一种地塞米松脂质乳滴眼液及其制备方法与流程

本发明涉及医药
技术领域：
，尤其涉及一种地塞米松脂质乳滴眼液及其制备方法。
背景技术：
：地塞米松是用于治疗眼内炎症特别是黄斑性病变的常用药物，但是通过传统滴眼给药的治疗效果受药物难以进入眼内组织，并且在眼内分布量少，治疗眼内或眼后段疾病的效果并不显著。因此，眼内或眼后段疾病如虹膜、睫状体等眼内炎、玻璃体出血或视网膜黄斑性病变等疾病的治疗，临床需采用静脉注射或玻璃体注射、结膜注射等给药方法。但是眼内注射是侵入性的，而且治疗过程中需要重复多次注射，可能导致结膜下结疤、粘连；注射过程容易刺伤角膜或引起出血，这无疑增加了发生眼内炎的风险，一旦发生眼内炎，将可能导致患者视力不可逆损伤乃至丧失，这也是困扰本领域技术人员的技术难题。技术实现要素：本发明提供一种地塞米松脂质乳滴眼液及其制备方法，以增加眼内组织分布、促进向眼内的渗透，进而达到安全、有效治疗眼内及眼底疾病的目的。为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的，一种地塞米松脂质乳滴眼液，所述的地塞米松脂质乳滴眼液为水包油亚微乳液体系，乳滴中的油脂中包覆有由脂质载体和地塞米松形成的脂质纳米颗粒。需要说明的是，上述的地塞米松脂质乳滴眼液乳滴平均粒径小于200nm，粒径分布为173±36nm，90％粒径累计值小于等于500nm。需要说明的是，上述的地塞米松脂质乳滴眼液组分包括以下重量百分比：需要说明的是，上述的脂质载体为蛋黄卵磷脂、LIPOIDE80(精制蛋黄卵磷脂，其中磷脂酰胆碱含量为80)、LIPOIDS75(大豆卵磷脂)、大豆磷脂、氢化大豆磷脂中的任意一种或多种任意比例的混合物。需要说明的是，上述的油脂为药用大豆油、橄榄油、注射用大豆油、辛酸/癸酸甘油三酯、中链甘油三酯中的任意一种或多种任意比例的混合物。需要说明的是，上述的乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油、聚乙二醇十五羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、泊洛沙姆、丙三醇、丙二醇中的任意一种或多种任意比例的混合物。需要说明的是，上述的等渗调节剂为丙三醇、氯化钠、甘露糖醇中的任意一种或多种任意比例的混合物；pH调节剂采用盐酸、氢氧化钠、磷酸盐、枸橼酸盐中的任意一种或多种任意比例的混合物；所述的pH调节剂的用量为调节所述的地塞米松脂质乳滴眼液的pH为5.5～8。需要说明的是，上述的抑菌剂采用苯乙醇、山梨酸或苯氧乙醇中的任意一种或多种任意比例的混合物，所述的抑菌剂的质量浓度为0.75％～1.5％。一种如上所述的地塞米松脂质乳滴眼液的制备方法，包括以下步骤：步骤1：将地塞米松和脂质载体分散在挥发性的有机溶剂中，减压除去挥发性的有机溶剂，形成地塞米松脂质载体的蜂窝状膜，并分散于油脂中形成的油相；步骤2：将油相与具有乳化剂的水相混合、剪切乳化，即得地塞米松脂质乳滴眼液的初乳；步骤3：向地塞米松脂质乳滴眼液的初乳中加入适量的水，即得。在上述的地塞米松脂质乳滴眼液的制备方法中，所述的步骤3为初乳经压力500～1200bar的高压均质，循环次数为3～15次，乳匀，得脂质乳；制得的脂质乳用微孔滤膜过滤，调节pH，最后加入抑菌剂、硼酸缓冲水溶液液、磷酸盐缓冲水溶液或硼酸盐缓冲水溶液中的一种或几种，即得脂质滴眼液。优选地，步骤3为初乳经压力600～800bar的高压均质，循环次数为5～10次，乳匀，得脂质乳；制得的脂质乳用微孔滤膜过滤，调节pH，最后加入处方量抑菌剂、硼酸缓冲水溶液液、磷酸盐缓冲水溶液或硼酸盐缓冲水溶液中的一种，即得脂质滴眼液。在上述的地塞米松脂质乳滴眼液的制备方法中，所述的挥发性的有机溶剂由乙醇与丙酮组成，乙醇与丙酮的总重量和脂质载体的体积比为20：1，乙醇与丙酮的体积比1：1～1：3；需要说明的是，乙醇与丙酮的总重量和脂质载体的体积比在实际应用中并不需要严格限定在20:1这个值，如乙醇与丙酮的总重量为25g，脂质载体的体积为1ml依然可以实施本方案，乙醇与丙酮的用量的原则在于使地塞米松和蛋黄卵磷脂能够有效分散即可。对于本领域技术人员来说，其合理的选用范围都是可选的。在上述的地塞米松脂质乳滴眼液的制备方法中，所述的减压过程中，反应温度为40℃，真空度为-0.07～-0.08MPa。需要说明的是，在实际应用中，在减压过程中的温度对于本发明的效果的影响并不是决定性的，反应温度一般可以选择为室温或者略高于或低于室温的温度如20-40℃都是可选的，当然也并不排除与更高的温度。本发明中减压温度和减压时间是密切相关的，温度越高，真空度越接近真空，其减压时间越短，在实际操作过程中，控制合理的温度使挥发性溶剂能够以稳定的速度挥发即可，应当避免温度过高导致的溶液爆沸。本发明的有益效果：本发明将药物与具有两亲性的磷脂结合，能够分散形成独立的纳米粒子，具有生物黏附性。将其包载于水包油型亚微乳中的油相，可形成类似于泪液膜的微观结构，能够促进药物透过生物膜屏障。由于脂质纳米粒与水包油型亚微乳独特的结构，能够缓慢地释放出包封的药物，增加药物在眼内组织的分布、促进向眼内的渗透，进而达到安全、有效治疗眼内及眼底疾病的目的。因此，通过本发明制备的一种地塞米松脂质乳滴眼液与市售滴眼液相比，在眼内滞留时间明显延长，眼内各组织药物浓度明显提高，并且能使其透过眼内屏障的药物量增加，不仅有益于提高眼内药物浓度，而且还能通过滴眼方式治疗眼内或眼后段疾病。附图说明图1是实施例1的粒径分布图；图2是实施例2的粒径分布图；图3是实施例3的粒径分布图；图4是实施例1的Zeta电位图；图5是实施例2的Zeta电位图；图6是实施例3的Zeta电位图；图7是实施例1的空白对照的组织检查学图；图8是实施例2的空白对照的组织检查学图；图9是实施例3的空白对照的组织检查学图；图10是市售对照组的空白对照的组织检查学图；图11是实施例1的受试制剂的组织检查学图；图12是实施例2的受试制剂的组织检查学图；图13是实施例3的受试制剂的组织检查学图；图14是市售对照组的受试制剂的组织检查学图；图15是实施例1-3以及市售对照组的离体角膜累计渗透量图；图16是实施例1-3以及市售对照组的各时间点药物在角膜组织中的分布图；图17是实施例1-3以及市售对照组的各时间点药物在巩膜组织中的分布图；图18是实施例1-3以及市售对照组的各时间点药物在玻璃体组织中的分布图；图19是实施例1-3以及市售对照组的各时间点药物在晶状体组织中的分布图；图20是实施例1-3以及市售对照组的药物浓度-时间曲线图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。实施例1制备方法：取处方量蛋黄卵磷脂PL-100M和地塞米松溶解在乙醇与丙酮(1:1，v/v)的混合溶剂中，混合溶剂为200g；40℃减压蒸发除去溶剂形成药物与磷脂的混合物，将该混合物分散至处方量的药用大豆油中形成油相，另取处方量的泊洛沙姆188乳化剂溶解于适量水中，随后将含丙三醇的水溶液与油相混合，800rpm剪切乳化10min，既得初乳。调节高压均质机的二级阀压力为200～300bar，均质2min使已细化的颗粒分布的更加均匀，再调节一级阀500～600bar之间，循环10次匀质处理，使物料充分在阀芯、阀座和冲击环三者组成的狭小区域内产生类似爆咋效应的强烈的孔穴作用，同时伴随着物料通过阀芯和阀座间的狭缝产生的剪切作用以及冲击环撞击产生的高速撞击作用，使得整个体系得到超微细化，待高压匀质结束后，调节pH至6.5～7.8之间，加入苯乙醇，通氮气，小容量安瓿熔封，100℃流通蒸汽灭菌30～45min，即得地塞米松脂质乳滴眼液。实施例2制备方法：取处方量LIPOIDE80和地塞米松溶解在乙醇与丙酮(1:3，v/v)的混合溶剂中，混合溶剂为100g；40℃减压蒸发除去溶剂形成药物与磷脂的混合物，将该混合物分散至处方量的药用大豆油中形成油相，另取处方量的SolutolHS15乳化剂溶解于适量水中，随后将含乳化剂的水溶液与油相混合，800rpm剪切乳化10min，既得初乳。调节高压均质机的二级阀压力为200～300bar，均质2min使已细化的颗粒分布的更加均匀，再调节一级阀500～600bar之间，循环10次匀质处理，使物料充分在阀芯、阀座和冲击环三者组成的狭小区域内产生类似爆炸效应的强烈的孔穴作用，同时伴随着物料通过阀芯和阀座间的狭缝产生的剪切作用以及冲击环撞击产生的高速撞击作用，使得整个体系得到超微细化，待高压匀质结束后，调节pH至6.5～7.8之间，加入山梨酸，通氮气，小容量安瓿熔封，100℃流通蒸汽灭菌30～45min，即得地塞米松脂质乳滴眼液。实施例3制备方法：取处方量LIPOIDS75和地塞米松溶解在乙醇与丙酮(1:2，v/v)的混合溶剂中，混合溶剂为140g；40℃减压蒸发除去溶剂形成药物与磷脂的混合物，将该混合物分散至处方量的药用大豆油中形成油相，另取处方量的CremophorEL乳化剂溶解于适量水中，随后将含乳化剂的水溶液与油相混合，800rpm剪切乳化10min，既得初乳。调节高压均质机的二级阀压力为200～300bar，均质2min使已细化的颗粒分布的更加均匀，再调节一级阀500～600bar之间，循环10次匀质处理，使物料充分在阀芯、阀座和冲击环三者组成的狭小区域内产生类似爆咋效应的强烈的孔穴作用，同时伴随着物料通过阀芯和阀座间的狭缝产生的剪切作用以及冲击环撞击产生的高速撞击作用，使得整个体系得到超微细化，待高压匀质结束后，调节pH至6.5～7.8之间，加苯氧乙醇，通氮气，小容量安瓿熔封，100℃流通蒸汽灭菌30～45min，即得地塞米松脂质乳滴眼液。通过以下实验来说明本发明中地塞米松脂质乳滴眼液的制剂特征、眼部刺激性及其与常规制剂相比角膜渗透性增强的特性。1.粒径与电位试验药物：本发明公开的地塞米松脂质乳滴眼液；实验方法：取本发明公开的地塞米松脂质乳滴眼液适量用去离子水适当稀释，采用粒度DelsaNanoC激光粒度仪测定，自动调节仪器光强度在10000ICP左右，温度控制在25℃，散射角度为165°，测定其粒径分布及电位强度。测试结果：实施例1-3的粒径分布图见图1-图3；其中，在图1-图3中，横坐标Diameter(nm)表示直径(nm)，纵坐标(左)DifferentialIntensity(％)为激光强度；纵坐标(右)CumulativeIntensity(％)为累计强度(％)。实施例1-3的Zeta电位图见图4-图6；其中，在图4-图6中，横坐标(上)Frequency(Hz)为电位信号出现的频次(Hz)；纵坐标Intensity为电位信号强度；横坐标(下)ZetaPotential(mV)为电位(mV)。实施例1-3的多分散指数(PDI)见表-1：表-1实施例1-3的多分散性指数项目实施例1实施例2实施例3PDI0.103±0.0120.176±0.270.119±0.0172.刺激性评价试验药物：本发明公开的地塞米松脂质乳滴眼液，实施例1、实施例2、实施例3和市售滴眼液(含地塞米松、妥布霉素复方制剂)对照组，每次给药量为100μl；试验动物：清洁级新西兰白兔12只，雌雄各半，体重2.5～3.5kg(购自南方医科大学实验动物中心)；动物饲养环境：20℃，RT30％～70％，人工光线，12小时日光，12小时黑暗；实验动物合格证号：NO.44002100003592；实验方法：采用同体自身对照法，将0.1mL试验药物滴入右眼结膜囊内，左眼滴入乳酸林格注射液作为对照。给药后使眼睛被动闭合5～10s。每天3次，连续给药7天，观察每次给药前及最后一次给药后(1、2、4、24、48和72h)时角膜，虹膜，结膜的生理情况，按照Draize试验表进行评分，计算各组受试制剂得分。刺激性评价末次给药观察结束后，耳缘静脉注射空气处死家兔，分别取对组及受试组眼球，用4％多聚甲醛溶液固定48h后，石蜡切片，HE(苏木精-伊红)染色，中性树胶封片，显微镜下放大适当倍数分别检查对照组及受试组虹膜、角膜、视网膜等组织，观察基底细胞与上皮细胞形态、嗜曙红细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞的组织形态、浸润有无改变。实验结果：给药期间和末次给药后，肉眼观察家兔眼角膜无混浊，虹膜和结膜未见红肿、充血等异常现象。眼球组织切片如图7-图14所示，与对照组相比，暴露于不同制剂的组织并未发生显著改变。显微镜下观察受试组上皮细胞形态正常，基质中淋巴组织、白细胞正常，未出现形态改变、嗜中性粒细胞浸润等现象。3.离体角膜透过性评价试验药物：本发明公开的地塞米松脂质乳滴眼液，实施例1、实施例2、实施例3和市售滴眼液对照组，每次给药量为100μl；评价方法：采用改进的Franz立式扩散池，扩散口直径8mm，有效扩散面积为0.5024cm2，接收池容积为6mL。将新鲜离体角膜小心固定在Franz扩散池的供给池和接收池之间，使上皮层面向供给池。接收池中灌满接收介质，精密移取样品于供给池，薄膜封口，防止水分蒸发。扩散池置于透皮扩散试验仪上，调节温度34±1℃，转速为200rpm，于时间点取样2ml，HPLC测定，计算地塞米松的透过参数。实验结果：不同时间点离体角膜累积透过量Q如图-15所示，将Q与渗透时间t拟合方程，计算表观渗透系数。如表-2所示，实施例中地塞米松脂质乳滴眼液的表观渗透系数Papp与溶液对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，脂质滴眼液对于地塞米松可产生显著的促渗作用。表-2离体角膜透过参数4.眼组织分布研究试验药物：本发明公开的地塞米松脂质乳滴眼液，实施例1、实施例2、实施例3和市售滴眼液对照组，每次给药量为100μl。给药设计：家兔随机分为3组，每组5只，每组给予不同的制剂。实验前12h开始禁食，但正常饮水。给药时，分别撑开家兔眼睑使用微量注射器在左、右眼分别滴入试验药物100μl，迫使家兔眼睑闭合约15秒使药物分布均匀。样品采集：待0.75、1.5、3、6和9h时间点后，摘取眼球，用乳酸林格溶液冲洗并用滤纸吸干水分，分离角膜、巩膜、玻璃体和晶状体，精密称重，采用Re-HPLC测定各时间点药物浓度。实验结果：不同处方制剂在眼部各组织的分布情况见图16～图19。实施例的眼部组织分布量明显比市售滴眼液高。由于生物相容性磷脂的加入，改变了难溶性药物地塞米松的渗透性，与市售滴眼液相比脂质乳可提高药物在眼部组织分布的分布量，为其治疗眼后段疾病奠定基础。5.房水内药物时间分布试验药物：本发明公开的地塞米松脂质乳滴眼液，实施例1、实施例2、实施例3和市售滴眼液对照组，每次给药量为100μl。给药设计：采用角膜穿刺术，家兔随机分为3组，每组3只，每组给予不同的制剂。实验前12h开始禁食，但正常饮水。给药时，分别撑开家兔眼睑使用微量注射器在左、右眼分别滴入试验药物100μl，迫使家兔眼睑闭合约15秒使药物分布均匀。样品采集：待0.75、1.5、3、6和9h时间点后，抽取房水100μL，采用Re-HPLC测定各时间点药物浓度。采用统计矩法计算药动学参数，如图-20房水中的药物浓度-时间曲线可以看出，滴眼给药后，由于药物进入房水前需要透过角膜，因此房水中的地塞米松有一个非静脉给药途径的吸收过程，达峰浓度的时间相对比较慢。结果表明，实施例中脂质乳滴眼液组的峰浓度显著高于市售滴眼液对照组，本发明制备的脂质乳滴眼液有利于地塞米松在眼内的吸收。本发明与传统方法相比具有以下优点：1.本发明将药物与具有两亲性的磷脂结合，能够分散形成独立的纳米粒子，具有生物黏附性。将其包载于水包油型亚微乳中的油相，可形成类似于泪液膜的微观结构，能够促进药物透过生物膜屏障。由于脂质纳米粒与水包油型亚微乳独特的结构，能够缓慢地释放出包封的药物，增加药物在眼内组织的分布、促进向眼内的渗透，进而达到安全、有效治疗眼内及眼底疾病的目的。2.通过本发明制备的一种地塞米松脂质乳滴眼液与市售滴眼液相比，在眼内滞留时间明显延长，眼内各组织药物浓度明显提高，并且能使其透过眼内屏障的药物量增加，不仅有益于提高眼内药物浓度，而且还能通过滴眼方式治疗眼内或眼后段疾病3.本发明采用薄膜分散-高压均质的工艺制备得到的地塞米松脂质乳滴眼液采用激光粒度法测得平均粒径小于200nm，粒径分布范围在173±36nm之间，D90小于500nm，体系乳滴表面所带负电荷，ζ电位值在-(50±10)mV，体系稳定性良好。以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3