二肽或其盐为选自由环苏氨酰酪氨酸、环缬氨酰酪氨酸、环谷氨酰胺酰酪氨酸、环天冬酰异亮氨酸、环精氨酰脯氨酸、环天冬酰甘氨酸、环蛋氨酰缬氨酸、环谷氨酰半胱氨酸、环丝氨酰谷氨酸、环异亮氨酰赖氨酸、环谷氨酰胺酰亮氨酸、环异亮氨酰苏氨酸、环苏氨酰苏氨酸、环蛋氨酰苏氨酸、环丙氨酰半胱氨酸、环甘氨酰半胱氨酸、环天冬氨酰丝氨酸、环精氨酰天冬氨酸、环甘氨酰色氨酸、环组氨酰苯丙氨酸、环天冬氨酰亮氨酸、环异亮氨酰组氨酸、环丝氨酰亮氨酸、环异亮氨酰天冬氨酸、环丝氨酰半胱氨酸、环苯丙氨酰色氨酸、环丙氨酰亮氨酸、环谷氨酰胺酰组氨酸、环精氨酰缬氨酸、环谷氨酰亮氨酸、环亮氨酰色氨酸、环色氨酰色氨酸、环L-丙氨酰脯氨酸、环蛋氨酰精氨酸、环赖氨酰苯丙氨酸、环苯丙氨酰苯丙氨酸、环色氨酰酪氨酸、环天冬酰缬氨酸、环谷氨酰胺酰异亮氨酸、环丙氨酰丝氨酸、环蛋氨酰组氨酸、环蛋氨酰脯氨酸、环精氨酰亮氨酸、环蛋氨酰谷氨酸、环蛋氨酰丙氨酸、环异亮氨酰谷氨酸、环异亮氨酰丝氨酸、环缬氨酰丝氨酸、环蛋氨酰甘氨酸、环缬氨酰苏氨酸、及环缬氨酰天冬氨酸、环甘氨酰脯氨酸、环亮氨酰脯氨酸、环谷氨酰胺酰甘氨酸、环色氨酰赖氨酸、环谷氨酰胺酰苯丙氨酸、环赖氨酰甘氨酸、环丝氨酰赖氨酸、环缬氨酰赖氨酸、环天冬酰赖氨酸、环组氨酰组氨酸、环苏氨酰组氨酸、环天冬氨酰组氨酸、环天冬酰组氨酸、环精氨酰丝氨酸、环天冬酰蛋氨酸、环谷氨酰胺酰蛋氨酸、环色氨酰精氨酸、环天冬酰精氨酸、环天冬酰脯氨酸及环精氨酰精氨酸构成的组中的1个或2个以上的环状二肽或其盐。

8)根据7)所述的应用，其特征在于，环状二肽或其盐为选自7)所述的组中的3个以上的环状二肽或其盐。

9)根据7)或8)所述的应用，其特征在于，以氨基酸作为组成单元的环状二肽从大豆中得到。

10)根据7)或8)所述的应用，其特征在于，以氨基酸作为组成单元的环状二肽从茶中得到。

本发明的糖代谢改善剂具有如下优点：在具有优异的糖代谢改善作用的同时还可安全且长期摄取。

附图说明

图1表示给予大豆肽热处理物后的血浆中活性型GLP-1量。

图2表示给予大豆肽热处理物及大豆肽后的糖负荷试验的结果。

图3表示给予茶肽热处理物后的糖负荷试验的结果。

具体实施方式

本发明的一个方式是有效成分为以氨基酸作为组成单元的环状二肽或其盐的糖代谢改善剂。且，在本说明书中，有时概括环状二肽或其盐而简称为环状二肽。

本发明的糖代谢改善剂的有效成分是选自由环苏氨酰酪氨酸〔Cyclo(Thr-Tyr)〕、环缬氨酰酪氨酸〔Cyclo(Val-Tyr)〕、环谷氨酰胺酰酪氨酸〔Cyclo(Gln-Tyr)〕、环天冬酰异亮氨酸〔Cyclo(Asn-Ile)〕、环精氨酰脯氨酸〔Cyclo(Arg-Pro)〕、环天冬酰甘氨酸〔Cyclo(Asn-Gly)〕、环蛋氨酰缬氨酸〔Cyclo(Met-Val)〕、环谷氨酰半胱氨酸〔Cyclo(Glu-Cys)〕、环丝氨酰谷氨酸〔Cyclo(Ser-Glu)〕、环异亮氨酰赖氨酸〔Cyclo(Ile-Lys)〕、环谷氨酰胺酰亮氨酸〔Cyclo(Gln-Leu)〕、环异亮氨酰苏氨酸〔Cyclo(Ile-Thr)〕、环苏氨酰苏氨酸〔Cyclo(Thr-Thr)〕、环蛋氨酰苏氨酸〔Cyclo(Met-Thr)〕、环丙氨酰半胱氨酸〔Cyclo(Ala-Cys)〕、环甘氨酰半胱氨酸〔Cyclo(Gly-Cys)〕、环天冬氨酰丝氨酸〔Cyclo(Asp-Ser)〕、环精氨酰天冬氨酸〔Cyclo(Arg-Asp)〕、环甘氨酰色氨酸〔Cyclo(Gly-Trp)〕、环组氨酰苯丙氨酸〔Cyclo(His-Phe)〕、环天冬氨酰亮氨酸〔Cyclo(Asp-Leu)〕、环异亮氨酰组氨酸〔Cyclo(Ile-His)〕、环丝氨酰亮氨酸〔Cyclo(Ser-Leu)〕、环异亮氨酰天冬氨酸〔Cyclo(Ile-Asp)〕、环丝氨酰半胱氨酸〔Cyclo(Ser-Cys)〕、环苯丙氨酰色氨酸〔Cyclo(Phe-Trp)〕、环丙氨酰亮氨酸〔Cyclo(Ala-Leu)〕、环谷氨酰胺酰组氨酸〔Cyclo(Gln-His)〕、环精氨酰缬氨酸〔Cyclo(Arg-Val)〕、环谷氨酰亮氨酸〔Cyclo(Glu-Leu)〕、环亮氨酰色氨酸〔Cyclo(Leu-Trp)〕、环色氨酰色氨酸〔Cyclo(Trp-Trp)〕、环L-丙氨酰脯氨酸〔Cyclo(L-Ala-Pro)〕、环蛋氨酰精氨酸〔Cyclo(Met-Arg)〕、环赖氨酰苯丙氨酸〔Cyclo(Lys-Phe)〕、环苯丙氨酰苯丙氨酸〔Cyclo(Phe-Phe)〕、环色氨酰酪氨酸〔Cyclo(Trp-Tyr)〕、环天冬酰缬氨酸〔Cyclo(Asn-Val)〕、环谷氨酰胺酰异亮氨酸〔Cyclo(Gln-Ile)〕、环丙氨酰丝氨酸〔Cyclo(Ala-Ser)〕、环蛋氨酰组氨酸〔Cyclo(Met-His)〕、环蛋氨酰脯氨酸〔Cyclo(Met-Pro)〕、环精氨酰亮氨酸〔Cyclo(Arg-Leu)〕、环蛋氨酰谷氨酸〔Cyclo(Met-Glu)〕、环蛋氨酰丙氨酸〔Cyclo(Met-Ala)〕、环异亮氨酰谷氨酸〔Cyclo(Ile-Glu)〕、环异亮氨酰丝氨酸〔Cyclo(Ile-Ser)〕、环缬氨酰丝氨酸〔Cyclo(Val-Ser)〕、环蛋氨酰甘氨酸〔Cyclo(Met-Gly)〕、环缬氨酰苏氨酸〔Cyclo(Val-Thr)〕、环缬氨酰天冬氨酸〔Cyclo(Val-Asp)〕、环甘氨酰脯氨酸〔Cyclo(Gly-Pro)〕、环亮氨酰脯氨酸〔Cyclo(Leu-Pro)〕、环谷氨酰胺酰甘氨酸〔Cyclo(Gln-Gly)〕、环色氨酰赖氨酸〔Cyclo(Trp-Lys)〕、环谷氨酰胺酰苯丙氨酸〔Cyclo(Gln-Phe)〕、环赖氨酰甘氨酸〔Cyclo(Lys-Gly)〕、环丝氨酰赖氨酸〔Cyclo(Ser-Lys)〕、环缬氨酰赖氨酸〔Cyclo(Val-Lys)〕、环天冬酰赖氨酸〔Cyclo(Asn-Lys)〕、环组氨酰组氨酸〔Cyclo(His-His)〕、环苏氨酰组氨酸〔Cyclo(Thr-His)〕、环天冬氨酰组氨酸〔Cyclo(Asp-His)〕、环天冬酰组氨酸〔Cyclo(Asn-His)〕、环精氨酰丝氨酸〔Cyclo(Arg-Ser)〕、环天冬酰蛋氨酸〔Cyclo(Asn-Met)〕、环谷氨酰胺酰蛋氨酸〔Cyclo(Gln-Met)〕、环色氨酰精氨酸〔Cyclo(Trp-Arg)〕、环天冬酰精氨酸〔Cyclo(Asn-Arg)〕、环天冬酰脯氨酸〔Cyclo(Asn-Pro)〕、及环精氨酰精氨酸〔Cyclo(Arg-Arg)〕构成的组A中的1个或2个以上的环状二肽或其盐。或者，有效成分是选自所述环状二肽或其盐中的3个以上的环状二肽或其盐。且，在本说明书中，只要环状二肽中的氨基酸构成相同，则它们的记载顺序任一个在先均可，例如，Cyclo(Trp-Tyr)与Cyclo(Tyr-Trp)为相同的环状二肽。

本发明的糖代谢改善剂只要含有所述71个环状二肽中的1个或2个以上的环状二肽或其盐作为有效成分即可。其中，从GLP-1分泌促进效果的观点出发，作为有效成分的环状二肽，优选至少含有选自由环苏氨酰酪氨酸、环缬氨酰酪氨酸、环谷氨酰胺酰酪氨酸、环天冬酰异亮氨酸、环精氨酰脯氨酸、环天冬酰甘氨酸、环蛋氨酰缬氨酸、环谷氨酰半胱氨酸、环丝氨酰谷氨酸、环异亮氨酰赖氨酸、环谷氨酰胺酰亮氨酸、环异亮氨酰苏氨酸、环苏氨酰苏氨酸、环蛋氨酰苏氨酸、环丙氨酰半胱氨酸、环甘氨酰半胱氨酸、环天冬氨酰丝氨酸、环精氨酰天冬氨酸、环甘氨酰色氨酸、环组氨酰苯丙氨酸、环天冬氨酰亮氨酸、环异亮氨酰组氨酸、环丝氨酰亮氨酸、环异亮氨酰天冬氨酸、环丝氨酰半胱氨酸、环苯丙氨酰色氨酸、环丙氨酰亮氨酸、环谷氨酰胺酰组氨酸、环精氨酰缬氨酸、环谷氨酰亮氨酸、环亮氨酰色氨酸、环色氨酰色氨酸、环L-丙氨酰脯氨酸、环蛋氨酰精氨酸、环赖氨酰苯丙氨酸、环苯丙氨酰苯丙氨酸、环色氨酰酪氨酸、环天冬酰缬氨酸及环谷氨酰胺酰异亮氨酸构成的组B中的1个或2个以上的环状二肽或其盐。更优选至少含有选自由环苏氨酰酪氨酸、环缬氨酰酪氨酸、环谷氨酰胺酰酪氨酸、环天冬酰异亮氨酸、环精氨酰脯氨酸、环天冬酰甘氨酸、环蛋氨酰缬氨酸、环谷氨酰半胱氨酸、环丝氨酰谷氨酸及环异亮氨酰赖氨酸构成的组C中的1个或2个以上的环状二肽或其盐。

构成本发明的环状二肽的2个氨基酸为氨基酸A、氨基酸B时，氨基酸A的羧基与氨基酸B的氨基脱水缩合，且具有氨基酸A的氨基与氨基酸B的羧基脱水缩合的结构。构成氨基酸的至少1个优选碱性氨基酸，进一步优选精氨酸，但并不限定于此。

由于本发明的糖代谢改善剂具有含有有效量的所述环状二肽或其盐的特征，据此能够促进GLP-1的分泌来改善糖代谢，故而可适合用于需要糖代谢的改善的疾病。作为这样的疾病，可列举糖尿病及肥胖症，对上述疾病的预防及治疗有效。

例如，本发明的糖代谢改善剂可附上用于高血糖或肥胖的预防及/或改善之意的标注来提供，对血糖值高的人、稍有些肥胖的人、有代谢综合症趋势的人等极为有用。

另外，本发明的一个方式是有效成分为以氨基酸作为组成单元的环状二肽或其盐的GLP-1分泌促进剂。关于上述糖代谢改善剂的大部分记载也适用于GLP-1分泌促进剂。

本发明的糖代谢改善剂只要包含能够发挥所述71个环状二肽中的1个或2个以上的环状二肽或其盐的功效的量即可。环状二肽或其盐的含量可根据公知的方法测定，例如，可供于LC-MS/MS进行测定。

在本说明书中，环状二肽的盐是指所述环状二肽在药理学上允许的任意的盐(包含无机盐及有机盐)，例如，可列举所述环状二肽的钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、有机酸盐(醋酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、草酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、丙酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、苦味酸盐、苯磺酸盐等)等。

本发明中所使用的环状二肽可根据该领域公知的方法来制备。例如，还可通过化学合成方法或酶法、微生物发酵法来制造，还可通过使直链肽进行脱水·环化反应来合成，还可根据日本特开2003-252896号公报、J.Peptide Sci.，10，737-737(2004)记载的方法来制备。例如，可适合地使用将通过酶处理、热处理所得到的大豆肽或茶肽进一步进行热处理所得到的处理物。即，在本发明中，以氨基酸作为组成单元的环状二肽还可从大豆或茶中得到。

将含有大豆肽的溶液进行热处理所得到的处理物可如下制备，具体而言，例如使大豆肽以20～500g/mL的浓度溶解到水中，在40～150℃的条件下进行5分钟～120小时加热。对于所得到的处理物，根据期望还可进行过滤、离心分离、浓缩、超滤、冷冻干燥、粉末化等的处理。

将含有茶肽的溶液进行热处理所得到的处理物可如下制备，具体而言，例如使茶肽以20～500g/mL的浓度溶解到水中，在40～150℃的条件下进行5分钟～120小时加热。对于所得到的处理物，根据期望还可进行过滤、离心分离、浓缩、超滤、冷冻干燥、粉末化等的处理。

环状二肽的盐可通过该领域公知的任意方法由本领域技术人员容易地制备。

如上所得到的环状二肽或其盐可用于促进GLP-1的分泌从而来改善糖代谢。据此，本发明还提供以本发明的环状二肽或其盐作为有效成分的GLP-1分泌促进剂。

本发明的糖代谢改善剂或GLP-1分泌促进剂可通过符合其形态的适当的方法摄取。只要该摄取方法使本发明的环状二肽或其盐能够在循环血中移动，则没有特别限定。且，在本说明书中，摄取包括摄取、服用或饮用的全部方式来使用。

本发明的糖代谢改善剂可如下进行制剂化，例如在含有所述环状二肽或其盐的原料中根据期望加入溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂等，根据公知的方法制成片剂、颗粒剂、散剂、粉末剂、胶囊剂等的固体剂型或通常的溶液剂、混悬剂、乳剂等的液体剂型等。上述组合物可直接与水等一起服用。另外，制备成可容易配合的形态(例如，粉末形态、颗粒形态)后，例如还可作为医药品的原材料使用。

另外，所述形态中的环状二肽或其盐的含量，考虑到其给予形态、给予方法等，只要是可得到本发明所期望的效果表达的量即可，没有特别限定。例如，组A的以氨基酸作为组成单元的环状二肽或其盐的总量如下，更优选组B的环状二肽或其盐的总含量如下，进一步优选组C的环状二肽或其盐的总含量如下，优选0.2×10ppm以上、更优选0.2×10²ppm以上、进一步优选0.4×10²ppm以上，优选1.0×10⁶ppm以下、更优选1.0×10⁵ppm以下、进一步优选0.5×10⁵ppm以下。另外，为液体剂型等时，组A的以氨基酸作为组成单元的环状二肽或其盐的总量如下，更优选组B的环状二肽或其盐的总含量如下，进一步优选组C的环状二肽或其盐的总含量如下，优选0.2×10^-2mg/100mL以上、更优选0.2×10^-1mg/100mL以上、进一步优选0.2mg/100mL以上，优选1.0×10³mg/100mL以下、更优选1.0×10²mg/100mL以下、进一步优选0.5×10²mg/100mL以下。从GLP-1分泌促进效果的观点出发，在环状二肽中GLP-1分泌促进作用高的组B或组C的环状二肽所占的合计量的比例优选为5重量％以上、更优选10重量％以上、进一步优选15重量％以上。另外，上限没有特别限定，优选90重量％以下、更优选60重量％以下。作为各个环状二肽或其盐的含量，可列举以下的量：

(1)环苏氨酰酪氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(2)环缬氨酰酪氨酸或其盐的含量：0.30×10～0.50×10⁵ppm、优选0.30×10²～0.50×10⁴ppm。

(3)环谷氨酰胺酰酪氨酸或其盐的含量：0.20×10～0.40×10⁵ppm、优选0.20×10²～0.40×10⁴ppm。

(4)环天冬酰异亮氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(5)环精氨酰脯氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(6)环天冬酰甘氨酸或其盐的含量：0.20×10～0.50×10⁵ppm、优选0.20×10²～0.50×10⁴ppm。

(7)环蛋氨酰缬氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(8)环谷氨酰半胱氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(9)环丝氨酰谷氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(10)环异亮氨酰赖氨酸或其盐的含量：0.50×10～0.90×10⁵ppm、优选0.50×10²～0.90×10⁴ppm。

(11)环谷氨酰胺酰亮氨酸或其盐的含量：0.80×10～1.30×10⁵ppm、优选0.80×10²～1.30×10⁴ppm。

(12)环异亮氨酰苏氨酸或其盐的含量：0.20×10～0.50×10⁵ppm、优选0.20×10²～0.50×10⁴ppm。

(13)环苏氨酰苏氨酸或其盐的含量：0.30×10～0.50×10⁵ppm、优选0.30×10²～0.50×10⁴ppm。

(14)环蛋氨酰苏氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(15)环丙氨酰半胱氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(16)环甘氨酰半胱氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(17)环天冬氨酰丝氨酸或其盐的含量：1.00×10～1.60×10⁵ppm、优选1.00×10²～1.60×10⁴ppm。

(18)环精氨酰天冬氨酸或其盐的含量：0.90×10～1.50×10⁵ppm、优选0.90×10²～1.50×10⁴ppm。

(19)环甘氨酰色氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.30×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.30×10⁴ppm。

(20)环组氨酰苯丙氨酸或其盐的含量：0.20×10～0.40×10⁵ppm、优选0.20×10²～0.40×10⁴ppm。

(21)环天冬氨酰亮氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.80×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.80×10⁴ppm。

(22)环异亮氨酰组氨酸或其盐的含量：0.70×10～1.20×10⁵ppm、优选0.70×10²～1.20×10⁴ppm。

(23)环丝氨酰亮氨酸或其盐的含量：0.70×10～1.10×10⁵ppm、优选0.70×10²～1.10×10⁴ppm。

(24)环异亮氨酰天冬氨酸或其盐的含量：0.70×10～1.10×10⁵ppm、优选0.70×10²～1.10×10⁴ppm。

(25)环丝氨酰半胱氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(26)环苯丙氨酰色氨酸或其盐的含量：0.07×10～0.20×10⁵ppm、优选0.07×10²～0.20×10⁴ppm。

(27)环丙氨酰亮氨酸或其盐的含量：1.40×10～2.30×10⁵ppm、优选1.40×10²～2.30×10⁴ppm。

(28)环谷氨酰胺酰组氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(29)环精氨酰缬氨酸或其盐的含量：0.60×10～1.00×10⁵ppm、优选0.60×10²～1.00×10⁴ppm。

(30)环谷氨酰亮氨酸或其盐的含量：0.70×10～1.10×10⁵ppm、优选0.70×10²～1.10×10⁴ppm。

(31)环亮氨酰色氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.30×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.30×10⁴ppm。

(32)环色氨酰色氨酸或其盐的含量：0.04×10～0.07×10⁵ppm、优选0.04×10²～0.07×10⁴ppm。

(33)环L-丙氨酰脯氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(34)环蛋氨酰精氨酸或其盐的含量：0.20×10～0.50×10⁵ppm、优选0.20×10²～0.50×10⁴ppm。

(35)环赖氨酰苯丙氨酸或其盐的含量：1.00×10～1.60×10⁵ppm、优选1.00×10²～1.60×10⁴ppm。

(36)环苯丙氨酰苯丙氨酸或其盐的含量：0.30×10～0.60×10⁵ppm、优选0.30×10²～0.60×10⁴ppm。

(37)环色氨酰酪氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.20×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.20×10⁴ppm。

(38)环天冬酰缬氨酸或其盐的含量：0.30×10～0.50×10⁵ppm、优选0.30×10²～0.50×10⁴ppm。

(39)环谷氨酰胺酰异亮氨酸或其盐的含量：0.50×10～0.80×10⁵ppm、优选0.50×10²～0.80×10⁴ppm。

(40)环丙氨酰丝氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.80×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.80×10⁴ppm。

(41)环蛋氨酰组氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.30×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.30×10⁴ppm。

(42)环蛋氨酰脯氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.30×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.30×10⁴ppm。

(43)环精氨酰亮氨酸或其盐的含量：1.50×10～2.30×10⁵ppm、优选1.50×10²～2.30×10⁴ppm。

(44)环蛋氨酰谷氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.30×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.30×10⁴ppm。

(45)环蛋氨酰丙氨酸或其盐的含量：0.20×10～0.50×10⁵ppm、优选0.20×10²～0.50×10⁴ppm。

(46)环异亮氨酰谷氨酸或其盐的含量：0.50×10～0.90×10⁵ppm、优选0.50×10²～0.90×10⁴ppm。

(47)环异亮氨酰丝氨酸或其盐的含量：0.50×10～0.90×10⁵ppm、优选0.50×10²～0.90×10⁴ppm。

(48)环缬氨酰丝氨酸或其盐的含量：0.50×10～0.90×10⁵ppm、优选0.50×10²～0.90×10⁴ppm。

(49)环蛋氨酰甘氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(50)环缬氨酰苏氨酸或其盐的含量：0.30×10～0.60×10⁵ppm、优选0.30×10²～0.60×10⁴ppm。

(51)环缬氨酰天冬氨酸或其盐的含量：0.50×10～0.90×10⁵ppm、优选0.50×10²～0.90×10⁴ppm。

(52)环甘氨酰脯氨酸或其盐的含量：0.30×10～0.50×10⁵ppm、优选0.30×10²～0.50×10⁴ppm。

(53)环亮氨酰脯氨酸或其盐的含量：0.50×10～0.90×10⁵ppm、优选0.50×10²～0.90×10⁴ppm。

(54)环谷氨酰胺酰甘氨酸或其盐的含量：0.05×10～0.09×10⁵ppm、优选0.05×10²～0.09×10⁴ppm。

(55)环色氨酰赖氨酸或其盐的含量：0.20×10～0.40×10⁵ppm、优选0.20×10²～0.40×10⁴ppm。

(56)环谷氨酰胺酰苯丙氨酸或其盐的含量：0.30×10～0.60×10⁵ppm、优选0.30×10²～0.60×10⁴ppm。

(57)环赖氨酰甘氨酸或其盐的含量：1.00×10～1.60×10⁵ppm、优选1.00×10²～1.60×10⁴ppm。

(58)环丝氨酰赖氨酸或其盐的含量：1.60×10～2.60×10⁵ppm、优选1.60×10²～2.60×10⁴ppm。

(59)环缬氨酰赖氨酸或其盐的含量：0.90×10～1.50×10⁵ppm、优选0.90×10²～1.50×10⁴ppm。

(60)环天冬酰赖氨酸或其盐的含量：0.60×10～1.10×10⁵ppm、优选0.60×10²～1.10×10⁴ppm。

(61)环组氨酰组氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(62)环苏氨酰组氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(63)环天冬氨酰组氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(64)环天冬酰组氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.30×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.30×10⁴ppm。

(65)环精氨酰丝氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(66)环天冬酰蛋氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(67)环谷氨酰胺酰蛋氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.20×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.20×10⁴ppm。

(68)环色氨酰精氨酸或其盐的含量：0.10×10～0.30×10⁵ppm、优选0.10×10²～0.30×10⁴ppm。

(69)环天冬酰精氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

(70)环天冬酰脯氨酸或其盐的含量：0.05×10～0.09×10⁵ppm、优选0.05×10²～0.09×10⁴ppm。

(71)环精氨酰精氨酸或其盐的含量：0.40×10～0.70×10⁵ppm、优选0.40×10²～0.70×10⁴ppm。

本发明的糖代谢改善剂可通过符合其形态的适当的给予方法给予。只要给予方法使本发明的环状二肽或其盐能够在循环血中移动，则也没有特别限定，例如可通过内用、外用、皮内等方式给予，外用时，例如作为栓剂等的外用剂型，只要通过其适合的给予方法给予即可。

本发明的糖代谢改善剂或GLP-1分泌促进剂的给予量根据其形态、给予方法、使用目的及作为该糖代谢改善剂的给予对象的患者或患兽的年龄、体重、症状来适当设定，并不固定。例如，作为本发明中的本发明环状二肽或其盐的有效人摄取量，体重50kg的人为每1天优选0.2mg以上、更优选2mg以上、进一步优选20mg以上，优选10g以下、更优选5g以下、进一步优选2g以下。另外，给予也可在期望的给予量范围内，1天内单次或分多次进行。给予期间也是任意的。且，在此本发明的环状二肽或其盐的有效人摄取量是指对人显示有效效果的环状二肽或其盐的合计摄取量，环状二肽的种类没有特别限定。

在本说明书中，本发明的糖代谢改善剂或GLP-1分泌促进剂的摄取对象优选人，但也可为牛、马、山羊等的家畜动物，狗、猫、兔子等的宠物动物，或小鼠、大鼠、豚鼠、猴子等的实验动物。

本发明还提供包含如下内容的糖代谢改善方法：对需要改善糖代谢的个体给予本发明的环状二肽或其盐或者含有本发明的环状二肽或其盐的组合物的治疗有效量。且，需要改善糖代谢的个体与本发明的糖代谢改善剂的所述给予对象相同。

另外，在本说明书中，治疗有效量是指将本发明的环状二肽或其盐给予上述个体时，与未给予的个体相比的糖代谢改善的量。具体的有效量根据给予形态、给予方法、使用目的及个体的年龄、体重、症状等来适当确定，并不固定。

在本发明的治疗方法中，为了成为所述治疗有效量，可直接给予本发明的环状二肽或其盐，另外还可给予含有本发明的环状二肽或其盐的组合物。另外，给予方法也没有限定，例如，可通过经口给予来给予。

根据本发明的治疗方法，能够改善糖代谢而不产生副作用。

实施例

以下，示出实施例来具体地说明本发明，但本发明并不局限于下述实施例。＜试剂＞

环状二肽由神户天然化学来合成。Poly-L-Lysine 96孔板为BD公司，PBS(+)、抗生素、Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM)、葡萄糖、羧甲基纤维素钠盐(CMC-Na)为Nacalai Tesque公司制，TPA为Cell Signaling公司制，活性型GLP-1ELISA试剂盒为Merck Millipore公司制，胎牛血清(FBS)为Sigma公司制，磷酸西格列汀为Santa Cruz Biotechnology公司制，Glutest neo Super、Glutest Neo Sensor为三和化学研究所公司制，大豆肽(Hinute AM)为不二制油公司制，NCI-H716细胞使用从ATCC公司转让的细胞。

＜统计分析＞

在以下的试验例中，数据由平均值±标准误差表示。统计学检验在试验例1、2、3中使用Student’s t-test，在其他试验例中通过one-way ANOVA进行分散分析后，使用Dunnet’s test实施多重比较检验。结果中的“*”为p＜0.05的显著性差异，“#”为p＜0.1的显著性差异。且，上述分析全部使用SPSS for Windows release 17.0(SPSS公司制)实施。

试验例1(使用环状二肽的体外GLP-1分泌促进作用的研究)

将环状二肽内的水溶性高的92种用于下述的实验。将混悬于DMEM培养基(已添加10％FBS、2mM谷氨酰胺、1％抗生素)的NCI-H716细胞以0.5×10⁵细胞/孔各接种100μL到Poly-L-Lysine 96孔板中，用CO₂孵育箱(espec公司制)培养48小时。用PBS(+)清洗后，将添加了最终浓度为10mM的各环状二肽、10μM的磷酸西格列汀的PBS(+)溶液100μL添加到细胞中。1小时后回收添加溶液，使用ELISA试剂盒测定溶液中的活性型GLP-1量。分析则是使用将未添加环状二肽的组的活性型GLP-1量作为100时的相对值。

结果如表1～5所示。在各个表中，表示在体外可确认活性型GLP-1分泌促进活性的环状二肽与未确认到上述活性的环状二肽。

表1

表2

表3

表4

表5

试验例2(使用环状二肽的体内血浆中GLP-1增加作用的研究)

将环状二肽内的在体外可确认GLP-1分泌促进作用的环状二肽、脂溶性高的环状二肽用于下述的实验。使用动物为从日本Clea公司购入的雄性7周龄C57/BL6J小鼠，在1周的适应期间后供于实验。动物为在具有空调设备的饲育室(温度23.5±1.0℃、湿度55±10RH％、换气次数12～15次/小时、照明7：00～19：00/天)中饲育。适应期间中，自由摄取市售饲料(CE-2、日本Clea公司制)及自来水。

适应期间后，进行5.5小时的禁食、2小时的禁水。其后，将溶解或混悬于0.5％CMC-Na水溶液的环状二肽以10mg/kg强制经口给予。接着，30分钟后在麻醉下由腹部大静脉进行采血，添加1μL肝素钠、1μL的10mM磷酸西格列汀后，以8000rpm进行10分钟离心，将回收的血浆中的活性型GLP-1量用ELISA试剂盒进行测定。分析使用将0.5％CMC-Na水溶液给予组的活性型GLP-1量作为100时的相对值。

结果如表6～15所示。在各个表中，表示在体内可确认血浆中活性型GLP-1增加作用的环状二肽与未确认到上述作用的环状二肽。

表6

表7

表8

表9

表10

表11

表12

表13

表14

表15

试验例3(使用大豆肽热处理物的体内血浆中GLP-1增加作用的研究)

将大豆肽热处理物用于下述的实验。使用动物为从日本Clea公司购入的雄性7周龄C57/BL6J小鼠，在1周的适应期间后供于实验。动物为在具有空调设备的饲育室(温度23.5±1.0℃、湿度55±10RH％、换气次数12～15次/小时、照明7：00～19：00/天)中饲育。适应期间中，自由摄取市售饲料(CE-2、日本Clea公司制)及自来水。

适应期间后，进行5.5小时的禁食、2小时的禁水。其后，将溶解于蒸馏水的大豆肽热处理物以1g/kg强制经口给予。接着，15、30、60分钟后在麻醉下由腹部大静脉进行采血，添加1μL肝素钠、1μL的10mM磷酸西格列汀后，以8000rpm进行10分钟离心，将回收的血浆中的活性型GLP-1量用ELISA试剂盒进行测定。

结果如图1所示。

试验例4(使用大豆肽热处理物的体内糖代谢亢进作用的研究)

将大豆肽热处理物、大豆肽用于下述的实验。使用动物为从日本Clea公司购入的雄性7周龄C57/BL6J小鼠，在1周的适应期间后供于实验。动物为在具有空调设备的饲育室(温度23.5±1.0℃、湿度55±10RH％、换气次数12～15次/小时、照明7：00～19：00/天)中饲育。适应期间中，自由摄取市售饲料(CE-2、日本Clea公司制)及自来水。

适应期间后，进行5.5小时的禁食、2小时的禁水。其后，将溶解于蒸馏水的大豆肽热处理物、大豆肽以1g/kg强制经口给予。对照组强制经口给予相同量的蒸馏水。接下来，30分钟后对于全组腹腔内给予1g/kg的葡萄糖。给予前及葡萄糖腹腔内给予30、60、90、120分钟后由尾静脉进行采血，使用Glucose Neo Super、Glucose Neo Sensor测定血糖值。

结果如图2所示。

试验例5(使用茶肽热处理物的体内糖代谢亢进作用的研究)

将茶肽热处理物用于下述的实验。使用动物为从日本Clea公司购入的雄性7周龄C57/BL6J小鼠，在1周的适应期间后供于实验。动物为在具有空调设备的饲育室(温度23.5±1.0℃、湿度55±10RH％、换气次数12～15次/小时、照明7：00～19：00/天)中饲育。适应期间中，自由摄取市售饲料(CE-2、日本Clea公司制)及自来水。

适应期间后，进行5.5小时的禁食、2小时的禁水。其后，将溶解于蒸馏水的茶肽热处理物以1g/kg强制经口给予。对照组强制经口给予相同量的蒸馏水。接下来，30分钟后对于全组腹腔内给予1g/kg的葡萄糖。给予前及葡萄糖腹腔内给予30、60、90、120分钟后由尾静脉进行采血，使用Glucose Neo Super、Glucose Neo Sensor测定血糖值。

结果如图3所示。