一种血清4型禽腺病毒灭活苗及其制备方法与流程

文档序号:12047060阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种血清4型禽腺病毒灭活苗,其特征在于,所述的灭活苗的抗原为通过悬浮培养方法获得的效价不低于109TCID50/ml的灭活后的血清4型禽腺病毒。

2.根据权利要求1所述的血清4型禽腺病毒灭活苗,其特征在于,所述的血清4型禽腺病毒是血清4型禽腺病毒JH株。

3.根据权利要求1所述的血清4型禽腺病毒灭活苗,其特征在于,所述的灭活苗的抗原通过下述方法获得:将血清4型禽腺病毒接种于鸡肝细胞,利用激流式生物反应器扩增血清4型禽腺病毒;反应器转速为40r/min、200g载体初始细胞接种为1×109个、细胞生长液为10%FBS血清的DMEM/F12培养液、病毒感染及维持液为含2%FBS血清的DMEM/F12培养基、最适PH为7.0-7.2、病毒接种量MOI为0.1以及病毒收获时间为接种后96小时。

4.一种制备高效价血清4型禽腺病毒灭活苗的方法,其特征在于包括以下步骤:

(1)血清4型禽腺病毒悬浮培养:将血清4型禽腺病毒接种于鸡肝细胞,利用激流式生物反应器扩增血清4型禽腺病毒;悬浮培养激流式生物反应器主要培养条件参数为:反应器转速为40r/min、200g载体初始细胞接种为1×109个、细胞培养液为10%FBS血清的DMEM/F12培养液、病毒感染及维持液为含2%FBS血清的DMEM/F12培养基、最适PH为7.0-7.2、病毒接种量MOI为0.1以及病毒收获时间为接种后96小时;感染后96小时后收集病毒、分装,并测定病毒效价;

(2)血清4型禽腺病毒灭活苗制备:将以上扩增获得的血清4型禽腺病毒按终浓度0.1%的比例加入甲醛溶液,置37℃灭活24小时,并进行灭活及无菌检验;将灭活血清4型禽腺病毒稀释至4×107.0TCID50/mL,按V/V为4%的比例,向灭活病毒液中加入灭菌吐温-80,并使吐温-80彻底溶解,获得水相;将3份油相导入乳化罐中,同时缓慢加入1份水相进行乳化,制成血清4型禽腺病毒灭活疫苗,分装。

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