紫草素在制备用于治疗上下呼吸道变应性疾病的药物中的应用的制作方法

本发明涉及医药技术领域，具体涉及紫草素在制备用于治疗上下呼吸道变应性疾病的药物中的应用。

背景技术：

紫草(Radix Arnebiae)为紫草科植物新疆紫草Arnebia educhroma(Royle)Johnst、紫草Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.或内蒙紫草ArnebiaguttataBunge的干燥根。紫草又称紫草茸、山紫草、紫丹、紫草根、红石根。主产于新疆、西藏、甘肃、黑龙江、吉林、辽宁、河北、河南、广西等地。紫草性味甘、咸、寒，归心、肝经。功能凉血，活血，解毒透疹。主治血热毒盛，斑疹紫黑，麻疹不透，疮疡，湿疹，水火烫伤等。紫草主要含有紫草素(shikonin)、乙酰紫草素(acetylshikonin)、β-羟基异戊酰紫草素(β-hydro-xyisovalerylshikonin)、β，β’-二甲基丙烯酰紫草素(β，β′-dimethylacrylshikonin)等。

其中，紫草素分子量为288.30，分子式C16H16O5，别名为5，8-二羟基-2-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊-3-烯基]萘-1，4-二酮，结构如式1所示，目前国内研究紫草素应用主要是肿瘤及自身免疫病的免疫干预，目前已知的紫草素效应有包括抑制人乳腺癌、肝癌、前列腺癌、胰腺癌的细胞增殖，抗肝炎病毒、流感病毒、乳头瘤病毒等多种病毒。抗肿瘤主要是通过干扰蛋白质与DNA间的关联，诱导肿瘤细胞自噬、抑制肿瘤细胞基因表达等机制发挥作用，在抗病毒方面主要是通过调控细胞因子分泌、抑制病毒基因复制和蛋白表达等机制发挥作用。但是紫草素单体在制备用于治疗上下呼吸道变应性疾病的药物中的应用还未见报道。

并且目前国内上下呼吸道变应性疾病的治疗主要是应用糖皮质激素类药物、β2受体兴奋药、白三烯阻滞药等雾化，因这些药物本身具免疫抑制作用，长期使用，易使患者出现免疫降低，病情反复。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供紫草素在制备用于治疗上下呼吸道变应性疾病的药物中的应用，以紫草素对上下呼吸道变应性疾病进行免疫干预，从树突状细胞成熟及表型表达、TH细胞的激活和分化、细胞因子的分泌等方面进行调节，建立正常免疫秩序，避免造成类似激素类药物所致的免疫抑制现象。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

1、紫草素在制备用于治疗上下呼吸道变应性疾病的药物中的应用。

优选的，所述上下呼吸道变应性疾病包括变应性鼻炎及变应性哮喘。

本发明的有益效果在于：紫草素可干预变应性鼻炎和变应性哮喘患者黏膜及黏膜相关淋巴组织中树突状细胞的成熟和表型表达，从而纠正变应性鼻炎中TH细胞应答的偏移，可干预上下呼吸道变应性疾病患者树突状细胞及TH2细胞相关细胞因子的分泌，减少炎细胞局部浸润，减少成熟浆细胞分泌超敏反应相关IgE类抗体，诱导机体产生免疫耐受，建立正常免疫调节，促进疾病缓解。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：

图1中A、B、C、D分别表示AR建模后模型组鼻黏膜、观察组鼻黏膜、对照组鼻黏膜、紫草素干预后观察组鼻黏膜的HE染色光镜下情况；

图2中A、B分别表示树突细胞CD80、CD86表达情况；

图3中A、B分别表示相关细胞因子IL-10、IL-12表达情况；

图4表示紫草素治疗上下呼吸道变应性疾病的作用机理。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明做进一步说明。本发明所述紫草素可从紫草根中提取得来，也可应用现有技术已公开的人工合成的方法获得。本领域人员可知，运用从紫草根中提取得来的紫草素或者应用现有技术已公开的人工合成的方法获得的紫草素同样具有用于治疗上下呼吸道变应性疾病的用途。

实施例1紫草素对大鼠变应性鼻炎(AR)的防治作用

1.1建模与分组

选8-10周龄健康大鼠40只，大鼠体重性别差异无统计学意义。10只健康大鼠直接脱椎处死取鼻黏膜固定设为对照组1。采用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)局部滴鼻法致敏建立大鼠AR模型30只，致敏量为10μgOVA+0.5㎎Al(OH)3+0.1ml生理盐水每侧鼻孔，两侧鼻孔各2次/天，持续刺激10天后根据症状及鼻分泌物涂片判定建模成功。10只为模型组，建模成功即脱椎处死取鼻黏膜迅速固定，20只为观察组，建模成功后予以100μg/ml紫草素雾化吸入治疗(100～200㎎紫草素+5毫升生理盐水+1㎎糜蛋白酶雾化)，12小时后处死取鼻黏膜固定。

1.2方法

三组实验标本均采用免疫组织化学技术，用兔抗多克隆抗体CD80、兔抗多克隆抗体CD86及兔抗多克隆抗体IL-10、兔抗多克隆抗体IL-12标记后，显微镜观察计数结果，先在低倍镜选取阳性细胞多的区域5个，再配上计数格在高倍镜下进行计数。

1.3试剂及实验器材

试验用左旋紫草素由重庆三峡医药高等专科学校天然药物工程技术中心自行提取。CD86多克隆兔抗体(货号ANT-283)、CD80多克隆兔抗体(货号ANT-133)购自北京鼎国昌盛生物科技有限公司，IL-10多克隆兔抗体(货号A-AP52148)、IL-12多克隆兔抗体(货号A-AP52181)购自武汉艾美捷科技有限公司。轮转式切片机为徕卡2015(德国产)，显微镜用奥林巴斯显微镜CX31-LV320，image Analysis Syste11.0软件成像系统。

1.4数据处理

结果计量用均数±标准差，组间数据采用方差检验。SPSS18.0软件处理数据。检验水准α＝0.05，P＜0.05表示有统计学意义。

1.5大鼠AR造模评定标准

大鼠AR造模评定依据确立为①症状：鼻红，搔抓鼻周或者眼周，频繁喷嚏，大量清涕，四项症状至少满足三项；②检查：鼻分泌物涂片显示嗜酸性粒细胞阳性。排除鼻红程度、喘息程度等难以具体计量的因素，大鼠AR模型紫草素干预效果评判标准如下表1。干预效果评估采取叠加计分，＜4分为显效，4～6分为有效，＞6分为无效。

表1大鼠AR模型紫草素干预效果评判标准

1.6结果及分析

1.6.1大鼠AR模型紫草素干预情况比较

在OVA滴鼻造模十天左右，30只大鼠先后出现鼻红，搔抓鼻周或者眼周，频繁喷嚏，大量清涕症状，鼻分泌物涂片显示嗜酸性粒细胞阳性。模型组大鼠取得的鼻黏膜苍白、水肿。光镜HE染色可见鼻黏膜增厚且厚度不均，基底结构不清，固有层小血管、毛细血管扩张明显，组织间隙扩大，大量炎细胞浸润。经紫草素干预后，观察组大鼠症状明显缓解，喷嚏、搔抓鼻周、眼周频率降低，鼻分泌物涂片嗜酸性粒细胞阳性率减少，镜下观察鼻黏膜水肿减轻，炎细胞数量也有所减少。光镜观察情况如图1所示，根据预设的干预效果评估标准，观察组共计有显效13例，有效7例，无效0例。根据症状观察结果，紫草素对大鼠AR模型超敏反应有治疗作用。

1.6.2树突状细胞CD80、CD86表达情况

在实验标本中，CD80及CD86阳性细胞为棕黄色，主要集中在鼻黏膜上皮及固有层，如图2所示，观察组标本中CD80值为13.52±3.53、CD86值为24.01±13.12，模型组CD80值为17.19±4.42、CD86值为38.89±9.77，数据及检验情况如下表2。

表2三组AR大鼠模型中树突细胞CD80、CD86表达的检测情况

1.6.3细胞因子IL-10、IL-12表达情况

在实验标本中，IL-10、IL-12阳性细胞为黄色，主要集中在鼻黏膜上皮层，少数在鼻黏膜固有层，如图3所示，观察组IL-10值为6.69±1.12，IL-12值为44.3±9.7；(模型组IL-10值为3.61±0.23，IL-12值为28.8±8.2)，数据及检验情况如下表3。

表3三组AR大鼠模型相关细胞因子IL-10、IL-12表达的检测情况

由上述结果可得知，在对观察组AR大鼠模型进行紫草素干预后，观察组大鼠症状明显缓解，喷嚏、搔抓鼻周、眼周频率降低或不再出现，鼻分泌物涂片嗜酸性粒细胞阳性率减少，镜下观察鼻黏膜水肿减轻，炎细胞数量也有所减少。根据预设的干预效果评估标准，观察组共计有显效13例，有效7例，无效0例。证实紫草素在AR模型中的免疫干预对疾病发展有正面影响。

在实验标本检测中，观察组DCs表面CD80、CD86等协同刺激分子表达与健康大鼠检测状态接近，此外观察组相关细胞因子IL-10、IL-12检测也接近健康状态，与模型组DCs表面CD80、CD86的异常表达相对比，结果经方差检验具统计学意义，因为紫草素干预了DCs表面CD80、CD86的表型表达，这个效果可以减少TH2类细胞的过度活化，纠正AR中TH应答的偏移，减少TH细胞相关促炎因子的分泌，建立正常的免疫调节，促进疾病缓解。此外在AR病程中，DCs相关细胞因子IL-10、IL-12分泌减少，而在观察组中，经紫草素干预，IL-10、IL-12分泌基本正常，这一效果可以抑制多种促炎细胞因子的合成,抑制肥大细胞等释放炎症介质，减少炎细胞局部浸润，诱导动物模型产生免疫耐受，从而起到治疗AR的作用。

实施例2紫草素对大鼠变应性哮喘(AS)的防治作用

上下呼吸道变应性疾病AR、AS具有一致性，通过如实施例1所述的建模、分组以及实验方式同时得出了紫草素对大鼠变应性哮喘(AS)的防治作用的相关实验数据，具体如下：

表4四组AS大鼠模型中树突细胞CD80、CD86表达的检测情况

表5四组AS大鼠模型相关细胞因子IL-4、IL-10、IL-12表达的检测情况

由表4、5可证实紫草素在AS模型中的免疫干预对疾病发展也有正面影响，紫草素可以起到治疗As的作用。

通过实施例1及2可论证，紫草素可干预变应性鼻炎和变应性哮喘患者黏膜及黏膜相关淋巴组织中树突状细胞的成熟和表型表达，从而纠正变应性鼻炎中TH细胞应答的偏移，可干预上下呼吸道变应性疾病患者树突状细胞及TH2细胞相关细胞因子的分泌，减少炎细胞局部浸润，减少成熟浆细胞分泌超敏反应相关IgE类抗体，诱导机体产生免疫耐受，建立正常免疫调节，促进疾病缓解，其作用机理如图4所示。

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。