SESTRIN-GATOR2相互作用的调节剂和其用途的制作方法

本发明涉及适用于调节sestrin-gator2相互作用，从而间接地选择性调节mtorc1活性的化合物和方法。本发明还提供包含本发明化合物的药学上可接受的组合物和使用所述组合物来治疗各种病症的方法。

背景技术：

雷帕霉素复合体1(rapamycincomplex1，mtorc1)蛋白激酶的机理标靶是感知多样化环境暗示的主生长调节剂，环境暗示例如生长因子、细胞应激以及营养物和能量水平。mtorc1在活化时使加强如mrna翻译和脂质合成的合成代谢过程的底物磷酸化并限制如自体吞噬的分解代谢过程。在广泛范围的疾病中出现了mtorc1调节异常，所述疾病尤其包括糖尿病、癫痫症、神经变性、免疫反应、骨骼肌生长被抑制以及癌症(豪厄尔(howell)等人,(2013)生化学会会刊(biochemicalsocietytransactions)41,906-912；金姆(kim)等人,(2013)分子与细胞(moleculesandcells)35,463-473；拉普兰特(laplante)和萨巴蒂尼(sabatini),(2012)细胞(cell)149,274-293)。

许多上游输入，包括生长因子和能量水平，通过tsc复合体发信号到mtorc1，tsc复合体调控rheb，一种小gtp酶，它是mtorc1的基本活化剂(布鲁加罗拉斯(brugarolas)等人,(2004)基因与发育(genes&amp；development)18,2893-2904；加拉米(garami)等人,(2003)分子细胞(molecularcell)11,1457-1466；伊诺基(inoki)等人,(2003)基因与发育17,1829-1834；龙(long)等人,(2005)当代生物学(currentbiology)15,702-713；桑贾克(sancak)等人,(2008)科学(science)(纽约州纽约)320,1496-1501；绍塞多(saucedo)等人,(2003)自然·细胞生物学(naturecellbiology)5,566-571；斯托克(stocker)等人,(2003)自然·细胞生物学5,559-565；缇依(tee)等人,(2002)美国国家科学院院刊(procnatlacadsciusa)99,13571-13576)。氨基酸似乎不是通过tsc-rheb轴发信号到mtorc1，相反通过由raga或ragb分别与ragc或ragd结合组成的杂二聚raggtp酶起作用(海洛斯(hirose)等人,(1998)细胞科学杂志(journalofcellscience)111(pt1),11-21；金姆等人,(2008)自然·细胞生物学10,935-945；诺部库尼(nobukuni)等人,(2005)美国国家科学院院刊102,14238-14243；洛可(roccio)等人,(2005)致癌基因(oncogene)25,657-664；桑贾克等人,(2008)科学(纽约州纽约)320,1496-1501；舒尔曼(schürmann)等人,(1995)生物化学杂志(thejournalofbiologicalchemistry)270,28982-28988；关口(sekiguchi)等人,(2001)生物化学杂志276,7246-7257；史密斯(smith)等人,(2005)生物化学杂志280,18717-18727)。raggtp酶控制mtorc1的亚细胞定位并且氨基酸有利于将mtorc1募集到溶酶体表面，在溶酶体表面还存在rhebgtp酶(伯格(buerger)等人,(2006)生物化学与生物物理学研究通讯(biochemicalandbiophysicalresearchcommunications)344,869-880；迪波尔(dibble)等人,(2012)分子细胞47,535-546；西都(saito)等人,(2005)生物化学杂志(journalofbiochemistry)137,423-430；桑贾克等人,(2008)科学(纽约州纽约)320,1496-1501)。已鉴别出raggtp酶上游途径的若干阳性组分。ragulator复合体将raggtp酶定位于溶酶体表面，并且与液泡atp酶一起，有利于在raga/b上以gdp交换gtp(巴-皮勒德(bar-peled)等人,(2012)细胞150,1196-1208；桑贾克等人,(2010)细胞141,290-303；宗楚(zoncu)等人,(2011)科学·信号传导(sciencesignaling)334,678-683)。不同的flcn-fnip复合体作用于ragc/d并且刺激它将gtp水解成gdp(图顺(tsun)等人，2013)。当raga/b负载gtp并且ragc/d负载gdp时，这些杂二聚体结合mtorc1并将其募集到溶酶体表面，在溶酶体表面，mtorc1可以开始与其活化剂rhebgtp酶接触。

当前的研究已将gator1多蛋白复合体鉴别为是氨基酸感知途径的主要负调控剂，并且gator1多蛋白复合体缺失会引起mtorc1信号传导对氨基酸饥饿完全不敏感(巴-皮勒德等人,(2013)科学340,1100-1106；潘乔德(panchaud)等人,(2013)科学·信号传导6,ra42)。gator1由depdc5、nprl2和nprl3组成，并且是raga/b的gtp酶活化蛋白(gap)。gator2多蛋白复合体具有五个已知亚基(wdr24、wdr59、mios、sec13和seh1l)，是途径的阳性组分并且在gator1的上游或平行于gator1，但是其分子功能直到最近仍是未知的(巴-皮勒德等人,(2013)科学340,1100-1106)。

近来，通过鉴别gator2与一或多种sestrin的结合并且证实所得sestrin-gator2复合体调控mtorc1的亚细胞定位和活性，说明了关于mtorc1途径的额外信息。具体来说，sestrin-gator2复合体的存在通过防止mtorc1易位到溶酶体膜，抑制了mtorc1途径并降低了mtorc1活性。gator2与sestrin，并且尤其是sestrin1和sestrin2的相互作用被氨基酸，尤其是亮氨酸拮抗，并且就较轻微程度来说，被异亮氨酸、甲硫氨酸和缬氨酸拮抗。在亮氨酸存在下，gator2不与sestrin1或sestrin2相互作用并且mtorc1能够迁移到溶酶体膜，在溶酶体膜，mtorc1具有活性。sestrin1和sestrin2直接结合亮氨酸并且就较轻微程度来说，直接结合异亮氨酸和甲硫氨酸(钱曲鹏(chantranupong)等人,(2014)细胞报告(cellrep.)；9(1):1-8)。sestrin1或sestrin2的亮氨酸结合是破坏其与gator2的相互作用和后续mtorc1活化所必需的。不能结合亮氨酸的sestrin2突变体不能发信号通知mtorc1亮氨酸的存在，并且sestrin2和其同源物枯竭的细胞使得mtorc1对亮氨酸的不存在不敏感(沃尔夫森(wolfson)等人,(2015)科学pii:ab2674[印刷版之前的电子版])。

sestrin是对分子功能特征的了解还很少的三种相关蛋白质(sestrin1、sestrin2和sestrin3)(布赫宾德(buckbinder)等人,(1994)美国国家科学院院刊91,10640-10644；布达诺夫(budanov)等人,(2002)细胞134,451-460；佩特斯(peeters)等人,(2003)人类遗传学(humangenetics)112,573-580)。sestrin2抑制mtorc1信号传导，并且提出过，sestrin2能活化tsc上游的ampk以及与tsc相互作用(布达诺夫和卡琳(karin),(2008)细胞134,451-460)，但是后来的研究发现了sestrin2在不存在ampk的情况下对mtorc1的抑制(彭(peng)等人,(2014)细胞159(1):122-33)，进一步突出了gator2复合体在响应于sestrin2调节mtorc1方面所起到的重要作用。

sestrin-gator2复合体的调节代表了间接地选择性调节mtorc1活性的潜在治疗目标。

技术实现要素：

现在发现，本发明化合物和其药学上可接受的组合物可有效作为sestrin-gator2调节剂。所述化合物具有通式i：

或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文中所定义和描述。

本发明化合物和其药学上可接受的组合物适用于治疗各种与mtorc1相关的疾病、病症或病况。这些疾病、病症或病况包括糖尿病、癫痫症、神经变性、免疫反应、骨骼肌生长被抑制以及细胞增殖性病症(例如癌症)，如本文所述的那些。

具体实施方式

1.本发明的某些实施例的一般描述：

本发明化合物和其组合物适用作sestrin-gator2调节剂。在某些实施例中，本发明提供式i化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

r¹是h或c1-6烷基；

r²是r、-(ch2)n-苯基、-c(o)r、-so2r或-c(o)n(r)2；

n是0、1或2；

每个r独立地是氢、-cn或选自以下的任选地被取代的基团：饱和或不饱和c1-6脂族基、苯基、4到7元饱和或部分不饱和单环碳环、具有1到4个杂原子的5到6元单环杂芳基环、或具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到8元饱和或部分饱和杂环；

r³是环a、-c(o)r、-c(o)or、-c(o)n(r)2、-so3h、-so2n(r)2、-s(o)r、-s(o)环a、-or或-b(or)2，其中同一个硼上的两个or基团与其中间原子连在一起形成除了所述硼和两个氧之外还具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到8元单环饱和或部分不饱和环，或r³和r⁴连在一起形成具有0到1个选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元环；

l是共价键或任选地被1到9个氟基取代的直链或支链c1-6亚烷基链；

环a是任选地被取代的环，选自苯基或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元杂芳基环；

r⁴是r、-cf3、-or、-n(r)2、-si(r)3或-sr，或r³和r⁴连在一起形成具有0到1个选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元环；并且

r⁵是h或c1-4烷基。

2.化合物和定义：

本发明化合物包括在本文中一般描述的化合物，并且通过本文中所公开的类别、子类和物种进一步说明。如本文中所用，除非另外指明，否则以下定义应适用。出于本发明的目的，化学元素是根据元素周期表,cas版本,化学与物理手册(handbookofchemistryandphysics),第75版来鉴别的。另外，有机化学的一般原理描述于“有机化学(organicchemistry)”,托马斯索雷尔(thomassorrell),大学科学书籍(universitysciencebooks),索萨利托(sausalito):1999和“马奇高等有机化学(march'sadvancedorganicchemistry)”,第5版,编辑：史密斯m.b.(smith,m.b.)和马奇j.(march,j.),约翰·威利父子公司(johnwiley&sons),纽约:2001中，这些文献的全部内容特此以引用的方式并入。

如本文中所用的术语“脂族”或“脂族基”意指直链(即，非支链)或支链、被取代或未被取代的、完全饱和或含有一或多个不饱和单元的烃链，或完全饱和或含有一或多个不饱和单元，但不是芳族的单环烃或双环烃(在本文中又称为“碳环”、“环脂族”或“环烷基”)，其与分子的其余部分具有单一连接点。除非另外说明，否则脂族基含有1-6个脂族碳原子。在一些实施例中，脂族基含有1-5个脂族碳原子。在其它实施例中，脂族基含有1到4个脂族碳原子。在其它实施例中，脂族基含有1-3个脂族碳原子，且在其它实施例中，脂族基含有1到2个脂族碳原子。在一些实施例中，“环脂族”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一或多个不饱和单元，但不是芳族的单环c3-c6烃，其与分子的其余部分具有单一连接点。合适的脂族基包括但不限于直链或支链、被取代或未被取代的烷基、烯基、炔基以及其混合物，如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。

术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一或多个(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或杂环的可取代氮，例如n(如在3,4-二氢-2h-吡咯基中)、nh(如在吡咯烷基中)或nr⁺(如在n上被取代的吡咯烷基中))。

如本文中所用的术语“不饱和”意指具有一或多个不饱和单元的部分。

如本文中所用的术语“二价c1-8(或c1-6)饱和或不饱和、直链或支链烃链”是指如本文中所定义的直链或支链二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。

术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”是聚亚甲基，即-(ch2)n-，其中n是正整数，优选1到6、1到4、1到3、1到2或2到3。被取代的亚烷基链是一或多个亚甲基氢原子被取代基置换的聚亚甲基。合适的取代基包括下文关于被取代的脂族基所描述的取代基。

术语“亚烯基”是指二价烯基。被取代的亚烯基链是含有至少一个双键的聚亚甲基，其中一或多个氢原子被取代基置换。合适的取代基包括下文关于被取代的脂族基所描述的取代基。

术语“卤素”意指f、cl、br或i。

单独使用或如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中作为较大部分的一部分使用的术语“芳基”是指总共具有五到十四个环成员的单环或双环系统，其中系统中的至少一个环是芳族的并且其中系统中的每个环含有3到7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳环”互换使用。在本发明的某些实施例中，“芳基”是指芳环系统，包括但不限于苯基、联苯、萘基、蒽基等，其可以具有一或多个取代基。在如本文中所用的术语“芳基”的范围内还包括芳环与一或多个非芳族环稠合的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基(naphthimidyl)、啡啶基或四氢萘基等。

单独使用或作为例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”的较大部分的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”是指这样的基团，其具有5到10个环原子，优选5个、6个或9个环原子；在环阵列中共用6个、10个或14个π电子；并且除了碳原子之外还具有一到五个杂原子。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。如本文中所用的术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括杂芳基环与一或多个芳基、环脂族或杂环基环稠合的基团，其中连接基团或连接点位于杂芳基环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4h-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4h)-酮。杂芳基可以是单环或双环。术语“杂芳基(heteroaryl)”可以与术语“杂芳基环(heteroarylring)”、“杂芳基(heteroarylgroup)”或“杂芳族(heteroaromatic)”互换使用，这些术语中的任一个都包括任选地被取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基，其中烷基部分和杂芳基部分独立地任选地被取代。

如本文中所用的术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基(heterocyclicradical)”和“杂环(heterocyclicring)”可以互换使用并且是指稳定的5到7元单环或7-10元双环杂环部分，其是饱和或部分不饱和的，并且除了碳原子之外还具有一或多个、优选一到四个如上文所定义的杂原子。当作为杂环的环原子使用时，术语“氮”包括被取代的氮。举例来说，在具有0到3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是n(如在3,4-二氢-2h-吡咯基中)、nh(如在吡咯烷基中)或⁺nr(如在n上被取代的吡咯烷基中)。

杂环可以在任何杂原子或碳原子处连接到其侧基，从而产生稳定结构，并且任何环原子都可以任选地被取代。所述饱和或部分不饱和杂环基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂卓基(diazepinyl)、氧氮杂卓基(oxazepinyl)、硫氮杂卓基(thiazepinyl)、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基环(heterocyclylring)”、“杂环基(heterocyclicgroup)”、“杂环部分(heterocyclicmoiety)”和“杂环基(heterocyclicradical)”在本文中可互换使用，并且还包括杂环基环与一或多个芳基、杂芳基或环脂族环稠合的基团，如吲哚啉基、3h-吲哚基、苯并二氢吡喃基(chromanyl)、啡啶基或四氢喹啉基。杂环基可以是单环或双环的。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基，其中烷基部分和杂环基部分独立地任选地被取代。

如本文中所用的术语“部分不饱和”是指环部分包括至少一个双键或三键。术语“部分不饱和”打算涵盖具有多个不饱和位点的环，但并不打算包括如本文中所定义的芳基或杂芳基部分。

如本文中所述，本发明化合物可以含有“任选地被取代的”部分。一般来说，术语“被取代”无论前面有还是没有术语“任选地”，都意指指定部分的一或多个氢被合适的取代基置换。除非另外指明，否则“任选地被取代的”基团可以在基团的每个可取代位置处具有合适的取代基，并且当任何既定结构中超过一个位置可以被超过一个选自指定群组的取代基取代时，在每一个位置处的取代基可以是相同的或不同的。本发明所预想的取代基的组合优选是能形成稳定的或化学可行的化合物的组合。如本文中所用的术语“稳定”是指化合物在经历一些条件以便实现所述化合物的产生、检测，并且在某些实施例中，实现所述化合物的回收、纯化以及用于本文中所公开的一或多个目的时，基本上不发生改变。

“任选地被取代的”基团的可取代碳原子上的合适的单价取代基独立地是卤素；-(ch2)0-4r^o；-(ch2)0-4or^o；-o(ch2)0-4r^o；-o-(ch2)0-4c(o)or^o；-(ch2)0-4ch(or^o)2；-(ch2)0-4sr^o；可被r^o取代的-(ch2)0-4ph；可被r°取代的-(ch2)0-4o(ch2)0-1ph；可被r°取代的-ch＝chph；可被r^o取代的-(ch2)0-4o(ch2)0-1-吡啶基；-no2；-cn；-n3；-(ch2)0-4n(r^o)2；-(ch2)0-4n(r^o)c(o)r^o；-n(r^o)c(s)r^o；-(ch2)0-4n(r^o)c(o)nr^o2；-n(r^o)c(s)nr^o2；-(ch2)0-4n(r^o)c(o)or^o；-n(r^o)n(r^o)c(o)r^o；-n(r^o)n(r^o)c(o)nr^o2；-n(r^o)n(r^o)c(o)or^o；-(ch2)0-4c(o)r^o；-c(s)r^o；-(ch2)0-4c(o)or^o；-(ch2)0-4c(o)sr^o；-(ch2)0-4c(o)osir^o3；-(ch2)0-4oc(o)r^o；-oc(o)(ch2)0-4sr-；sc(s)sr^o；-(ch2)0-4sc(o)r^o；-(ch2)0-4c(o)nr^o2；-c(s)nr^o2；-c(s)sr^o；-sc(s)sr^o；-(ch2)0-4oc(o)nr^o2；-c(o)n(or^o)r^o；-c(o)c(o)r^o；-c(o)ch2c(o)r^o；-c(nor^o)r^o；-(ch2)0-4ssr^o；-(ch2)0-4s(o)2r^o；-(ch2)0-4s(o)2or^o；-(ch2)0-4os(o)2r^o；-s(o)2nr^o2；-(ch2)0-4s(o)r^o；-n(r^o)s(o)2nr^o2；-n(r^o)s(o)2r^o；-n(or^o)r^o；-c(nh)nr^o2；-p(o)2r^o；-p(o)r^o2；-op(o)r^o2；-op(o)(or^o)2；-sir^o3；-(c1-4直链或支链亚烷基)o-n(r^o)2；或-(c1-4直链或支链亚烷基)c(o)o-n(r^o)2，其中每个r^o可以如下文所定义般被取代并且独立地是氢、c1-6脂族基、-ch2ph、-o(ch2)0-1ph、-ch2-(5到6元杂芳基环)、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环，或不管以上定义，两个独立存在的r^o与其中间原子连在一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其可以如下文所定义般被取代。

r^o(或通过将两个独立存在的r^o与其中间原子连在一起所形成的环)上的合适的单价取代基独立地是卤素、-(ch2)0-2r^●、-(卤基r^●)、-(ch2)0-2oh、-(ch2)0-2or^●、-(ch2)0-2ch(or^●)2；-o(卤基r^●)、-cn、-n3、-(ch2)0-2c(o)r^●、-(ch2)0-2c(o)oh、-(ch2)0-2c(o)or^●、-(ch2)0-2sr^●、-(ch2)0-2sh、-(ch2)0-2nh2、-(ch2)0-2nhr^●、-(ch2)0-2nr^●2、-no2、-sir^●3、-osir^●3、-c(o)sr^●、-(c1-4直链或支链亚烷基)c(o)or^●或-ssr^●，其中每个r^●未被取代或当前面是“卤基”时，仅被一或多个卤素取代，并且独立地选自c1-4脂族基、-ch2ph、-o(ch2)0-1ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。r^o的饱和碳原子上的合适的二价取代基包括＝o和＝s。

“任选地被取代的”基团的饱和碳原子上的合适的二价取代基包括以下：＝o、＝s、＝nnr^*2、＝nnhc(o)r^*、＝nnhc(o)or^*、＝nnhs(o)2r^*、＝nr^*、＝nor^*、-o(c(r^*2))2-3o-或-s(c(r^*2))2-3s-，其中每个独立存在的r^*选自氢、可以如下文所定义般被取代的c1-6脂族基、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。与“任选地被取代的”基团的邻位可取代碳结合的合适的二价取代基包括：-o(cr^*2)2-3o-，其中每个独立存在的r^*选自氢、可以如下文所定义般被取代的c1-6脂族基、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。

r^*的脂族基上的合适的取代基包括卤素、-r^●、-(卤基r^●)、-oh、-or^●、-o(卤基r^●)、-cn、-c(o)oh、-c(o)or^●、-nh2、-nhr^●、-nr^●2或-no2，其中每个r^●未被取代或当前面是“卤基”时，仅被一或多个卤素取代，并且独立地是c1-4脂族基、-ch2ph、-o(ch2)0-1ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。

“任选地被取代的”基团的可取代氮上的合适的取代基包括或其中每个独立地是氢、可以如下文所定义般被取代的c1-6脂族基、未被取代的-oph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环，或不管以上定义，两个独立存在的与其中间原子连在一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。

的脂族基上的合适的取代基独立地是卤素、-r^●、-(卤基r^●)、-oh、-or^●、-o(卤基r^●)、-cn、-c(o)oh、-c(o)or^●、-nh2、-nhr^●、-nr^●2或-no2，其中每个r^●未被取代或当前面是“卤基”时，仅被一或多个卤素取代，并且独立地是c1-4脂族基、-ch2ph、-o(ch2)0-1ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到6元饱和、部分不饱和或芳基环。

如本文中所用的术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内适用于与人类和低等动物的组织接触而无不当毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐在所属领域中众所周知。举例来说，s.m.伯奇(s.m.berge)等人在以引用的方式并入本文中的药物科学杂志(j.pharmaceuticalsciences)，1977,66,1-19中详细描述了药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机酸和有机酸以及无机碱和有机碱的盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸或有机酸形成的盐，无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，有机酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸，或通过使用所属领域中所用的其它方法，如离子交换而形成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。

衍生自适当的碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐以及n⁺(c1-4烷基)4盐。代表性碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。适当时，其它药学上可接受的盐包括使用抗衡离子形成的无毒铵、季铵和胺阳离子，抗衡离子如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳烷基磺酸根和芳基磺酸根。

除非另外规定，否则本文中所描绘的结构还意图包括所述结构的所有异构(例如，对映异构、非对映异构以及几何异构(或构象异构))形式；例如，关于每个不对称中心的r与s构形、z与e双键异构体，以及z与e构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物都在本发明的范围内。除非另外规定，否则本发明化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。另外，除非另外规定，否则本文中所描绘的结构还意图包括仅在一或多个同位素增浓原子的存在方面不同的化合物。举例来说，包括由氘或氚置换氢或由¹³c或¹⁴c增浓的碳置换碳的具有本发明结构的化合物在本发明的范围内。所述化合物适用作例如分析工具，适用作生物分析中的探针，或适用作根据本发明的治疗剂。

如本文中所用的术语“亮氨酸模拟物”被定义为是在25μm下相对于亮氨酸而言使与gator2结合的sestrin2的量减少至少约40％的化合物。在某些实施例中，“亮氨酸模拟物”使与gator2结合的sestrin2的量减少至少约100％、至少约150％或至少约200％。

如本文中所用的术语“亮氨酸拮抗剂”被定义为是在25μm下相对于亮氨酸而言使与gator2结合的sestrin2的量增加至少约40％(表示为亮氨酸活性的-40％)的化合物。在某些实施例中，“亮氨酸拮抗剂”使与gator2结合的sestrin2的量增加至少约100％、至少约150％或至少约200％。

如本文中所用的术语“可测量的亲和力”和“可测量地抑制”意指在包含本发明化合物或其组合物以及sestrin2、gator2和亮氨酸的样品与包含sestrin2、gator2和亮氨酸，但不存在所述化合物或其组合物的等效样品之间，与gator2结合的sestrin2的可测量的改变。

3.示范性实施例的说明：

在某些实施例中，本发明提供式i化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

r¹是h或c1-6烷基；

r²是r、-(ch2)n-苯基、-c(o)r、-so2r或-c(o)n(r)2；

n是0、1或2；

每个r独立地是氢、-cn或选自以下的任选地被取代的基团：饱和或不饱和c1-6脂族基、苯基、4到7元饱和或部分不饱和单环碳环、具有1到4个杂原子的5到6元单环杂芳基环、或具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到8元饱和或部分饱和杂环；

r³是环a、-c(o)r、-c(o)or、-c(o)n(r)2、-so3h、-so2n(r)2、-s(o)r、-s(o)环a、-or或-b(or)2，其中同一个硼上的两个or基团与其中间原子连在一起形成除了所述硼和两个氧之外还具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到8元单环饱和或部分不饱和环，或r³和r⁴连在一起形成具有0到1个选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元环；

l是共价键或任选地被1到9个氟基取代的直链或支链c1-6亚烷基链；

环a是任选地被取代的环，选自苯基或具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元杂芳基环；

r⁴是r、-cf3、-or、-n(r)2、-si(r)3或-sr，或r³和r⁴连在一起形成具有0到1个选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元环；并且

r⁵是h或c1-4烷基。

在一些实施例中，所提供的式i化合物不是下表2中所描绘的那些化合物。

如在上文中一般定义，r¹是h或c1-6烷基。在一些实施例中，r¹是h。在其它实施例中，r¹是c1-6烷基。在一些实施例中，r¹是甲基。在一些实施例中，r¹是异丁基。在一些实施例中，r¹选自下表1中所描绘的那些。在一些实施例中，r¹选自下表2中所描绘的那些。

如在上文中一般定义，r²是r、-(ch2)n-苯基、-c(o)r、-so2r或-c(o)n(r)2。在一些实施例中，r²是r。在一些实施例中，r²是-(ch2)n-苯基。在一些实施例中，r²是-c(o)r。在一些实施例中，r²是-so2r。在一些实施例中，r²是-c(o)n(r)2。在一些实施例中，r²是甲基。在一些实施例中，r²是-(ch2)-苯基。在一些实施例中，r²是-c(o)ch3。在一些实施例中，r²选自下表1中所描绘的那些。在一些实施例中，r²选自下表2中所描绘的那些。

如在上文中一般定义，n是0、1或2。在一些实施例中，n是0。在一些实施例中，n是1。在一些实施例中，n是2。

如在上文中一般定义，r³是环a、-c(o)r、-c(o)or、-c(o)n(r)2、-so3h、-so2n(r)2、-s(o)r、-s(o)环a、-or或-b(or)2，其中同一个硼上的两个-or基团与其中间原子连在一起形成除了所述硼和两个氧之外还具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到8元单环饱和或部分不饱和环，或r³和r⁴连在一起形成具有0到1个选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元环。

在一些实施例中，r³是-c(o)oh。在一些实施例中，r³是-c(o)n(r)2。在一些实施例中，r³是-so3h。在一些实施例中，r³是-so2n(r)2。在一些实施例中，r³是-b(or)2，其中同一个硼上的两个-or基团与其中间原子连在一起形成除了所述硼和两个氧之外还具有0到3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5到8元单环饱和、部分不饱和或杂环。在一些实施例中，r³和r⁴连在一起形成具有0到1个选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元环。

在一些实施例中，r³是环a。如在上文中一般定义，环a是任选地被取代的环，选自苯基或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元杂芳基环。在一些实施例中，环a是任选地被取代的苯基。在一些实施例中，环a是具有1到4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5元杂芳基环。在一些实施例中，环a是选自咪唑基、异噁唑基、1h-吡咯基(例如马来酰亚胺基)、吡唑基、噁唑基、四唑基、噻唑基和三唑基的任选地被取代的5元杂芳基环。在一些实施例中，环a是具有1到2个氮原子的任选地被取代的6元杂芳基环。在一些实施例中，环a是选自吡啶基和嘧啶基的任选地被取代的6元环。在一些实施例中，环a选自下表1中所描绘的那些。

在一些实施例中，r3是(频哪醇合)硼。在一些实施例中，r³选自下表1中所描绘的那些。在一些实施例中，r³选自下表2中所描绘的那些。

如在上文中一般定义，l是共价键或任选地被1到4个氟基取代的直链或支链c1-6亚烷基链。在一些实施例中，l是共价键。在一些实施例中，l是任选地被1到4个氟基取代的直链或支链c1-6亚烷基链。在一些实施例中，l是亚甲基。在一些实施例中，l是正丁烯基。在一些实施例中，l是乙烯基。在一些实施例中，l是正丙烯基。在一些实施例中，l选自下表1中所描绘的那些。在一些实施例中，l选自下表2中所描绘的那些。

在一些实施例中，l是任选地被1到4个氟基取代的支链c1-6亚烷基链。在某些实施例中，l是-c(ch3)2-。在其它实施例中，l是-c(ch3)(cf3)-。

如在上文中一般定义，r⁴是r、-cf3、-or、-n(r)2、-si(r)3或-sr，或r³和r⁴连在一起形成具有0到1个选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元环。在一些实施例中，r⁴是r。在一些实施例中，r⁴是-cf3。在一些实施例中，r⁴是-or。在一些实施例中，r⁴是-n(r)2。在一些实施例中，r⁴是-si(r)3。在一些实施例中，r⁴是-sr。在一些实施例中，r⁴是异丙基。在一些实施例中，r⁴是叔丁基。在一些实施例中，r⁴是环丙基。在一些实施例中，r⁴是环丁基。在一些实施例中，r⁴是仲丁基。在一些实施例中，r⁴是甲氧基。在一些实施例中，r⁴是甲硫基。在一些实施例中，r³和r⁴连在一起形成具有0到1个选自氮、氧或硫的杂原子的任选地被取代的5到6元环。在一些实施例中，r⁴选自下表1中所描绘的那些。在一些实施例中，r⁴选自下表2中所描绘的那些。

如在上文中一般定义，r⁵是h或c1-4烷基。在一些实施例中，r⁵是h。在一些实施例中，r⁵是c1-4烷基。在一些实施例中，r⁵是甲基。在一些实施例中，r⁵选自下表1中所描绘的那些。在一些实施例中，r⁵选自下表2中所描绘的那些。

在某些实施例中，本发明提供式ii化合物：

或其药学上可接受的盐，其中单独的和组合形式的每个变量如上文所定义并且如本文所提供的实施例中所描述。

在某些实施例中，本发明提供式iii化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

q是-c(r')2-或-nh-；

r^x和r^y各自是氢，或r^x和r^y连在一起形成＝o；

是双键或单键；

每个r独立地是氢、-cn或选自以下的任选地被取代的基团：c1-6脂族基、苯基、4到7元饱和或部分不饱和单环碳环、具有1到4个杂原子的5到6元单环杂芳基环、或具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到8元饱和或部分饱和杂环；

每个r'独立地是氢、卤素、-cn或选自以下的任选地被取代的基团：c1-6脂族基、苯基、4到7元饱和或部分不饱和单环碳环、具有1到4个杂原子的5到6元单环杂芳基环、或具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到8元饱和或部分饱和杂环；

l是共价键或任选地被1到9个氟基取代的直链或支链c1-6亚烷基链；

r⁴'是r、-cf3、-or、-n(r)2、-si(r)3或-sr；并且

r⁵'是h、-or或c1-4烷基。

在一些实施例中，q是-nh-。在一些实施例中，q是-ch2-。在一些实施例中，q是-chf-。

在一些实施例中，l是-ch2-。

在一些实施例中，r^x和r^y各自是氢。在一些实施例中，r^x和r^y连在一起形成＝o。

在一些实施例中，r⁵'是h。在一些实施例中，r⁵'是-oh。

在一些实施例中，是单键。在一些实施例中，是双键。

在某些实施例中，本发明提供式iv-a、iv-b或iv-c的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

r¹是h或c1-6烷基；

r²是r、-(ch2)n-苯基、-c(o)r、-so2r或-c(o)n(r)2；

每个r^4"独立地是r、卤素或-cf3；

每个r独立地是氢、-cn或选自以下的任选地被取代的基团：饱和或不饱和c1-6脂族基、苯基、4到7元饱和或部分不饱和单环碳环、具有1到4个杂原子的5到6元单环杂芳基环、或具有1到2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4到8元饱和或部分饱和杂环；并且

l¹是共价键或任选地被1到9个氟基取代的直链或支链c1-6亚烷基链。

在一些实施例中，r¹是h。在一些实施例中，r¹是c1-6烷基。

在一些实施例中，r¹选自下表1中所描绘的那些。

在一些实施例中，r²是r。在一些实施例中，r²是-(ch2)n-苯基。在一些实施例中，r²是-c(o)r。

在一些实施例中，r²选自下表1中所描绘的那些。

在一些实施例中，每个r^4"独立地是r、卤素或-cf3。在一些实施例中，r^4"是r。在一些实施例中，r^4"是卤素。在一些实施例中，r^4"是-cf3。在一些实施例中，r^4"选自下表1中所描绘的那些。

在一些实施例中，l¹是共价键或任选地被1到9个氟基取代的直链或支链c1-6亚烷基链。在一些实施例中，l¹是共价键。在一些实施例中，l¹是任选地被1到9个氟基取代的直链或支链c1-6亚烷基链。在一些实施例中，l¹选自下表1中所描绘的那些。

本发明的示范性化合物阐述于下表1中。

表1.示范性化合物

本发明的示范性化合物阐述于下表2中。

表2.示范性化合物

在一些实施例中，本发明提供一种上表1中所阐述的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，本发明提供一种上表2中所阐述的化合物或其药学上可接受的盐。

5.用途、调配和投药

药学上可接受的组合物

根据另一个实施例，本发明提供一种组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。本发明组合物中的化合物的量是能够有效地可测量地抑制或活化生物样品中或患者中的sestrin-gator2相互作用的量。在某些实施例中，本发明组合物中的化合物的量是能够有效地可测量地抑制或活化生物样品中或患者中的sestrin-gator2相互作用的量。在某些实施例中，将本发明组合物调配成用于向需要所述组合物的患者投药。在一些实施例中，将本发明组合物调配成用于使患者口服。

如本文中所用的术语“患者”意指动物，优选哺乳动物，并且最优选是人类。

术语“药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂”是指不会破坏一起调配的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。可用于本发明组合物中的药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂包括但不限于离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白，如人血清白蛋白；缓冲物质，如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物；水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白；磷酸氢二钠；磷酸氢钾；氯化钠；锌盐；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；基于纤维素的物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物；聚乙二醇；以及羊毛脂。

本发明组合物可以经口、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或通过植入型药盒投与。如本文中所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物经口、经腹膜内或经静脉内投与。本发明组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据所属领域中已知的技术使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来调配。无菌可注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如呈在1,3-丁二醇中的溶液形式。可以采用的可接受的媒剂和溶剂是水、林格氏溶液(ringer'ssolution)和等张氯化钠溶液。另外，常规采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。

为了这个目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包括合成的单酸甘油酯或二酸甘油酯。例如油酸的脂肪酸和其甘油酯衍生物如天然药学上可接受的油般适用于制备可注射剂，天然药学上可接受的油例如橄榄油或蓖麻油，尤其呈其聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或常用于调配药学上可接受的剂型的类似分散剂，药学上可接受的剂型包括乳液和悬浮液。出于调配的目的，还可以使用其它常用的表面活性剂，例如吐温(tween)、斯潘(span)，和常用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型的其它乳化剂或生物利用率增强剂。

本发明的药学上可接受的组合物可以按任何口服可接受的剂型口服，所述剂型包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在口服使用的片剂的情况下，常用载剂包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服投药，适用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当为了口服使用而需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。必要时，也可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。

或者，本发明的药学上可接受的组合物可以用于经直肠投药的栓剂形式投与。这些栓剂可以通过将药剂与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下是固体但在直肠温度下是液体并且因此将在直肠中熔融以释放出药物。这类材料包括可可脂、蜂蜡以及聚乙二醇。

本发明的药学上可接受的组合物还可以局部投与，尤其是在治疗目标包括通过局部施药容易到达的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。容易制备适用于这些区域或器官中的每一个的局部调配物。

对下肠道的局部施药可以直肠栓剂调配物(参见上文)或以合适的灌肠剂调配物实现。也可以使用局部透皮贴片。

对于局部施药来说，所提供的药学上可接受的组合物可以含有活性组分悬浮于或溶解于一或多种载剂中的合适软膏形式调配。用于本发明化合物的局部投药的载剂包括但不限于矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，所提供的药学上可接受的组合物可以含有活性组分悬浮于或溶解于一或多种药学上可接受的载剂中的合适洗剂或乳膏形式调配。合适的载剂包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇以及水。

对于眼科使用，所提供的药学上可接受的组合物可以在有或无例如苯扎氯铵(benzylalkoniumchloride)的防腐剂存在下，调配为于ph调节过的等张无菌生理盐水中的微粉化悬浮液，或优选调配为于ph调节过的等张无菌生理盐水中的溶液。或者对于眼科使用，药学上可接受的组合物可在如矿脂的软膏中调配。

本发明的药学上可接受的组合物也可以通过鼻气雾剂或吸入投与。所述组合物根据药物调配领域中众所周知的技术制备，并且可以采用苯甲醇或其它合适的防腐剂、用于增强生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂，以生理盐水中的溶液形式制备。

最优选地，将本发明的药学上可接受的组合物调配成用于口服。所述调配物可以与食物一起或不与食物一起投与。在一些实施例中，本发明的药学上可接受的组合物不与食物一起投与。在其它实施例中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起投与。

可以与载剂材料组合产生呈单一剂型的组合物的本发明化合物的量将取决于所治疗的宿主、特定投药模式而变化。优选地，应该将所提供的组合物调配成可以向接受这些组合物的患者投与剂量介于0.01-100毫克/千克体重/天之间的抑制剂。

还应了解，针对任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、整体健康状况、性别、饮食、投药时间、排泄率、药物组合以及治疗医师的判断和所治疗的特定疾病的严重程度。组合物中本发明化合物的量也将取决于组合物中的特定化合物。

化合物和药学上可接受的组合物的用途

本文所述的化合物和组合物一般适用于抑制或活化sestrin-gator2相互作用。在一些实施例中，所提供的化合物或其组合物是sestrin-gator2相互作用的活化剂。

本发明中被用作sestrin-gator2相互作用的抑制剂或活化剂的化合物的活性可以在体外、体内或在细胞系中分析。体外分析包括判定sestrin-gator2相互作用的抑制或活化的分析。替代性体外分析定量抑制剂减少sestrin与gator2的结合的能力或活化剂增加sestrin与gator2的结合的能力。本发明中被用作sestrin-gator2相互作用的抑制剂或活化剂的化合物的详细分析条件阐述于以下实例中。

如本文中所用的术语“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”以及“治疗(treating)”是指逆转、减轻如本文所述的疾病或病症或其一或多种症状，延迟其发作或抑制其进展。在一些实施例中，治疗可在已出现一或多种症状后投与。在其它实施例中，治疗可在缺乏症状时投与。举例来说，治疗可以在症状发作之前向易感个体(例如，根据症状史和/或根据遗传学或其它易感性因素)投与。还可以在症状已经消退之后继续进行治疗，例如以预防或延迟其复发。

所提供的化合物是sestrin-gator2相互作用的抑制剂或活化剂，并且因此适用于治疗一或多种与mtorc1的活性相关的病症。因此，在某些实施例中，本发明提供一种用于治疗mtorc1介导的病症的方法，所述方法包含向有需要的患者投与本发明化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

如本文中所用，如本文中所用的术语“mtorc1介导的”病症、疾病和/或病况意指已知mtorc1起作用的任何疾病或其它有害的病况。因此，本发明的另一个实施例涉及治疗一或多种已知mtorc1起作用的疾病或减轻其严重程度。

本文所述的方法包括用于治疗受试者的癌症的方法。如在此情况下所使用的，“治疗”意指改善或改良癌症的至少一个症状或临床参数。举例来说，治疗能够引起肿瘤大小或生长速率减小。在所有受试者中，治疗无需治愈癌症或促成100％时间的缓解。

如本文所述的，活化sestrin-gator2相互作用并且从而降低mtorc1活性的药剂，例如抑制性核酸或小分子，所述药剂的施用能减少受试者中的癌细胞增殖并且因此治疗癌症。因此，在一些实施例中，本文所述的方法包括投与治疗有效剂量的一或多种活化sestrin-gator2相互作用并且从而间接地抑制mtorc1途径的药剂。

如本文中所用的术语“癌症”是指细胞具有自主生长能力，即，以迅速增殖的细胞生长为特征的异常状态或病况。所述术语意图包括所有类型的癌性生长或致癌过程、转移性组织或恶性转化的细胞、组织或器官，不管组织病理学类型或侵袭阶段。如本文中所用的术语“肿瘤”是指多个癌细胞，例如癌细胞块。

能够使用本文所述的方法治疗或诊断的癌症包括各个器官系统的恶性肿瘤，如影响肺、乳房、甲状腺、淋巴、胃肠道和泌尿生殖道的恶性肿瘤，以及腺癌，包括恶性肿瘤，如大部分结肠癌、肾细胞癌、前列腺癌和/或睾丸肿瘤、非小细胞肺癌、小肠癌以及食道癌。

在一些实施例中，使用本文所述的方法来治疗或诊断受试者的癌瘤。术语“癌瘤”是本领域所知的并且是指上皮或内分泌组织的恶性肿瘤，包括呼吸系统癌、胃肠系统癌、泌尿生殖系统癌、睾丸癌、乳腺癌、前列腺癌、内分泌系统癌以及黑素瘤。在一些实施例中，癌症是肾癌或黑素瘤。示范性癌瘤包括从子宫颈、肺、前列腺、乳房、头颈部、结肠以及卵巢组织形成的那些。所述术语还包括癌肉瘤，例如，其包括由癌组织和肉瘤组织组成的恶性肿瘤。“腺癌”是指衍生自腺组织的癌瘤或其中肿瘤细胞形成可辨认的腺结构。

术语“肉瘤”是本领域所知的并且是指间充质衍生的恶性肿瘤。

在一些实施例中，本文所述的方法所治疗的癌症是相对于正常组织或同一组织的其它癌症来说，mtorc1水平增加或mtorc1的表达或活性增加的癌症；可以使用本领域中已知并且本文中所述的方法来鉴别那些癌症。在一些实施例中，方法包括：获得包含癌细胞的样品，测定样品中的mtorc1活性，以及投与如本文所述的治疗(例如sestrin-gator2相互作用的调节剂)。在一些实施例中，癌症是本文中显示具有增加的mtorc1活性水平的癌症。

在一些实施例中，本发明提供一种用于治疗一或多种病症、疾病和/或病况的方法，其中所述病症、疾病或病况包括但不限于细胞增殖性病症。

细胞增殖性病症

本发明的特征在于用于诊断和预后细胞增殖性病症(例如癌症)并且通过调节sestrin-gator2相互作用，从而间接地选择性调节mtorc1活性来治疗这些病症的方法和组合物。本文所述的细胞增殖性病症包括例如癌症、肥胖症以及增殖依赖性疾病。所述病症可以使用本领域中已知的方法诊断。

癌症

癌症包括但不限于白血病(例如急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、急性成骨髓细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性骨髓单核细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如霍奇金病(hodgkin'sdisease)或非霍奇金病)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(waldenstrom'smacroglobulinemia)、多发性骨髓瘤、重链疾病以及实体肿瘤，如肉瘤和癌瘤(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因瘤(ewing'stumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓质癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤(wilm'stumor)、子宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤以及成视网膜细胞瘤)。在一些实施例中，癌症是黑素瘤或乳腺癌。

其它增殖性疾病

其它增殖性疾病包括例如肥胖症、良性前列腺增生、牛皮癣、异常角质化、淋巴组织增生病症(例如淋巴系统细胞异常增殖的病症)、慢性类风湿性关节炎、动脉硬化、再狭窄以及糖尿病性视网膜病。以引用的方式并入本文中的增殖性疾病包括第5,639,600号和第7,087,648号美国专利中所述的那些。

其它病症

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来治疗核糖体病变(例如戴-布二氏贫血(diamond-blackfananemia)、5q-综合征、舒-戴二氏综合征(shwachman-diamondsyndrome)、x连锁角化不良、软骨毛发发育不良以及特雷彻·柯林斯综合征(treachercollinssyndrome))。(参见派恩(payne)等人,(2012)血液(blood).9月13日；120(11):2214-24；伊费言(efeyan)等人,(2012)分子医学趋势(trendsmolmed.)9月；18(9):524-533)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的核糖体病变的方法，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在某些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的选自戴-布二氏贫血、5q-综合征、舒-戴二氏综合征、x连锁角化不良、软骨毛发发育不良或特雷彻·柯林斯综合征的核糖体病变的方法，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物步骤。

在一些实施例中，使用活化mtorc1活性的方法来治疗粘合病变(例如罗伯茨综合征(robertssyndrome)和德朗热综合征(corneliadelangesyndrome))。(参见许(xu)等人,(2016)bmc基因组学(bmcgenomics)17:25)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的粘合病变(例如罗伯茨综合征和德朗热综合征)的方法，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来逆转肌肉萎缩或预防肌肉萎缩，所述肌肉萎缩是由以下原因导致的：因为生活方式所造成的不活动、由矫形外科所引起的不活动、固定或受试者的年龄或受试者所具有或患有的疾病或病况。(参见卡斯伯特森(cuthbertson)等人,(2005)美国实验生物学学会联合会杂志(fasebj.)3月；19(3):422-4.电子版2004年12月13日；伦尼(rennie),(2009)应用生理学、营养学和代谢(appl.physiol.nutr.metab.)34:377-381；汉姆(ham)等人,(2014)临床营养学(clinnutr.)12月；33(6):937-45)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种逆转或预防有需要的患者由因为生活方式所造成的不活动、由矫形外科引起的不活动、固定或受试者的年龄或受试者所具有或患有的疾病或病况所导致的肌肉萎缩的方法，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来逆转肌肉萎缩或预防肌肉萎缩，所述肌肉萎缩是因为骨骼断裂、重度烧伤、脊髓损伤、切除术、变性疾病、要求受试者卧床休息、待在重病监护室或长期住院才能恢复的病况。(参见戈登(gordon)等人,(2013)国际生物化学与细胞生物学杂志(intjbiochemcellbiol.)10月；45(10):2147-57；莱杰(léger)等人,(2009)肌肉与神经(musclenerve.)7月；40(1):69-78)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种逆转或预防有需要的患者因为骨骼断裂、重度烧伤、脊髓损伤、切除术、变性疾病、要求受试者卧床休息、待在重病监护室或长期住院才能恢复的病况所导致的肌肉萎缩的方法，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来治疗引起骨骼肌萎缩的疾病、病况或病症，如肌肉减少症、肌肉去神经支配、肌肉萎缩症、炎性肌病、脊髓性肌萎缩(sma)、肌肉萎缩性侧索硬化(als)或重症肌无力。(参见凯(kye)等人,(2014)人类分子遗传学(hummolgenet.)12月1日；23(23):6318-6331；古普(gurpur)等人,(2009)美国病理学杂志(amjpathol.)3月；174(3):999-1008；桥汉(chauhan)等人,(2013)神经科学研究(neuroscires.)9月-10月；77(1-2):102-9)；菁(ching)等人,(2013)人类分子遗传学3月15日；22(6):1167-79)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的引起骨骼肌萎缩的疾病、病况或病症的方法，所述疾病、病况或病症如肌肉减少症、肌肉去神经支配、肌肉萎缩症、炎性肌病、脊髓性肌萎缩(sma)、肌肉萎缩性侧索硬化(als)或重症肌无力，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来预防正准备太空旅行的受试者的肌肉损失，使正参与太空旅行的受试者能承受肌肉损失，或加强最近刚从太空旅行回来的受试者的肌肉损失的恢复。(参见施泰因(stein)等人,(1999)美国生理学杂志(amjphysiol.)；276:e1014-21)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种在有需要的受试者中预防正准备太空旅行的受试者的肌肉损失、使正参与太空旅行的受试者能承受肌肉损失、或加强最近刚从太空旅行回来的受试者的肌肉损失的恢复的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来使正准备武装冲突或军事训练、正参与武装冲突或军事训练或最近刚从武装冲突或军事训练回来的受试者能承受过度肌肉应激和/或疲劳或加强恢复。(参见帕萨可斯(pasiakos)等人,(2011)美国临床营养学杂志(amjclinnutr.)9月；94(3):809-18)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种在有需要的受试者中使正准备武装冲突或军事训练、正参与武装冲突或军事训练或最近刚从武装冲突或军事训练回来的受试者能承受过度肌肉应激和/或疲劳或加强恢复的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来预防患者的自体吞噬。在一些实施例中，所述患者具有或患有以取决于自体吞噬的诱导的方式对疗法具有抗性的癌症。(参见金姆和古安(guan),(2015)临床研究杂志(jclininvest.)1月；125(1):25-32)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种在有需要的患者中预防患者的自体吞噬的方法，所述患者具有或患有以取决于自体吞噬的诱导的方式对疗法具有抗性的癌症，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc活化方法来治疗或预防抑郁症。(参见伊格纳西奥(ignácio)等人,(2015)英国临床药理学杂志(brjclinpharmacol.)11月27日)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗或预防有需要的患者的抑郁症的方法，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来引发快速起效的抗抑郁剂活性。因此，在一些实施例中，本发明提供一种在有需要的患者中引发快速起效的抗抑郁剂活性的方法，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来治疗或预防因为响应于日夜周期交替的加速昼夜行为再夹带所导致的时差。(参见曹(cao)等人,(2013)神经元(neuron.)8月21日；79(4):712-2410.1016)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗或预防有需要的患者的因为响应于日夜周期交替的加速昼夜行为再夹带所导致的时差的方法，所述方法包含向所述患者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来预防或逆转受试者的心肌萎缩。在一些实施例中，所述受试者具有或一直具有选自心脏病发作、充血性心力衰竭、心脏移植、心脏瓣膜修复、动脉粥样硬化、其它主要血管疾病以及心脏搭桥手术的疾病或病况。(参见宋(song)等人,(2010)美国生理学杂志：细胞生理学(amjphysiolcellphysiol.)12月；299(6):c1256-c1266)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种在有需要的受试者中预防或逆转受试者的心肌萎缩的方法，其中所述受试者具有或一直具有选自心脏病发作、充血性心力衰竭、心脏移植、心脏瓣膜修复、动脉粥样硬化、其它主要血管疾病以及心脏搭桥手术的疾病或病况，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来增加力量和/或增加运动后的肌肉量。在一些实施例中，所述方法结合理疗进行，理疗是作为全胃肠外营养的一部分或用于促进功能性电刺激。(参见中村(nakamura)等人,(2012)国际老年病学与老年学(geriatrgerontolint.)1月；12(1):131-9)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种增加力量和/或增加运动后的肌肉量的方法。在一些实施例中，在有需要的受试者中结合理疗进行所述方法，理疗是作为全胃肠外营养的一部分或用于促进功能性电刺激，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来减少食物摄入。(参见佩德罗索(pedroso)等人,(2015)营养物(nutrients.)5月22日；7(5):3914-37)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种减少有需要的受试者的食物摄入的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来治疗肥胖症。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的肥胖症的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来提高从生物反应器制造治疗性重组蛋白过程中的生产率。(参见麦克维伊(mcvey)等人,(2016)生物技术与生物工程(biotechnolbioeng.)2月16日.doi:10.1002/bit.25951)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种提高从生物反应器制造治疗性重组蛋白过程中的生产率的方法，所述方法包含向所述制造中添加所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，在免疫细胞中使用mtorc1活化方法来促进和/或维持其抗肿瘤活性。这包括在过继转移之前在体外增加免疫细胞中的mtorc1，以及在与其它目标免疫疗法策略共投与时在体内增加免疫细胞中的mtorc1。在一些实施例中，免疫细胞包括初始t细胞、cd4+或cd8+t细胞、th1、th2、treg和th17细胞、树突状细胞、nk细胞以及巨噬细胞。(参见杨(yang)等人,(2011)自然·免疫学(natimmunol.)；12:888-897；奥布赖恩(o'brien)等人(2011)欧洲免疫学杂志(eurjimmunol.)；41:3361-3370；戴歌飞(delgoffe)等人,(2009)免疫学(immunity.)6月19日；30(6):832-44；奇(chi),(2012)自然·免疫学综述(natrevimmunol.)4月20日；12(5):325-338；波利兹(pollizzi)等人,(2015)临床研究杂志；125(5):2090-2108；阿里(ali)等人,(2015)免疫学前沿(frontimmunol.)；6:355；卡斯尼格(katholnig)等人,(2013)生化学会会刊(biochemsoctrans.)8月；41(4):927-33；王(wang)等人,(2013)美国国家科学院院刊12月10日；110(50):e4894-903；杨和奇,(2013)临床研究杂志12月；123(12):5165-78)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种活化免疫细胞中的mtorc1以促进和/或维持其抗肿瘤活性的方法。在一些实施例中，本发明提供一种在过继转移之前在体外增加免疫细胞中的mtorc1的方法。在一些实施例中，本发明提供一种在与其它目标免疫疗法策略共投与时在体内增加免疫细胞中的mtorc1的方法。在某些实施例中，免疫细胞包括初始t细胞、cd4+或cd8+t细胞、th1、th2、treg和th17细胞、树突状细胞、nk细胞以及巨噬细胞，包含向所述免疫细胞中添加所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，在视网膜中使用mtorc1活化方法来治疗色素性视网膜炎和其它形式的眼部神经变性。(参见蓬佐(punzo)等人,(2009)自然·神经科学(natneurosci.)1月；12(1):44-52)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的色素性视网膜炎和其它形式的眼部神经变性的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来增加中枢或周围轴突再生。(参见娜米可(namiko)等人,(2010)生物化学杂志(jbiolchem.)285:28034-28043)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种增加有需要的受试者的中枢或周围轴突再生的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，在损伤之后或在以脱髓鞘为特征的疾病中，所述疾病例如多发性硬化和帕金森病(parkinson'sdisease)，使用mtorc1活化方法来促进髓鞘再生和神经元活性。(参见泰勒(tyler)等人,(2009)神经科学杂志(jneurosci.)5月13日；29(19):6367-78；诺尔门(norrmén)等人,(2014)细胞报告10月23日；9(2):646-60；洛夫(love)(2006).临床病理学杂志(jclinpathol.)11月；59(11):1151-1159)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种在有需要的受试者中在损伤之后或在以脱髓鞘为特征的疾病中促进髓鞘再生和神经元活性的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的多发性硬化的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的帕金森病的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来治疗多发性硬化。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的多发性硬化或其变体的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的巴洛同心圆硬化(balo'sconcentricsclerosis)、谢耳德氏病(schilder'sdisease)、急性(marburg型)多发性硬化、炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病(inflammatorydemyelinativepolyradiculoneuropathy)或肿块样多发性硬化的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用mtorc1活化方法来治疗德维克病(devic'sdisease)、急性播散性脑脊髓炎、急性出血性脑白质炎、进行性多病灶脑白质病以及尼曼-皮克病(niemann-pick)。(参见塔基基塔(takikita)等人,(2004)神经病理学与实验神经病学杂志(jneuropatholexpneurol.)6月；63(6):660-73)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的德维克病、急性播散性脑脊髓炎、急性出血性脑白质炎、进行性多病灶脑白质病以及尼曼-皮克病的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用活化的mtorc1方法来治疗或预防多种形式的自闭症。(参见纳瓦里诺(novarino)等人,(2012)科学10月19日,338:6105,第394-397页)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗或预防有需要的受试者的一种形式的自闭症的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用活化mtorc1的方法来治疗神经变性疾病。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的神经变性疾病的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用活化mtorc1的方法来治疗与突触功能障碍相关的疾病。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的与突触功能障碍相关的疾病的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，在中枢神经系统中使用活化mtorc1的方法来增加以树突棘减少和突触丢失为特点的神经变性疾病中的树突形成和突触发生，所述神经变性疾病如阿尔茨海默病(alzheimer'sdisease)、肌肉萎缩性侧索硬化、中风以及青光眼。(参见迪波洛(dipolo)等人,(2015)神经再生研究(neuralregenres.)4月；10(4):559-561)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种增加有需要的受试者的以树突棘减少和突触丢失为特点的神经变性疾病中的树突形成和突触发生的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病、肌肉萎缩性侧索硬化、中风或青光眼的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施例中，使用活化mtorc1的方法来治疗如阿尔茨海默病、肌肉萎缩性侧索硬化、精神分裂症、瑞特综合征(rettsyndrome)、脆性x综合征、帕金森病、亨廷顿病(huntington'sdisease)、中风以及青光眼等疾病。(参见林(lin)等人,公共科学图书馆·综合(plosone)8(4):e62572,2013；李(lee)等人,(2015)神经元1月21日；85(2):303-315；玻林(bowling)等人,(2014)科学·信号传导(scisignal.)1月14日；7(308):ra4)。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的受试者的如阿尔茨海默病、肌肉萎缩性侧索硬化、精神分裂症、瑞特综合征、脆性x综合征、帕金森病、亨廷顿病、中风以及青光眼等疾病的方法，所述方法包含向所述受试者投与所提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

本发明的药学上可接受的组合物可以取决于所治疗感染的严重程度，经口、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏或滴剂)、经颊、作为口腔喷雾或鼻喷雾等投与给人类和其它动物。在某些实施例中，本发明化合物可以经口或肠胃外以每天约0.01mg/kg到约50mg/kg并且优选约1mg/kg到约25mg/kg受试者体重的剂量水平一天一或多次地投与，从而获得所期望的治疗效果。

口服液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可以含有本领域中常用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯以及其混合物。除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括佐剂，如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂以及芳香剂。

可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液，可以根据已知技术使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂制备。无菌可注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈在1,3-丁二醇中的溶液形式。可以采用的可接受媒剂和溶剂是水、林格氏溶液、u.s.p.和等张氯化钠溶液。另外，常规采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于此目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包括合成的单酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，在可注射剂制备中使用脂肪酸，例如油酸。

可注射调配物可以例如通过用细菌截留过滤器过滤或通过并入灭菌剂来灭菌，呈可以在使用前溶解于或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。

为了延长本发明化合物的作用，通常期望从皮下或肌肉内注射减慢化合物的吸收。这可以通过使用具有不良水溶性的结晶或非晶材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率于是取决于其溶解速率，溶解速率又可以取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将化合物溶解于或悬浮于油媒剂中来延迟肠胃外投与的化合物形式的吸收。通过形成化合物于如聚丙交酯-聚乙交酯的生物可降解聚合物中的微胶囊基质来制造可注射积存形式。取决于化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物的释放速率。其它生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。积存可注射调配物还通过将化合物截留于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。

经直肠或阴道投与的组合物优选是可以通过将本发明化合物与合适的无刺激性赋形剂或载剂混合而制备的栓剂，所述赋形剂或载剂例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡，其在环境温度下是固体但在体温下是液体并且因此在直肠或阴道腔中熔融并释放出活性化合物。

口服固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在所述固体剂型中，活性化合物与以下物质混合：至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载剂，如柠檬酸钠或磷酸二钙；和/或a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂--琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，如石蜡；f)吸收促进剂，如季铵化合物；g)湿润剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸收剂，如高岭土和膨润土；以及i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠；以及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。

还可以使用类似类型的固体组合物作为使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。固体剂型片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂以及颗粒剂可以用包衣和外壳来制备，例如肠溶衣和药物调配领域中众所周知的其它包衣。它们可以任选地含有乳浊剂，并且也可以具有这样的组成，所述组成使其在肠道某一部分中任选地以延迟方式仅释放或优先释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。还可以使用类似类型的固体组合物作为使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。

活性化合物还可以呈与一或多种如上文所指出的赋形剂形成的微胶囊化形式。固体剂型片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂以及颗粒剂可以用包衣和外壳来制备，如肠溶衣、控释包衣以及药物调配技术中众所周知的其它包衣。在所述固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂混合，所述惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或淀粉。正常实践时，这些剂型还可以包含除惰性稀释剂以外的附加物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。它们可以任选地含有乳浊剂，并且也可以具有这样的组成，所述组成使其在肠道某一部分中任选地以延迟方式仅释放或优先释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。

用于局部或经皮投与本发明化合物的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。根据需要，可以在无菌条件下混合活性组分与药学上可接受的载剂和任何所需防腐剂或缓冲剂。眼科调配物、滴耳剂和滴眼剂也涵盖在本发明范围内。另外，本发明涵盖透皮贴片的用途，这些透皮贴片具有将化合物控制递送到肌体的额外优点。所述剂型可以通过将化合物溶解于或分配于适当介质中制得。还可以使用吸收增强剂来增加化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。

根据一个实施例，本发明涉及一种调节生物样品中的sestrin-gator2相互作用，从而间接地选择性调节mtorc1活性的方法，所述方法包含使所述生物样品与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。

如本文中所用的术语“生物样品”包括但不限于细胞培养物或其提取物；由哺乳动物获得的活组织检查材料或其提取物；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其它体液或其提取物。

本发明的另一个实施例涉及一种调节患者中的sestrin-gator2相互作用，从而间接地选择性调节mtorc1活性的方法，所述方法包含向所述患者投与本发明化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。

根据另一个实施例，本发明涉及一种调节患者中的sestrin-gator2相互作用，从而间接地选择性调节mtorc1活性的方法，所述方法包含向所述患者投与本发明化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。在其它实施例中，本发明提供一种用于治疗有需要的患者的由mtorc1介导的病症的方法，所述方法包含向所述患者投与根据本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。所述病症详细描述于本文中。

取决于待治疗的特定病况或疾病，还可以在本发明组合物中存在为了治疗所述病况通常所投与的额外治疗剂。如本文中所用的为了治疗特定疾病或病况通常所投与的额外治疗剂被称为“适合待治疗的疾病或病况”。

本发明的化合物也可以有利地与其它抗增殖化合物组合使用。所述抗增殖化合物包括但不限于芳香酶抑制剂；抗雌激素；拓扑异构酶i抑制剂；拓扑异构酶ii抑制剂；微管活性化合物；烷化化合物；组蛋白脱乙酰基酶抑制剂；诱导细胞分化过程的化合物；环加氧酶抑制剂；mmp抑制剂；mtor抑制剂；抗赘生性抗代谢物；铂化合物；靶向/减小蛋白质或脂质激酶活性的化合物和其它抗血管生成化合物；靶向、减小或抑制蛋白质或脂质磷酸酶的活性的化合物；戈那瑞林(gonadorelin)激动剂；抗雄激素；甲硫氨酸氨肽酶抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；双膦酸盐；生物反应调节剂；抗增殖抗体；肝素酶抑制剂；ras致癌同工型的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗血液科恶性疾病的化合物；靶向、减小或抑制flt-3的活性的化合物；hsp90抑制剂，如来自conformatherapeutics的17-aag(17-烯丙基氨基格尔德霉素(17-allylaminogeldanamycin)，nsc330507)、17-dmag(17-二甲氨基乙氨基-17-去甲氧基-格尔德霉素，nsc707545)、ipi-504、cnf1010、cnf2024、cnf1010；替莫唑胺纺锤体驱动蛋白抑制剂，如来自葛兰素史克(glaxosmithkline)的sb715992或sb743921，或来自combinatorx的潘他米丁(pentamidine)/氯丙嗪；mek抑制剂，如来自阿莱生物制药公司(arraybiopharma)的arry142886、来自阿斯利康公司(astrazeneca)的azd6244、来自辉瑞(pfizer)的pd181461以及甲酰四氢叶酸。如本文中所用的术语“芳香酶抑制剂”涉及一种抑制雌激素产生，例如抑制底物雄烯二酮和睾酮分别向雌酮和雌二醇的转化的化合物。所述术语包括但不限于类固醇，尤其是阿他美坦(atamestane)、依西美坦(exemestane)和福美司坦(formestane)；并且尤其是非类固醇，尤其是氨鲁米特(aminoglutethimide)、罗谷亚胺(roglethimide)、吡鲁米特(pyridoglutethimide)、曲洛司坦(trilostane)、睾内酯(testolactone)、酮康唑(ketokonazole)、伏罗唑(vorozole)、法屈唑(fadrozole)、阿那曲唑(anastrozole)和来曲唑(letrozole)。依西美坦以商标名aromasin^tm出售。福美司坦以商标名lentaron^tm出售。法屈唑以商标名afema^tm出售。阿那曲唑以商标名arimidex^tm出售。来曲唑以商标名femara^tm或femar^tm出售。氨鲁米特以商标名orimeten^tm出售。包含化疗剂作为芳香酶抑制剂的本发明的组合尤其适用于治疗激素受体阳性肿瘤，如乳腺肿瘤。

如本文中所用的术语“抗雌激素”是指在雌激素受体水平上拮抗雌激素效应的化合物。所述术语包括但不限于他莫昔芬(tamoxifen)、氟维司群(fulvestrant)、雷洛昔芬(raloxifene)和雷洛昔芬盐酸盐。他莫昔芬以商标名nolvadex^tm出售。雷洛昔芬盐酸盐以商标名evista^tm出售。氟维司群可以商标名faslodex^tm投与。包含化疗剂作为抗雌激素的本发明的组合尤其适用于治疗雌激素受体阳性肿瘤，如乳腺肿瘤。

如本文中所用的术语“抗雄激素”是指任何能够抑制雄激素的生物作用的物质并且包括但不限于比卡鲁胺(bicalutamide)(casodex^tm)。如本文中所用的术语“戈那瑞林激动剂”包括但不限于阿巴瑞克(abarelix)、戈舍瑞林(goserelin)和乙酸戈舍瑞林。戈舍瑞林可以商标名zoladex^tm投与。

如本文中所用的术语“拓扑异构酶i抑制剂”包括但不限于拓扑替康(topotecan)、吉马替康(gimatecan)、伊立替康(irinotecan)、喜树碱(camptothecian)和其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱结合物pnu-166148。伊立替康可以例如以其例如以商标camptosar^tm出售的形式投与。拓扑替康以商标名hycamptin^tm出售。

如本文中所用的术语“拓扑异构酶ii抑制剂”包括但不限于蒽环霉素(anthracycline)，如阿霉素(doxorubicin)(包括脂质体调配物，如caelyx^tm)、道诺霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)和奈莫柔比星(nemorubicin)；蒽醌，米托蒽醌(mitoxantrone)和洛索蒽醌(losoxantrone)；以及鬼臼毒素，依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)。依托泊苷以商标名etopophos^tm出售。替尼泊苷以商标名vm26-bristol出售。阿霉素以商标名acriblastin^tm或adriamycin^tm出售。表柔比星以商标名farmorubicin^tm出售。伊达比星以商标名zavedos^tm出售。米托蒽醌以商标名novantron出售。

术语“微管活性剂”是指微管稳定化、微管去稳定化化合物和微管聚合抑制剂，包括但不限于紫杉烷，如紫杉醇和多西他赛(docetaxel)；长春花生物碱，如长春碱或硫酸长春碱、长春新碱或硫酸长春新碱以及长春瑞滨(vinorelbine)；海绵内酯(discodermolide)；秋水仙碱(cochicine)和埃博霉素(epothilone)以及其衍生物。紫杉醇以商标名taxol^tm出售。多西他赛以商标名taxotere^tm出售。硫酸长春碱以商标名vinblastinr.p^tm出售。硫酸长春新碱以商标名farmistin^tm出售。

如本文中所用的术语“烷化剂”包括但不限于环磷酰胺、异环磷酰胺(ifosfamide)、美法仑(melphalan)或亚硝基脲(nitrosourea)(bcnu或gliadel)。环磷酰胺以商标名cyclostin^tm出售。异环磷酰胺以商标名holoxan^tm出售。

术语“组蛋白脱乙酰基酶抑制剂”或“hdac抑制剂”是指抑制组蛋白脱乙酰基酶并且具有抗增殖活性的化合物。其包括但不限于辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)。

术语“抗赘生性抗代谢物”包括但不限于5-氟尿嘧啶或5-fu、卡培他滨(capecitabine)、吉西他滨(gemcitabine)、dna去甲基化合物，如5-氮杂胞苷(5-azacytidine)和地西他滨(decitabine)、甲氨蝶呤(methotrexate)和依达曲沙(edatrexate)以及叶酸拮抗剂，如培美曲塞(pemetrexed)。卡培他滨以商标名xeloda^tm出售。吉西他滨以商标名gemzar^tm出售。

如本文中所用的术语“铂化合物”包括但不限于卡铂(carboplatin)、顺铂(cis-platin)、顺铂(cisplatinum)和奥沙利铂(oxaliplatin)。卡铂可以例如以其例如以商标carboplat^tm出售的形式投与。奥沙利铂可以例如以其例如以商标eloxatin^tm出售的形式投与。

如本文中所用的术语“靶向/减小蛋白质或脂质激酶活性或蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物或其它抗血管生成化合物”包括但不限于蛋白质酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，如a)靶向、减小或抑制血小板衍生生长因子受体(pdgfr)的活性的化合物，如靶向、减小或抑制pdgfr的活性的化合物，尤其是抑制pdgf受体的化合物，如n-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼(imatinib)、su101、su6668和gfb-111；b)靶向、减小或抑制成纤维细胞生长因子受体(fgfr)的活性的化合物；c)靶向、减小或抑制胰岛素样生长因子受体i(igf-ir)的活性的化合物，如靶向、减小或抑制igf-ir的活性的化合物，尤其是抑制igf-i受体的激酶活性的化合物，或靶向igf-i受体或其生长因子的胞外结构域的抗体；d)靶向、减小或抑制trk受体酪氨酸激酶家族的活性的化合物，或ephrinb4抑制剂；e)靶向、减小或抑制axi受体酪氨酸激酶家族的活性的化合物；f)靶向、减小或抑制ret受体酪氨酸激酶的活性的化合物；g)靶向、减小或抑制kit/scfr受体酪氨酸激酶的活性的化合物，如伊马替尼；h)靶向、减小或抑制作为pdgfr家族的一部分的c-kit受体酪氨酸激酶的活性的化合物，如靶向、减小或抑制c-kit受体酪氨酸激酶家族的活性的化合物，尤其是抑制c-kit受体的化合物，如伊马替尼；i)靶向、减小或抑制c-abl家族成员、其基因融合产物(例如bcr-abl激酶)和突变体的活性的化合物，如靶向、减小或抑制c-abl家族成员和其基因融合产物的活性的化合物，如n-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼或尼罗替尼(nilotinib)(amn107)；pd180970；ag957；nsc680410；来自parkedavis的pd173955；或达沙替尼(dasatinib)(bms-354825)；j)靶向、减小或抑制蛋白激酶c(pkc)和丝氨酸/苏氨酸激酶的raf家族的成员、mek、src、jak/泛jak、fak、pdk1、pkb/akt、ras/mapk、pi3k、syk、tyk2、btk和tec家族的成员和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家族(cdk)的成员的活性的化合物，包括星形孢菌素衍生物，如米哚妥林(midostaurin)；其它化合物的实例包括ucn-01、沙芬戈(safingol)、bay43-9006、苔藓虫素(bryostatin)1、哌立福新(perifosine)；伊莫福新(llmofosine)；ro318220和ro320432；go6976；lsis3521；ly333531/ly379196；异喹啉化合物；ftis；pd184352或qan697(p13k抑制剂)或at7519(cdk抑制剂)；k)靶向、减小或抑制蛋白质-酪氨酸激酶抑制剂的活性的化合物，如靶向、减小或抑制蛋白质-酪氨酸激酶抑制剂的活性的化合物，包括甲磺酸伊马替尼(gleevec^tm)或泰福斯汀(tyrphostin)，如泰福斯汀a23/rg-50810；ag99；泰福斯汀ag213；泰福斯汀ag1748；泰福斯汀ag490；泰福斯汀b44；泰福斯汀b44(+)对映异构体；泰福斯汀ag555；ag494；泰福斯汀ag556、ag957和阿达弗斯汀(adaphostin)(4-{[(2,5-二羟苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷酯；nsc680410，阿达弗斯汀)；l)靶向、减小或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(egfr1、erbb2、erbb3、erbb4，呈均聚或杂二聚体形式)和其突变体的活性的化合物，如靶向、减小或抑制表皮生长因子受体家族的活性的化合物，尤其是抑制egf受体酪氨酸激酶家族的成员，如egf受体、erbb2、erbb3和erbb4，或与egf或egf相关配体结合的化合物、蛋白质或抗体、cp358774、zd1839、zm105180；曲妥珠单抗(trastuzumab)(herceptin^tm)、西妥昔单抗(cetuximab)(erbitux^tm)、易瑞沙(iressa)、特罗凯(tarceva)、osi-774、cl-1033、ekb-569、gw-2016、e1.1、e2.4、e2.5、e6.2、e6.4、e2.11、e6.3或e7.6.3，以及7h-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；m)靶向、减小或抑制c-met受体的活性的化合物，如靶向、减小或抑制c-met的活性的化合物，尤其是抑制c-met受体的激酶活性的化合物，或靶向c-met的胞外结构域或与hgf结合的抗体；n)靶向、减小或抑制一或多个jak家族成员(jak1/jak2/jak3/tyk2和/或泛jak)的激酶活性的化合物，包括但不限于prt-062070、sb-1578、巴瑞替尼(baricitinib)、帕瑞替尼(pacritinib)、莫罗替尼(momelotinib)、vx-509、azd-1480、tg-101348、托法替尼(tofacitinib)和鲁索利替尼(ruxolitinib)；o)靶向、减小或抑制pi3激酶(pi3k)的激酶活性的化合物，包括但不限于atu-027、sf-1126、ds-7423、pbi-05204、gsk-2126458、zstk-474、布帕昔布(buparlisib)、皮特里昔布(pictrelisib)、pf-4691502、byl-719、达妥昔布(dactolisib)、xl-147、xl-765和艾德昔布(idelalisib)；以及；以及q)靶向、减小或抑制刺猬蛋白(hh)的信号传导效应或平滑受体(smo)途径的化合物，包括但不限于环巴胺、维莫德吉(vismodegib)、伊曲康唑(itraconazole)、伊莫德吉(erismodegib)和ipi-926(萨瑞德吉(saridegib))。

如本文中所用的术语“pi3k抑制剂”包括但不限于对磷脂酰肌醇-3-激酶家族中的一或多种酶具有抑制活性的化合物，所述酶包括但不限于pi3kα、pi3kγ、pi3kδ、pi3kβ、pi3k-c2α、pi3k-c2β、pi3k-c2γ、vps34、p110-α、p110-β、p110-γ、p110-δ、p85-α、p85-β、p55-γ、p150、p101和p87。适用于本发明中的pi3k抑制剂的实例包括不限于atu-027、sf-1126、ds-7423、pbi-05204、gsk-2126458、zstk-474、布帕昔布、皮特里昔布、pf-4691502、byl-719、达妥昔布、xl-147、xl-765以及艾德昔布。

如本文中所用的术语“bcl-2抑制剂”包括但不限于对b细胞淋巴瘤-2蛋白(bcl-2)具有抑制活性的化合物，包括但不限于abt-199、abt-731、abt-737、阿朴棉子酚(apogossypol)、艾森塔(ascenta)的泛bcl-2抑制剂、姜黄素(和其类似物)、双重bcl-2/bcl-xl抑制剂(无限制药公司(infinitypharmaceuticals)/诺华制药公司(novartispharmaceuticals))、根纳三思(genasense)(g3139)、ha14-1(和其类似物；参见wo2008118802)、那维克拉(navitoclax)(和其类似物，参见us7390799)、nh-1(沈阳药科大学(shenayngpharmaceuticaluniversity))、奥巴克拉(obatoclax)(和其类似物，参见wo2004106328)、s-001(誉衡药业(gloriapharmaceuticals))、tw系列化合物(密歇根大学(univ.ofmichigan))以及维奈妥拉(venetoclax)。在一些实施例中，bcl-2抑制剂是小分子治疗剂。在一些实施例中，bcl-2抑制剂是肽模拟物。

如本文中所用的术语“btk抑制剂”包括但不限于对布鲁顿氏酪氨酸激酶(bruton'styrosinekinase，btk)具有抑制活性的化合物，包括但不限于avl-292和依鲁替尼(ibrutinib)。

如本文中所用的术语“syk抑制剂”包括但不限于对脾酪氨酸激酶(syk)具有抑制活性的化合物，包括但不限于prt-062070、r-343、r-333、excellair、prt-062607和福他替尼(fostamatinib)。

btk抑制化合物和可通过所述化合物与本发明化合物的组合治疗的病况的其它实例可见于wo2008039218和wo2011090760中，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文中。

syk抑制化合物和可通过所述化合物与本发明化合物的组合治疗的病况的其它实例可见于wo2003063794、wo2005007623及wo2006078846中，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文中。

pi3k抑制化合物和可通过所述化合物与本发明化合物的组合治疗的病况的其它实例可见于wo2004019973、wo2004089925、wo2007016176、us8138347、wo2002088112、wo2007084786、wo2007129161、wo2006122806、wo2005113554和wo2007044729中，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文中。

jak抑制化合物和可通过所述化合物与本发明化合物的组合治疗的病况的其它实例可见于wo2009114512、wo2008109943、wo2007053452、wo2000142246和wo2007070514中，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文中。

其它抗血管生成化合物包括具有另一种活性机制，例如与蛋白质或脂质激酶抑制无关的活性机制的化合物，例如沙立度胺(thalidomide)(thalomid^tm)和tnp-470。

适用于与本发明化合物组合使用的蛋白酶体抑制剂的实例包括但不限于硼替佐米(bortezomib)、双硫仑(disulfiram)、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate；egcg)、盐孢菌素a(salinosporamidea)、卡非佐米(carfilzomib)、onx-0912、cep-18770和mln9708。

靶向、减小或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物是例如磷酸酶1抑制剂、磷酸酶2a抑制剂或cdc25抑制剂，如冈田酸(okadaicacid)或其衍生物。

诱导细胞分化过程的化合物包括但不限于视黄酸、α-生育酚、γ-生育酚或δ-生育酚或α-生育三烯酚、γ-生育三烯酚或δ-生育三烯酚。

如本文中所用的术语环加氧酶抑制剂包括但不限于cox-2抑制剂，5-烷基取代的2-芳氨基苯乙酸和衍生物，如塞来昔布(celecoxib)(celebrex^tm)、罗非昔布(rofecoxib)(vioxx^tm)、依托昔布(etoricoxib)、伐地考昔(valdecoxib)或5-烷基-2-芳氨基苯乙酸，如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯胺基)苯乙酸，罗美昔布(lumiracoxib)。

如本文中所用的术语“双膦酸盐”包括但不限于依替膦酸(etridonicacid)、氯膦酸(clodronicacid)、替鲁膦酸(tiludronicacid)、帕米膦酸(pamidronicacid)、阿仑膦酸(alendronicacid)、伊班膦酸(ibandronicacid)、利塞膦酸(risedronicacid)和唑来膦酸(zoledronicacid)。依替膦酸以商标名didronel^tm出售。氯膦酸以商标名bonefos^tm出售。替鲁膦酸以商标名skelid^tm出售。帕米膦酸以商标名aredia^tm出售。阿仑膦酸以商标名fosamax^tm出售。伊班膦酸以商标名bondranat^tm出售。利塞膦酸以商标名actonel^tm出售。唑来膦酸以商标名zometa^tm出售。术语“mtor抑制剂”是指抑制哺乳动物雷帕霉素标靶(mammaliantargetofrapamycin；mtor)并且具有抗增殖活性的化合物，如西罗莫司(sirolimus)依维莫司(everolimus)(certican^tm)、cci-779和abt578。

如本文中所用的术语“肝素酶抑制剂”是指靶向、减小或抑制硫酸肝素降解的化合物。所述术语包括但不限于pi-88。如本文中所用的术语“生物反应调节剂”是指淋巴因子或干扰素。

如本文中所用的术语“ras致癌同工型(如h-ras、k-ras或n-ras)的抑制剂”是指靶向、减小或抑制ras的致癌活性的化合物；例如“法呢基转移酶抑制剂(farnesyltransferaseinhibitor)”，如l-744832、dk8g557或r115777(zarnestra^tm)。如本文中所用的术语“端粒酶抑制剂”是指靶向、减小或抑制端粒酶活性的化合物。靶向、减小或抑制端粒酶活性的化合物尤其是抑制端粒酶受体的化合物，如端粒酶素(telomestatin)。

如本文中所用的术语“甲硫氨酸氨肽酶抑制剂”是指靶向、减小或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物。靶向、减小或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物包括但不限于比格麦德(bengamide)或其衍生物。

如本文中所用的术语“蛋白酶体抑制剂”是指靶向、减小或抑制蛋白酶体活性的化合物。靶向、减小或抑制蛋白酶体活性的化合物包括但不限于硼替佐米(velcade^tm)和mln341。

如本文中所用的术语“基质金属蛋白酶抑制剂”或(“mmp”抑制剂)包括但不限于胶原蛋白肽模拟和非肽模拟抑制剂、四环素衍生物，例如氧肟酸盐肽模拟抑制剂巴马司他(batimastat)和其具有口服生物利用率的类似物马立马司他(marimastat)(bb-2516)、普啉司他(prinomastat)(ag3340)、美他司他(metastat)(nsc683551)、bms-279251、bay12-9566、taa211、mmi270b或aaj996。

如本文中所用的术语“用于治疗血液科恶性疾病的化合物”包括但不限于fms样酪氨酸激酶抑制剂，其为靶向、减小或抑制fms样酪氨酸激酶受体(flt-3r)的活性的化合物；干扰素，1-β-d-阿糖呋喃胞嘧啶(ara-c)和白消安(bisulfan)；和alk抑制剂，其为靶向、减小或抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物。

靶向、减小或抑制fms样酪氨酸激酶受体(flt-3r)活性的化合物尤其是抑制flt-3r受体激酶家族成员的化合物、蛋白质或抗体，如pkc412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、su11248和mln518。

如本文中所用的术语“hsp90抑制剂”包括但不限于靶向、减小或抑制hsp90的固有atp酶活性的化合物；通过泛素-蛋白酶体途径降解、靶向、减小或抑制hsp90客户蛋白(clientprotein)的化合物。靶向、减小或抑制hsp90的固有atp酶活性的化合物尤其是抑制hsp90的atp酶活性的化合物、蛋白质或抗体，如17-烯丙基氨基,17-去甲氧基格尔德霉素(17aag)，一种格尔德霉素衍生物；其它格尔德霉素相关化合物；根赤壳菌素(radicicol)；以及hdac抑制剂。

如本文中所用的术语“抗增殖抗体”包括但不限于曲妥珠单抗(herceptin^tm)、曲妥珠单抗-dm1、爱必妥(erbitux)、贝伐单抗(bevacizumab)(avastin^tm)、利妥昔单抗(rituximab)pro64553(抗cd40)和2c4抗体。抗体意指完整单克隆抗体、多克隆抗体、由至少2种完整抗体形成的多特异性抗体以及抗体片段，只要其能展现所期望的生物活性即可。

为治疗急性骨髓性白血病(aml)，本发明化合物可以与标准白血病疗法组合，尤其是与用于治疗aml的疗法组合使用。具体来说，本发明化合物可以与例如法呢基转移酶抑制剂和/或其它适用于治疗aml的药物，如道诺霉素、阿霉素(adriamycin)、ara-c、vp-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂(carboplatinum)和pkc412组合投与。

其它抗白血病化合物包括例如ara-c，一种嘧啶类似物，它是脱氧胞苷的2'-α-羟基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。还包括次黄嘌呤、6-巯嘌呤(6-mp)和磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)的嘌呤类似物。靶向、减小或抑制如丁酸钠和辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)的组蛋白脱乙酰基酶(hdac)抑制剂的活性的化合物抑制被称为组蛋白脱乙酰基酶的酶的活性。具体的hdac抑制剂包括ms275、saha、fk228(以前的fr901228)、曲古抑菌素a(trichostatina)和us6,552,065中所公开的化合物，包括但不限于n-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1h-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2e-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐，和n-羟基-3-[4-[(2-羟乙基){2-(1h-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2e-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐，尤其乳酸盐。如本文中所用的生长抑素(somatostatin)受体拮抗剂是指靶向、治疗或抑制生长抑素受体的化合物，如奥曲肽(octreotide)和som230。肿瘤细胞破坏方法是指如电离辐射的方法。上下文中所提到的术语“电离辐射”意指以电磁射线(如x射线和γ射线)或粒子(如α和β粒子)形式发生的电离辐射。在放疗中提供电离辐射，但不限于放疗中，并且电离辐射在本领域中是已知的。参见赫尔曼(hellman),癌症放疗的原理(principlesofradiationtherapy,cancer),肿瘤学的原理和实践(principlesandpracticeofoncology),德维塔(devita)等人编,第4版,第1卷,第248-275页(1993)。

还包括edg结合剂和核糖核苷酸还原酶抑制剂。如本文中所用的术语“edg结合剂”是指调节淋巴细胞再循环的一类免疫抑制剂，如fty720。术语“核糖核苷酸还原酶抑制剂”是指嘧啶或嘌呤核苷类似物，包括但不限于氟达拉滨和/或胞嘧啶阿拉伯糖苷(ara-c)、6-硫鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈滨(cladribine)、6-巯嘌呤(尤其与ara-c组合抗所有)和/或喷司他汀(pentostatin)。核糖核苷酸还原酶抑制剂尤其是羟基脲或2-羟基-1h-异吲哚-1,3-二酮衍生物。

还尤其包括vegf的那些化合物、蛋白质或单克隆抗体，如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪丁二酸盐；angiostatin^tm；endostatin^tm；邻氨基苯甲酸酰胺；zd4190；zd6474；su5416；su6668；贝伐单抗；或抗vegf抗体或抗vegf受体抗体，如rhumab和rhufab，vegf适体，如macugon；flt-4抑制剂、flt-3抑制剂、vegfr-2iggi抗体、安吉酶(angiozyme)(rpi4610)和贝伐单抗(avastin^tm)。

如本文中所用的光动力疗法是指使用某些被称作感光化合物的化学品来治疗或预防癌症的疗法。光动力疗法的实例包括用例如visudyne^tm和卟吩姆钠(porfimersodium)的化合物治疗。

如本文中所用的血管生成抑制性类固醇是指阻断或抑制血管生成的化合物，如阿奈可他(anecortave)、曲安西龙(triamcinolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、11-α-表氢化皮质醇(11-α-epihydrocotisol)、脱氧皮醇(cortexolone)、17α-羟基孕酮(17α-hydroxyprogesterone)、皮质酮(corticosterone)、去氧皮质酮(desoxycorticosterone)、睾酮(testosterone)、雌酮和地塞米松(dexamethasone)。

含有皮质类固醇的植入物是指如氟新龙(fluocinolone)和地塞米松的化合物。

其它化疗化合物包括但不限于植物碱、激素化合物和拮抗剂；生物反应调节剂，优选淋巴因子或干扰素；反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物；shrna或sirna；或混杂化合物或具有其它或未知作用机制的化合物。

通过编码序号、通用名称或商标名鉴别的活性化合物的结构可以得自现行版标准纲要“默克索引(themerckindex)”或得自数据库，例如patentsinternational(例如imsworldpublications)。

本发明化合物还可以与已知治疗方法，例如投与激素或辐射，组合使用。在某些实施例中，所提供的化合物被用作放射增敏剂，尤其用于治疗对放疗的敏感性差的肿瘤。

本发明化合物可以单独投与或与一或多种其它治疗化合物组合投与，可能的组合疗法采用固定组合形式，或交错投与或彼此独立地投与本发明化合物和一或多种其它治疗化合物，或组合投与固定组合和一或多种其它治疗化合物。除此以外或另外，本发明化合物尤其可以与化疗、放疗、免疫疗法、光疗、手术干预或这些的组合组合投与来治疗肿瘤。如上所述，在其它治疗策略的情况下，长期疗法与辅助疗法同样是可能的。其它可能的治疗是用于维持患者在肿瘤消退后的状态的疗法或甚至化学预防疗法，例如，对有风险的患者来说。

那些额外的药剂可以作为多次给药方案的一部分，与含有本发明化合物的组合物分开投与。或者，那些药剂可以是单一剂型的一部分，与本发明化合物一起混合在单一组合物中。如果作为多次给药方案的一部分投与，那么两种活性剂可以同时、依次或彼此间隔一段时间，通常彼此间隔在5小时以内提供。

如本文中所用的术语“组合(combination)”、“组合(combined)”以及相关术语是指同时或依次投与根据本发明的治疗剂。举例来说，本发明化合物可以与另一种治疗剂同时投与或以分开的单位剂型依次投与或以单一单位剂型一起投与。因此，本发明提供一种包含本发明化合物、额外治疗剂和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂的单一单位剂型。

本发明化合物和可以与载剂材料组合产生单一剂型的额外治疗剂(在包含如上所述的额外治疗剂的那些组合物中)的量将取决于所治疗的宿主和特定投药模式而变化。优选地，本发明组合物应调配成可以投与剂量介于0.01-100毫克/千克体重/天之间的本发明化合物。

在包含额外治疗剂的那些组合物中，那种额外治疗剂和本发明化合物可以协同地起作用。因此，这些组合物中额外治疗剂的量将低于仅使用那种治疗剂的单一疗法中所需的量。在这些组合物中，可以投与剂量介于0.01-1,000微克/千克体重/天之间的额外治疗剂。

存在于本发明组合物中的额外治疗剂的量将不大于通常将以包含所述治疗剂作为唯一活性剂的组合物形式投与的量。优选地，本发明所公开的组合物中额外治疗剂的量将在通常存在于包含那种药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中的量的约50％到100％范围内。

还可以将本发明化合物或其药物组合物并入用于包覆可植入医疗装置的组合物中，所述可植入医疗装置如假体、人工瓣膜、人造血管、支架和导管。血管支架例如已被用于克服再狭窄(损伤后血管壁再变窄)。然而，使用支架或其它可植入装置的患者有凝块形成或血小板活化的风险。可以通过用包含激酶抑制剂的药学上可接受的组合物预包覆所述装置来预防或减轻这些不合需要的作用。用本发明化合物包覆的可植入装置是本发明的另一个实施例。

例证

如以下实例中所描绘，在某些示范性实施例中，化合物根据以下一般程序制备。应了解，虽然一般方法描绘了某些本发明化合物的合成，但以下一般方法和本领域普通技术人员已知的其它方法可以适用于如本文中所述的所有化合物和这些化合物中的每一个的子类和物种。

实验部分中所用缩写的列表。

4ams：分子筛

acoh：乙酸

acn：乙腈

anhyd：无水

aq：水溶液

bn：苯甲基

boc：叔丁氧基羰基

cbzcl：氯甲酸苯甲酯

cbz-osu：n-(苯甲氧基羰基氧基)丁二酰亚胺

cu(oac)2：乙酸铜(ii)

d：天

dast：三氟化二乙氨基硫

dbu：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯

dce：1,2-二氯乙烷

dcm：二氯甲烷

dea：二乙胺

dibal-h：二异丁基氢化铝

dipea：n,n-二异丙基乙胺

dma：n,n-二甲基乙酰胺

dmap：4-二甲氨基吡啶

dmf：n,n-二甲基甲酰胺

dmso-二甲亚砜

dppa：叠氮磷酸二苯酯

edc：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐

ee：对映体过量

esi：电喷雾电离

et3n：三乙胺

et2o：乙醚

etoac：乙酸乙酯

etoh：乙醇

fmoc：芴甲氧羰基

fmoc-osu：n-(9-芴甲氧羰基氧基)丁二酰亚胺

h：小时

hatu：六氟磷酸3-氧化1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓

hcoonh4：甲酸铵

hplc：高效液相色谱

ibx：2-碘酰基苯甲酸

ipa：异丙醇

koac：乙酸钾

m：摩尔浓度

me：甲基

meoh：甲醇

min：分钟

ml：毫升

mm：毫摩尔浓度

mmol：毫摩尔

mtbe：甲基叔丁基醚

nabh3cn：氰基硼氢化钠

na2co3：碳酸钠

nahco3：碳酸氢钠

nmp：n-甲基吡咯烷

nmr：核磁共振

℃：摄氏度

pbs：磷酸盐缓冲盐水

pd/c：钯/碳

pd(oh)2/c：珀尔曼催化剂(pearlman'scatalyst)

pe：石油醚

phnh2：苯胺

pph3：三苯膦

rel：相对

rt：室温

sat：饱和

sfc：超临界流体色谱

socl2：亚硫酰氯

tbab：四正丁基溴化铵

tbuok：叔丁醇钾

tea：三乙胺

tf：三氟甲磺酸盐

tfaa：三氟甲磺酸酐

tfa：三氟乙酸

tips：三异丙基硅基

thf：四氢呋喃

tmscn：三甲基氰硅烷

ptsa：对甲苯磺酸

tsoh：对甲苯磺酸

下面描述所提供的化合物的代表性非限制性实例的制备。

实例1：(s)-2-(二甲氨基)-4-甲基戊酸[i-1].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(二甲氨基)-4-甲基戊酸：

向(s)-2-氨基-4-甲基戊酸(2.0g，15.24mmol)溶液中添加甲醛(38％，24.0g)和pd/c(10％，500mg)，过滤所得溶液(60ml)。将混合物在室温下氢化两天并过滤以去除催化剂。浓缩滤液到干燥，并向残余物中添加etoh(30ml)。将混合物搅拌1小时并过滤。浓缩滤液，得到呈白色粉末状的(s)-2-(二甲氨基)-4-甲基戊酸(1.3g，8.16mmol，53％)。esi-ms(ei⁺,m/z):160.2[m+h]⁺。¹h-nmr(400mhz,meod-d4):δ3.47(dd,j＝4.4hz,10.0hz,1h),2.85(s,6h),1.89-1.74(m,2h),1.62-1.55(m,1h),1.00(dd,j＝2.8hz,6.8hz,6h)。

实例2和3：(s)-2-氨基-7,7,7-三氟庚酸盐酸盐[i-2]和(r)-2-氨基-7,7,7-三氟庚酸盐酸盐[i-3].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：1,1,1-三氟-5-碘戊烷：

在冰浴下，向5,5,5-三氟戊-1-醇(2.0g，14.0mmol)、咪唑(1.48g，21.7mmol)和pph3(5.5g，21.0mmol)于dcm(40ml)中的溶液中添加i2(4.45g，17.5mmol)。将混合物升温到室温，并且搅拌过夜。向以上混合物中添加et2o(50ml)，然后搅拌10分钟。过滤混合物，并且在65℃下在大气压下蒸发滤液以去除溶剂，用et2o(30ml)稀释残余物，过滤混合物，并且将滤液用于下一步骤。

步骤2：(s)-2-(二苯基亚甲基氨基)-7,7,7-三氟庚酸叔丁酯和(r)-2-(二苯基亚甲基氨基)-7,7,7-三氟庚酸叔丁酯：

在-10℃下，向2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸叔丁酯(2.0g，6.78mmol)和tbab(109mg，0.339mmol)于甲苯(35ml)和dcm(15ml)中的溶液中添加koh(50％，20ml)，5分钟后，历时5分钟向以上溶液中逐滴添加et2o(30ml)中的1,1,1-三氟-5-碘戊烷，将所得混合物在-10℃到0℃下搅拌1小时。将溶液用水(200ml)稀释并用ea(100ml)萃取。用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，相继通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/10)和手性制备型hplc[柱：r,r-whelk-ol4.6*250mm5μm；溶剂：meoh(0.2％甲醇氨)]纯化粗产物，得到(s)-2-(二苯基亚甲基氨基)-7,7,7-三氟庚酸叔丁酯(200mg，0.48mmol，7.1％)和(r)-2-(二苯基亚甲基氨基)-7,7,7-三氟庚酸叔丁酯(200mg，0.48mmol，7.1％)。

(s)-2-(二苯基亚甲基氨基)-7,7,7-三氟庚酸叔丁酯(200mg，0.48mmol，7.1％)。esi-ms(ei+,m/z):243.1[m+h]+。¹h-nmr(500mhz,cdcl3):δ8.64(d,j＝8.0hz,2h),7.43-7.46(m,3h),7.38-7.39(m,1h),7.31-7.34(m,2h),7.15-7.17(m,2h),3.91(dd,j＝5.5hz,7.5hz,1h),2.00-2.05(m,2h),1.88-1.92(m,2h),1.31-1.52(m,13h)。

(r)-2-(二苯基亚甲基氨基)-7,7,7-三氟庚酸叔丁酯(200mg，0.48mmol，7.1％)。esi-ms(ei+,m/z):243.1[m+h]+。¹h-nmr(500mhz,cdcl3):δ8.64(d,j＝7.0hz,2h),7.43-7.46(m,3h),7.38-7.39(m,1h),7.31-7.34(m,2h),7.15-7.17(m,2h),3.92(dd,j＝5.5hz,7.5hz,1h),2.00-2.05(m,2h),1.88-1.92(m,2h),1.31-1.52(m,13h)。

步骤3：(s)-2-氨基-7,7,7-三氟庚酸盐酸盐[i-2]：

将(s)-2-(二苯基亚甲基氨基)-7,7,7-三氟庚酸叔丁酯(200mg，0.48mmol)于6mhcl(10ml)和二噁烷(5ml)中的溶液加热到100℃，持续17小时。用et2o(10ml×2)萃取溶液，将水相浓缩到干燥，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-7,7,7-三氟庚酸盐酸盐(i-2)(82.7mg，0.35mmol，74％)。esi-ms(ei+,m/z):200.1[m+h]+。1hnmr(500mhz,d2o)δ3.93(t,j＝6.0hz,1h),2.10-2.15(m,2h),1.83-1.90(m,2h),1.40-1.56(m,4h)。

步骤4：(r)-2-氨基-7,7,7-三氟庚酸盐酸盐[i-3]：

将(r)-2-(二苯基亚甲基氨基)-7,7,7-三氟庚酸叔丁酯(200mg，0.48mmol)于6mhcl(10ml)和二噁烷(5ml)中的溶液加热到100℃，持续17小时。用et2o(10ml×2)萃取溶液，将水相浓缩到干燥，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-7,7,7-三氟庚酸盐酸盐(i-3)(91.6mg，0.39mmol，82％)。esi-ms(ei+,m/z):200.1[m+h]+。1hnmr(500mhz,d2o)δ3.92(t,j＝6.0hz,1h),2.09-2.14(m,2h),1.82-1.89(m,2h),1.39-1.55(m,4h)。

实例4和5：(s)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸[i-4]和(r)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸[i-5].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酸和(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酸

向2-氨基-4,4,4-三氟丁酸(1.0g，6.36mmol)和nahco3(589mg，7.01mmol)于丙酮(60ml)中的溶液中缓慢添加n-(苯甲氧基羰基氧基)丁二酰亚胺(1.75g，7.01mmol)并且在0℃下过滤所得溶液(60ml)。将混合物在室温下搅拌16小时。用ch2cl2(2×100ml)萃取反应混合物并且水层用hcl(3m)酸化到约ph4，然后用etoac(3×150ml)萃取。用na2so4干燥有机相并在真空中蒸发溶剂。通过手性制备型hplc(柱：ay-h4.6*250mm5μm；溶剂：etoh)纯化所得粗产物，得到呈白色固体状的(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酸(700mg，2.40mmol，37.8％)和(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酸(700mg，2.40mmol，37.8％)。esi-ms(ei+,m/z):314.0[m+na]+。

(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酸。¹h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ13.20(s,1h),7.84(d,j＝9.0hz,1h),7.40-7.30(m,5h),5.06(s,2h),4.31-4.27(m,1h),2.85-2.58(m,2h)。

(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酸。¹h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ13.21(s,1h),7.85(d,j＝8.5hz,1h),7.38-7.30(m,5h),5.06(s,2h),4.31-4.27(m,1h),2.83-2.59(m,2h)。

步骤2：(s)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸[i-4].

将(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酸(700mg，2.40mmol)和pd/c(10％)(200mg)于meoh(50ml)中的混合物在室温下在氢气氛围下搅拌2小时。过滤混合物，并用meoh(20ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸(i-4)(250mg，1.59mmol，66.3％)。esi-ms(ei+,m/z):158.1[m+h]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6+1滴tfa+1滴d2o):δ4.32(t,j＝6.0hz,1h),3.03-2.82(m,2h)。

步骤3：(r)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸[i-5].

将(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酸(700mg，2.40mmol)和pd/c(10％)(200mg)于meoh(50ml)中的混合物在室温下在氢气氛围下搅拌2小时。过滤混合物，并用meoh(20ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸(i-5)(250mg，1.59mmol，66.3％)。esi-ms(ei⁺,m/z):158.1[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,dmso-d6+1滴tfa+1滴d2o):δ4.31(t,j＝6.0hz,1h),3.03-2.83(m,2h)。

实例6和7：(s)-2-氨基-5,5,5-三氟戊酸[i-6]和(r)-2-氨基-5,5,5-三氟戊酸[i-7].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：4,4,4-三氟丁醛：

在冰浴下，向4,4,4-三氟丁-1-醇(4.0g，31.3mmol)于dmso(80ml)中的溶液中添加ibx(13.0g，46.9mmol)。将混合物升温到室温，并且搅拌过夜。将反应混合物倒入水(200ml)中并用et2o(100ml×2)萃取，用水(100ml×3)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，并将溶液用于下一步骤。

步骤2：2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟戊腈：

在冰浴下，向以上4,4,4-三氟丁醛于et2o(200ml)中的溶液中添加苯甲胺(4ml)、acoh(3.0ml)，然后添加tmscn(3.5ml)。将混合物升温到室温，并且搅拌过夜。将溶液用水(200ml)稀释并用etoac(100ml)萃取，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色固体状的2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟戊腈(6.7g，粗制)，将其用于下一步骤。esi-ms(ei+,m/z):243.1[m+h]+。

步骤3：2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟戊酸：

将2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟戊腈(6.7g，粗制)于浓hcl(80ml)和acoh(30ml)中的溶液加热到95℃，持续17小时。将溶液浓缩到干燥，用所得溶液过滤(100ml)和acn(50ml)稀释，用饱和nahco3溶液将ph调节到3-4，将混合物过滤并干燥，得到呈白色固体状的2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟戊酸(3.5g，13.4mmol，43％，3个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):262.1[m+h]⁺。

步骤4：2-氨基-5,5,5-三氟戊酸：

将2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟戊酸(3.3g，12.6mmol)和pd(oh)2/c(20％，400mg)于acoh(60ml)中的混合物在30℃下搅拌17小时。过滤混合物，并将滤液浓缩到干燥，得到呈棕色固体状的2-氨基-5,5,5-三氟戊酸(3.0g，粗制)。esi-ms(ei+,m/z):172.2[m+h]+。

步骤5：(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸和(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸：

在冰浴下，向2-氨基-5,5,5-三氟戊酸(3.0g，粗制)于饱和nahco3溶液(100ml)和丙酮(100ml)中的溶液中添加cbz-osu(3.45g，13.9mmol)，2小时后，用6mhcl将混合物调节到ph3，用etoac(50ml×2)萃取，用水(50ml)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，并在真空中浓缩。相继通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/2)和手性制备型hplc[柱：ay-h4.6*250mm5μm；溶剂：meoh(0.5％nh4oh)]纯化粗产物，得到呈白色固体状的(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸(1.50g，4.92mmol，28％，2个步骤)和(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸(1.50g，4.92mmol，28％，2个步骤)。

(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸(1.50g，4.92mmol，28％，2个步骤)。esi-ms(ei+,m/z):328.0[m+na]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ12.86(s,1h),7.71(d,j＝8.0hz,1h),7.31-7.39(m,5h),5.05(s,2h),4.05-4.10(m,1h),2.34-2.41(m,1h),2.21-2.29(m,1h),1.84-1.97(m,2h)。

(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸(1.50g，4.92mmol，28％，2个步骤)esi-ms(ei+,m/z):328.0[m+na]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ12.85(s,1h),7.71(d,j＝8.0hz,1h),7.30-7.39(m,5h),5.05(s,2h),4.05-4.10(m,1h),2.34-2.41(m,1h),2.21-2.29(m,1h),1.84-1.97(m,2h)。

步骤6：(s)-2-氨基-5,5,5-三氟戊酸[i-6]：

将(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸(500mg，1.64mmol)和pd/c(10％)(50mg)于meoh(20ml)中的混合物在室温下在氢气下搅拌2小时。过滤混合物，并用meoh(20ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-5,5,5-三氟戊酸(i-6)(200mg，1.17mmol，71％)。esi-ms(ei⁺,m/z):172.1[m+h]⁺。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.38(s,3h),4.05(d,j＝4.4hz,1h),2.34-2.55(m,2h),1.95-20.9(m,2h)。

步骤7：(r)-2-氨基-5,5,5-三氟戊酸[i-7]：

将(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸(500mg，1.64mmol)和pd/c(10％)(50mg)于meoh(20ml)中的混合物在室温下在氢气下搅拌2小时。过滤混合物，并用meoh(20ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-5,5,5-三氟戊酸(i-7)(160mg，0.94mmol，57％)。esi-ms(ei+,m/z):172.1[m+h]+。1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.38(s,3h),4.05(d,j＝4.4hz,1h),2.34-2.55(m,2h),1.95-20.9(m,2h)。

实例8和9：(s)-2-氨基-6,6,6-三氟己酸[i-8]和(r)-2-氨基-6,6,6-三氟己酸[i-9].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-6,6,6-三氟己酸和(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-6,6,6-三氟己酸

在0℃下，向2-氨基-6,6,6-三氟己酸(556mg，2.5mmol)和1mnaoh(25ml，25mmol)于thf(25ml)中的溶液中缓慢添加氯甲酸苯甲酯(554mg，3.25mmol)，将混合物在室温下搅拌16小时。用dcm(2×100ml)萃取反应混合物，并且用hcl(3m)将水层酸化到约ph4，然后用etoac(3×50ml)萃取。用na2so4干燥有机相并在真空中蒸发溶剂。通过手性制备型hplc(柱：ay-h(250*4.6mm5μm)；流动相：正己烷(0.1％dea):etoh(0.1％dea)＝90:10)纯化所得粗产物，得到呈白色固体状的(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-6,6,6-三氟己酸(232mg，0.73mmol，29％)和(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-6,6,6-三氟己酸(250mg，0.78mmol，31.3％)。esi-ms(ei+,m/z):342.0[m+na]+。

(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-6,6,6-三氟己酸，1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ12.68(s,1h),7.66(d,j＝7.5hz,1h),7.38-7.32(m,5h),5.04(s,2h),4.00-3.96(m,1h),2.28-2.19(m,2h),1.80-1.51(m,4h)。

(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-6,6,6-三氟己酸，1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ12.68(s,1h),7.67(d,j＝8.5hz,1h),7.38-7.30(m,5h),5.04(s,2h),4.00-3.96(m,1h),2.33-2.15(m,2h),1.82-1.51(m,4h)。

步骤2：(s)-2-氨基-6,6,6-三氟己酸[i-8].

将(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-6,6,6-三氟己酸(200mg，0.63mmol)和pd/c(10％)(50mg)于meoh(20ml)中的混合物在室温下在氢气氛围下搅拌2小时。过滤混合物，并用meoh(20ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-6,6,6-三氟己酸(i-8)(56.2mg，0.30mmol，48.2％)。esi-ms(ei⁺,m/z):186.1[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,dmso-d6+1滴tfa+1滴d2o):δ3.99(t,j＝5.5hz,1h),2.32-2.30(m,2h),1.91-1.83(m,2h),1.70-1.57(m,2h)。

步骤3：(r)-2-氨基-6,6,6-三氟己酸[i-9].

将(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-6,6,6-三氟己酸(250mg，0.78mmol)和pd/c(10％)(50mg)于meoh(20ml)中的混合物在室温下在氢气氛围下搅拌2小时。过滤混合物，并用meoh(20ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-6,6,6-三氟己酸(i-9)(48.8mg，0.26mmol，33.8％)。esi-ms(ei⁺,m/z):186.1[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,dmso-d6+1滴tfa+1滴d2o):δ3.98(t,j＝6.5hz,1h),3.33-2.28(m,2h),1.93-1.81(m,2h),1.71-1.54(m,2h)。

实例11：(s)-2-(苯甲基氨基)-4-甲基戊酸[i-11].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(苯甲基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(800mg，2.0mmol)于meoh(30ml)中的搅拌溶液中添加苯甲醛(0.26g，2.4mmol)和乙酸钾(0.4g，4.1mmol)，并将混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加氰基硼氢化钠(0.2g，3.0mmol)，将混合物在室温下再搅拌5小时。将混合物用饱和nahco3溶液(50ml)淬灭，用etoac(50ml×2)萃取，用所得溶液过滤(50ml)和盐水(50ml)洗涤。浓缩有机相，通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm，流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化，得到呈无色油状的(s)-2-(苯甲基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯(200mg，0.64mmol，32％)。ms(ei+,m/z):312.3[m+h]+。1h-nmr(500mhz,meod):δ7.41～7.49(m,10h),5.34(dd,j＝12.0hz,45.0hz,2h),4.23(q,j＝12.0hz,2h),4.07～4.09(m,3h),1.68～1.85(m,3h),0.94(dd,j＝8.5hz,20.5hz,6h)。

步骤2：(s)-2-(苯甲基氨基)-4-甲基戊酸[i-11]：

向(s)-2-(苯甲基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯(50mg，0.16mmol)于meoh(5ml)中的搅拌溶液中添加1mnaoh(0.5ml)。在室温下搅拌反应物4小时。浓缩所得溶液并且通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化残余物，得到呈白色固体状的(s)-2-(苯甲基氨基)-4-甲基戊酸(i-11)(21mg，0.095mmol，58％)。ms(ei+,m/z):222.2[m+h]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ9.32(s,1h),7.43～7.50(m,5h),4.17(dd,j＝13.0hz,44.0hz,2h),3.82(t,j＝6.5hz,1h),1.68～1.76(m,3h),0.85～0.90(m,6h)。

实例12：(s)-4-甲基-2-(2-苯乙酰胺基)戊酸[i-12]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-2-(2-苯乙酰胺基)戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(500mg，1.27mmol)、2-苯乙酸(260mg，1.91mmol)和hatu(726mg，1.91mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加dipea(410mg，3.18mmol)，并将溶液在室温下搅拌2小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-2-(2-苯乙酰胺基)戊酸苯甲酯(300mg，0.88mmol，70％)。ms(ei+,m/z):340.2[m+h]+。

步骤2：(s)-4-甲基-2-(2-苯乙酰胺基)戊酸[i-12]：

向(s)-4-甲基-2-(2-苯乙酰胺基)戊酸苯甲酯(250mg，0.74mmol)于etoh(10ml)中的搅拌溶液中添加催化量的pd/c(10％，20mg)。将反应物在氢气氛围下在50℃下搅拌3小时。过滤并浓缩所得溶液，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-2-(2-苯乙酰胺基)戊酸(i-12)(100mg，0.40mmol，54％)。ms(ei+,m/z):250.2[m+h]+。1h-nmr(500mhz,meod):δ7.24-7.32(m,5h),4.44(t,j＝7.5hz,1h),3.58(s,2h),1.64-1.68(m,3h),0.96(d,j＝6.0hz,3h),0.91(d,j＝6.0hz,3h)。

实例13：(s)-2-(异丙基氨基)-4-甲基戊酸[i-13]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(异丙基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(1.0g，2.53mmol)于meoh(30ml)中的搅拌溶液中添加丙酮(177mg，3.05mmol)和乙酸钾(0.5g，5.08mmol)，并将混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加氰基硼氢化钠(0.24g，3.81mmol)，将混合物在室温下再搅拌3小时。将混合物用饱和nahco3溶液(50ml)淬灭，用etoac(50ml×2)萃取，用所得溶液过滤(50ml)和盐水(50ml)洗涤。浓缩有机相，通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm，流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化，得到呈无色油状的(s)-2-(异丙基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯(200mg，0.76mmol，30％)。ms(ei+,m/z):264.3[m+h]+。1h-nmr(500mhz,meod):δ7.22～7.29(m,5h),5.07(dd,j＝11.5hz,17.0hz,2h),3.33(dd,j＝6.5hz,8.5hz,1h),2.54～2.59(m,1h),1.30～1.48(m,3h),0.72～0.94(m,12h)。

步骤2：(s)-2-(异丙基氨基)-4-甲基戊酸[i-13]：

向(s)-2-(异丙基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯(200mg，0.76mmol)于meoh(10ml)中的搅拌溶液中添加催化量的pd/c(10％，50mg)。将反应物在氢气氛围下在室温下搅拌24小时。过滤所得溶液并浓缩过滤，得到呈白色固体状的(s)-2-(异丙基氨基)-4-甲基戊酸(i-13)(100mg，0.57mmol，76％)。ms(ei+,m/z):174.3[m+h]+。1h-nmr(500mhz,meod):δ3.56(dd,j＝6.0hz,8.5hz,1h),3.33～3.40(m,1h),1.75～1.86(m,2h),1.53～1.58(m,1h),1.31～1.36(m,6h),0.96～1.02(m,6h).3.85(dd,j＝5.5hz,8.5hz,1h),2.87(q,j＝6.0hz,1h),2.68(dd,j＝7.5hz,12.0hz,1h),1.92～1.99(m,1h),1.65～1.78(m,3h),0.88～0.96(m,12h)。

实例14：(s)-2-(异丁基氨基)-4-甲基戊酸[i-14]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(异丁基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(1.0g，2.53mmol)于meoh(30ml)中的搅拌溶液中添加异丁醛(0.22g，3.05mmol)和乙酸钾(0.5g，5.08mmol)，并且将混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加氰基硼氢化钠(0.24g，3.81mmol)。将混合物在室温下再搅拌5小时。将混合物用饱和nahco3溶液(50ml)淬灭，用etoac(50ml×2)萃取，用所得溶液过滤(50ml)和盐水(50ml)洗涤。浓缩有机相，通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm，流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化，得到呈无色油状的(s)-2-(异丁基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯(300mg，1.08mmol，50％)。ms(ei+,m/z):278.2[m+h]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ9.16(s,1h),9.14(d,j＝17.5hz,2h),7.42-7.43(m,5h),5.28(q,j＝12.0hz,2h),4.08-4.09(m,1h),2.87-2.89(m,1h),2.65-2.66(m,1h),1.91-1.95(m,1h),1.62～1.71(m,3h),0.88～0.94(m,12h)。

步骤2：(s)-2-(异丁基氨基)-4-甲基戊酸[i-14]：

向(s)-2-(异丁基氨基)-4-甲基戊酸苯甲酯(300mg，1.08mmol)于meoh(10ml)中的搅拌溶液中添加催化量的pd/c(10％，50mg)。将反应物在氢气氛围下在室温下搅拌24小时。过滤所得溶液并浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-2-(异丁基氨基)-4-甲基戊酸(i-14)(150mg，0.8mmol，74％)。ms(ei+,m/z):188.3[m+h]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ8.82(s,2h),3.85(dd,j＝5.5hz,8.5hz,1h),2.87(q,j＝6.0hz,1h),2.68(dd,j＝7.5hz,12.0hz,1h),1.92～1.99(m,1h),1.65～1.78(m,3h),0.88～0.96(m,12h)。

实例15：(s)-2-苯甲酰胺基-4-甲基戊酸[i-15]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-苯甲酰胺基-4-甲基戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(500mg，1.27mmol)、苯甲酸(223mg，1.91mmol)和hatu(726mg，1.91mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加dipea(410mg，3.18mmol)，并将溶液在室温下搅拌2小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-苯甲酰胺基-4-甲基戊酸苯甲酯(300mg，0.92mmol，73％)。ms(ei+,m/z):326.2[m+h]+。

步骤2：(s)-2-苯甲酰胺基-4-甲基戊酸[i-15]：

向(s)-2-苯甲酰胺基-4-甲基戊酸苯甲酯(100mg，0.46mmol)于etoh(10ml)中的搅拌溶液中添加催化量的pd/c(10％，20mg)。将反应物在氢气氛围下在50℃下搅拌3小时。过滤并浓缩所得溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-苯甲酰胺基-4-甲基戊酸(i-15)(100mg，0.42mmol，65％)。ms(ei+,m/z):236.2[m+h]+。1h-nmr(400mhz,meod):δ7.87(t,j＝6.5hz,2h),7.47-7.57(m,3h),4.69(dd,j＝4.0hz,11.0hz,1h),1.75-1.84(m,3h),1.01(dd,j＝6.5hz,10.5hz,6h)。

实例16：(s)-2-异丁酰胺基-4-甲基戊酸[i-16]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-异丁酰胺基-4-甲基戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(500mg，1.27mmol)、异丁酸(168mg，1.91mmol)和hatu(726mg，1.91mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加dipea(410mg，3.18mmol)，并将溶液在室温下搅拌2小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-异丁酰胺基-4-甲基戊酸苯甲酯(300mg，1.03mmol，81％)。ms(ei+,m/z):292.2[m+h]+。

步骤2：(s)-2-异丁酰胺基-4-甲基戊酸[i-16]：

向(s)-2-(环己基甲酰胺基)-4-甲基戊酸苯甲酯(200mg，0.69mmol)于etoh(10ml)中的搅拌溶液中添加催化量的pd/c(10％，20mg)。将反应物在氢气氛围下在50℃下搅拌3小时。过滤并浓缩所得溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-异丁酰胺基-4-甲基戊酸(100mg，0.50mmol，73％)。ms(ei+,m/z):202.2[m+h]+。1h-nmr(400mhz,meod):δ4.43(t,j＝6.4hz,1h),2.49-2.56(m,1h),1.60-1.74(m,3h),1.12(dd,j＝2.4hz,6.8hz,6h),0.96(dd,j＝6.4hz,16.0hz,6h)。

实例17：(s)-2-(环己烷磺酰胺基)-4-甲基戊酸[i-17]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(环己烷磺酰胺基)-4-甲基戊酸苯甲酯：

在用冰浴冷却的情况下，向(s)-2-氨基-4-甲基戊酸苯甲酯4-甲基苯磺酸盐(500mg，1.27mmol)和et3n(642.89mg，6.35mmol)于dmf(3ml)中的溶液中添加环己烷磺酰氯(278.53mg，1.52mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将溶液用乙酸乙酯(10ml)稀释，用所得溶液过滤(10ml×3)和盐水(10ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化粗产物，得到呈白色固体状的(s)-2-(环己烷磺酰胺基)-4-甲基戊酸苯甲酯(200mg，0.544mmol，98％)。esi-ms(ei+,m/z):368.3[m+h]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6)δ7.70(d,j＝9.0hz,1h),7.38(t,j＝6.5hz,4h),7.37-7.32(m,1h),5.14(q,j＝12.5hz,2h),3.91(td,j＝5.0hz,9.5hz,1h),2.69-2.74(m,1h),2.05(d,j＝12.5hz,1h),1.97(d,j＝12.5hz,1h),1.74-1.67(m,2h),1.57-1.51(m,2h),1.50-1.44(m,1h),1.36-0.99(m,5h),0.87(dt,j＝10.5hz,j＝20.5hz,6h)。

步骤2：(s)-2-(环己烷磺酰胺基)-4-甲基戊酸[i-17]：

向(s)-2-(环己烷磺酰胺基)-4-甲基戊酸苯甲酯(192mg，0.552mmol)于etoh(3ml)中的溶液中添加pd/c(20mg，10％)。将反应混合物在50℃下在氢气下搅拌4小时。过滤混合物，并用meoh(10ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-2-(环己烷磺酰胺基)-4-甲基戊酸(i-17)(23.3mg，0.084mmol,100％)。esi-ms(ei⁺,m/z):300.2[m+na]⁺。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),7.47(d,j＝9.0hz,1h),3.76(td,j＝5.0hz,9.5hz,1h),2.82-2.69(m,1h),2.18-1.97(m,2h),1.82-1.69(m,3h),1.61(d,j＝12.5hz,1h),1.54-1.40(m,2h),1.39-1.07(m,5h),0.95-0.80(m,6h)。

实例18：(s)-4-甲基-2-(苯基甲磺酰胺基)戊酸[i-18]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-2-(苯基甲磺酰胺基)戊酸苯甲酯：

在用冰浴冷却的情况下，向(s)-2-氨基-4-甲基戊酸苯甲酯4-甲基苯磺酸盐(500mg，1.27mmol)和et3n(642.89mg，6.35mmol)于dmf(3ml)中的溶液中添加苯甲磺酰氯(290.71mg，1.52mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将溶液用乙酸乙酯(10ml)稀释，用所得溶液过滤(10ml×3)和盐水(10ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化粗产物，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-2-(苯基甲磺酰胺基)戊酸苯甲酯(149mg，0.396mmol，90％)。esi-ms(ei+,m/z):398.0[m+na]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6)δ7.81(d,j＝8.5hz,1h),7.52-7.18(m,9h),5.15(s,2h),4.28(dd,j＝13.5hz,44.5hz,2h),3.87(dd,j＝8.0hz,15.0hz,1h),1.57-1.15(m,4h),0.82(dd,j＝4.5hz,6.0hz,6h)。

步骤2：(s)-4-甲基-2-(苯基甲磺酰胺基)戊酸[i-18]：

向(s)-4-甲基-2-(苯基甲磺酰胺基)戊酸苯甲酯(121mg，0.322mmol)于etoh(3ml)中的溶液中添加pd/c(20mg，10％)。将此反应混合物在50℃下在氢气下搅拌4小时。过滤混合物，并用meoh(10ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-2-(苯基甲磺酰胺基)戊酸(i-18)(41.2mg，0.144mmol，100％)。esi-ms(ei+,m/z):308.0[m+na]+。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ12.77(s,1h),7.59(d,j＝8.5hz,1h),7.47-7.25(m,5h),4.30(dd,j＝13.5hz,37.0hz,2h),3.75(dd,j＝7.5hz,15.5hz,1h),1.65(dt,j＝6.5hz,13.5hz,1h),1.45(t,j＝7.2hz,2h),0.85(dd,j＝1.5hz,6.5hz,6h)。

实例19：(s)-4-甲基-2-(甲磺酰胺基)戊酸[i-19]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-2-(甲磺酰胺基)戊酸苯甲酯：

在用冰浴冷却的情况下，向(s)-2-氨基-4-甲基戊酸苯甲酯4-甲基苯磺酸盐(500mg，1.27mmol)和et3n(642.89mg，6.35mmol)于dmf(3ml)中的溶液中添加甲磺酰氯(290.71mg，1.52mmol)，将混合物在25℃下搅拌2小时。将溶液用乙酸乙酯(10ml)稀释，用所得溶液过滤(10ml×3)和盐水(10ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化粗产物，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-2-(甲磺酰胺基)戊酸苯甲酯(192mg，0.641mmol，98％)。esi-ms(ei⁺,m/z):323.0[m+na]⁺。¹h-nmr(500mhz,dmso-d6)δ7.79(d,j＝8.8hz,1h),7.42-7.36(m,4h),7.37-7.32(m,1h),5.16(s,2h),3.97(td,j＝6.0hz,9.0hz,1h),2.85(s,3h),1.68(dq,j＝6.5hz,13.0hz,1h),1.54-1.46(m,2h),0.91-0.82(m,6h)。

步骤2：(s)-4-甲基-2-(甲磺酰胺基)戊酸[i-19]：

向(s)-4-甲基-2-(甲磺酰胺基)戊酸苯甲酯(149mg，0.497mmol)于etoh(3ml)中的溶液中添加pd/c(20mg，10％)。将此反应混合物在50℃下在氢气氛围下搅拌4小时。过滤混合物，并用meoh(10ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-2-(甲磺酰胺基)戊酸(i-19)(31.4mg，0.150mmol，100％)。esi-ms(ei⁺,m/z):232.1[m+na]⁺。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ12.82(s,1h),7.56(d,j＝9.0hz,1h),3.82(dd,j＝8.0hz,15.5hz,1h),2.88(s,3h),1.72(dt,j＝6.5hz,13.0hz,1h),1.48(t,j＝7.0hz,2h),0.89(t,j＝7.0hz,6h)。

实例20：(s)-2-氨基-4-甲基-n-苯基戊酰胺[i-20]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-1-氧代-1-(苯基氨基)戊-2-基氨基甲酸苯甲酯：

在室温下，向(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4-甲基戊酸(1.0g，3.77mmol)于dmf(20ml)中的溶液中添加苯胺(702mg，7.55mmol)、hatu(1.72g，4.52mmol)和et3n(1.14g，11.31mmol)。2小时后，将溶液用etoac(80ml)稀释，用所得溶液过滤(80ml×3)和盐水(80ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)纯化粗产物，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-1-氧代-1-(苯基氨基)戊-2-基氨基甲酸苯甲酯(350mg，1.03mmol，27％)。esi-ms(ei+,m/z):341.1[m+h]+。

步骤2：(s)-2-氨基-4-甲基-n-苯基戊酰胺[i-20]：

将(s)-4-甲基-1-氧代-1-(苯基氨基)戊-2-基氨基甲酸苯甲酯(350mg，1.03mmol)和pd/c(10％，50mg)于meoh(10ml)中的混合物在室温下在氢气下搅拌2小时。过滤混合物，并用meoh(10ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-4-甲基-n-苯基戊酰胺(i-20)(100mg，0.49mmol，47％)。esi-ms(ei+,m/z):207.2[m+h]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ9.86(s,1h),7.63(dd,j＝1.0hz,8.5hz,2h),7.31-7.27(m,2h),7.03(t,j＝7.5hz,1h),3.31(dd,j＝5.0hz,8.5hz,1h),1.80-1.71(m,1h),1.50-1.44(m,1h),1.35-1.29(m,1h),0.90(dd,j＝6.5hz,14.0hz,6h)。

实例21：(s)-2-氨基-n,4-二甲基戊酰胺[i-21]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-1-(甲氨基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸苯甲酯：

在25℃下，向(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4-甲基戊酸(1.0g，3.77mmol)于dmf(20ml)中的溶液中添加menh2·hcl(509mg，7.54mmol)、hatu(1.72g，4.52mmol)和et3n(1.14g，11.31mmol)。2小时后，将溶液用etoac(80ml)稀释，用所得溶液过滤(80ml×3)和盐水(80ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)纯化粗产物，得到呈无色油状的(s)-4-甲基-1-(甲氨基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸苯甲酯(550mg，1.98mmol，52％)。esi-ms(ei+,m/z):279.2[m+h]+。

步骤2：(s)-2-氨基-n,4-二甲基戊酰胺[i-21]：

将(s)-4-甲基-1-(甲氨基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸苯甲酯(300mg，1.08mmol)和pd/c(10％)(50mg)于meoh(10ml)中的混合物在室温下在氢气下搅拌2小时。过滤混合物，并用meoh(10ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈无色油状的(s)-2-氨基-n,4-二甲基戊酰胺(i-21)(152mg，1.05mmol，98％)。esi-ms(ei+,m/z):145.3[m+h]+。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):δ7.80(s,1h),3.10(dd,j＝5.0hz,9.0hz,1h),2.57(dd,j＝3.0hz,5.0hz,3h),1.81(s,2h),1.66-1.69(m,1h),1.34-1.39(m,1h),1.16-1.22(m,1h),0.81-0.87(m,6h)。

实例22：(s)-4-甲基-2-(苯基氨基)戊酸[i-22]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(环己基甲酰胺基)-4-甲基戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(500mg，1.27mmol)、环己甲酸(244mg，1.91mmol)和hatu(726mg，1.91mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加dipea(410mg，3.18mmol)，并将溶液在室温下搅拌2小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-(环己基甲酰胺基)-4-甲基戊酸苯甲酯(300mg，0.91mmol，71％)。ms(ei+,m/z):332.3[m+h]+。

步骤2：(s)-2-(环己基甲酰胺基)-4-甲基戊酸[i-22]：

向(s)-2-(环己基甲酰胺基)-4-甲基戊酸苯甲酯(200mg，0.60mmol)于etoh(10ml)中的搅拌溶液中添加催化量的pd/c(10％，20mg)。将反应物在氢气氛围下在50℃下搅拌3小时。过滤并浓缩所得溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-(环己基甲酰胺基)-4-甲基戊酸(i-22)(100mg，0.41mmol，69％)。ms(ei+,m/z):242.3[m+h]⁺。1h-nmr(500mhz,cd3od):δ4.43(t,j＝7.5hz,1h),2.29(td,j＝8.0hz,11.0hz,1h),1.74-1.85(m,4h),1.63-1.72(m,4h),1.43-1.49(m,2h),1.26-1.36(m,3h),0.96(dd,j＝6.0hz,20.5hz,6h)。

实例25：(s)-4-甲基-2-(苯基磺酰胺基)戊酸[i-25]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-2-(苯基磺酰胺基)戊酸苯甲酯：

在用冰浴冷却的情况下，向(s)-2-氨基-4-甲基戊酸苯甲酯4-甲基苯磺酸盐(300mg，0.762mmol)和et3n(385.73mg，3.81mmol)于dmf(3ml)中的溶液中添加苯磺酰氯(148.12mg，0.838mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将溶液用乙酸乙酯(10ml)稀释，用所得溶液过滤(10ml×3)和盐水(10ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗产物(280mg，纯度：85％，产率：74％)直接用于下一步骤。esi-ms(ei+,m/z):384.1[m+na]+。

步骤2：(s)-4-甲基-2-(苯基磺酰胺基)戊酸[i-25]：

向(s)-4-甲基-2-(苯基磺酰胺基)戊酸苯甲酯(200mg，0.553mmol)于etoh(3ml)中的溶液中添加pd/c(20mg，10％)。将此反应混合物在50℃下在氢气氛围下搅拌4小时。过滤混合物，并用meoh(10ml)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-2-(苯基磺酰胺基)戊酸(i-25)(63.7mg，0.234mmol，100％)。esi-ms(ei⁺,m/z):294.0[m+na]⁺。¹h-nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.61(s,1h),8.16(d,j＝8.6hz,1h),7.79-7.73(m,2h),7.62(t,j＝7.3hz,1h),7.56(t,j＝7.4hz,2h),3.63(dd,j＝8.5hz,14.5hz,1h),1.53(td,j＝6.5hz,13.5hz,1h),1.41-1.31(m,2h),0.79(d,j＝6.6hz,3h),0.66(d,j＝6.5hz,3h)。

实例26：(s)-4-甲基-2-(苯基氨基)戊酸[i-26]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-2-(苯基氨基)戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(200mg，0.51mmol)、苯基硼酸(186mg，1.52mmol)和cu(oac)2(462mg，2.54mmol)于dcm(10ml)中的混合物中添加4ams(1.0g)和et3n(155mg，1.52mmol)，并将混合物在室温下搅拌18小时。将混合物用所得溶液过滤(50ml)淬灭，用etoac(50ml×2)萃取，用所得溶液过滤(50ml)和盐水(50ml)洗涤。浓缩有机相，通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/20)纯化，得到呈无色油状的(s)-4-甲基-2-(苯基氨基)戊酸苯甲酯(100mg，0.34mmol，66％)。ms(ei+,m/z):298.2[m+h]+。

步骤2：(s)-4-甲基-2-(苯基氨基)戊酸[i-26]：

向(s)-4-甲基-2-(苯基氨基)戊酸苯甲酯(100mg，0.34mmol)于etoh(10ml)中的搅拌溶液中添加催化量的pd/c(10％，20mg)。将反应物在氢气氛围下在50℃下搅拌2小时。过滤并浓缩所得溶液，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-2-(苯基氨基)戊酸(i-26)(30mg，0.15mmol，43％)。ms(ei+,m/z):208.1[m+h]+。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ7.23(t,j＝8.0hz,2h),6.83(t,j＝7.6hz,1h),6.66(d,j＝8.0hz,2h),3.99(d,j＝8.4hz,1h),2.87(q,j＝6.0hz,1h),1.72～1.86(m,2h),1.62～1.68(m,1h),0.85～1.03(m,6h)。

实例36：(s)-2-乙酰胺基-4-甲基戊酸[i-36]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-乙酰胺基-4-甲基戊酸苯甲酯：

向l-亮氨酸苯甲酯对甲苯磺酸盐(500mg，1.27mmol)、乙酸(114mg，1.91mmol)和hatu(726mg，1.91mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加dipea(410mg，3.18mmol)，并将溶液在室温下搅拌2小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-乙酰胺基-4-甲基戊酸苯甲酯(300mg，1.14mmol，89％)。ms(ei+,m/z):264.2[m+h]+。

步骤2：(s)-2-乙酰胺基-4-甲基戊酸[i-36]：

向(s)-2-乙酰胺基-4-甲基戊酸苯甲酯(250mg，0.74mmol)于etoh(10ml)中的搅拌溶液中添加催化量的pd/c(10％，20mg)。将反应物在氢气氛围下在50℃下搅拌3小时。过滤并浓缩所得溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-乙酰胺基-4-甲基戊酸(i-36)(100mg，0.57mmol，81％)。ms(ei+,m/z):174.2[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,meod):δ4.43(dd,j＝6.0hz,9.5hz,1h),2.00(s,3h),1.61-1.73(m,3h),0.97(dd,j＝6.0hz,17.5hz,6h)。

实例45：(s,e)-2-(4-甲氧基-4-氧代丁-2-烯酰胺基)-4-甲基戊酸[i-45]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s,e)-2-(4-甲氧基-4-氧代丁-2-烯酰胺基)-4-甲基戊酸[i-45]：

向(e)-4-甲氧基-4-氧代丁-2-烯酸(1.0g，7.69mmol)于dcm(30ml)中的溶液中相继添加socl2(1.83g，15.38mmol)和dmf(0.1ml)。将溶液加热到40℃，持续4小时。将溶液浓缩到干燥，得到油状物。用dcm(10ml)稀释油状物。逐滴添加用冰浴冷却的(s)-2-氨基-4-甲基戊酸(1.0g，7.62mmol)于丙酮(20ml)和饱和na2co3(20ml)溶液中的溶液。1小时后，用6mhcl溶液将溶液调节到ph2，用etoac(40×2)萃取，用所得溶液过滤(80ml×3)和盐水(80ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。通过色谱(硅胶，meoh/dcm＝1/20)纯化粗产物，得到呈黄色油状的(s,e)-2-(4-甲氧基-4-氧代丁-2-烯酰胺基)-4-甲基戊酸(i-45)(1.0g，4.11mmol，53％)。esi-ms(ei⁺,m/z):244.2[m+h]⁺。¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ7.32(d,j＝15.2hz,1h),7.05(d,j＝15.2hz,1h),6.85-6.89(m,2h),7.30-7.46(m,1h),3.82(s,1h),1.63-1.78(m,3h),0.97(d,j＝4.8hz,6h)。

实例46和47：(r)-2-氨基-3,3-二氟-4-甲基戊酸[i-46]和(s)-2-氨基-3,3-二氟-4-甲基戊酸[i-47]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2,2-二氟-3-甲基丁酸乙酯：

将3-甲基-2-氧代丁酸乙酯(10g，0.069mol)和dast(16.8g，0.10mol)的混合物在室温下搅拌12小时。在通过tlc检查之后，向冷的碳酸氢钠溶液饱和水溶液中缓慢地逐滴添加反应混合物。用et2o(300ml×2)萃取混合物，并且将有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩，得到粗制2,2-二氟-3-甲基丁酸乙酯(8.3g)，其直接用于下一步骤。

步骤2：2,2-二氟-3-甲基丁醛：

在-78℃下在氩气下，向粗制2,2-二氟-3-甲基丁酸乙酯(8.3g)于ch2cl2(200ml)中的溶液中逐滴添加dibal-h于己烷(1.0m，69ml，69.0mmol)中的溶液，并且将混合物在-78℃下搅拌30分钟。在通过tlc检查之后，将反应物用饱和柠檬酸淬灭并用et2o萃取。将萃取物用饱和柠檬酸、盐水洗涤，用na2so4干燥，并在减压下浓缩，得到油性醛2,2-二氟-3-甲基丁醛(4.2g)，其不经过纯化就立即用于下一步骤中。

步骤3：2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊腈：

将粗制2,2-二氟-3-甲基丁醛(4.2g)于50mlmeoh中的溶液冷却到0℃。逐滴添加乙酸(冰的，2.1ml)，将温度保持在约0℃，然后在15分钟时间内添加三甲基氰硅烷(4.2ml)。将反应混合物升温到25℃并搅拌过夜。过滤所得冷溶液(200ml)，将其加入反应混合物中并用二氯甲烷(2*200ml)萃取反应混合物。相继用所得溶液过滤(2*100ml)、盐水(2*50ml)洗涤二氯甲烷层。二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，得到粗制2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊腈(2.8g)，其不经过纯化就立即用于下一步骤中。esi-ms(ei+,m/z):238.2[m+h]+。

步骤4：2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊酸：

将粗制2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊腈(2.8g)于50ml浓盐酸和10mlhoac中的溶液在90℃下搅拌24小时并浓缩。通过制备型hplc纯化残余物，得到呈白色固体状的2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊酸(513mg)。通过手性hplc纯化纯产物，得到(r)-2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊酸(80mg)和(s)-2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊酸(63mg)，两个都是白色固体。esi-ms(ei+,m/z):258.2[m+h]+。

步骤5-a：(r)-2-氨基-3,3-二氟-4-甲基戊酸[i-46]：

在室温下，向(r)-2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊酸(80mg，0.31mmol)于20mlmeoh中的溶液中添加hcoonh4(98mg，1.56mmol)和pd/c(100mg)。将混合物在60℃下搅拌2小时。过滤并浓缩反应混合物，得到粗产物，通过反相硅胶色谱纯化粗产物，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-3,3-二氟-4-甲基戊酸(i-46)(23mg，44％)；1h-nmr(500mhz,d2o):δ4.27(dd,j＝24.0,3.5hz,1h),2.55-2.42(m,1h),1.04(d,j＝7.0hz,3h),0.993(d,j＝6.5hz,3h)。

步骤5-b：(s)-2-氨基-3,3-二氟-4-甲基戊酸[i-47]：

在室温下，向(s)-2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊酸(63mg，0.24mmol)于15mlmeoh中的溶液中添加hcoonh4(77mg，1.22mmol)和pd/c(100mg)。将混合物在60℃下搅拌2小时。过滤并浓缩反应混合物，得到粗产物，通过反相硅胶色谱纯化粗产物，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-3,3-二氟-4-甲基戊酸(i-47)(14mg，34％)；1h-nmr(500mhz,d2o):δ4.27(dd,j＝24.0,3.5hz,1h),2.55-2.42(m,1h),1.04(d,j＝7.0hz,3h),0.993(d,j＝6.5hz,3h)。

实例147：(s)-2-氨基-4-甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-147].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-1-(甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯：

向(s)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸(1.0g，4.32mmol)、甲磺酰胺(452mg，4.75mmol)和hatu(1.8g，4.75mmol)于dmf(30ml)中的溶液中添加tea(1.3g，12.9mmol)，并将溶液在室温下搅拌17小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的(s)-4-甲基-1-(甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.42mmol，8.9％)。ms(ei-,m/z):307.0[m-h]^-。

步骤2：(s)-2-氨基-4-甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-147]：

向(s)-4-甲基-1-(甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.42mmol)于et2o(15ml)中的溶液中添加4mhcl/二噁烷(5ml)，在室温下搅拌3小时。过滤出固体，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-4-甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-147](32mg，0.13mmol，31％)。esi-ms(ei+,m/z):209.1[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,cd3od)δ3.96(t,j＝3.0hz,1h),3.32(s,3h),1.74-1.79(m,3h),1.02-1.05(m,6h)。

实例193：(s)-2-氨基-n,4,4-三甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-193].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4,4-二甲基-1-(n-甲基甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯：

向(s)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4,4-二甲基戊酸(500mg，1.97mmol)于dcm(60ml)中的溶液中添加hatu(900mg，2.36mmol)并在室温下搅拌2小时。然后向混合物中添加cs2co3(1.92g，5.91mmol)、n-甲基甲磺酰胺(322mg，2.95mmol)，并在室温下搅拌过夜。将溶液用水(200ml)稀释并用dcm(100ml)萃取。用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)纯化粗产物，得到呈黄色油状的(s)-4,4-二甲基-1-(n-甲基甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(420mg，1.25mmol，63％)。esi-ms(ei+,m/z):359.1[m+na]⁺。

步骤2：(s)-2-氨基-n,4,4-三甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-193]：

向(s)-4,4-二甲基-1-(n-甲基甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(420mg，1.25mmol)于et2o(20ml)中的溶液中添加4mhcl/二噁烷(10ml)，在室温下搅拌17小时。过滤出固体，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-n,4,4-三甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-193](250mg，0.13mmol，71％)。esi-ms(ei+,m/z):237.1[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,dmso)δ8.55(s,3h),4.59(s,1h),3.50(s,3h),3.26(s,3h),1.81-1.85(m,1h),1.63-1.67(m,1h),0.95(s,9h)。

实例192：2-氨基-4-氟-4-甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-192].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：4-氟-4-甲基-1-(甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯：

向4-氟-4-甲基-1-(甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(270mg，1.08mmol)于dcm(50ml)中的溶液中添加hatu(451mg，1.19mmol)并在室温下搅拌2小时。然后向混合物中添加cs2co3(1.06g，3.24mmol)、甲磺酰胺(206mg，2.17mmol)，并在室温下搅拌过夜。将溶液用水(200ml)稀释并用dcm(100ml)萃取。用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)纯化粗产物，得到呈黄色油状的(s)-4,4-二甲基-1-(n-甲基甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.6mmol，55％)。esi-ms(ei+,m/z):344.1[m+nh4]⁺。

步骤2：2-氨基-4-氟-4-甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-192].

向(s)-4,4-二甲基-1-(n-甲基甲磺酰胺基)-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.6mmol)于et2o(20ml)中的溶液中添加4mhcl/二噁烷(10ml)，在室温下搅拌17小时。过滤出固体，得到呈白色固体状的2-氨基-4-氟-4-甲基-n-(甲磺酰基)戊酰胺盐酸盐[i-192](89.8mg，0.34mmol，57％)。esi-ms(ei+,m/z):227.1[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,dmso)δ8.44(s,3h),4.02(s,1h),3.25(s,3h),2.16-2.25(m,1h),2.03-2.10(m,1h),1.43(s,3h),1.38(s,3h)。

实例190：(s)-2-((s)-2-氨基-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-190].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-((s)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯：

向(s)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4,4-二甲基戊酸(500mg，2.0mmol)于dcm(80ml)中的溶液中添加hatu(900mg，2.3mmol)并在室温下搅拌2小时。然后向混合物中添加cs2co3(1.95g，6.0mmol)、(s)-2-氨基-4-甲基戊酸甲酯盐酸盐(555mg，3.0mmol)，并在室温下搅拌过夜。将溶液用水(200ml)稀释并用dcm(100ml)萃取。用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)纯化粗产物，得到呈白色固体状的(s)-2-((s)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯(500mg，1.34mmol，67％)。esi-ms(ei+,m/z):317.2[m-56]⁺。

步骤2：(s)-2-((s)-2-氨基-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-190].

向(s)-2-((s)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯(500mg，1.34mmol)于et2o(20ml)中的溶液中添加4mhcl/二噁烷(10ml)，在室温下搅拌17小时。过滤出固体，得到呈白色固体状的(s)-2-(s)-2-氨基-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-190](300mg，0.97mmol，73％)。esi-ms(ei+,m/z):273.2[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,dmso)δ9.07-9.09(d,j＝7.5hz,1h),8.42(s,3h),4.29-4.34(m,1h),3.82(m,1h),3.60(s,3h),1.72-1.83(m,2h),1.50-1.62(m,3h),0.86-0.91(m,15h)。

实例122：(s)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-122].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-122]：

向(s)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸(100mg，0.69mmol)于meoh(10ml)中的溶液中添加4mhcl/二噁烷(10ml)，在80℃下搅拌24小时。浓缩混合物并用et2o敲打残余物，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-122](23.6mg，0.12mmol，20％)。esi-ms(ei+,m/z):160.1[m+h]+。1h-nmr(500mhz,cd3od):δ4.02-4.04(m,1h),3.86(s,3h),1.97-2.02(m,1h),1.64-1.68(m,1h),1.03-1.05(d,9h)。

实例123：(r)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-123].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(r)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-123]：

向(r)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸(50mg，0.34mmol)于无水meoh(10ml)中的混合物中添加socl2(0.5ml)，在室温下搅拌17小时。浓缩混合物并用et2o敲打残余物，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐[i-123](34.2mg，0.17mmol，50％)。esi-ms(ei+,m/z):160.1[m+h]+。1h-nmr(500mhz,cd3od):δ4.02-4.04(m,1h),3.86(s,3h),1.97-2.02(m,1h),1.64-1.68(m,1h),1.03(s,9h)。

实例205：2-氨基-n-氰基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酰胺盐酸盐[i-205].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2-(叔丁氧羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸：

将2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(250mg，1.35mmol)、boc2o(353mg，1.62mmol)、naoh(80mg，2.0mmol)的混合物溶解于二噁烷(10ml)和h2o(2ml)中。将混合物在室温下搅拌3小时。将溶液用水(200ml)稀释并用dcm(50ml)萃取。用水(20ml×2)和盐水(10ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并浓缩，得到呈无色油状的粗制2-(叔丁氧羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(385mg)。esi-ms(ei⁺,m/z):307.9[m+na]⁺。

步骤2：2-(叔丁氧羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯：

将2-(叔丁氧羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(385mg，1.35mmol)、1-羟基吡咯烷-2,5-二酮(197mg，1.71mmol)、dcc(353mg，1.71mmol)的混合物溶解于dcm(15ml)中。将混合物在室温下搅拌17小时。过滤并用盐水(20ml)洗涤滤液，干燥(na2so4)，过滤并浓缩，得到呈白色固体状的粗制2-(叔丁氧羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(400mg)。esi-ms(ei⁺,m/z):282.9[m-100]⁺。

步骤3：1-氰基酰胺基-5,5,5-三氟-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯：

将2-(叔丁氧羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(300mg，0.78mmol)、氰胺(66mg，1.57mmol)、naoh(156mg，3.9mmol)的混合物溶解于thf(16ml)中。将混合物在0℃下搅拌0.5小时并在室温下搅拌17小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的1-氰基酰胺基-5,5,5-三氟-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.14mmol)。ms(ei+,m/z):310.3[m+h]⁺。

步骤4：2-氨基-n-氰基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酰胺盐酸盐[i-205]：

向1-氰基酰胺基-5,5,5-三氟-4-甲基-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.14mmol)于et2o(20ml)中的溶液中添加4mhcl/二噁烷(10ml)，在室温下搅拌24小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的2-氨基-n-氰基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酰胺盐酸盐[i-205](12.3mg，0.05mmol，27％)。ms(ei+,m/z):210.1[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,cd3od)δ4.06-4.09(m,1h),2.43-2.65(m,1h),1.67-1.85(m,2h),1.18-1.22(m,3h)。

实例206：2-氨基-3-(1-甲基环丁基)丙酸[i-206].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：n-甲氧基-n,1-二甲基环丁烷甲酰胺：

向1-甲基环丁烷甲酸(11.6g，0.1mol)、n,o-二甲基羟胺胺盐酸盐(19.5g，0.2mol)和hatu(42g，0.11mol)于dmf(300ml)中的溶液中添加tea(30.3g，0.3mol)，并将溶液在室温下搅拌17小时。将溶液用水(600ml)稀释并用etoac(400ml×2)萃取。用1nhcl、饱和nahco3和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈无色油状的n-甲氧基-n,1-二甲基环丁烷甲酰胺(12.2g，0.07mol，75％)。esi-ms(ei⁺,m/z):158.2[m+h]⁺。

步骤2：1-甲基环丁烷甲醛：

在0℃下在n2下，向n-甲氧基-n,1-二甲基环丁烷甲酰胺(2.0g，12.7mmol)于无水thf(20ml)中的溶液中逐滴添加1mlialh4(19ml，19mmol)。将混合物升温到室温并搅拌2小时。将溶液缓慢地用饱和塞格涅特盐(seignettesalt)淬灭并用et2o(100ml)萃取，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并用于下一步骤。

步骤3：(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙烯酸叔丁酯：

在0℃下，向威蒂希试剂(wittingreagent)(2.15g，5.86mmol)于无水thf(80ml)中的溶液中添加t-buona(844mg，8.79mmol)，并搅拌1小时。然后添加1-甲基环丁烷甲醛溶液并在室温下搅拌17小时。用etoac(100ml×2)萃取溶液。用盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/30)纯化粗产物，得到呈无色油状的(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙烯酸叔丁酯(700mg，2.2mmol)。esi-ms(ei⁺,m/z):200.2[m-56*2]⁺。

步骤4：2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸叔丁酯：

将(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙烯酸叔丁酯(700mg，2.2mmol)和pd/c(10％，100mg)于meoh(100ml)中的混合物在30℃下搅拌17小时。过滤混合物，并浓缩滤液到干燥，得到呈无色油状的2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸叔丁酯(600mg，粗制)。esi-ms(ei⁺,m/z):158.2[m-156]⁺。

步骤5：2-氨基-3-(1-甲基环丁基)丙酸[i-206]：

向2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸叔丁酯(600mg，粗制)于et2o(20ml)中的溶液中添加4mhcl/二噁烷(10ml)，在室温下搅拌17小时。浓缩溶液，得到2-氨基-3-(1-甲基环丁基)丙酸。ms(ei⁺,m/z):158.0[m+h]⁺。

¹hnmr(500mhz,d2o)δ3.91(t,j＝7.5hz,1h),2.06-2.02(m,1h),1.88-1.64(m,7h),1.15(s,3h)。

实例93：s-2-氨基-3-(1-甲基环丁基)丙酸[i-93].

反应流程：

程序和表征：

2-氨基-3-(1-甲基环丁基)丙酸的程序与实例8相同

步骤6：2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸：

将2-氨基-3-(1-甲基环丁基)丙酸(300mg，粗制)、cbzosu(714mg，2.8mmol)于丙酮(10ml)和饱和nahco3(3ml)中的混合物在室温下搅拌5小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸(160mg，0.54mmol)。ms(ei+,m/z):292.0[m+h]⁺。

步骤7：(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸：

通过手性hplc纯化2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸(160mg，0.54mmol)，得到呈白色固体状的(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸(50mg，0.17mmol)。ms(ei+,m/z):292.0[m+h]⁺。

步骤8：(s)-2-氨基-3-(1-甲基环丁基)丙酸[i-93]：

将(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基环丁基)丙酸(50mg，0.17mmol)和pd/c(10％，10mg)于meoh(10ml)中的混合物在室温下搅拌1小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化溶液，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-3-(1-甲基环丁基)丙酸[i-93](2mg，0.01mmol)。ms(ei+,m/z):292.0[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,d2o)δ3.76-3.79(t,1h),1.96-2.00(m,1h),1.61-1.86(m,7h),1.11(s,3h)。

实例204：2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-204]

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2-(二苯基亚甲基氨基)-3-(三甲基硅基)丙酸叔丁酯：

将2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸叔丁酯(2.5g，8.47mmol)于thf(20ml)中的溶液冷却到-78℃，然后在n2下逐滴添加lihmds(8.47ml，8.47mmol)。将溶液在-78℃下搅拌1小时。逐滴添加(碘甲基)三甲基硅烷(1.8g，8.47mmol)。将溶液在-78℃到室温下搅拌过夜。将溶液用盐水(25ml*2)洗涤，干燥(na2so4)，浓缩并通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/30)纯化，得到呈黄色固体状的2-(二苯基亚甲基氨基)-3-(三甲基硅基)丙酸叔丁酯(2.3g，6.04mmol，71％)。esi-ms(ei+,m/z):382.3[m+h]⁺。

步骤2：2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-204]：

将2-(二苯基亚甲基氨基)-3-(三甲基硅基)丙酸叔丁酯(500mg，1.31mmol)于4mhcl/二噁烷(6ml)中的溶液在室温下搅拌17小时。添加dcm(80ml)。过滤出固体，得到呈白色固体状的2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-204](113mg，0.57mmol，44％)。esi-ms(ei+,m/z):162.2[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,cd3od)δ13.78(br,1h),8.33(br,1h),3.75(m,1h),1.00-1.14(m,2h),0.06(s,9h)。

实例201：(s)-2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-201].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-201]：

将(s)-2-(二苯基亚甲基氨基)-3-(三甲基硅基)丙酸叔丁酯(300mg，0.79mmol)于4mhcl/二噁烷(3ml)中的溶液在室温下搅拌17小时。添加dcm(40ml)。过滤出固体，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-201](92mg，0.47mmol，62％)。esi-ms(ei+,m/z):162.2[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,cd3od)δ13.76(br,1h),8.38(br,1h),3.76(m,1h),1.02-1.16(m,2h),0.06(s,9h)。

实例200：(r)-2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-200].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(r)-2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-200]：

将(r)-2-(二苯基亚甲基氨基)-3-(三甲基硅基)丙酸叔丁酯(300mg，0.79mmol)于4mhcl/二噁烷(3ml)中的溶液在室温下搅拌17小时。添加dcm(40ml)。过滤出固体，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-3-(三甲基硅基)丙酸盐酸盐[i-200](80mg，0.41mmol，52％)。esi-ms(ei+,m/z):162.2[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,cd3od)δ13.77(br,1h),8.33(br,1h),3.76(m,1h),1.02-1.14(m,2h),0.06(s,9h)。

实例194：(s)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊酸[i-194].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊酸[i-194]：

将(s)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊酸乙酯盐酸盐(65mg，0.31mmol)、lioh.h2o(29mg，0.69mmol)于h2o(2ml)中的混合物在室温下搅拌2.5小时。然后，添加1nhcl调整ph＝3。直接通过反相hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化混合物，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊酸[i-194](40mg，0.27mmol，87％)。ms(ei+,m/z):150.3[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,cd3od)δ8.10(br,2h),3.79(m,1h),2.19-2.26(m,1h),1.97-2.05(m,1h),1.42(d,jz＝3.5hz,3h),1.37(d,jz＝4.0hz,3h)。

实例94：(s)-3,3-二甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺[i-94].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-1-氰基-3,3-二甲基丁基氨基甲酸叔丁酯：

向(s)-1-氨基-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(500mg，2.1mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加三聚氯氰(450mg，2.5mmol)，并在室温下搅拌2小时。然后，将混合物通过盐水(100ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml)萃取，干燥(na2so4)并浓缩，得到呈黄色粘稠物状的粗制(s)-1-氰基-3,3-二甲基丁基氨基甲酸叔丁酯(500mg)。esi-ms(ei+,m/z):249.2[m+na]⁺。

步骤2：(s)-3,3-二甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁基氨基甲酸叔丁酯：

将(s)-1-氰基-3,3-二甲基丁基氨基甲酸叔丁酯(粗制500mg)、znbr2(900mg，4.0mmol)、nan3(260mg，4.0mmol)于dmf(20ml)中的混合物在100℃下搅拌17小时。然后，将混合物用盐水(200ml)稀释，用乙酸乙酯(60ml)萃取，干燥(na2so4)并浓缩，得到呈黄色粘稠物状的粗制(s)-3,3-二甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁基氨基甲酸叔丁酯(400mg)。esi-ms(ei+,m/z):214.3[m+h-56]⁺。

步骤3：((s)-3,3-二甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺[i-94]：

将(s)-3,3-二甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁基氨基甲酸叔丁酯(粗制300mg)于4mhcl/二噁烷(3.5ml)中的溶液在室温下搅拌17小时。然后，将溶液浓缩并直接通过反相hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化，得到呈白色固体状的(s)-3,3-二甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺2,2,2-三氟乙酸盐[i-94](30mg，0.11mmol，9％，3个步骤)。ms(ei+,m/z):170.2[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,cd3od)δ8.18(br,3h),4.48(m,1h),2.14(m,1h),1.73(dd,jz＝3.5,16.5hz1h),0.72(s,9h)。

实例175：合成2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊酸[i-175]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-4-甲基-2-(苯基甲磺酰胺基)戊酸苯甲酯：

在冰浴下，向3-(苯甲氧基)丙-1-醇(10.0g，60.24mmol)于dmso(100ml)中的溶液中添加ibx(20.2g，72.29mmol)。将混合物升温到室温，并在此温度下搅拌17小时。将反应混合物倒入水(300ml)中并用ea(200ml×2)萃取，用水(200ml×3)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，并浓缩溶液，并通过sgc纯化粗产物，获得淡黄色液体(8.0g，81％)。

1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.77(s,1h),7.36-7.26(m,5h),4.53(s,2h),3.8-3.83(m,2h),2.71-2.68(m,2h)。

步骤2：(4-(苯甲氧基)-1,1,1-三氟丁-2-基氧基)三甲基硅烷：

在室温下，向3-(苯甲氧基)丙醛(4.0g，24.4mmol)于thf(50ml)中的溶液中添加三甲基(三氟甲基)硅烷(10.4g，73.2mmol)，然后添加csf(0.37g，2.44mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。然后用水(100ml)淬灭并用ea(100ml×2)萃取，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并浓缩。通过iscobiotage纯化粗产物，获得呈无色液体状的(4-(苯甲氧基)-1,1,1-三氟丁-2-基氧基)三甲基硅烷(4.5g，60％)。

1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.38-7.29(m,5h),4.51(t,j＝12hz,2h),4.23-4.19(m,1h),3.59-3.57(m,2h),2.04-2.01(m,1h),1.78-1.73(m,1h),0.13(s,9h)。

步骤3：4-(苯甲氧基)-1,1,1-三氟丁-2-醇：

将4-(苯甲氧基)-1,1,1-三氟丁-2-醇(4.5g，14.7mmol)于hcl溶液(3m，于meoh中，50ml)中的溶液在室温下搅拌2小时。然后浓缩并通过iscobiotage纯化，获得呈无色液体状的4-(苯甲氧基)-1,1,1-三氟丁-2-醇(2.75g，80％)。

步骤4：((4,4,4-三氟-3-甲氧基丁氧基)甲基)苯：

在0℃下，向4-(苯甲氧基)-1,1,1-三氟丁-2-醇(2.75g，11.75mmol)于thf(100ml)中的溶液中添加t-buok(1.58g，14.1mmol)，并在此温度下搅拌30分钟。然后添加mei(2.17g，15.28mmol)并在室温下再搅拌1小时。反应物用水(100ml)淬灭并用ea(100ml×2)萃取，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并浓缩。通过iscobiotage纯化粗产物，获得呈无色液体状的((4,4,4-三氟-3-甲氧基丁氧基)甲基)苯(2.04g，70％)。

1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.38-7.29(m,5h),4.53(t,j＝12hz,2h),3.78-3.74(m,1h),3.66-3.57(m,2h),3.5(s,3h),2.03-1.96(m,1h),1.78-1.57(m,1h)。

步骤5：4,4,4-三氟-3-甲氧基丁-1-醇：

将((4,4,4-三氟-3-甲氧基丁氧基)甲基)苯(2.04g，8.23mmol)和pd/c(0.5g)于meoh(30ml)中的溶液在室温下搅拌2小时，然后过滤并浓缩，获得呈无色液体状的4,4,4-三氟-3-甲氧基丁-1-醇。此粗产物直接用于下一步骤。

步骤6：4,4,4-三氟-3-甲氧基丁醛：

在冰浴下，向4,4,4-三氟-3-甲氧基丁-1-醇(1.3g，来自最后一步的粗产物)于dmso(20ml)中的溶液中添加ibx(2.76g，9.88mmol)。将混合物升温到室温，并在此温度下搅拌17小时。将反应混合物倒入水(80ml)中并用et2o(80ml×2)萃取，用水(80ml×3)和盐水(80ml)洗涤有机相，并将溶液直接用于下一步骤。

步骤7：2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊腈：

在冰浴下，向以上4,4,4-三氟-3-甲氧基丁醛于et2o(160ml)中的溶液中添加苯甲胺(2ml)、acoh(2.0ml)，然后添加tmscn(3ml)。将混合物升温到室温，并在此温度下搅拌17小时。将溶液用水(200ml)稀释并用ea(100ml)萃取，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色稠油状的2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊腈(2.0g，粗制)，将其用于下一步骤。esi-ms(ei⁺,m/z):

步骤8：2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊酸：

将2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊腈(2.0g，粗制)于浓hcl(30ml)和acoh(10ml)中的溶液加热到100℃，持续17小时。将溶液浓缩到干燥，用h2o(100ml)和acn(50ml)稀释，用饱和nahco3溶液将ph调节到3-4，过滤混合物并干燥，得到呈棕色固体状的2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊酸(0.8g，35％，4个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):[m+h]⁺。

步骤9：2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊酸[i-175]：

将2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊酸(300mg，1.03mmol)和hcoonh4(650mg，10.3mmol)于meoh(10ml)中的溶液在60℃下搅拌2小时，然后过滤并浓缩。通过反相biotage纯化粗产物，获得呈白色固体状的2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲氧基戊酸[i-175]。

1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ4.23-4.19(m,1h),3.96-3.88(m,1h),3.64-3.6(m,3h),2.29-2.22(m,1h),2.04-1.97(m,1h)。

实例176：2-氨基-4,4,5-三甲基己酸[i-176]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2-(2,3-二甲基丁-2-基)丙二酸二乙酯：

将2-(丙-2-亚基)丙二酸二乙酯(2g，10.0mmol)于thf(60ml)中的溶液冷却到0℃，然后添加碘化铜(i)(2.9g，15.0mmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后在0℃下，将异丙基溴化镁(1mol/l，30.0ml，30.0mmol)逐滴添加到以上混合物中。将混合物在0℃下搅拌2小时。将混合物用hcl(1mol/l)淬灭，用etoac(60ml*2)萃取。分离有机相，用水(100ml×2)和盐水(130ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈黄色固体状的2-(2,3-二甲基丁-2-基)丙二酸二乙酯(2.4g，10.0mmol，98％)。esi-ms(ei⁺,m/z):245.3[m+h]⁺。

步骤2：2-(2,3-二甲基丁-2-基)丙二酸：

将2-(2,3-二甲基丁-2-基)丙二酸二乙酯乙酰胺(2.4g，10.0mmol)和水合氢氧化锂(2.1g，50.0mmol)于dmso(50ml)和水(10ml)中的混合物加热到98℃并保持20小时。将混合物冷却，用hcl(1mol/l)酸化，并分配于etoac(30ml)与水(30ml)之间。分离有机相，用水(50ml×2)和盐水(50ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈黄色油状的2-(2,3-二甲基丁-2-基)丙二酸(1.8g，10.0mmol，95％)。esi-ms(ei⁺,m/z):212.2[m+h]⁺。

步骤3：3,3,4-三甲基戊酸：

将2-(2,3-二甲基丁-2-基)丙二酸(1.8g，10.0mmol)于dmso(30ml)中的溶液加热到120℃并保持12小时。将混合物冷却并分配于etoac(50ml)与水(60ml)之间。分离有机相，用水(60ml×2)和盐水(60ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈黄色油状的3,3,4-三甲基戊酸(1.4g，10.0mmol，95％)。esi-ms(ei-,m/z):143.2[m-h]⁺。

步骤4：n-甲氧基-n,3,3,4-四甲基戊酰胺：

在20℃下，向3,3,4-三甲基戊酸(1.4g，10.0mmol)于30mldmf中的溶液中相继添加n,o-二甲基羟胺盐酸盐(1.2g，12.0mmol)、diea(3.8g，30.0mmol)。然后添加hatu(5.8g，15.0mmol)。将混合物在搅拌下加热到25℃并保持18小时。相继用水、甲基叔丁基醚(50ml*2)淬灭反应混合物。相分离，用盐水(80ml*3)洗涤有机层，用na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色油状的n-甲氧基-n,3,3,4-四甲基戊酰胺(1.5g，90％)。esi-ms(ei⁺,m/z):188.2[m+h]⁺。

步骤4：3,3,4-三甲基戊醛：

在0℃下，向n-甲氧基-n,3,3,4-四甲基戊酰胺(1.9g，0.01mol)于30mlthf中的溶液中添加lialh4(1g，0.03mol)。将混合物在0℃下搅拌1小时。相继用水、甲基叔丁基醚(50ml*2)淬灭反应混合物。相分离，用盐水(80ml*3)洗涤有机层，用na2so4干燥并过滤。滤液含有呈无色溶液状的3,3,4-三甲基戊醛(1.3g，95％)，将其直接用于下一步骤。

步骤5：2-(苯甲基氨基)-4,4,5-三甲基己腈：

在冰浴下，向以上3,3,4-三甲基戊醛于甲基叔丁基醚(120ml)中的溶液中相继添加苯甲胺(1.6ml)、acoh(1.0ml)和tmscn(1.8ml)。将混合物温热到25℃并搅拌过夜。将溶液用水(60ml)稀释并用etoac(30ml)萃取，用水(50ml×2)和盐水(50ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色油状的2-(苯甲基氨基)-4,4,5-三甲基己腈(2g，粗制)，将其用于下一步骤。esi-ms(ei+,m/z):245.4[m+h]⁺。

步骤6：2-(苯甲基氨基)-4,4,5-三甲基己酸：

将2-(苯甲基氨基)-4,4,5-三甲基己腈(2g，粗制)于浓hcl(60ml)和acoh(10ml)中的溶液加热到95℃，持续18小时。将溶液冷却到15℃，用饱和nahco3溶液将ph调节到3-4，过滤混合物并干燥，得到呈白色固体状的2-(苯甲基氨基)-4,4,5-三甲基己酸(0.6g，2.3mmol，30％，3个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):264.4[m+h]⁺。

2-氨基-4,4,5-三甲基己酸[i-176]：

在室温下，向2-(苯甲基氨基)-4,4,5-三甲基己酸(78mg，0.3mmol)于8mlmeoh中的溶液中添加hcoonh4(0.13g，2.0mmol)和pd/c(30mg)。将混合物在60℃下搅拌2小时。过滤并浓缩反应混合物，得到粗产物，通过反相硅胶色谱纯化粗产物，得到呈白色固体状的2-氨基-6,6,6-三氟-4-甲基己酸[i-176](40mg，90％)；esi-ms(ei⁺,m/z):174.3[m+h]⁺；1hnmr(500mhz,meod)δ3.56(dd,j＝7.2,4.9hz,1h),2.12(dd,j＝14.7,4.9hz,1h),1.66-1.51(m,2h),0.97(d,j＝14.9hz,6h),0.92(dd,j＝6.8,3.6hz,6h)。

实例178：2-氨基-4,4-二甲基庚酸[i-178]

反应流程：

程序和表征：

程序与实例176中所用的相同

2-氨基-4,4-二甲基庚酸[i-178]：¹hnmr(500mhz,meod-d4)δ3.77(t,j＝6hz,1h),2.09-2.05(m,1h),1.6-1.56(m,1h),1.37-1.26(m,4h),1.01-0.92(m,9h)。

实例195：2-氨基-4,4-二甲基己酸[i-195]、(s)-2-氨基-4,4-二甲基己酸[i-120]、(r)-2-氨基-4,4-二甲基己酸[i-191].

反应流程：

程序和表征：

程序与实例176中所用的相同

2-氨基-4,4-二甲基庚酸[i-195]：¹hnmr(500mhz,d2o)δ3.87(t,j＝6.0hz,1h),1.93(dd,j＝15.0hz,j＝5.5hz,1h),1.57(dd,j＝15.0hz,j＝6.5hz,1h),1.22-1.26(m,2h),0.86(d,(dd,j＝2.0hz,6h),0.76(t,j＝7.5hz,3h)。

(s)-2-氨基-4,4-二甲基己酸[i-120]：¹hnmr(500mhz,meod-d4)δ3.43(dd,j＝7.0hz,j＝5.0hz,1h),1.95(dd,j＝15.0hz,j＝5.0hz,1h),1.42(dd,j＝15.0hz,j＝7.0hz,1h),1.23-1.28(m,2h),0.87(d,(dd,j＝4.5hz,6h),0.80(t,j＝7.5hz,3h)。

(r)-2-氨基-4,4-二甲基己酸[i-191]：¹hnmr(500mhz,meod-d4)δ3.43(dd,j＝7.0hz,j＝5.0hz,1h),1.95(dd,j＝15.0hz,j＝5.0hz,1h),1.42(dd,j＝15.0hz,j＝7.0hz,1h),1.23-1.28(m,2h),0.87(d,(dd,j＝4.5hz,6h),0.80(t,j＝7.5hz,3h)。

实例177：2-氨基-6,6,6-三氟-4-甲基己酸[i-177]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：n-甲氧基-n-甲基-2-(三苯基-l5-亚膦基)乙酰胺：

将(2-氯-n-甲氧基-n-甲基乙酰胺(13.7g，0.1mol)和三苯膦(26.2g，0.1mol)于乙腈(200ml)中的混合物加热到80℃并保持20小时。在低于40℃下冷却并浓缩混合物以去除溶剂。将残余物相继溶解于二氯甲烷(200ml)、2nkoh(100ml)中。将所得混合物在20℃下搅拌1小时。相分离，用盐水(200ml*3)洗涤有机层，用na2so4干燥并过滤。在真空中浓缩滤液，得到呈黄色固体状的n-甲氧基-n-甲基-2-(三苯基-l5-亚膦基)乙酰胺(36g，0.1mol，98％)。esi-ms(ei⁺,m/z):364.4[m+h]⁺。

步骤2：(e)-5,5,5-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基戊-2-烯酰胺：

将n-甲氧基-n-甲基-2-(三苯基-l5-亚膦基)乙酰胺(36.3g，0.1mol)和4,4,4-三氟丁-2-酮(25.2g，0.2mol)于四氢呋喃(500ml)中的混合物加热到70℃并保持7天。在低于40℃下在真空中冷却并浓缩混合物以去除溶剂。通过硅胶柱(200g，200～300目，uv254nm)纯化残余物，用0到35％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈黄色油状的(e)-5,5,5-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基戊-2-烯酰胺(6g，0.03mol，28％)。esi-ms(ei⁺,m/z):212.2[m+h]⁺。

步骤3：5,5,5-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基戊酰胺：

将(e)-5,5,5-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基戊-2-烯酰胺(6g，0.03mol)和pd/c(10％，400mg)于thf(100ml)中的混合物在30℃下搅拌18小时。过滤混合物，并在真空中浓缩滤液到干燥，得到呈黄色油状的5,5,5-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基戊酰胺(6g，0.03mol，98％)。esi-ms(ei+,m/z):214.2[m+h]⁺。

步骤4：5,5,5-三氟-3-甲基戊醛：

在0℃下，向5,5,5-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基戊酰胺(6g，0.03mol)于100mlthf中的溶液中添加lialh4(1g，0.03mol)。将混合物在0℃下搅拌1小时。相继用水、甲基叔丁基醚(60ml*2)淬灭反应混合物。相分离，用盐水(80ml*3)洗涤有机层，用na2so4干燥并过滤。保留滤液，得到呈无色溶液状的5,5,5-三氟-3-甲基戊醛(4.5g，95％)，将其直接用于下一步骤中。

步骤5：2-(苯甲基氨基)-6,6,6-三氟-4-甲基己腈：

在冰浴下，向以上5,5,5-三氟-3-甲基戊醛于甲基叔丁基醚(200ml)中的溶液中相继添加苯甲胺(5ml)、acoh(4.0ml)和tmscn(5ml)。将混合物温热到20℃并搅拌过夜。将溶液用水(100ml)稀释并用etoac(100ml)萃取，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色油状的2-(苯甲基氨基)-6,6,6-三氟-4-甲基己腈(6g，粗制)，将其用于下一步骤。esi-ms(ei+,m/z):271.3[m+h]⁺。

步骤6：2-(苯甲基氨基)-6,6,6-三氟-4-甲基己酸：

将2-(苯甲基氨基)-6,6,6-三氟-4-甲基己腈(3g，粗制)于浓hcl(100ml)和acoh(20ml)中的溶液加热到100℃，持续17小时。将溶液冷却到15℃，用饱和nahco3溶液将ph调节到3-4，过滤混合物并干燥，得到呈白色固体状的2-(苯甲基氨基)-6,6,6-三氟-4-甲基己酸(1g，13.4mmol，33％，3个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):290.3[m+h]⁺。

2-氨基-6,6,6-三氟-4-甲基己酸[i-177]：

在室温下，向2-(苯甲基氨基)-6,6,6-三氟-4-甲基己酸(88mg，0.31mmol)于8mlmeoh中的溶液中添加hcoonh4(0.13g，2.0mmol)和pd/c(30mg)。将混合物在60℃下搅拌2小时。过滤并浓缩反应混合物，得到粗产物，通过反相硅胶色谱纯化粗产物，得到呈白色固体状的2-氨基-6,6,6-三氟-4-甲基己酸[i-177](45mg，84％)；esi-ms(ei⁺,m/z):200.2[m+h]⁺；1hnmr(500mhz,dmso)δ3.15(d,j＝5.7hz,1h),2.39-2.24(m,1h),2.19-1.96(m,2h),1.82-1.66(m,1h),1.63-1.35(m,1h),0.98(dd,j＝16.5,6.2hz,3h)。

实例179：(s)-2-氨基-5-氟-4-(氟甲基)戊酸[i-179]

反应流程：

程序和表征：

步骤1：5-(苯甲氧基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二噁烷：

在0℃下，向(2,2-二甲基-1,3-二噁烷-5-基)甲醇(0.29g，2.0mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加nah(60％，在油中，0.12g，3.0mmol)。将混合物在0℃下搅拌0.2小时。然后添加(溴甲基)苯(0.45g，2.6mmol)。将混合物升温到10℃持续3小时并保持18小时。相继用冰水、etoac(60ml)淬灭反应混合物。相分离，用盐水(60ml*3)洗涤有机层，用na2so4干燥并过滤。浓缩滤液并通过硅胶柱(20g，uv254nm，用10％到50％的etoac/pe洗脱)纯化残余物，得到呈无色油状的5-(苯甲氧基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二噁烷(1)(0.46g，0.2mol，95％)。esi-ms(ei⁺,m/z):237.3[m+h]⁺。

步骤2：2-(苯甲氧基甲基)丙烷-1,3-二醇：

向5-(苯甲氧基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二噁烷(930mg，3.94mmol)于meoh(20ml)中的溶液中添加3nhcl水溶液(2ml)。将混合物在50℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物并用dcm(20ml)稀释，用盐水(15ml)洗涤，干燥并蒸发，得到粗制无色油状物(780mg，100％)。esi-ms(ei⁺,m/z):197[m+h]⁺。

步骤3：((3-氟-2-(氟甲基)丙氧基)甲基)苯：

在-78℃下，向2-(苯甲氧基甲基)丙烷-1,3-二醇(780mg，3.94mmol)于dcm(20ml)中的预先冷却的溶液中逐滴添加dast(1.9g，11.8mmol)。将混合物在20℃下搅拌24小时。在-78℃下，用饱和nahco3水溶液(10ml)淬灭反应混合物。分离dcm相并用盐水洗涤，用mgso4干燥，用短硅胶垫过滤，然后浓缩，得到粗制无色油状物(800mg，100％)。esi-ms(ei⁺,m/z):223[m+na]⁺。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.37-7.28(m,5h),4.65-4.57(m,2h),4.55-4.48(m,4h),3.57(d,j＝6.2hz,2h),2.50-2.34(m,1h)。

步骤4：3-氟-2-(氟甲基)丙-1-醇：

在-78℃下，向((3-氟-2-(氟甲基)丙氧基)甲基)苯(800mg，3.94mmol)于dcm(20ml)中的预先冷却的溶液中逐滴添加bcl3/甲苯(1m，6ml，6.0mmol)。将混合物在-78～0℃下搅拌2小时。在-78℃下，用h2o(0.5ml)淬灭反应混合物。用mgso4干燥dcm相，过滤并将溶液(约20ml)直接用于下一步骤。

步骤5：三氟甲磺酸3-氟-2-(氟甲基)丙酯：

在-40℃下，向3-氟-2-(氟甲基)丙-1-醇(8ml溶液，来自步骤4，1.6mmol)的预先冷却的溶液中相继逐滴添加py(380mg，4.8mmol)、tf2o(1.36g，4.8mmol)。将混合物在-30℃下搅拌1小时。在-40℃下，用盐水(20ml)淬灭反应混合物。分离dcm相并用mgso4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗制褐色油状物(200mg，51％)，将其直接用于下一步骤。

步骤6：2-(二苯基亚甲基氨基)-5-氟-4-(氟甲基)戊酸叔丁酯：

在-78℃下，在25分钟内，向2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸叔丁酯(944mg，3.2mmol)于thf(20ml)中的预先冷却的溶液中添加lda(2.5m，在thf/甲苯/己烷中，1.28ml，3.2mmol)。将混合物在此温度下搅拌10分钟。在-78℃下逐滴添加三氟甲磺酸3-氟-2-(氟甲基)丙酯(200mg，0.82mmol)于thf(2ml)中的溶液。将反应混合物放置在冷却浴的正上方并再搅拌1小时。用饱和nh4cl水溶液(20ml)淬灭反应混合物，用mtbe(30ml*2)萃取，用h2o、盐水(每次50ml)洗涤，干燥并浓缩，得到粗产物，通过色谱(硅胶，pe到5％ea/pe)纯化粗产物两次，得到呈白色固体状的所要产物(22mg，6.9％)。esi-ms(ei⁺,m/z):388[m+h]⁺。¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.56-7.45(m,6h),7.41(t,j＝7.4hz,2h),7.18(d,j＝6.3hz,2h),4.50-4.17(m,4h),3.91(dd,j＝7.7,5.5hz,1h),2.11-1.97(m,1h),1.87(dd,j＝12.7,5.5hz,2h),1.38(s,9h)。

步骤7：(s)-2-氨基-5-氟-4-(氟甲基)戊酸盐酸盐：

将2-(二苯基亚甲基氨基)-5-氟-4-(氟甲基)戊酸叔丁酯(55mg，0.14mmol)于3nhcl/meoh(2ml)中的溶液在室温下搅拌20小时。浓缩反应混合物并用et2o洗涤，得到粗制固体，将其溶解于dcm/tfa(1:1,2ml)中并在室温下搅拌20小时。蒸发反应混合物并用et2o洗涤，得到粗制固体，将其溶解于6nhcl(1ml)中并在80℃下搅拌2小时。蒸发并冻干反应混合物，得到粗产物，通过rp-biotage，使用3mmhcl/h2o纯化，得到呈白色固体状的所要产物(8.3mg，29％)。esi-ms(ei⁺,m/z):168[m+h]⁺。¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.85(bs,3h),4.48(dd,j＝48.3,14.2hz,4h),3.46-3.36(m,1h),2.47-2.26(m,1h),1.78(dt,j＝14.3,7.3hz,1h),1.63-1.53(m,1h)。

实例187：(s)-3-氨基-5,5-二甲基-二氢呋喃-2(3h)-酮[i-187]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-3-氨基-5,5-二甲基-二氢呋喃-2(3h)-酮[i-187]：

向含有(s)-2-氨基-4-甲基戊-4-烯酸(100mg)的圆底烧瓶中添加浓hcl(1ml)和socl2(0.2ml)。将混合物在室温下搅拌4小时。浓缩反应混合物并用et2o洗涤，得到粗制固体，通过rp-biotage，使用0.025％tfa/h2o/mecn纯化，得到呈白色固体状的所要产物(20.2mg，11.4％)。esi-ms(ei⁺,m/z):130.1[m+h]⁺。¹hnmr(500mhz,dmso)δ8.80(bs,3h),4.58(dd,j＝11.2,9.3hz,1h),2.53-2.48(m,1h),2.13(t,j＝11.7hz,1h),1.45(s,3h),1.40(s,3h)。

实例90：合成(s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸[i-90]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2-(1,1,1-三氟丙-2-亚基)丙二酸二乙酯：

在冰浴下，在20分钟内，向thf(1l)中逐滴添加ticl4(65.8ml，600mmol)，添加ccl4(30ml)。向混合物中添加丙二酸二乙酯(48.0g，300mmol)和1,1-二氟丙-2-酮(56.4g，600mmol)。将混合物升温到室温，并且搅拌过夜。在20分钟内在冰浴下逐滴添加吡啶(200ml)。将反应混合物倒入水(2l)中，过滤，并用etoac(500ml×2)萃取滤液，用水(600ml)、1mhcl(600ml×2)、水(600ml)、饱和nahco3(600ml)和盐水(600ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩并通过色谱(硅胶，0％到5％的乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到呈无色液体状的2-(1,1-二氟丙-2-亚基)丙二酸二乙酯(60.9g，258mmol，86％)。esi-ms(ei⁺,m/z):237.0[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,cdcl3):δ6.97(t,j＝55.5hz,1h),4.25-4.33(m,4h),2.03(s,3h),1.29-1.34(m,6h)。

步骤2：2-(1,1-二氟-2-甲基丙-2-基)丙二酸二乙酯：

在-20℃下在1小时内，向2-(1,1-二氟丙-2-亚基)丙二酸二乙酯(10.0g，42.3mmol)和cui(12.1g，63.5mmol)于dcm(100ml)和thf(25ml)中的混合物中逐滴添加memgi(42.3ml，130.5mmol)。将溶液倒入冰水(200ml)中并用饱和nh4cl溶液(100ml)处理，将混合物搅拌30分钟并过滤，用dcm(100ml)萃取滤液，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色液体状的2-(1,1-二氟-2-甲基丙-2-基)丙二酸二乙酯(10.1g，40.2mmol，95％)，将其用于下一步骤。esi-ms(ei⁺,m/z):253.1[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,cdcl3):δ6.05(t,j＝57.5hz,1h),4.17-4.23(m,4h),3.49(s,1h),1.22-1.28(m,6h),1.20(s,6h)。

步骤3：4,4-二氟-3,3-二甲基丁酸：

将2-(1,1-二氟-2-甲基丙-2-基)丙二酸二乙酯(6.1g，24.2mmol)和lioh.h2o(5.1g,121mmol)于dmso(50ml)和h2o(0.5ml)中的混合物加热到90℃，持续17小时。用水(200ml)稀释混合物，用dcm(100ml)萃取，用6mhcl溶液将水相的ph调节到3-4，用dcm(100ml×2)萃取，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色液体状的4,4-二氟-3,3-二甲基丁酸(3.6g，粗制)。esi-ms(ei⁺,m/z):151.1[m-h]^-。

步骤4：4,4-二氟-n-甲氧基-n,3,3-三甲基丁酰胺：

向4,4-二氟-3,3-二甲基丁酸(3.6g，粗制)、n,o-二甲基羟胺盐酸盐(4.6g，47.4mmol)和hatu(10.8g，28.4mmol)于dmf(50ml)中的溶液中添加et3n(7.18g，71.1mmol)，之后室温下搅拌17小时。过滤混合物，并用水(200ml)稀释滤液，用et2o(100ml×2)萃取，用水(100ml)、1mhcl(100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色液体状的4,4-二氟-n-甲氧基-n,3,3-三甲基丁酰胺(3.1g，15.9mmol，66％，2个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):196.0[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,cdcl3):δ5.95(t,j＝57.5hz,1h),3.69(s,3h),3.17(s,3h),2.51(s,2h),1.12(s,6h)。

步骤5：4,4-二氟-3,3-二甲基丁醛：

在冰浴下，向4,4-二氟-n-甲氧基-n,3,3-三甲基丁酰胺(3.1g，15.9mmol)于thf(80ml)中的溶液中逐滴添加lialh4(24ml，24mmol)。1小时后，用柠檬酸溶液(100ml)淬灭混合物，用et2o(100ml×2)萃取溶液，用盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，并将溶液用于下一步骤。

步骤6：2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊腈：

在冰浴下，向以上4,4-二氟-3,3-二甲基丁醛于et2o(200ml)中的溶液中相继添加苯甲胺(3ml)、acoh(3ml)和tmscn(3ml)，将溶液在0～室温下搅拌17小时，然后用etoac(100ml)稀释。用h2o(100ml×2)洗涤溶液，然后浓缩，得到呈棕色液体状的2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊腈(3.2g，粗制)。esi-ms(ei⁺,m/z):253.0[m+h]⁺。

步骤7：2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸：

将2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊腈(1.8g，粗制)于浓hcl(50ml)和acoh(10ml)中的溶液加热到100℃，持续64小时。浓缩混合物以去除溶剂，用1mnaoh溶液将ph调节到12，用pe(100ml)萃取，用6mhcl将水相调节到ph5-6。形成白色固体，过滤，并用水(50ml)洗涤滤饼，在真空中干燥，得到呈白色固体状的2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(1.3g，4.80mmol，54％，3个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):272.0

步骤8：2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸：

将2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(1.3g，4.80mmol)、hcoonh4(1.51g，24mmol)和pd/c(10％，200mg)于meoh(50ml)中的混合物加热到60℃，持续1小时。过滤混合物，并浓缩滤液，得到呈白色固体状的2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(1.0g，粗制)。esi-ms(ei⁺,m/z):182.0

步骤9：2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸

在冰浴下，向2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(1.0g，粗制)和nahco3(1.27g，14.4mmol)于丙酮(30ml)和h2o(30ml)中的溶液中添加cbzosu(2.39g，9.6mmol)。在搅拌17小时之后，用1mhcl溶液将混合物调节到ph3-4，并用etoac(50ml×2)萃取溶液，用盐水(50ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，相继通过反相硅胶色谱和手性制备型hplc[柱：cc44.6*250mm5μm；溶剂：meoh(0.2％甲醇氨)]纯化粗产物，得到(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(400mg，1.27mmol，26％，2个步骤)和(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(380mg，1.21mmol，25％，2个步骤)，两个都呈无色油状。esi-ms(ei⁺,m/z):316.0

步骤10：(s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸：

将(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(400mg，1.27mmol)和pd/c(10％，50mg)于meoh(30ml)中的溶液在室温下在氢气下搅拌2小时，过滤混合物并在真空中浓缩并通过反相硅胶色谱纯化，得到(s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(115.7mg，0.64mmol，50％)。esi-ms(ei⁺,m/z):182.0¹h-nmr(500mhz,meod-d4):δ5.60(t,j＝56.5hz,1h),3.97(t,j＝6.0hz,1h),2.07(dd,j＝15.5hz,j＝5.5hz,1h),1.77(dd,j＝15.5hz,j＝6.5hz,1h),0.96(d,j＝9.5hz,6h)。

实例88：合成(s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸[i-88]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：(s)-2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺：

在冰浴下在5分钟内，向2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊腈(1.2g，4.76mmol)于dcm(20ml)中的溶液中逐滴添加浓h2so4(10ml)，将混合物升温到室温并搅拌6小时。将混合物倒入冰水(100ml)中，用10％naoh溶液将溶液调节到ph8～9，然后用etoac(100ml×2)萃取，用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩并相继通过色谱(0％到5％的meoh/dcm)和手性制备型hplc[柱：cc44.6*250mm5μm；溶剂：meoh(0.2％甲醇氨)]纯化，得到(s)-2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺(400mg，1.48mmol，31％)和(r)-2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺(380mg，1.41mmol，30％)，两个都呈无色液体状。esi-ms(ei⁺,m/z):253.0[m+h]⁺。

步骤2：(s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺：

将(s)-2-(苯甲基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺(200mg，0.74mmol)、hcoonh4(233mg，3.7mmol)和pd/c(10％，40mg)于meoh(15ml)中的混合物加热到60℃，持续1小时。过滤混合物，并浓缩滤液并通过反相硅胶色谱纯化，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺三氟乙酸(128mg，0.44mmol，59％)。esi-ms(ei⁺,m/z):181.0[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,meod-d4):δ5.66(t,j＝56.5hz,1h),3.95(dd,j＝8.0hz,j＝5.0hz,1h),2.14(dd,j＝10.0hz,j＝8.0hz,1h),1.83(dd,j＝14.5hz,j＝5.5hz,1h),1.12(d,j＝15.0hz,6h)。

实例185：合成(s)-2-((s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯[i-185]：

反应流程：

程序和表征：

2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸的程序与实例90相同

步骤1：(s)-2-((s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯：

将(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(150mg，0.476mmol)、hatu(199mg，0.524mmol)、(s)-2-氨基-4-甲基戊酸甲酯盐酸盐(104mg，0.571mmol)和dipea(123mg，0.952mmol)的溶液在室温下搅拌1小时，然后用冰水(20ml)淬灭，用ea(2×30ml)萃取，干燥，过滤并浓缩。通过反相硅胶色谱biotage纯化粗产物，获得呈白色固体状的(s)-2-((s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯(95mg，45％)。esi-ms(ei⁺，m/z):443.0

步骤2：(s)-2-((s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯：

将(s)-2-((s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯(95mg，0.215mmol)和pd/c(30mg)于thf(5ml)中的溶液在室温下搅拌2小时，然后过滤、浓缩。通过反相硅胶色谱biotage纯化粗产物，获得呈白色固体状的(s)-2-((s)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯(45mg，69％)。esi-ms(ei⁺,m/z):309.0

¹h-nmr(500mhz,dmso-d6):9.11(d,j＝7hz,1h),8.41(s,3h),5.81(t,j＝56.5hz,1h),4.34-4.31(m,1h),3.89-3.81(m,1h),3.62(s,3h),1.98-1.93(m,1h),1.76-1.73(m,1h),1.65-1.54(m,3h),0.93-0.81(m,12h)。

实例184：合成(s)-2-((r)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯[i-184]：

程序与实例90、185相同。

(s)-2-((r)-2-氨基-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯：esi-ms(ei⁺,m/z):309.0

¹h-nmr(500mhz,dmso-d6):9.18(d,j＝7hz,1h),8.38(s,3h),5.79(t,j＝56.5hz,1h),4.37-4.32(m,1h),3.85-3.78(m,1h),3.58(s,3h),1.97-1.92(m,1h),1.77-1.72(m,1h),1.61-1.51(m,3h),0.94-0.82(m,12h)。

实例145：合成(2s,4r)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸、(2r,4s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸、(2r,4r)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸和(2s,4s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸：[3d；i-145]；[3c；i-146]；[3a；i-167]；[3b；i-250]

反应流程：

程序和表征：

步骤1：合成(2s,4r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸、(2r,4s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸、(2r,4r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸和(2s,4s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸：

向2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(600mg，3.2mmol)于丙酮(10ml)和nahco3饱和水溶液(10ml)中的溶液中添加cbzosu(970mg，3.9mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时。然后添加etoac(20ml)和h2o(20ml)，分离水溶液并且进一步用etoac(2*20ml)萃取，合并萃取物并用盐水(20ml)洗涤，用无水na2so4干燥，过滤并浓缩，通过制备型hplc纯化残余物，得到呈白色固体状的2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(750mg)。通过手性hplc纯化纯产物，得到四种异构体：(2s,4r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(150mg，15％)、(2r,4s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(40mg，3.9％)、(2r,4r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(50mg，4.9％)和(2s,4s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(80mg，7.8％)，全是白色固体。esi-ms(ei+,m/z):342.0[m+na]+。

步骤2-a：合成(2s,4r)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸：

将(2s,4r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(150mg，0.47mmol)和pd/c(75mg)于meoh(15ml)中的溶液在室温下搅拌3小时。过滤并浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的(2s,4r)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(51.7mg，59％)。esi-ms(ei⁺,m/z):186.2[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,meod):δ3.64-3.60(m,1h),2.77-2.71(br,1h),2.24-2.18(m,1h),1.76-1.69(m,1h),1.25(d,j＝7.0hz,3h)。

步骤2-b：合成(2r,4s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸：

将(2r,4s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(40mg，0.12mmol)和pd/c(20mg)于meoh(4ml)中的溶液在室温下搅拌3小时。过滤并浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的(2r,4s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(13.3mg，60％)。esi-ms(ei⁺,m/z):186.2[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,meod):δ3.51-3.47(m,1h),2.64-2.58(br,1h),2.12-2.06(m,1h),1.63-1.57(m,1h),1.13(d,j＝7.0hz,3h)。

步骤2-c：合成(2r,4r)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸：

将(2r,4r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(50mg，0.16mmol)和pd/c(25mg)于meoh(5ml)中的溶液在室温下搅拌3小时。过滤并浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的(2r,4r)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(18.0mg，61％)。esi-ms(ei⁺,m/z):186.1[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,meod):δ3.51-3.47(m,1h),2.46-2.44(br,1h),1.95-1.87(m,2h),1.11(d,j＝7.0hz,3h)。

步骤2-d：合成(2s,4s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸：

将(2s,4s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(80mg，0.25mmol)和pd/c(40mg)于meoh(8ml)中的溶液在室温下搅拌3小时。过滤并浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的(2s,4s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基戊酸(38.1mg，82％)。esi-ms(ei⁺,m/z):186.2[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,meod):δ3.51-3.47(m,1h),2.46-2.44(br,1h),1.95-1.87(m,2h),1.11(d,j＝7.0hz,3h)。

实例128：(s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酸(i-128)：

反应流程：

程序和表征：

程序与实例187中所用的相同。

(s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酸：esi-ms(ei⁺,m/z):200.1¹h-nmr(500mhz,d2o):δ3.94(t,j＝5.5hz,1h),2.23(dd,j＝15.5hz,j＝5.5hz,1h),1.90(dd,j＝15.5hz,j＝6.0hz,1h),1.13(d,j＝8.5hz,6h)。

实例188：(s)-2-((r)-2-氨基-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯[i-188]：

反应流程：

程序和表征：

2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酸的程序与实例90相同

步骤1：(s)-2-((r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯：

将(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-二氟-4,4-二甲基戊酸(150mg，0.45mmol)、hatu(188mg，0.495mmol)、(s)-2-氨基-4-甲基戊酸甲酯盐酸盐(123mg，0.675mmol)和dipea(175mg，1.35mmol)的溶液在室温下搅拌1小时，然后用冰水(20ml)淬灭，用ea(2×30ml)萃取，干燥，过滤并浓缩。通过反相硅胶色谱biotage纯化粗产物，获得呈白色固体状的(s)-2-((s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯(120mg，58％)。esi-ms(ei⁺,m/z):461.0

步骤2：(s)-2-((r)-2-氨基-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯：

将(s)-2-((s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-二氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯(120mg，0.26mmol)和pd/c(30mg)于thf(10ml)中的溶液在室温下搅拌2小时，然后过滤、浓缩。通过反相硅胶色谱biotage纯化粗产物，获得呈白色固体状的(s)-2-((s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯(49mg，57％)。esi-ms(ei⁺,m/z):326.0

¹h-nmr(500mhz,meod-d4):4.47(t,j＝7.5hz,1h),3.99-3.97(m,1h),3.77(s,3h),2.33-2.28(m,1h),1.95-1.91(m,1h),1.69-1.68(m,3h),1.24-1.17(m,6h),1.00-0.94(m,6h)。

实例189：(s)-2-((s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯[i-189]：

反应流程：

程序与实例188中所用的相同。

程序和表征：

实例189：(s)-2-((s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4,4-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊酸甲酯[i-189]：¹h-nmr(500mhz,meod-d4):4.52(t,j＝7.5hz,1h),4.02-3.99(m,1h),3.73(s,3h),2.35-2.30(m,1h),1.95-1.91(m,1h),1.78-1.67(m,3h),1.25(s,3h),1.17(s,3h),1.01-0.97(m,6h)。

实例108：(s)-2-氨基-6-氟己酸[i-108].

实例109：(r)-2-氨基-6-氟己酸[i-109].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2-(二苯基亚甲基氨基)-6-氟己酸叔丁酯：

将1-氟-4-碘丁烷(2.0g，9.90mmol)、2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸叔丁酯(2.43g，8.25mmol)、tbab(266mg，0.83mmol)和koh(水溶液，50％)(10ml)于dcm(10ml)和甲苯(25ml)中的混合物在50℃下搅拌16小时。通过sgc(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)纯化溶液，得到呈无色油状的(2-(二苯基亚甲基氨基)-6-氟己酸叔丁酯(0.91g，2.47mmol，30％)。ms(ei+,m/z):370.2[m+h]⁺。

步骤2：(s)-2-氨基-6-氟己酸[i-108]：

将(s)-2-(二苯基亚甲基氨基)-6-氟己酸叔丁酯(360mg，0.97mmol)于二噁烷(10ml)和hcl(水溶液，6m)中的溶液在室温下搅拌16小时。用乙醚和水萃取混合物。在将ph调节到3-4调节之后，用ea萃取水层。浓缩有机层，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-6-氟己酸[i-108](125mg，0.84mmol，86％)。esi-ms(ei+,m/z):150.3[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,d2o)δ4.469(t,j＝6.0hz,1h),4.351(t,j＝6.0hz,1h),3.950(t,j＝6.0hz,1h),1.904-1.820(m,2h),1.690-1.588(m,2h),1.456-1.388(m,2h)。

步骤2：(r)-2-氨基-6-氟己酸[i-109]：

将(r)-2-(二苯基亚甲基氨基)-6-氟己酸叔丁酯(300mg，0.81mmol)于二噁烷(10ml)和hcl(水溶液，6m)中的溶液在室温下搅拌16小时。用乙醚和水萃取混合物。在将ph调节到3-4调节之后，用ea萃取水层。通过hplc纯化有机层，得到呈白色固体状的(r)-2-氨基-6-氟己酸[i-109](35mg，0.23mmol，29％)。esi-ms(ei+,m/z):150.2[m+h]⁺。1hnmr(500mhz,d2o)δ4.505(t,j＝6.0hz,1h),4.410(t,j＝6.0hz,1h),3.823(t,j＝6.0hz,1h),1.906-1.827(m,2h),1.722-1.639(m,2h),1.485-1.399(m,2h)。

实例198：2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸甲酯(i-198)：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：4,4,4-三氟-n-甲氧基-n-甲基-3-(三氟甲基)丁-2-烯酰胺：

在1小时内，向三水合六氟丙酮(30g，136mmol)的搅拌溶液中缓慢地逐滴添加h2so4(100ml，浓)，并向n-甲氧基-n-甲基-2-(三苯基亚膦基)-乙酰胺(10g，27.5mmol)于thf(200ml)中的溶液中引入气态六氟丙酮。将混合物在室温下搅拌16小时。然后添加石油醚(200ml)，过滤出白色沉淀。浓缩滤液，通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1～3/1)纯化残余物，得到呈轻油状的4,4,4-三氟-n-甲氧基-n-甲基-3-(三氟甲基)丁-2-烯酰胺(6.2g，24.7mmol，90％)。esi-ms(ei⁺,m/z):252.1[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,cdcl3):δ7.15(s,1h),3.67(s,3h),3.26(s,3h)。

步骤2：4,4,4-三氟-n-甲氧基-n-甲基-3-(三氟甲基)丁酰胺：

将4,4,4-三氟-n-甲氧基-n-甲基-3-(三氟甲基)丁-2-烯酰胺(4.5g，17.9mmol)、pd(oh)2/c(620mg)于meoh(100ml)中的混合物在室温下在氢气氛围下搅拌16小时。然后过滤并浓缩，得到呈轻油状的4,4,4-三氟-n-甲氧基-n-甲基-3-(三氟甲基)丁酰胺(1.8g，7.1mmol，40％)。esi-ms(ei⁺,m/z):254.1[m+h]⁺。

步骤3：4,4,4-三氟-3-(三氟甲基)丁醛：

在冰浴下，向4,4,4-三氟-n-甲氧基-n-甲基-3-(三氟甲基)丁酰胺(1.8g，7.1mmol)于thf(50ml)中的溶液中逐滴添加lialh4(8.5ml，8.5mmol)，1小时后，用柠檬酸溶液(100ml)淬灭混合物，用et2o(100ml×2)萃取溶液，用盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，并将溶液用于下一步骤。

步骤4：2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊腈：

在冰浴下，向以上4,4,4-三氟-3-(三氟甲基)丁醛于et2o(200ml)中的溶液中相继添加苯甲胺(2ml)、acoh(2ml)和tmscn(2ml)，将溶液在0～室温下搅拌17小时，然后用etoac(100ml)稀释。用h2o(100ml×2)洗涤溶液，然后浓缩，得到呈棕色液体状的2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊腈(2.1g，粗制)。esi-ms(ei⁺,m/z):311.2[m+h]⁺。

步骤5：2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸：

将2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊腈(2.1g，粗制)于浓hcl(50ml)和acoh(10ml)中的溶液加热到100℃，持续40小时。浓缩混合物以去除溶剂，用1mnaoh溶液将ph调节到12，用pe(100ml)萃取，用6mhcl将水相的ph调节到5-6，形成白色固体，过滤，并用水(50ml)洗涤滤饼，在真空中干燥，得到呈白色固体状的2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(1.0g，3.0mmol，42％，3个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):272.0

步骤6：2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸甲酯：

将2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(800mg，2.4mmol)于hcl/meoh(50ml，2m)中的溶液加热到75℃，持续17小时。浓缩溶液并通过制备型hplc(bostonc1821*250mm流动相：a：0.1％tfa；b：acn)纯化，得到呈无色油状的2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸甲酯(120mg，0.35mmol，15％)。esi-ms(ei⁺,m/z):344.1[m+h]⁺。

步骤7：2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸甲酯三氟乙酸：

将2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸甲酯(100mg，0.30mmol)、hcoonh4(92mg，1.5mmol)和pd/c(10％，20mg)于meoh(10ml)中的混合物加热到65℃，持续1小时。过滤混合物，并浓缩滤液并通过反相硅胶色谱纯化，得到呈白色固体状的过滤混合物，并浓缩滤液并通过反相硅胶色谱纯化，得到呈白色固体状的2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸甲酯三氟乙酸(76mg，0.21mmol，70％)。esi-ms(ei⁺,m/z):254.1[m+h]⁺。¹hnmr(500mhz,meod-d4)δ4.26(dd,j＝7.5hz,j＝6.0hz,1h),3.91(m,4h),2.49(dd,j＝8.5hz,j＝5.0hz,1h),2.33-2.37(m,1h)。

实例164：(s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(i-164)：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸：

将2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(480mg，1.46mmol)和pd(oh)2/c(20％，100mg)于acoh(15ml)中的溶液在35℃下在氢气下搅拌17小时。过滤混合物并在真空中浓缩滤液，得到呈白色固体状的2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(460mg，粗制)。esi-ms(ei⁺,m/z):240.2[m+h]⁺。

步骤2：(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸：

在冰浴下，向2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(460mg，粗制)和nahco3(368mg，4.38mmol)于丙酮(30ml)和h2o(30ml)中的溶液中添加cbzosu(727mg，2.92mmol)。17小时后，用1mhcl溶液将反应混合物调节到ph3-4，并用etoac(50ml×2)萃取溶液，用盐水(50ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，相继通过反相硅胶色谱和手性制备型hplc[柱：cc44.6*250mm5μm；溶剂：meoh(0.2％甲醇氨)]纯化粗产物，得到(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(27mg，0.072mmol，5％，2个步骤)和(r)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(22mg，0.059mmol，4％，2个步骤)，两个都呈无色油状。esi-ms(eⁱ⁺,m/z):396.0[m+na]⁺。

步骤3：(s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸：

将(s)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸(27mg，0.072mmol)和pd/c(10％，5mg)于meoh(10ml)中的混合物在室温下搅拌1小时。过滤溶液并通过反相硅胶色谱纯化，得到呈白色固体状的(s)-2-氨基-5,5,5-三氟-4-(三氟甲基)戊酸[i-164](8.5mg，0.036mmol，49％)。ms(ei⁺,m/z):240.2[m+h]⁺。¹hnmr(500mhz,d2o)δ3.74-3.80(m,2h),2.88-2.31(m,1h),1.91-2.20(m,1h)。

实例203：2-氨基-4-环戊基丁酸[i-203]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2-环戊基乙醛：

在冰浴下，向3-环戊基丙-1-醇(2.0g，17.5mmol)于dmso(40ml)中的溶液中添加ibx(7.35g，26.3mmol)。将混合物升温到室温，并且搅拌过夜。将反应混合物倒入水(200ml)中并用et2o(100ml×2)萃取，用水(100ml×3)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，并将溶液用于下一步骤。

步骤2：(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-环戊基丁-2-烯酸叔丁酯：

在冰浴下，向威蒂希试剂(2.5g，6.8mmol)于thf(50ml)中的溶液中添加naot-bu(785mg，8.2mmol)。1小时后，添加以上2-环戊基乙醛于et2o(200ml)中的溶液。将混合物升温到室温，并且搅拌过夜。用水(200ml)稀释溶液并用ea(100ml×2)萃取，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩并通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/20)纯化，得到呈无色液体状的(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-环戊基丁-2-烯酸叔丁酯(1.0g，3.1mmol，45％，2个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):326.2[m+h]⁺。

步骤3：2-(叔丁氧羰基氨基)-4-环戊基丁酸叔丁酯：

将(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-环戊基丁-2-烯酸叔丁酯(240mg，0.74mmol)、hcoonh4(233mg，3.7mmol)和pd/c(10％，30mg)于meoh(15ml)中的混合物加热到回流，持续4小时。过滤并浓缩混合物，用et2o(50ml)稀释，用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈无色液体状的2-(叔丁氧羰基氨基)-4-环戊基丁酸叔丁酯(224mg，0.69mmol，93％)。esi-ms(ei⁺,m/z):328.2[m+h]⁺。

步骤4：2-氨基-4-环戊基丁酸：

将2-(叔丁氧羰基氨基)-4-环戊基丁酸叔丁酯(224mg，0.69mmol)于6mhcl(20ml)和二噁烷(10ml)中的溶液加热到70℃，持续2小时。在真空中浓缩混合物，用水(30ml)稀释，用et2o(20ml×2)萃取，并浓缩滤液到干燥，得到呈白色固体状的2-氨基-4-环戊基丁酸(114.9mg，0.52mmol，81％)。esi-ms(ei⁺,m/z):172.3[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,d2o):δ3.91(t,j＝6.0hz,1h),1.82-1.89(m,2h),1.66-1.72(m,3h),1.28-1.52(m,6h),1.00-1.01(m,2h)。

实例202：2-氨基-5-环戊基戊酸[i-202]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：3-环戊基丙醛：

在冰浴下，向3-环戊基丙-1-醇(1.0g，7.8mmol)于dmso(20ml)中的溶液中添加ibx(3.28g，11.7mmol)。将混合物升温到室温，并且搅拌过夜。将反应混合物倒入水(100ml)中并用et2o(60ml×2)萃取，用水(100ml×3)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，并将溶液用于下一步骤。

步骤2：(e)-2-(叔丁氧羰基氨基)-5-环戊基戊-2-烯酸叔丁酯：

在冰浴下，向威蒂希试剂(500mg，1.36mmol)于thf(15ml)中的溶液中添加naot-bu(157mg，1.63mmol)。1小时后，添加以上3-环戊基丙醛于et2o(100ml)中的溶液。将混合物升温到室温，并且搅拌过夜。用水(200ml)稀释溶液并用etoac(100ml)萃取，用水(100ml×2)和盐水(100ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩并通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/20)纯化，得到呈无色液体状的(e)-2-(叔丁氧羰基氨基)-5-环戊基戊-2-烯酸叔丁酯(250mg，0.74mmol，9.5％，2个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):340.2[m+h]⁺。

步骤3：2-(叔丁氧羰基氨基)-5-环戊基戊酸叔丁酯：

将2-(叔丁氧羰基氨基)-5-环戊基戊-2-烯酸酯(250mg，0.74mmol)和pd/c(10％，30mg)于meoh(15ml)中的混合物在室温下在氢气下搅拌17小时。过滤并浓缩混合物，得到呈无色液体状的2-(叔丁氧羰基氨基)-5-环戊基戊酸叔丁酯(250mg，0.73mmol，99％)。esi-ms(ei⁺,m/z):342.2[m+h]⁺。

步骤4：2-氨基-5-环戊基戊酸：

将2-(叔丁氧羰基氨基)-5-环戊基戊酸酯(250mg，0.73mmol)于6mhcl(20ml)和二噁烷(10ml)中的溶液加热到80℃，持续5小时。在真空中浓缩混合物，用水(30ml)稀释，用et2o(20ml×2)萃取，并浓缩滤液到干燥，得到呈白色固体状的2-氨基-5-环戊基戊酸(115mg，0.52mmol，71％)。esi-ms(ei⁺,m/z):186.2[m+h]⁺。¹h-nmr(400mhz,d2o):δ3.84(t,j＝6.0hz,1h),1.79-1.84(m,2h),1.61-1.67(m,3h),1.25-1.49(m,8h),0.95-0.99(m,2h)。

实例197：合成2-氨基-n-环戊基-3,3-二氟-n,4-二甲基戊酰胺[i-197]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：2-(苯甲基氨基)-n-环戊基-3,3-二氟-n,4-二甲基戊酰胺：

将2-(苯甲基氨基)-3,3-二氟-4-甲基戊酸(80mg，0.31mmol)、n-甲基环戊胺(62mg，0.62mmol)、hatu(141mg,0.37mmol)和et3n(94mg，0.93)于dmf(2ml)中的混合物在室温下搅拌3小时。通过制备型hplc(bostonc1821*250mm流动相：a：0.1％tfa；b：acn)纯化混合物，得到呈白色固体状的2-(苯甲基氨基)-n-环戊基-3,3-二氟-n,4-二甲基戊酰胺(45mg，0.13mmol，43％)。esi-ms(ei⁺,m/z):339.0

步骤2：2-氨基-n-环戊基-3,3-二氟-n,4-二甲基戊酰胺：

将2-(苯甲基氨基)-n-环戊基-3,3-二氟-n,4-二甲基戊酰胺(45mg，0.13mmol)、hcoonh4(41mg，0.65mmol)和pd/c(10％，10mg)于meoh(5ml)中的混合物加热到60℃，持续1小时。过滤混合物，并浓缩滤液并通过反相硅胶色谱纯化，得到呈白色固体状的2-氨基-n-环戊基-3,3-二氟-n,4-二甲基戊酰胺(16.3mg，0.066mmol，49％)。esi-ms(ei⁺,m/z):249.21hnmr(500mhz,meod-d4)δ5.26(dd,j＝15.5hz,j＝6.0hz,0.5h),5.08(dd,j＝16.5hz,j＝5.0hz,1h),4.28-4.31(m,0.5h),2.97(d,j＝48.5hz,3h),2.38(m,1h),1.65-1.99(m,8h),11.16(dt,j＝6.5hz,j＝3.0hz,6h)。

实例196：2-氨基-5-氟-4,4-二甲基戊酸[i-196].

反应流程：

程序和表征：

步骤1：3-羟基-n-甲氧基-n,2,2-三甲基丙酰胺：

将3-羟基-2,2-二甲基丙酸(10g，84.7mmol)、n,o-二甲基羟胺盐酸盐(16.4g，101.7mmol)、edci(24.4g，127.1mmol)、hobt(17.2g，127.1mmol)和dipea(28ml，169.5mmol)于dmf(200ml)中的混合物在室温下搅拌16小时。用etoac(200ml×3)和水(100ml)萃取反应混合物，合并有机层，用1nhcl(30ml*2)、1nnahco3(30ml×2)和盐水(50ml)洗涤，干燥，浓缩，得到残余物，通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/2)纯化，得到呈无色油状的3-羟基-n-甲氧基-n,2,2-三甲基丙酰胺(6.9g，50％)。esi-ms(ei⁺,m/z):162.2[m+h]⁺。

步骤2：3-氟-n-甲氧基-n,2,2-三甲基丙酰胺：

向冷却到-78℃的3-羟基-n-甲氧基-n,2,2-三甲基丙酰胺(4.5g，27.9mmol)于dcm(40ml)中的混合物中逐滴添加dast(7.4ml，55.9mmol)。然后在室温下搅拌1-2小时，再次冷却到-78℃，逐滴添加dast(4ml，27.9mmol)。将反应混合物在室温下再搅拌1小时。使反应混合物冷却到-78℃，缓慢添加饱和nh4cl(15ml)，添加dcm(50ml)，分离有机层，用饱和nh4cl(30ml)、盐水(30ml×2)洗涤，干燥，浓缩，得到残余物，通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/4)纯化，得到呈无色油状的3-氟-n-甲氧基-n,2,2-三甲基丙酰胺(1.9g，28％)。esi-ms(ei⁺,m/z):164.2[m+h]⁺。

步骤3：3-氟-2,2-二甲基丙醛：

向冷却到0℃的3-氟-n-甲氧基-n,2,2-三甲基丙酰胺(1.0g，61.3mmol)于thf(10ml)中的混合物中逐滴添加lialh4(6.1ml，61.3mmol，1m，于thf中)。然后在此温度下搅拌0.5-1小时。缓慢添加饱和nh4cl(10ml)，用et2o(20ml×3)萃取，用水(15ml×2)和盐水(15ml)洗涤，干燥，直接用于下一步骤。esi-ms(ei⁺,m/z)：无ms。

步骤4：(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氟-4,4-二甲基戊-2-烯酸叔丁酯：

将3-氟-2,2-二甲基丙醛(约630mg，6.1mmol，来自上一步的et2o溶液)、2-(叔丁氧羰基氨基)-2-二乙氧基磷酰基-乙酸叔丁酯(2.25g，6.1mmol)和t-buona(1.2g，12.3mmol)于thf(15ml)中的混合物在室温下搅拌16小时。添加饱和nh4cl(15ml)，用ea(30ml×3)萃取，与有机层组合，用水(15ml)和盐水(15ml)洗涤，干燥，浓缩，得到残余物，通过色谱(硅胶，石油醚/dcm)纯化，得到呈白色固体状的(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氟-4,4-二甲基戊-2-烯酸叔丁酯(190mg，0.60mmol，8％)。esi-ms(ei+,m/z):206[m-111]⁺。

步骤5：2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氟-4,4-二甲基戊酸叔丁酯：

将(z)-2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氟-4,4-二甲基戊-2-烯酸叔丁酯(190mg，0.60mmol)和pd/c(10％，30mg)于ipa(15ml)中的混合物在室温下在氢气下搅拌17小时。过滤并浓缩混合物，得到呈无色液体状的2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氟-4,4-二甲基戊酸叔丁酯(200mg，粗制)。esi-ms(ei⁺,m/z):342.2[m+na]⁺。

步骤6：2-氨基-5-氟-4,4-二甲基戊酸三氟乙酸：

将2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氟-4,4-二甲基戊酸叔丁酯(200mg，粗制)于6mhcl(20ml)和二噁烷(10ml)中的溶液加热到50℃，持续17小时。在真空中浓缩混合物，用水(30ml)稀释，用et2o(20ml×2)萃取，并在真空中浓缩滤液并通过反相硅胶色谱纯化，得到呈白色固体状的2-氨基-5-环戊基戊酸三氟乙酸(31.7mg，0.11mmol，19％)。esi-ms(ei⁺,m/z):164.2[m+h]⁺。¹h-nmr(500mhz,d2o):δ4.16(d,j＝47.5hz,1h),3.97(t,j＝5.5hz,1h),2.03(dd,j＝15.5hz,j＝5.5hz,1h),1.71(dd,j＝15.5hz,j＝6.0hz,1h),0.91(dd,j＝15.0hz,j＝2.0hz,6h)。

实例186：合成2,4-二氨基-4-甲基戊酸[i-186]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：4-(甲氧基(甲基)氨基)-2-甲基-4-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯：

向3-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(1g，4.61mmol)、n,o-二甲基羟胺盐酸盐(536mg，5.53mmol)、hatu(2.26g，5.99mmol)于dmf(15ml)中的溶液中添加dipea(1.49g，11.53mmol)。将溶液在室温下搅拌2小时，然后，用盐水(100ml)稀释混合物，用etoac(50ml×2)萃取。合并有机层，浓缩并通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)纯化，得到呈无色油状的4-(甲氧基(甲基)氨基)-2-甲基-4-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.8mmol，82％)。esi-ms(ei⁺,m/z):261.2[m+h]⁺。

步骤2：2-甲基-4-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯：

在室温下，向4-(甲氧基(甲基)氨基)-2-甲基-4-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(3.8g，14.6mmol)于thf(50ml)中的溶液中添加lialh4(16ml，1m，于thf中)。将溶液在室温下搅拌2小时，用na2so4.10h2o淬灭，过滤并用thf洗涤，得到呈黄色溶液状的2-甲基-4-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(约14mmol，于110mlthf中)。ms(ei⁺,m/z):146.3[m+h-56]⁺。

步骤3：4-(苯甲基氨基)-4-氰基-2-甲基丁-2-基氨基甲酸叔丁酯：

向2-甲基-4-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(粗制，约14mmol，于110mlthf中)溶液中添加bnnh2(2.2ml)和acoh(2.2ml)。将溶液在室温下搅拌10分钟。添加tmscn(2.2ml)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后，浓缩反应混合物并通过色谱(硅胶，乙酸乙酯/石油醚＝1/4)，得到呈黄色粘稠物状的4-(苯甲基氨基)-4-氰基-2-甲基丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(670mg，2.11mmol，15％)。ms(ei⁺,m/z):318.3[m+h]⁺。

步骤4：5-氨基-4-(苯甲基氨基)-2-甲基-5-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯：

向4-(苯甲基氨基)-4-氰基-2-甲基丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(640mg，2.00mmol)、k2co3(550mg，3.98mmol)于dmso(16ml)中的混合物中添加30％h2o2(0.64ml，5.67mmol)并在室温下搅拌17小时。然后，用h2o(200ml)稀释反应混合物，用etoac(100ml×2)萃取。合并有机层，浓缩，得到呈黄色粘稠物状的2-(苯甲基氨基)-4-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸(粗制，890mg)。ms(ei+,m/z):336.0[m+h]⁺。

步骤5：2-(苯甲基氨基)-4-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸：

将5-氨基-4-(苯甲基氨基)-2-甲基-5-氧代戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(粗制890mg，约2.0mmol)、koh(406mg，7.25mmol)于乙烷-1,2-二醇(9ml)和h2o(9ml)中的混合物在100℃下搅拌5小时。然后，用盐水(200ml)稀释反应混合物，用thf/ea＝2:1(90ml×5)萃取，合并有机层，浓缩并通过反相hplc(bostonc1821*250mm10μm；流动相：a：0.1％三氟乙酸；b：乙腈)纯化，得到呈白色固体状的2-(苯甲基氨基)-4-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸(120mg，0.36mmol，18％)。ms(ei+,m/z):337.3[m+h]⁺。

步骤6：2-氨基-4-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸：

将2-(苯甲基氨基)-4-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸(140mg，0.42mmol)、hcoonh4(132mg，2.1mmol)和pd/c(10％，20mg)于meoh(15ml)中的混合物加热到60℃，持续1小时。过滤混合物，并浓缩滤液并通过反相硅胶色谱纯化，得到呈白色固体状的2-氨基-4-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸(60mg，0.24mmol，58％)。esi-ms(ei⁺,m/z):247.2

步骤7：2,4-二氨基-4-甲基戊酸：

将2-氨基-4-(叔丁氧羰基氨基)-4-甲基戊酸(60mg，0.24mmol)于6mhcl(10ml)和二噁烷(0ml)中的溶液在室温下搅拌17小时。在真空中浓缩溶液，得到呈白色固体状的2,4-二氨基-4-甲基戊酸(51.8mg，0.236mmol，97％)。esi-ms(ei⁺,m/z):147.11hnmr(500mhz,d2o)δ4.04(dd,j＝9.5hz,j＝3.5hz,1h),2.32(dd,j＝15.0hz,j＝9.5hz,1h),1.94(dd,j＝15.0hz,j＝3.0hz,1h),1.38(dd,j＝9.5hz,j＝5.0hz,6h)。

实例199：合成4,4,4-三氟-3-甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺[i-199]：

反应流程：

程序和表征：

步骤1：n-甲氧基-n-甲基-2-(三苯基-l5-亚膦基)乙酰胺：

将2-氯-n-甲氧基-n-甲基乙酰胺(13.7g，0.1mol)和三苯膦(26.2g，0.1mol)于乙腈(200ml)中的的混合物加热到80℃并保持20小时。在低于40℃下冷却并浓缩混合物以去除溶剂。将残余物相继溶解于二氯甲烷(200ml)、2nkoh(100ml)中。将所得混合物在20℃下搅拌1小时。用盐水(200ml×3)洗涤有机层，用na2so4干燥并过滤。在真空中浓缩滤液，得到呈黄色固体状的n-甲氧基-n-甲基-2-(三苯基-l5-亚膦基)乙酰胺(36g，0.1mol，98％)。esi-ms(ei⁺,m/z):364.4[m+h]⁺。

步骤2：(e)-4,4,4-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基丁-2-烯酰胺：

将n-甲氧基-n-甲基-2-(三苯基-l5-亚膦基)乙酰胺(36.3g，0.1mol)和1,1,1-三氟丙-2-酮(22.4g，0.2mol)于四氢呋喃(500ml)中的混合物加热到20℃并保持20小时。在低于40℃下在真空中冷却并浓缩混合物以去除溶剂。通过硅胶柱(200g，200～300目，uv254nm)纯化残余物，用0到25％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈黄色油状的(e)-4,4,4-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基丁-2-烯酰胺(19.5g，0.1mol，98％)。esi-ms(ei⁺,m/z):198.2[m+h]⁺。

步骤3：4,4,4-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基丁酰胺：

将(e)-4,4,4-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基丁-2-烯酰胺(2g，0.01mol)和pd/c(10％，200mg)于thf(50ml)中的混合物在26℃下搅拌18小时。过滤混合物，并在真空中浓缩滤液到干燥，得到呈黄色油状的4,4,4-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基丁酰胺(2g，0.01mol，98％)。esi-ms(ei⁺,m/z):200.2[m+h]⁺。

步骤4：4,4,4-三氟-3-甲基丁醛：

在0℃下，向4,4,4-三氟-n-甲氧基-n,3-二甲基丁酰胺(2g，0.01mol)于40mlthf中的溶液中添加lialh4(0.4g，0.01mol)。将混合物在0℃下搅拌1小时。相继用水、甲基叔丁基醚(30ml×2)淬灭反应混合物。用盐水(50ml×3)洗涤有机层，用na2so4干燥并过滤。保留滤液，得到呈无色溶液状的4,4,4-三氟-3-甲基丁醛(1.4g，粗制)，将其直接用于下一步骤中。

步骤5：2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊腈：

在冰浴下，向以上4,4,4-三氟-3-甲基丁醛于甲基叔丁基醚(100ml)中的溶液中相继添加苯甲胺(1.5ml)、acoh(1.0ml)和tmscn(1.5ml)。将混合物温热到20℃并搅拌过夜。用水(30ml)稀释溶液并用etoac(30ml)萃取。用水(30ml×2)和盐水(50ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈棕色油状的2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊腈(2.6g，粗制)，将其用于下一步骤。esi-ms(ei⁺,m/z):257.3[m+h]⁺。

步骤6：n-苯甲基-4,4,4-三氟-3-甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺：

向2-(苯甲基氨基)-5,5,5-三氟-4-甲基戊腈(0.3g，粗制)于dmf(10ml)中的溶液中添加nh4cl(0.15g，0.003mol)和nan3(0.21g，0.003mol)，加热到95℃，持续18小时。将溶液冷却到15℃并用etoac(20ml)萃取，用水(20ml×2)和盐水(20ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，得到呈白色固体状的n-苯甲基-4,4,4-三氟-3-甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺(0.1g，0.5mmol，33％，3个步骤)。esi-ms(ei⁺,m/z):300.3[m+h]⁺。

4,4,4-三氟-3-甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺三氟乙酸：

在室温下，向n-苯甲基-4,4,4-三氟-3-甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺(160mg，0.54mmol)于meoh(15ml)中的溶液中添加hcoonh4(0.17g，2.7mmol)和pd/c(30mg)。将混合物在60℃下搅拌2小时。过滤并浓缩反应混合物，得到粗产物，通过反相硅胶色谱纯化，得到呈白色固体状的4,4,4-三氟-3-甲基-1-(2h-四唑-5-基)丁-1-胺三氟乙酸(72.8mg，0.23mmol，42％)；esi-ms(ei⁺,m/z):210.2[m+h]⁺；1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ4.67-4.93(m,1h),2.31-2.41(m,1h),2.00-2.12(m,2h),0.99(dd,j＝16.8,j＝6.4hz,6h)。

实例210蛋白质印迹分析(westernblotassay)

此筛选分析测量测试化合物对通过从hek293t细胞稳定表达的flag-wdr24的免疫沉淀纯化的gator2/sestrin2复合体的体外活性。使hek293t细胞(293t)工程化以通过慢病毒转导来稳定表达n端标记的flag-wdr24。慢病毒通过以下产生：使用xtremegene9转染试剂(罗氏诊断(rochediagnostics))，将慢病毒转移载体pljm60与δvpr包膜和cmvvsv-g包装质粒一起共转染到hek-293t细胞中。转染后24小时，将培养基改为补充有30％灭活胎血清的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(dulbecco'smodifiedeagle'smedia，dmem)。在转染后48小时和72小时收集含有病毒的上清液并使所述上清液通过0.45μm过滤器以消除细胞。在含有8μg/ml聚凝胺(polybrene)的培养基中感染6孔组织培养板中的靶细胞并通过在2,200rpm下离心1小时进行旋转感染。在感染后二十四小时，去除病毒并用适当的抗生素选择细胞。然后使细胞生长于补充有10％胎牛血清和抗生素的dmem中。

为了筛选亮氨酸模拟化合物，将2,000,000个表达flag-wdr24的293t细胞涂于10cm组织培养板中。七十二小时后，将细胞放置于不用氨基酸调配并且补充有5mm葡萄糖(-aarpmi，美国生物生命科学(usbiologicallifesciences))的标准rpmi培养基中，持续1小时，然后在裂解缓冲液(40mmhepes、1％triton、10mmβ-甘油磷酸钠、10mm焦磷酸钠、2.5mmmgcl2以及蛋白酶抑制剂)中裂解。为了分离flag-wdr24/内源性sestrin2复合体，用30μl抗flag树脂(西格玛(sigma))在4℃下对1ml体积的粗制裂解物(相当于2-4mg的总蛋白质)进行2小时免疫沉淀，在冷裂解缓冲液加0.5mnacl中洗涤两次，并且再悬浮于1ml冷胞质缓冲液(40mmhepesph7.4、140mmkcl、10mmnacl、2.5mmmgcl2、0.1％tritonx-100)中。然后向每个免疫沉淀样品中按不同浓度添加测试化合物或对照(过滤所得溶液或亮氨酸)并在4℃下旋转培育60分钟。在培育期之后，使样品离心以使与抗flag树脂结合的flag-wdr24/内源性sestrin2复合体成块，完全去除上清液并且将树脂再悬浮于sds-page样品缓冲液中并煮沸5分钟。然后通过sds-page处理样品并且用抗flag(西格玛)和抗sestrin2(赛信通技术公司(cellsignalingtechnology))抗体进行蛋白质印迹，如l.钱曲鹏等人,细胞报告9:1-8(2014)中所述。

扫描所得蛋白质印迹并且使用成像平台定量对应于sestrin2和flag-wdr24的条带强度。为了测定每种病况中与gator2结合的sestrin2的量，针对flag-wdr24的条带强度归一化sestrin2的条带强度。对于每一批测试化合物来说，还进行了阴性对照(过滤所得溶液)和阳性对照(亮氨酸，25μm，西格玛)。使亮氨酸对与flag-wdr24结合的内源性sestrin2的消耗归一化以表示100％活性。一式两份地分析化合物并且每个化合物的活性按亮氨酸活性的百分比进行定量并取平均。重复尝试分析，得到亮氨酸的平均活性相比于水而言标准差是20％；因此，在25μm下一式两份，使与gator2结合的sestrin2的量减少至少40％的测试化合物被视为统计学上显著的并且被表征为是亮氨酸模拟物。一些化合物增加与flag-wdr24结合的sestrin2的量。使与gator2结合的sestrin2的量增加超过40％(表示为小于亮氨酸活性的-40％)的化合物被表征为是亮氨酸拮抗剂。

实例211.鉴别模拟或拮抗亮氨酸对sestrin2和sestrin2/gator2相互作用的活性的化合物的方法。

引言

在亮氨酸水平不足的情况下，sestrin1和sestrin2通过gator2组分wdr24和seh1l与gator2相互作用。在亮氨酸足够的条件下，亮氨酸直接结合sestrin2，诱导sestrin2与gator2解离。以下方法的目标是鉴别模拟亮氨酸与sestrin2结合并破坏sestrin2/gator2的作用的化合物。此外，所述方法鉴别拮抗与sestrin2结合的亮氨酸并防止sestrin2对亮氨酸起反应而与gator2解离的化合物。

方法1(体外ppi分析)

此筛选分析测量化合物对通过从hek293t细胞稳定表达的flag-wdr24的免疫沉淀纯化的gator2/sestrin2复合体的体外活性。使hek293t细胞(293t)工程化以通过慢病毒转导来稳定表达n端标记的flag-wdr24。慢病毒通过以下产生：使用xtremegene9转染试剂，将慢病毒转移载体pljm60与δvpr包膜和cmvvsv-g包装质粒一起共转染到hek-293t细胞中。转染后24小时，将培养基改为补充有30％灭活胎血清的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(dmem)。在转染后48小时和72小时收集含有病毒的上清液并使所述上清液通过0.45μm过滤器以消除细胞。在含有8μg/ml聚凝胺的培养基中感染6孔组织培养板中的靶细胞并通过在2,200rpm下离心1小时进行旋转感染。在感染后24小时，去除病毒并用适当的抗生素选择细胞。然后使细胞生长于补充有10％胎牛血清和抗生素的dmem中。

为了筛选亮氨酸模拟化合物，将2,000,000个表达flag-wdr24的293t涂于10cm组织培养板中。72小时后，将细胞放置于不用氨基酸调配并且补充有5mm葡萄糖(-aarpmi，美国生物生命科学)的标准rpmi培养基中，持续1小时，然后在裂解缓冲液(40mmhepes、1％triton、10mmβ-甘油磷酸钠、10mm焦磷酸钠、2.5mmmgcl2以及蛋白酶抑制剂)中裂解。如下分离flag-wdr24/内源性sestrin2复合体：用30μl抗flag树脂(西格玛)在4℃下对1ml体积的粗制裂解物(相当于2-4mg的总蛋白质)进行2小时免疫沉淀(ip)，在冷裂解缓冲液加0.5mnacl中洗涤两次，并且再悬浮于1ml冷胞质缓冲液(40mmhepesph7.4、140mmkcl、10mmnacl、2.5mmmgcl2、0.1％tritonx-100)中。然后向每个样品中按指定浓度25μm添加化合物并在4℃下旋转培育30分钟。在培育期之后，使样品离心以使与抗flag树脂结合的flag-wdr24/内源性sestrin2复合体成块，完全去除上清液并且将树脂再悬浮于十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)样品缓冲液中并煮沸5分钟。然后通过sds-page处理样品并且用抗flag(西格玛)和抗sestrin2(赛信通技术公司)抗体进行蛋白质印迹，如l.钱曲鹏等人,细胞报告9:1-8(2014)中所述。

扫描所得蛋白质印迹并且使用成像平台定量对应于sestrin2和flag-wdr24的条带强度。为了测定每种病况中与gator2结合的sestrin2的量，针对flag-wdr24的条带强度归一化sestrin2的条带强度。对于每一批测试化合物来说，还进行了阴性对照(水)和阳性对照(亮氨酸，25μm，西格玛)。使亮氨酸对与flag-wdr24结合的内源性sestrin2的消耗归一化以表示100％活性。一式两份地分析化合物并且每个化合物的活性按亮氨酸活性的百分比进行定量并取平均。列举了测试化合物的定量数据的表呈现在表3中。重复尝试分析，得到亮氨酸的平均活性相比于水而言标准差是20％；因此，在25μm下，两个副本都使与gator2结合的sestrin2的量减少至少40％的测试化合物被视为统计学上显著的并且被称为亮氨酸模拟物。一些化合物增加与flag-wdr24结合的sestrin2的量(在表3中显示为亮氨酸的负活性百分比)。显示小于亮氨酸活性的-40％的化合物也视为命中并被称为亮氨酸拮抗剂。

方法2(基于细胞的mtorc1活化)

为了证明被鉴别为是亮氨酸模拟物的化合物在完整细胞中的功效，通过蛋白质印迹法测量在亮氨酸饥饿后响应于化合物处理的mtorc1信号传导。在亮氨酸饥饿之后，在添加亮氨酸之后10到90分钟，在测量信号传导时，外源性亮氨酸的添加活化了mtorc1，如王s.(wang,s.)、图顺z.等人科学347(6218):188-194(2015)中所述。因此，设计一种类似分析，以类似方式测试被鉴别为是亮氨酸模拟物的化合物是否能活化mtorc1。简单来说，将800,000个hek293t细胞涂在6孔板的每个孔中补充有10％胎牛血清和抗生素的dmem中。第二天，将细胞放置在无亮氨酸(赛默科技(thermoscientific))或血清的改良的dmem中，持续1小时，然后添加指定浓度的亮氨酸模拟物(n＝3)，持续超过10分钟的一段时间。然后裂解细胞，针对sds-page加以处理并用针对mtorc1底物磷酸化s6激酶(thr389)和磷酸化4ebp1(thr37/46)(赛信通技术公司)的抗体和载样对照(β-肌动蛋白，圣克鲁斯生物技术(santacruzbiotechnology))进行蛋白质印迹法，如康s.a.(kang,s.a.)等人科学341(6144):364-374(2013)中所述。然后使用成像平台，针对肌动蛋白条带归一化对应于磷酸化底物的条带的强度。相对于没用化合物处理过的亮氨酸饥饿细胞显著增加mtorc1信号传导的化合物(学生t检验，p<0.05)被视为在细胞中有活性的。作为阳性对照，向亮氨酸饥饿细胞中添加100μm亮氨酸，持续60分钟。

方法3(基于细胞的mtorc1活化)

为了证明被鉴别为是亮氨酸拮抗剂的化合物的功效或为了判定弱亮氨酸模拟物是否能增强亮氨酸在完整细胞中的活性，如上重复相同范例，但是存在以下改变：将细胞放置在没有亮氨酸的dmem培养基(如方法3中所述)中，持续60分钟，然后是化合物(n＝3)，持续大于或等于60分钟的一段时间。在化合物处理之后，用30和100μm的亮氨酸刺激细胞60分钟。通过如方法2中所述的蛋白质印迹法测量mtorc1信号传导。以统计学上显著的方式(学生t检验，p<0.05)响应于30μm或100μm的亮氨酸降低mtorc1的肌动蛋白归一化磷酸化底物水平的化合物被视为在细胞中有活性的。以统计学上显著的方式(学生t检验，p<0.05)响应于30μm或100μm的亮氨酸增加mtorc1的肌动蛋白归一化磷酸化底物水平的化合物被视为细胞中的亮氨酸增强剂。作为对照，在添加亮氨酸之前，用水预处理亮氨酸饥饿细胞。或者，以与以上所述相同的方式，但是没有亮氨酸饥饿和刺激，来分析hek293t细胞中潜在的亮氨酸拮抗剂。进行蛋白质印迹以判定在化合物处理之后在富培(repleteculturing)条件下基线mtorc1信号传导是否衰减。

方法4

化合物调节细胞中的sestrin2与gator2之间的相互作用的能力通过在涂在10cm组织培养皿中的工程化以稳定表达flag-wdr24的hek293t细胞中重复方法2和3中所述的分析来测量。从由如方法1中所述经过化合物处理(n＝3)后的细胞获得的裂解物测量内源性sestrin2与flag-wdr24之间的相互作用。简单来说，为了测量在细胞处理之后与flag-wdr24结合的内源性sestrin2的量，用抗flag树脂进行免疫沉淀并且针对sds-page和蛋白质印迹法处理所得样品以测量与flag-wdr24结合的内源性sestrin2的量。以统计学上显著的方式(学生t检验，p<0.05)调节与gator2结合的sestrin2的量的化合物被视为命中。

方法5(alphalisa基于细胞的分析)

为了证明被鉴别为是亮氨酸模拟物的化合物在基于板的形式的完整细胞中的功效，通过alphalisa测量在亮氨酸饥饿后响应于化合物处理的mtorc1信号传导。简单来说，将1,000,000个hek293t细胞涂在t-75细胞培养瓶中补充有10％胎牛血清的dmem中。在细胞达到汇合之后，将其放置在无亮氨酸(赛默科技)、含10％已透析的胎牛血清的改良的dmem中，持续1小时。然后使细胞胰蛋白酶化，并且以50,000个细胞/孔重新涂于底部黑色透明的96孔板中无亮氨酸、含10％已透析的胎牛血清的dmem中。使细胞附着到板上2小时，然后添加指定浓度的化合物(n＝4)，持续超过1小时的一段时间。在达到时间点之后，裂解细胞并通过p-p70s6k(thr389)surefireultraalphalisa试剂盒，根据制造商的说明书(http://www.perkinelmer.com/cmsresources/images/44-176283man_surefire_tgr70s_p70_pt389.pdf)分析。相对于没用化合物处理过的亮氨酸饥饿细胞显著增加mtorc1信号传导的化合物(学生t检验，p<0.05)被视为mtorc1活化剂。相对于没用化合物处理过的亮氨酸饥饿细胞显著降低mtorc1信号传导的化合物(学生t检验，p<0.05)被视为细胞中的抑制剂。作为阳性对照，向亮氨酸饥饿细胞中添加100μm亮氨酸，持续与化合物处理相等的一段时间。

方法6，热偏移方案(thermalshiftprotocol，tm偏移)：

将经过密码子优化的全长人类sestrin2与his-mbp标签进行n端融合并克隆到pmal6h-c5xt细菌表达载体中。将此载体转化到大肠杆菌lobstr(de3)细胞(kerafast)中。使细胞在37℃下生长至0.6od，然后用0.2mmiptg在18℃下诱导蛋白质产生，持续12-14小时。通过在6,000g下离心收集细胞，再悬浮于裂解缓冲液(50mm磷酸钾ph8.0、500mmnacl、30mm咪唑、1mmdtt、10μg/ml核酸酶和1mmpmsf)中并通过声处理裂解。通过在10,000g下离心20分钟清洁裂解物。通过his标签的亲和捕捉，接着通过离子交换和尺寸排阻色谱，以接近100％的纯度从可溶部分分离sestrin2蛋白质。关于热偏移分析，将sestrin2蛋白在稀释缓冲液(10mmtrishclph7.4、150mmnacl、1mmdtt、0.1mmedta)中稀释到2mg/ml。在进行热偏移分析之前，针对96孔板的每孔，将2μlsestrin2蛋白与8μlrox染料(赛默飞世尔(thermofisher))、1μl媒剂或化合物以及14μl稀释缓冲液组合，并在冰上培育1小时，使化合物进行结合。然后在安捷伦(agilent)mx3005p上进行热偏移分析并且每个化合物按10μm、100μm和1000μm重复分析三次。与亮氨酸一起培育使得sestrin2的解链温度按剂量依赖性方式偏移了2.16到11.61摄氏度。基于与媒剂一起培育的sestrin2的重复热偏移测量的cv％变化率，2度或更大的正偏移被视为统计学上显著的。

方法7，间接配体结合分析(ilba)

sestrin2与亮氨酸或其它配体的结合在完整细胞中体外检测或采用经过纯化的蛋白质，通过赛信通技术公司(cst，目录号8487)的兔单克隆抗sestrin2抗体进行免疫检测。通过抗体亲和力在亮氨酸结合之后降低的方式，由亮氨酸结合来调节cst抗体与天然(非变性)sestrin2的结合。类似地，cst抗体对天然sestrin2的亲和力在化合物与天然结合之后按与亮氨酸类似的方式降低。反之，如通过热偏移分析所测量，使sestrin2去稳定的化合物增加了cst抗体对非变性sestrin2的亲和力。因此，开发了多种形式的此间接配体结合分析(ilba)来测量cst抗sestrin2抗体在亮氨酸或化合物的结合后的亲和力。在一个版本中，用由人类细胞系在1小时氨基酸饥饿期(细胞在1％triton、10mmβ-甘油磷酸盐、10mm焦磷酸钠、40mmhepes[ph7.4]、150mmnacl以及2.5mmmgcl2中裂解)之后产生的粗制裂解物进行分析。然后将裂解物与亮氨酸或其它化合物一起在冰上或在室温下培育1小时。在化合物培育之后，用cst抗sestrin2抗体对样品进行1.5小时免疫沉淀，然后与蛋白a琼脂糖凝胶一起培育30分钟，如l.钱曲鹏等人,细胞报告9:1-8(2014)中所述。琼脂糖凝胶结合的抗体-蛋白质复合体通过离心沉淀并用兔多克隆抗sestrin2抗体(蛋白质科技(proteintech)，#10795-1-ap)对流过物进行第二轮免疫沉淀以确定样品之间的总sestrin2蛋白水平是相等的。用免疫沉淀样品进行sds-page，接着用西格玛(目录号wh0083667m3)的小鼠单克隆抗sestrin2抗体进行蛋白质印迹。在用cst的抗sestrin2抗体免疫沉淀的样品的免疫印迹上，亮氨酸结合诱导对应于sestrin2的条带的强度显著减小50％或更多，但是在用蛋白质科技的抗体免疫沉淀的样品的免疫印迹上，亮氨酸结合不会引起sestrin2条带的改变。这个版本的分析还测量到，通过与化合物一起培育，诱导出了增加的sestrin2不稳定性。以相同方式进行分析，但是使sestrin2去稳定(如通过热偏移分析所测量)的化合物导致对应于使用cst抗体进行sestrin2免疫沉淀的免疫印迹条带强度增加。

还在所培养的过表达与flag标签n端融合的sestrin2的人类细胞中进行此分析。在此版本的分析中，程序保持相同，但是改用小鼠抗flag抗体(#f3165，西格玛)进行免疫印迹。当用不能够结合亮氨酸的sestrin2的点突变形式进行ilba时，在亮氨酸或γ-甲基亮氨酸结合之后，未观察到cst抗体亲和力减小。

在另一个版本的分析中，对所培养的人类细胞进行某种组合的氨基酸饥饿，持续1小时，然后用亮氨酸或化合物刺激。在刺激后一小时裂解细胞，并且除了1小时配体结合步骤之外，如上所述进行处理。

还使用alphalisa技术(珀金埃尔默(perkinelmer))按多孔形式进行了间接配体结合分析。此版本的分析要求生物素标记的抗sestrin2抗体、抗生蛋白链菌素供体珠粒(珀金埃尔默)与抗flag受体珠粒(珀金埃尔默)偶合以便检测过表达的flag-sestrin2，或与小鼠抗sestrin2抗体(西格玛)和抗小鼠受体珠粒(珀金埃尔默)偶合以便检测内源性sestrin2。

如上所述进行分析，但是存在以下修改：关于分析的亮氨酸或化合物结合部分，由瞬时或稳定地过表达人类flag-sestrin2的细胞在1小时氨基酸饥饿之后产生的粗制裂解物在裂解缓冲液中稀释到0.8mg/ml的总蛋白质并且排列在如96孔板的多孔板中。关于内源性sestrin2的检测，将粗制裂解物在裂解缓冲液中稀释到4mg/ml的总蛋白质。向每个孔中添加亮氨酸或化合物并且在冰上或在室温下在温和搅拌下将板培育1小时。在配体结合步骤过程中，将生物素标记的抗sestrin2抗体(cst)在alphalisa免疫分析缓冲液(珀金埃尔默)中稀释到5nm，并且将5nm小鼠抗sestrin2抗体(西格玛)与抗小鼠受体珠粒的4×储备液(40μg/ml)组合用于检测内源性sestrin2的分析。关于flag-sestrin2的检测，在免疫分析缓冲液中制备抗flag受体珠粒的4×储备液(40μg/ml)。在配体结合步骤之后，将5μl裂解物与10μl生物素标记的抗sestrin2抗体、12.5μl小鼠sestrin2抗体/抗小鼠受体珠粒混合物或抗flag受体珠粒以及10μlalphalisa免疫分析缓冲液组合并在室温下培育1小时。最后，添加12.5μl抗生蛋白链菌素供体珠粒(160μg/ml，在免疫分析缓冲液中)，再在暗处持续一小时，然后在envision读板仪上读板。

还如所述般进行alphalisa分析，但改用在免疫分析缓冲液中稀释到最终反应浓度为3ng/ml的经过纯化的sestrin2蛋白。

最后，在裂解之前，对于在氨基酸饥饿条件下用亮氨酸或化合物处理的细胞的裂解物进行alphalisa。在多孔板中进行基于细胞的处理，并且每个alphalisa反应使用15μl裂解物(1mg/ml总蛋白质)以及10μl生物素标记的抗体、12.5μl抗体/受体珠粒混合物以及12.5μl抗生蛋白链菌素供体珠粒混合物。

还用基于捕捉的方法来进行间接配体结合分析，如本领域中进行的夹心elisa。在一个版本的分析中，使用由meso-scalediscovery(msd)开发的技术进行ilba。msd系统是基于与分析物结合的抗体的电化学发光检测。用表达内源性sestrin2或过表达flag-sestrin2的粗制裂解物进行ilba并且在裂解之前在体外或在细胞中进行亮氨酸处理。关于内源性sestrin2的体外ilba，制备粗制裂解物(0.8mg/ml总蛋白质)并且以与关于alphalisailba所述相同的方式进行亮氨酸结合。在配体结合完全之后，向每个孔中添加来自cst的生物素标记的抗sestrin2抗体至最终浓度为0.25μg/ml，并在温和搅拌下在4℃下培育1小时。按以下方式中的一种实现每个样品到96孔板的孔中的捕捉：用来自西格玛的小鼠抗sestrin2抗体涂布涂有抗生蛋白链菌素的msd板或裸msd板。捕捉需要每孔25μl样品，接着在以350rpm振荡下培育1小时。在样品捕捉之后，用tris缓冲的盐水与0.1％吐温(tbs-t)将孔洗涤三次。如果样品被捕捉到涂有抗生蛋白链菌素的板上，那么就添加小鼠单克隆抗sestrin2抗体(西格玛)至最终浓度为1μg/ml，以350rpm振荡1小时。再次在tbs-t中洗涤孔，并且添加最终浓度为1μg/ml的抗小鼠第二sulfo-tag抗体(msd)，以350rpm振荡一小时。最后，用tbs-t将孔洗涤三次并添加2×读取缓冲液(msd)，并且立即在msd仪器上读取板。如果用涂有小鼠抗sestrin2抗体的裸板捕捉样品，那么在洗涤之后，添加最终浓度为1μg/ml的抗生蛋白链菌素第二sulfo-tag抗体(msd)，振荡1小时，接着洗涤并与读取缓冲液一起培育，然后分析。

在另一个版本的此分析中，分析过表达flag-sestrin2的粗制裂解物并且使用如上所述相同的基于msd的方案，用小鼠单克隆抗flag抗体(西格玛)捕捉或检测。

关于所有分析，以显著方式减小对应于sestrin2的免疫反应性的信号的化合物被视为亮氨酸模拟物，而以显著方式增加信号的化合物被视为潜在的亮氨酸拮抗剂。

表3显示所选择的本发明化合物的活性。化合物编号对应于表1和2中的化合物编号。具有表示为“a”的活性的化合物提供相对于亮氨酸≥40％的活性％，具有表示为“b”的活性的化合物提供相对于亮氨酸≤-40％的活性％，具有表示为“c”的活性的化合物提供相对于亮氨酸介于-40％与40％之间的活性％。在指定浓度下，具有表示为“d”的活性的化合物相对于dmso对照提供0.5到2倍的偏移，具有表示为“e”的活性的化合物相对于dmso提供2.1-5倍的偏移，具有表示为“f”的活性的化合物相对于dmso提供5.1-10倍的偏移，并且具有表示为“g”的活性的化合物相对于dmso提供10.1到14倍的偏移。

使用分析方法1测定相对于亮氨酸分析的活性％的活性。使用分析方法2测定基于细胞的mtorc1活化分析的活性。

表3.示范性化合物的分析数据

表4显示在alphalisa基于细胞的分析(方法5)中有活性的所选择的本发明化合物。化合物编号对应于表1和2中的化合物编号。表4中所列的化合物是mtorc1活化剂并且对比阳性亮氨酸对照，具有>2倍的活性。

表4.在alphalisa基于细胞的分析中有活性的示范性化合物

表5显示在热偏移分析(方法6)中有活性的所选择的本发明化合物。化合物编号对应于表1和2中的化合物编号。表5中所列的化合物展现2度或更大的正偏移。

表5.在热偏移分析中有活性的示范性化合物