本发明涉及植物提取物领域，具体涉及一种毛稔果实提取物的制备工艺及其抗氧化用途。
背景技术：
我国野生植物资源品种多，产量较大，质量好。现代医学发现，一些野生植物可调节人体新陈代谢、降低血压、降低血胆固醇、预防和治疗多种疾病。一些植物中含有许多抗氧化物质，除了具有抗氧化功能外，还有抗菌抗病毒，抗炎和扩张血管的作用，具有清除自由基、防止动脉硬化、改善血液循环、避免细胞受低氧伤害的功能，对老年性痴呆症以及延缓机体衰老有较好的效果。特别是在野生浆果中，抗氧化物含量普遍较高。
毛稔又名甜娘、开口枣，为野牡丹科直立灌木，分布于我国南部，印度，马来西亚等地。毛稔花朵大而艳丽，是较好的庭院盆栽植物，根叶有收敛止血，消食止痢等药用价值。毛稔以叶或全株入药，具有解毒止痛、生肌止血的功效，毛稔的叶中含有黄酮类、糖类成分，全草含黄酮甙、酚类、氨基酸、糖类成分。成熟的果实香甜可口，可以生吃，亦可用来泡酒。然而，至今尚未有关于毛稔果实提取物的报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种毛稔果实提取物的制备工艺及其抗氧化用途。
本发明所采取的技术方案是：
毛稔果实提取物的制备工艺，包括如下步骤：
(1)用60～80℃热水处理新鲜的毛稔果实8～15min，捞出后直接匀浆处理，经超微粉碎，获得毛稔果实超细粉末；
(2)取毛稔果实超细粉末，加入提取液，摇匀，所述提取液为乙醇体积浓度40％～60％的乙醇水溶液；
(3)设置水浴超声处理功率为500～700W，温度为50～70℃，超声处理后，4000～4500g离心25～35min，收集上清液；
(4)用醋酸调节pH至4～6，乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，70～90℃蒸干，得毛稔果实提取物。
进一步的，步骤(1)中，毛稔果实热水处理捞出后，直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径达10～25μm。
优选的，步骤(2)中，所述提取液为乙醇体积浓度40％～50％的乙醇水溶液。
进一步的，步骤(2)中，毛稔果实超细粉末与提取液的混合比例为1：15～35(g/mL)。
优选的，步骤(2)中，毛稔果实超细粉末与提取液的混合比例为1：25～35(g/mL)。
进一步的，步骤(3)中，水浴超声时间为15～35min。
优选的，步骤(3)中，水浴超声时间为25～35min。
优选的，步骤(4)中，醋酸调节pH至4～5。
进一步的，步骤(4)中，采用乙酸乙酯萃取2次，每次加入乙酸乙酯的体积为上清液体积的0.9～1.1倍。
上述制备工艺提取得到的毛稔果实提取物在制备抗氧化剂中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明结合了超微粉、超声辅助提取等技术，并在此基础上做了有益的改进，制备得到的毛稔果实提取物能够最大程度地保持毛稔果实的抗氧化成分，提取工艺简单、效率高，适用于大规模的工业化生产，可应用于抗氧化剂的制备。
具体实施方式
实施例1毛稔果实提取物及提取工艺
用70℃热水处理新鲜的毛稔果实10min，捞出后直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径20μm，获得毛稔果实超细粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入50mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为600W，60℃超声处理25min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，收集上清液；用醋酸调节pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
实施例2毛稔果实提取物及提取工艺
用70℃热水处理新鲜的毛稔果实10min，捞出后直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径10μm，获得毛稔果实超细粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入50mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为600W，60℃超声处理25min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，收集上清液；用醋酸调节pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
实施例3毛稔果实提取物及提取工艺
用70℃热水处理新鲜的毛稔果实10min，捞出后直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径25μm，获得毛稔果实超细粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入50mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为600W，60℃超声处理25min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，收集上清液；用醋酸调节pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
实施例4毛稔果实提取物及提取工艺
用70℃热水处理新鲜的毛稔果实10min，捞出后直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径25μm，获得毛稔果实超细粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入70mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度40％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为700W，50℃超声处理35min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，收集上清液；用醋酸调节pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
实施例5毛稔果实提取物及提取工艺
用70℃热水处理新鲜的毛稔果实10min，捞出后直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径20μm，获得毛稔果实超细粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入57mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度43％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为500W，70℃超声处理35min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，收集上清液；用醋酸调节pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
实施例6毛稔果实提取物及提取工艺
用70℃热水处理新鲜的毛稔果实10min，捞出后直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径10μm，获得毛稔果实超细粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入30mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度60％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为600W，60℃超声处理15min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，收集上清液；用醋酸调节pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
实施例7毛稔果实提取物及提取工艺
用70℃热水处理新鲜的毛稔果实10min，捞出后直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径20μm，获得毛稔果实超细粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入50mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为600W，60℃超声处理25min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，收集上清液；用醋酸调节pH至5，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
实施例8毛稔果实提取物及提取工艺
用70℃热水处理新鲜的毛稔果实10min，捞出后直接使用匀浆机处理至匀浆，经超微粉碎胶体磨，调整磨齿间隙至粉碎粒径20μm，获得毛稔果实超细粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入50mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为600W，60℃超声处理25min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，收集上清液；用醋酸调节pH至6，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
对比例1
取新鲜毛稔果实清洗干净，自然晾干，采用中药粉碎机粉碎至75μm，获得毛稔果实粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入50mL的提取液，所述提取液为乙醇体积浓度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超声仪器中，设置超声功率为600W，60℃超声处理25min；超声处理后的提取液，4200g离心30min，用醋酸调节pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
对比例2
取新鲜毛稔果实清洗干净，自然晾干，采用中药粉碎机粉碎至75μm，获得毛稔果实粉末；精确称量2g的毛稔果实超细粉末，加入提取液进行热回流提取3次，所述提取液为乙醇体积浓度90％的乙醇水溶液，每次提取2小时，每次用提取液50mL，合并提取液，浓缩至无醇味，浓缩液依次用石油醚(80mL×3次)、乙酸乙酯(80mL×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物；减压浓缩，80℃蒸干得毛稔果实提取物。
抗氧化能力评价
将实施例1～8，对比例1～2毛稔果实提取物用去离子水稀释到能抑制20％～80％的空白吸光度，采用ABTS法测定抗氧化能力，选择Trolox作为参照标准。
表1各例提取的毛稔果实提取物的TEAC值
如表1所示，实施例1～5和7制备的毛稔果实提取物的TEAC值高于900(μmol Trolox/g DW)，说明在此提取工艺下，能够最大程度地保留毛稔果实提取物的抗氧化活性。对比例1与实施例1～3的区别在于毛稔果实粉末的制备，可见超微粉碎工艺更利于毛稔果实提取物抗氧化物活性的保留；对比例2是采用常规工艺提取毛稔果实的抗氧化物，其TEAC值达到814.59μmol Trolox/g DW，亦有较好的提取效果。
毛稔果实提取物的多酚类成分分析
分别准确称取适量多酚类标准物质(绿原酸、咖啡酸、大豆黄素、雌马酚、表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、阿魏酸、染料木素、黄豆黄素、对羟基肉桂酸、原儿茶酸、槲皮素、芦丁、白藜芦醇)，用甲醇溶解，制得质量浓度均为1g/L的单标准储备液。再取适量体积的单标准储备液置于容量瓶中，用甲醇定容，制备成浓度为1mg/L的混合标准储备液。用同样的方法稀释实施例1的毛稔果实提取物，作为样品液。
采用AB Sciex 4000Qtrap液相色谱串联质谱仪，对提取物中的多酚类成分进行定性和定量。利用Acquity HSS T3柱对成分进行分离。流动相由溶液A(0.1％甲酸溶液，V/V)和溶液B(甲醇)组成，流动相流速为0.3ml/min。梯度洗脱程序为：0-2min，15％B；2-8min，15-30％B；8-15min，30-80％B；15-17.5min，80％B；17.5-19.5min，15％B。进样量为2μL。离子源：电喷雾离子源，扫描方式：多离子反应监测，离子源温度：550℃，毛细管电压：-4.5KV。
结果显示：在毛稔果实提取物中，鉴定出了7种多酚类成分。其中包括表儿茶素没食子酸酯(1019.57±99.39μg/g DW)，表儿茶素(90.34±4.84μg/g DW)，芦丁(61.6±1.59μg/g DW)，表没食子儿茶素(28.67±2.62μg/g DW)，原儿茶酸(3.22±0.23μg/g DW)，绿原酸(2.34±0.28μg/g DW)，槲皮素(1.39±0.18μg/g DW)。