本发明涉及免疫血清制备方法，具体涉及一种治疗猪支原体肺炎的血清制备方法。
背景技术：
：猪支原体肺炎，又称猪气喘病、猪地方流行性肺炎、猪霉形体肺炎，猪是由猪肺炎支原体引起猪的一种慢性呼吸道传染病，主要症状为咳嗽和气喘，病变的特征是融合性支气管肺炎。本病广泛分布于世界各地，在我国许多地区的猪场都有发生，由于带菌病猪的存在和分布面较广，除直接发生死亡外，病猪生长发育缓慢，生长率降低15％左右，饲料利用率降低20％，造成饲料和人力的浪费，有的成为僵猪或继发感染死亡，所造成的经济损失很大，是危害养猪业发展的重要疫病之一。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种治疗猪支原体肺炎的血清制备方法。本发明采用的技术方案为，一种治疗猪支原体肺炎的血清制备方法，包括以下步骤：（1）从猪场选取健康、非免疫15日龄仔猪，饲养于消毒后的饲养室中，饲养期间，每天灌喂水葫芦根酶解提取物，灌喂量为20mg/kg，连续灌喂15天；（2）仔猪长至35日龄时，通过气管接种30mL猪肺炎支原体232毒株，剂量为每头猪每毫升105变色单位；（3）接种后持续观察15天，淘汰病猪，保留未发病的猪只，每天灌喂水葫芦根酶解提取物，灌喂量为50mg/kg，连续灌喂15天；（4）仔猪长至70日龄时，通过气管接种90mL猪肺炎支原体232毒株，剂量为每头猪每毫升105变色单位；（5）接种后持续观察15天，淘汰病猪，保留未发病的猪只，对未发病猪只剖杀放血，分离血清，经无菌检测及生物学安全检测后，按3-5ml/每支分装入容器中，4℃保存。其中，饲养期间，每隔1天对饲养室消毒一次。其中，所述水葫芦根酶解提取物制作方法为，将粉碎的水葫芦根浸泡在加有纤维素酶、木聚糖酶的55%乙醇中，在42-45℃、pH值等于6的条件下进行酶解提取，所述酶解提取时间为8-10小时；55%乙醇用量为水葫芦根重量的8-10倍；纤维素酶的用量为3-5mg/g水葫芦根；木聚糖酶的用量为1-1.2mg/g水葫芦根。在确诊猪感染呼吸道疾病后，对病猪腹腔注射5ml/头本发明所得到的治疗猪呼吸道疾病的血清，具有显著的治疗效果，在仔猪断奶前一周腹腔注射3ml/头，有显著的预防效果。本发明在仔猪生长期间通过向仔猪灌喂水葫芦根酶解物，能有效提高仔猪抗猪肺炎支原体感染的能力，仔猪经2次攻毒后，血清内抗猪肺炎支原体抗体含量极高。附图说明图1为本发明对照试验中，实验组和对照组猪只ELISA抗体动态变化图。具体实施方式实施例1、从猪场选取健康、非免疫15日龄仔猪50头，饲养于消毒后的饲养室中，饲喂常规配制得到的全价日粮，全价日粮中不掺加任何抗病毒或抗生素类成分，饲养期间，每天灌喂水葫芦根酶解提取物，灌喂量为20mg/kg，连续灌喂15天，停止灌喂；仔猪长至35日龄时，通过气管接种30mL猪肺炎支原体232毒株，剂量为每头猪每毫升105变色单位；接种后持续观察15天，仅有一只猪出现感染症状，表现为咳嗽、气喘，淘汰病猪，保留剩余未发病的猪只49头，每天灌喂水葫芦根酶解提取物，灌喂量为50mg/kg，连续灌喂15天，停止灌喂；仔猪长至70日龄时，通过气管接种90mL猪肺炎支原体232毒株，剂量为每头猪每毫升105变色单位；接种后持续观察15天，未见有猪只发病，保留未发病的49头猪只，随机从未发病猪只中挑选5头剖杀放血，分离血清，经无菌检测及生物学安全检测后，按3-5ml/每支分装入容器中，4℃保存，得到治疗猪支原体肺炎的血清。其中，饲养期间，每隔1天对饲养室消毒一次。其中，所述水葫芦根酶解提取物制作方法为，将粉碎的水葫芦根浸泡在加有纤维素酶、木聚糖酶的55%乙醇中，在44℃、pH值等于6的条件下进行酶解提取，所述酶解提取时间为9小时；55%乙醇用量为水葫芦根重量的9倍；纤维素酶的用量为4mg/g水葫芦根；木聚糖酶的用量为1.1mg/g水葫芦根。将上述得到的治疗猪支原体肺炎的血清用于预防和治疗猪支原体肺炎。治疗试验：2015年7月30日，长丰县水家湖某猪场购进仔猪500头，均重16.22kg，随机将仔猪等分为A、B两组并人工标记，对A组猪只腹腔注射3ml/头由实施例1得到的治疗猪支原体肺炎的血清后，将A、B两组猪混合饲养；饲养期间B组猪只中有35头仔猪于9月12号开始发病，至9月18日确诊有猪支原体感染，将确诊病猪隔离治疗，治疗期间仍按之前相同饲养方法饲喂，对病猪腹腔注射5ml/头由实施例1得到的治疗猪支原体肺炎的血清，每天注射一次，连续注射3天，隔离治疗期间，每天早、中、晚仔细观察猪只的临床症状，根据治疗效果分为有效和无效，注射3天后，已出现临床症状的猪，症状完全消失或在停药后15天内没有新的病猪出现，判定为有效，用药6天，原来出现临床症状的猪仍有明显临床症状或死亡，停药15天后又复发判定为无效。试验结果：组别有效率（%）A100%饲养期间，A组猪只未见有猪支原体感染病猪出现。以下结合具体对照试验对本发明进一步说明：其中，实验组从猪场选取健康、非免疫15日龄仔猪100头，饲养于消毒后的饲养室中，饲喂常规配制得到的全价日粮，全价日粮中不掺加任何抗病毒或抗生素类成分，饲养期间，每天灌喂水葫芦根酶解提取物，灌喂量为20mg/kg，连续灌喂15天，停止灌喂；仔猪长至35日龄时，通过气管接种30mL猪肺炎支原体232毒株，剂量为每头猪每毫升105变色单位；接种后持续观察15天，仅有2只猪出现感染症状，表现为咳嗽、气喘，淘汰病猪，保留剩余未发病的猪只98头，每天灌喂水葫芦根酶解提取物，灌喂量为50mg/kg，连续灌喂15天，停止灌喂；仔猪长至70日龄时，通过气管接种90mL猪肺炎支原体232毒株，剂量为每头猪每毫升105变色单位；接种后持续观察15天，未见有猪只发病，保留未发病的98头猪只。其中，饲养期间，每隔1天对饲养室消毒一次。其中，所述水葫芦根酶解提取物制作方法为，将粉碎的水葫芦根浸泡在加有纤维素酶、木聚糖酶的55%乙醇中，在44℃、pH值等于6的条件下进行酶解提取，所述酶解提取时间为9小时；55%乙醇用量为水葫芦根重量的9倍；纤维素酶的用量为4mg/g水葫芦根；木聚糖酶的用量为1.1mg/g水葫芦根。对照组从猪场选取健康、非免疫15日龄仔猪100头，饲养于消毒后的饲养室中，饲喂常规配制得到的全价日粮，全价日粮中不掺加任何抗病毒或抗生素类成分，；仔猪长至35日龄时，通过气管接种30mL猪肺炎支原体232毒株，剂量为每头猪每毫升105变色单位；接种后持续观察15天，有82只猪出现感染症状，表现为咳嗽、气喘，淘汰病猪，保留剩余未发病的猪只18头，检测未发病猪只体内抗体水平；剩余18头仔猪长至70日龄时，通过气管接种90mL猪肺炎支原体232毒株，剂量为每头猪每毫升105变色单位；接种后持续观察15天，有15头猪只发病，保留未发病的3头猪只。实验组和对照组试验期间，分别于第15天、30天、35天、50天、65天、70天、85天对未淘汰猪只采血，用间接ELISA测定猪肺炎支原体抗体；结果见图1。当前第1页1 2 3