本发明属于兽用生物制品
技术领域：
，涉及一种猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病二联活疫苗、其制备方法和应用。
背景技术：
：猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，prrs)，又称蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，prrsv)引起的一种猪的高度接触性传染病，不同年龄、品种和性别的猪均能感染，但以妊娠母猪和1月龄以内仔猪最易感。该病以母猪流产、死胎、弱胎及仔猪呼吸困难、败血症、高死亡率为主要特征。猪伪狂犬病(pseudorabies,pr)是由猪伪狂犬病病毒(pseudorabiesvirus,prv)引起的一种猪传染病。prv能使所有的家畜发病，各种年龄的动物都对其易感。猪感染prv的临床症状主要为肌肉震颤、共济失调、后肢麻痹、角弓反张和转圈运动等，妊娠母猪感染通常会发生流产、产死胎和木乃伊胎，给养猪业造成了巨大损失。为了有效预防上述两种疫病，各大养殖企业均将这两种传染病的疫苗列入常规免疫程序。因目前市面上仅有单苗出售，且prv单苗还起不到好的保护作用，要同时预防这两种疫病，同一年龄段猪只往往需要免疫多次，这使得各年龄段猪的免疫密度增大，而疫苗的费用、注苗时的人力和对猪造成的应激以及短时间高密度注苗引起各疫苗之间的相互干扰，使猪场经营者带来较大的负担。另外，猪繁殖与呼吸综合征病毒感染会降低猪的免疫力并引发免疫抑制。因此，当免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗时，会降低与其共同免疫的其他疫苗的免疫效果，将猪繁殖与呼吸综合征疫苗与其他疫苗联合免疫，往往需要大大提高其他疫苗的免疫量来刺激免疫应答。猪伪狂犬病病毒感染会降低猪的免疫力并引发免疫抑制，猪伪狂犬病病毒活疫苗仍具有免疫抑制作用，因此，当免疫猪伪狂犬病病毒活疫苗，会降低与其共同免疫的其他疫苗的免疫效果。因此，本领域迫切需要抗原含量配伍适中，且能够进行多联的prrsv疫苗和prv疫苗，以达到预防多种疾病的目的。技术实现要素：为解决现有技术的不足，本发明提供一种疫苗组合物，其含有猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原相互无免疫抑制。本发明还涉及一种制备所述的疫苗组合物的方法，所述方法包括分别扩增培养所述猪繁殖与呼吸综合征活的病毒、所述猪伪狂犬病病毒活的病毒，按比例混合所述扩增的猪繁殖与呼吸综合征活的病毒和猪伪狂犬病病毒活的病毒，加入冻干保护剂，冻干。本发明还涉及所述疫苗组合物在制备预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒和/或猪伪狂犬病病毒感染相关疾病的药物中的应用。本发明的疫苗组合物，能同时预防高致病性猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病两种疫病，避免注苗时的人力和对猪造成的应激以及短时间高密度注苗引起各疫苗之间的相互干扰，做到“一针防两病”；现有技术中公知猪繁殖与呼吸综合征活病毒具有免疫抑制作用，能对猪伪狂犬疫苗的免疫产生抑制，猪伪狂犬病病毒活疫苗也具有免疫抑制作用，在本发明的疫苗组合物中，在抗原含量较低的情况下，依然能避免两者间的免疫抑制问题，本发明的疫苗组合物中的各抗原成分均达到或超过对应单苗的免疫效果，本发明的疫苗组合物具有良好的免疫原性；本发明的疫苗组合物中猪伪狂犬病病毒抗原对猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的免疫应答具有较好的免疫促进作用。具体实施方式以下，对本发明的实施方式进行说明。为了克服现有技术缺陷，本发明涉及一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的猪繁殖与呼吸综合征活的病毒抗原和免疫量的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原，以及冻干保护剂；所述猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1:0.6到1:6。本发明的疫苗组合物中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原之间无免疫抑制。“无免疫抑制”是指，所述prrsv抗原成分与所述prv抗原成分在免疫猪以后不会显著削弱对方的免疫效果。例如，在免疫所述疫苗组合物后，所述疫苗组合物在猪体内产生的抗prv抗体的量或者该抗体中和抗原的效价不显著低于单独免疫所述prv疫苗时产生的抗体的量或效价；或者所述疫苗组合物在猪体内产生的抗prrsv抗体的量或者该抗体中和抗原的效价不显著低于单独免疫所述prrsv疫苗时产生的抗体的量或效价。可以通过常规的方法在免疫后的适当的时间检测抗体产生的量或者中和抗原的效价。例如，可以通过elisa的方法，用对应的抗原进行检测。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述猪繁殖与呼吸综合征活的病毒抗原包括高致病性猪繁殖与呼吸综合征jxa1-r株；所述猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原包括猪伪狂犬病病毒hn1201株的弱毒株、猪伪狂犬病病毒hn1202株的弱毒株、猪伪狂犬病病毒hen1株的弱毒株、猪伪狂犬病病毒js-2012株的弱毒株、猪伪狂犬病病毒prv-zj01株的弱毒株。高致病性猪繁殖与呼吸综合征jxa1-r株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmccno.2467，保藏地址为北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所，公开于中国专利申请cn101307305a。猪伪狂犬病病毒株js-2012株公开于免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[j].童武，张青占，郑浩等，中国动物传染病学报2013,21(3):1-7；猪伪狂犬病病毒hen1株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为cgmccno.6656，公开于中国专利申请cn102994458a；猪伪狂犬病病毒变异株prv-zj01，其保藏号为cgmccno.8170，公开于中国专利申请cn103627678a；猪伪狂犬病病毒hn1201株(pseudorabiesvirus,strainhn1201)保藏号为cctccno.v201311，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2013年5月20日，公开于专利申请201510124250.0；猪伪狂犬病病毒hn1202株(pseudorabiesvirus,strainhn1202)保藏号为cctccno.v201335，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2013年8月26日，公开于专利申请201510124250.0。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述猪繁殖与呼吸综合征活的病毒抗原包括高致病性猪繁殖与呼吸综合征jxa1-r株；以及所述猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原包括猪伪狂犬病病毒hn1201-r株、猪伪狂犬病病毒hn1202-r株、猪伪狂犬病病毒hen1-r株、猪伪狂犬病病毒js-2012-r株、猪伪狂犬病病毒prv-zj01-r株。猪伪狂犬病病毒hn1201-r株、猪伪狂犬病病毒hn1202-r株、猪伪狂犬病病毒hen1-r株、猪伪狂犬病病毒js-2012-r株、猪伪狂犬病病毒prv-zj01-r株公开于专利申请201510124250.0。申请人声明自申请日起二十年内向公众发放。在某些实施方式中，所述疫苗组合物中，所述prrsv抗原与所述prv抗原可以以适当的比例混合。例如，可以将所述prrsv抗原与所述prv抗原分别制成具有一定病毒滴度的抗原液，再根据测得的病毒滴度计算混合的比例。病毒滴度可以通过50％组织培养感染剂量(tcid50)表征，tcid50值可以通过本领域已知的适当方法进行测定。例如，可以将病毒进行10倍系列稀释，接种长满特异细胞的96孔细胞培养板，每个稀释度接种8孔，100ul/孔，接种后置于37℃，5％co2培养箱中培养4-5天，观察细胞病变，根据出现细胞病变的孔数计算tcid50。在某些实施方式中，可以根据测得的所述prrsv抗原与所述prv抗原的tcid50值进行混合，使得混合物中两种疫苗的tcid50值在适当的比例范围。本发明中所述的“tcid50”(50％tissuecultureinfectivedose)是指半数细胞培养物感染量，是表示病毒感染力的一种表示方式。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1∶0.6到1∶5。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1∶0.6到1∶4。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1∶0.6到1∶3。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1∶0.6到1∶2。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1∶0.6到1∶1。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1∶0.6到1∶0.9。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1∶0.6到1∶0.8。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1∶0.6到1∶0.7。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述猪繁殖与呼吸综合征活的病毒抗原含量为105.0～107.0tcid50，所述猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原含量为105.7～107.0tcid50。本发明的疫苗组合物中，在一定含量范围内，所述猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原对猪繁殖与呼吸综合征活的病毒抗原产生了协同作用，提高了其免疫效力。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述疫苗组合物中，所述猪繁殖与呼吸综合征活的病毒抗原含量为105.7～107.0tcid50。在某些实施方式中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗与所述猪伪狂犬疫苗的混合比例为1∶0.6到1∶6，例如，1∶0.6到1∶5，1∶0.6到1∶4，1∶0.6到1∶3，1∶0.6到1∶2，1∶0.6到1∶1，1∶0.6到1∶0.9，1∶0.6到1∶0.8，或1∶0.6到1∶0.7。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述冻干保护剂包括一种或多种下列成分：脱脂牛奶、明胶、海藻糖、牛血清白蛋白、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、山梨醇、l-谷氨酸钠、vc、蔗糖、甘氨酸、精氨酸。在本发明的疫苗组合物中还可以进一步含有冻干保护剂。冻干保护剂可以保护生物制品在冻干过程中的稳定性，减少冻干过程对疫苗的生物活性的破坏。冻干保护剂的例子包括蔗糖、l-谷氨酸钠、或水解乳蛋白。优选地，本发明所述的冻干保护剂为蔗糖脱脂乳冻干保护剂，其用量与混合病毒抗原液的体积比为1:1。所述蔗糖脱脂乳冻干保护剂是由以下组分组成：蔗糖5～10g、脱脂牛奶100ml。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物中，所述疫苗组合物包括含量为105.0～107.0tcid50的高致病性猪繁殖与呼吸综合征jxa1-r株、含量为105.7～107.0tcid50的猪伪狂犬病病毒hn1201-r株，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒活的病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒活的病毒抗原的tcid50值的比例为1:0.6到1:6。猪伪狂犬病病毒hn1201-r株，保藏号为cctccno.v201516，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2015年3月17日，保藏地址为中国武汉·武汉大学，公开于专利申请201510124250.0。本发明涉及一种预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征和/或猪伪狂犬病的疫苗组合物的制备方法，其中，所述方法包括：(1)分别培养增殖猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒；(2)按比例混合，加冻干保护剂、冻干。优选地，步骤(1)中培养增殖猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒选用易感细胞，所述易感细胞可以是传代细胞系，也可以是原代细胞。适合于猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感细胞包括，但不限于，非洲绿猴肾细胞marc-145细胞系、ma-104细胞系、vero细胞系、cl-2621细胞系等传代细胞系，或者pam细胞等原代细胞。适合于猪伪狂犬病病毒的易感细胞包括，但不限于，st细胞系、pk-15细胞系、非洲绿猴肾细胞marc-145细胞系、牛肾细胞mdbk细胞系、牛睾丸传代细胞bt细胞系、vero细胞系、bhk-21细胞系、猪肾传代细胞系(如：ibrs-2)、兔肾传代细胞系(如：rk)等传代细胞系，或者鸡胚成纤维细胞和猪肾细胞等原代细胞。原代细胞可以通过本领域公知的方法，用动物体内的组织进行分离和制备。本发明所述的猪伪狂犬病病毒为“猪伪狂犬变异株”，也称为高致病性猪伪狂犬毒株，是指：表现为任何年龄的猪都会感染，可在猪群水平传播，潜伏期短(1～2天)，发病率在10％～100％之间，发病猪死亡率在10％～100％之间(仔猪死亡率可高达100％)，感染后可引起猪只高热(40～42℃，持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死，并可引起种公猪精液质量下降，怀孕母猪流产(高达35％)，早产，死胎，弱仔(弱仔14日龄前全部死亡)等繁殖障碍症状。优选地，所述的伪狂犬变异株为经分离的所述猪伪狂犬病病毒变异株，当重现所述猪伪狂犬病毒变异株感染时，免疫了现有技术中基因缺失伪狂犬弱毒疫苗后依然会造成猪出现高热，精神沉郁，食欲下降或废绝症状的毒株。本发明所述的猪伪狂犬病病毒为猪伪狂犬病病毒变异株。本发明涉及所述的疫苗组合物在制备预防和治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒感染相关疾病中的应用。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物的应用中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒感染相关疾病为猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病。作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的疫苗组合物的应用中，所述的猪伪狂犬病是猪伪狂犬病病毒变异株导致的猪伪狂犬病。本文所用的术语“猪伪狂犬病”可以指表现为任何年龄的猪都会感染，可在猪群水平传播，潜伏期短(1～2天)，发病率在10％～100％之间，发病猪死亡率在10％～100％之间(仔猪死亡率可高达100％)，感染后可引起猪只高热(40～42℃，持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死，并可引起种公猪精液质量下降，怀孕母猪流产(高达35％)，早产，死胎，弱仔(弱仔14日龄前全部死亡)等繁殖障碍症状，但不限于此。上述症状与现有技术中感染了普通猪伪狂犬病病毒后产生的症状差异在于：感染了后会造成感染后成年猪(体重在50kg以上猪)可引起猪只高热(40～42℃，持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死；新生及4周龄以内的仔猪突然发病，发生大批死亡，死亡率达90％以上；发病仔猪主要表现为体温上升达41℃以上，食欲废绝，伴有明显的神经症状和腹泻；断奶前后仔猪主要为呼吸系统症状，表现呼吸困难、咳嗽、流鼻涕等。“猪繁殖与呼吸综合征”指prrsv感染猪后引起的一系列生理和病理的症状。这些症状包括，但不限于，发热、嗜睡、食欲不振、倦怠、呼吸困难、咳嗽、母猪繁殖障碍、仔猪生长缓慢、死亡等。本文所用的术语“预防”指通过给予根据本发明的疫苗组合物抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒和/或猪伪狂犬病病毒感染或推迟疾病发作的所有行为。术语“治疗”指通过给予根据本发明的疫苗组合物使猪繁殖与呼吸综合征病毒和/或猪伪狂犬病病毒感染引起的症状减轻或转好的所有行为。下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。实施例1猪繁殖与呼吸综合征病毒jxa1-r株的增殖培养生产用毒种为高致病性猪繁殖与呼吸综合征jxa1-r株，选取所需数量的marc-145细胞(已长成单层的细胞转瓶)，弃去生长液，按1％(v/v)接种生产用毒种病毒jxa1-r株，加入含2％胎牛血清的dmem细胞培养液，37℃旋转(9～12转/小时)培养，在显微镜下观察由病毒引起的细胞病变(cpe)，当cpe达到70％以上时收获细胞培养物，冻融1次，经离心或过滤除去细胞碎片，冻存于-40℃以下；按《中国兽药典》附录对疫苗抗原进行无菌检验及病毒含量测定。实施例2猪伪狂犬病病毒hn1201-r株的增殖培养生产用毒种为猪伪狂犬病病毒hn1201-r株，选取所需数量的pk15细胞(已长成单层的细胞转瓶)，弃去生长液，按1％(v/v)接种生产用毒种病毒，加入含2％胎牛血清的dmem细胞培养液，37℃旋转(9～12转/小时)培养，在显微镜下观察由病毒引起的细胞病变(cpe)，当cpe达到70％以上时收获细胞培养物，冻融1次，经离心或过滤除去细胞碎片，冻存于-40℃以下；按《中国兽药典》附录对疫苗抗原进行无菌检验及病毒含量测定。实施例3猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物的制备分别取实施例1制备的猪繁殖与呼吸综合征病毒和实施例2制备的猪伪狂犬病病毒按比例混合，即为配苗用混合病毒抗原；将混合病毒抗原按1:1体积比例加入5％蔗糖脱脂乳冻干保护剂，充分摇匀，定量分装后按常规方法立即进行冷冻干燥。疫苗配比见表1。表1猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物配比实施例4猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物免疫原性试验将4～6周龄prrsv及prv抗原、抗体阴性猪120头随机分成24组，5头/组，免疫实施例3制备的猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物。第1组、第2组免疫疫苗1，第3组和第4组免疫疫苗2，第5组和第6组免疫疫苗3，第7组和第8组免疫疫苗4，第9组和第10组免疫疫苗5，第11组和第12组免疫疫苗6，第13组和第14组免疫疫苗7，第15组和第16组免疫疫苗8，第17组和第18组免疫疫苗9，第19组和第20组免疫疫苗10，第21组和第22组免疫疫苗11，2ml/头，第23组和第24组为对照组。免疫28日后攻毒，第1组、第3组、第5组、第7组、第9组、第11组、第13组、第15组、第17组、第19组、第21组和第23组所有猪肌肉注射猪繁殖与呼吸综合征病毒nvdc-jxa1株105.0tcid50/头，每日测温并观察临床症状和死亡情况。具体结果见表2。表2二联活疫苗组合物中prrs部分免疫原性试验结果结果显示，本发明提供的猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物在prrsv抗原含量在105.0～107.0tcid50，猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒抗原的tcid50值的比例为1:0.6到1:6时，显示出较好的免疫效果。免疫28日后攻毒，第2组、第4组、第6组、第8组、第10组、第12组、第14组、第16组、第18组、第20组、第22组和第24组所有猪肌肉注射猪伪狂犬病病毒hn1201株107.0tcid50/头，每日测温并观察临床症状和死亡情况。具体结果见表3。表3二联活疫苗组合物中pr部分免疫原性试验结果结果显示，本发明提供的猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物在prv抗原含量在105.7～107.0tcid50时，显示出较好的免疫效果。结合本发明提供的猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物两种抗原的免疫实验结果，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原与所述的猪伪狂犬病病毒抗原的tcid50值的比例为1:0.6到1:6，猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原含量为105.0～107.0tcid50，猪伪狂犬病病毒抗原含量为105.7～107.0tcid50，对两种病原均有较好的免疫保护效果，可有效消除猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原对猪伪狂犬病病毒抗原的免疫干扰作用，且较低含量的猪伪狂犬病病毒抗原不会造成对猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的免疫应答。实施例5猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物的对比试验分别取实施例1制备的猪繁殖与呼吸综合征病毒和实施例2制备的猪伪狂犬病病毒按比例混合，即为配苗用混合病毒抗原；将混合病毒抗原按1:1体积比例加入5％蔗糖脱脂乳冻干保护剂，充分摇匀，定量分装后按常规方法立即进行冷冻干燥。疫苗配比见表4。表4疫苗组合物配比疫苗12疫苗13疫苗14疫苗15prrsv抗原(tcid50/ml)105.7105.9106.2106.2prv抗原(tcid50/ml)105.7105.8106.0—tcid50比例1:11:0.81:0.6—将4～6周龄prrsv及prv抗原、抗体阴性猪25头随机分成5组，5头/组，免疫上述制备的疫苗组合物。第25组免疫疫苗12，第26组免疫疫苗13，第27组免疫疫苗14，第28组免疫疫苗15，2ml/头，第29组为对照组。免疫后28天，各免疫组及对照组采集血清，测定prrsv中和抗体效价。结果见表5。表5血清抗体比较试验结果结果显示，本发明提供的猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物免疫猪，免疫28天对nvdc-jxa1株具有较高的血清中和效价，令人意外的是，即使二联活疫苗组合物中猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原含量比猪繁殖与呼吸综合征单苗含量较低，但联苗所产生的针对猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体效价却较高。证明了本发明提供的猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗组合物prv抗原成分对prrsv抗原成分的免疫应答具有较好的协同作用，能提供优于单苗的保护效果。以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。当前第1页12