本发明涉及一种牡丹籽皮中总黄酮的提取工艺，属于天然产物提取技术领域。
背景技术：
黄酮类化合物广泛存在于自然界中，属于植物在长期自然选择过程中产生的一些次级代谢产物。黄酮类化合物可以分为10多个类别：黄酮、黄烷醇、异黄酮、双氢黄酮、双氢黄酮醇、噢弄、黄烷酮、花色素、查耳酮、色原酮等，现已发现约4000余种黄酮类化合物，主要存在于植物的叶、果实、根、皮中。黄酮类化合物具有：抗氧化、清除氧自由基；调节心血管系统；抗癌、防癌作用；抗炎、免疫及抗衰老作用；对内分泌系统作用；生物类黄酮还具有吸收紫外辐射、止咳、祛痰、泻下、解痉、提高记忆力、抗过敏、活血化瘀、利胆及肝脏保护作用等。
黄酮类化合物的提取纯化方法很多，常用的提取方法有水提取法、有机溶剂萃取法、微波萃取法、超声波提取法、超临界流体萃取法等。常用的分离纯化黄酮类化合物的方法有硅胶柱层析法、聚酰胺柱层析法、葡聚糖凝胶柱层析、纸层析法、薄层层析法、铅盐沉淀、大孔树脂吸附分离法等。其中大孔树脂吸附分离法在工业上用来制备富含黄酮类化合物提取物的应用最为广泛。
大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的有机高聚物吸附剂。大孔吸附树脂为吸附和筛选原理相结合的分离材料，它的吸附性是由于范德华引力或生成氢键的结果，筛选原理是由于其本身多孔性结构所决定。有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而分开，这使得有机化合物尤其是水溶性化合物的提纯得以大大简化。大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、吸附选择性强、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和，使用周期长、节省费用等优点，避免了用有机溶剂提取分离而造成的有机溶剂回收难、损耗大、成本高、易燃易爆、对环境污染严重等缺点。大孔吸附树脂已在环保、食品、医药领域得到了广泛的应用，大孔吸附树脂在中草药有效成分精制纯化中的应用也逐年增加，在中草药化学成分的分离、富集中的应用也越来越受到人们的重视。
技术实现要素：
针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种牡丹籽皮中总黄酮的提取工艺，操作方便，提取效果好。
为了实现上述目的，本发明采用的一种牡丹籽皮中总黄酮的提取工艺，具体包括以下步骤，
1）大孔树脂的预处理：将大孔树脂用无水乙醇浸泡40-60 h，使其充分溶胀，装入层析柱中，再用乙醇冲洗层析柱，洗至洗出液中加入适量的蒸馏水无白色浑浊为止，然后用蒸馏水洗至无醇味，滤取备用；
2）总黄酮的提取：将牡丹籽皮提取液缓慢通过由步骤1）中大孔树脂组成的树脂柱，用蒸馏水洗去柱中残留的溶液，再用洗脱剂溶液以0.20-0.40 ml/s的流速流过树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩至干，即得牡丹籽皮总黄酮。
作为改进，所述步骤1）洗出液中蒸馏水的加入量为洗出液体积的4-6倍。
作为改进，所述步骤1）中采用HZ802、HZ801大孔树脂中任一种或其混合。
作为改进，所述步骤2）中采用的洗脱剂溶液为50%-70%体积浓度的乙醇溶液。
作为进一步改进，所述步骤2）中，采用浓度为60%的乙醇溶液以0.29mL/s的流速流过树脂柱。
本发明中牡丹籽皮提取液的制备可采用常用提取技术获得如可采用超声波提取方法，以60%乙醇为提取剂，按牡丹籽皮原料与提取剂的料液质量比1:20，提取1.5h后过滤即得牡丹籽皮提取液。
与现有技术相比，本发明采用HZ802、HZ801系列大孔树脂进行吸附提取，该系列大孔吸附树脂是以苯乙烯和丙酸酯为单体，加入乙烯苯为交联剂，甲苯、二甲苯为致孔剂，它们相互交联聚合形成了多孔骨架结构。大孔吸附树脂利用的是物理吸附原理，吸附性是由于范德华力或产生氢键的结果。在牡丹籽皮黄酮类物质的制备上，大孔吸附树脂具有两个独特优点：一是，大孔吸附树脂流速较快，生产效率高；二是，大孔吸附树脂价格便宜，生产成本低。本发明操作简单，成本低，易于工业化，得到的总黄酮含量较高，分离流速快，分离效率高。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面通过实施例，对本发明进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限制本发明的范围。除非另有定义，本文所使用的所有的技术术语和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同，本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
实施例一
一种牡丹籽皮中总黄酮的提取工艺，具体包括以下步骤，
1）大孔树脂的预处理：采用HZ802大孔树脂，用无水乙醇浸泡48h，使其充分溶胀，装入层析柱中，再用无水乙醇冲洗层析柱，洗至洗出液无水乙醇中加入适量的蒸馏水(v/v，1:5)无白色浑浊为止，然后用蒸馏水洗至无醇味，滤取备用；
2）总黄酮的提取：将浓度为1.14 mg/mL的牡丹籽皮提取液缓慢通过由步骤1）中大孔树脂组成的树脂床，用1000mL的水洗去柱中残留的溶液，再用浓度为60%的乙醇溶液以0.29ml/s的流速流过树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩至干，即得牡丹籽皮总黄酮，含量为70.4%。
实施例二
一种牡丹籽皮中总黄酮的提取工艺，具体包括以下步骤，
1）大孔树脂的预处理：采用HZ801大孔树脂，用无水乙醇浸泡48 h，使其充分溶胀，装入层析柱中，再用乙醇冲洗层析柱，洗至洗出液中加入适量的蒸馏水(v/v，1:5)无白色浑浊为止，然后用蒸馏水洗至无醇味，滤取备用；
2）总黄酮的提取：将浓度为1.14 mg/mL牡丹籽皮提取液缓慢通过由步骤1）中大孔树脂组成的树脂床，用1000mL的水洗去柱中残留的溶液，再用浓度为60%的乙醇溶液以0.29ml/s的流速流过树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩至干，即得牡丹籽皮总黄酮，含量为69.8%。
比较例1
一种牡丹籽皮中总黄酮的提取工艺，具体包括以下步骤，
1）大孔树脂的预处理：采用DA201大孔树脂，用无水乙醇浸泡48h，使其充分溶胀，装入层析柱中，再用乙醇冲洗层析柱，洗至洗出液中加入适量的蒸馏水(v/v，1:5)无白色浑浊为止，然后用蒸馏水洗至无醇味，滤取备用；
2）总黄酮的提取：将浓度为1.14 mg/mL牡丹籽皮提取液缓慢通过由步骤1）中大孔树脂组成的树脂床，用1000mL的水洗去柱中残留的溶液，再用体积浓度为60%的乙醇溶液以0.15ml/s的流速流过树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩至干，即得牡丹籽皮总黄酮，含量为59.4%。
比较例2
一种牡丹籽皮中总黄酮的提取工艺，具体包括以下步骤，
1）大孔树脂的预处理：采用AB-8大孔树脂，用无水乙醇浸泡48h，使其充分溶胀，装入层析柱中，再用乙醇冲洗层析柱，洗至洗出液中加入适量的蒸馏水(v/v，1:5)无白色浑浊为止，然后用蒸馏水洗至无醇味，滤取备用；
2）总黄酮的提取：将浓度为1.14 mg/mL牡丹籽皮提取液缓慢通过由步骤1）中大孔树脂组成的树脂床，用1000mL的水洗去柱中残留的溶液，再用体积浓度为60%的乙醇溶液以0.15ml/s的流速流过树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩至干，即得牡丹籽皮总黄酮，含量为60.3%。
同时，与现有常用的通过聚酰胺吸附的提取工艺相比，本发明采用大孔树脂进行吸附，与聚酰胺吸附工艺相比，大孔吸附树脂是以苯乙烯和丙酸酯为单体，加入乙烯苯为交联剂，甲苯、二甲苯为致孔剂，它们相互交联聚合形成了多孔骨架结构。而聚酰胺由酰胺聚合而成的一类高分子物质，又叫尼龙、锦纶。其次，原理不同。大孔吸附树脂利用的是物理吸附原理，吸附性是由于范德华力或产生氢键的结果。聚酰胺柱的原理主要是氢键和双重层析两种。
在牡丹籽皮黄酮类物质的制备上，大孔吸附树脂具有两个独特优点：一是，大孔吸附树脂流速较快，生产效率高；二是，大孔吸附树脂价格便宜，生产成本低。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。