一种以箬叶或箬叶提取物为活性成分的药物的制作方法

本发明属于医药领域，涉及箬叶提取物舒张预收缩的气管平滑肌，具体涉及以箬叶提取物为活性成分的用于治疗、预防、缓解或改善能够通过舒张平滑肌而治疗、预防、缓解或改善的疾病。
背景技术：
：目前，随着空气质量的日益下降，呼吸道系统疾病逐渐引起人们的关注。呼吸道系统疾病有多种，包括上呼吸道感染性疾病(感冒、咽炎、喉炎、扁桃体炎)和下呼吸道感染性疾病(气管炎、急慢性支气管炎、肺炎、哮喘)。此外，在2016年4月国家发布的重点防控的“5个重大慢性非传染性疾病”中的慢性气道阻塞性疾病(COPD)，这是一种以气流受限为特征的可以预防和治疗的疾病，包括慢性阻塞性肺气肿，慢性阻塞性心脏病。当哮喘或者COPD患者疾病发作时，会伴随着气道异常收缩、气道狭窄，导致病人无法正常呼吸，从而威胁生命安全。慢性阻塞性肺疾病(ChronicObstructivePulmonaryDisease，COPD)是一种常见的可防可治的持续性进展性不完全可逆性气流受限性疾病，常伴有气道和肺对有害颗粒或气体的慢性炎症反应。慢性阻塞性肺疾病是严重危害人类健康的常见病和多发病，其发病率、致残率和死亡率呈逐年增高趋势，并导致了严重的、持续增长的经济负担与社会负担。预计至2020年，COPD疾病负担将位列第五，世界范围内死亡原因第三位。目前为止，COPD的病因及发病机制尚未完全清楚。目前认为吸烟是COPD最重要的病因。呼吸道系统的另一种疾病哮喘也受到人们的重点关注。哮喘，又称支气管哮喘，是一种由多种细胞及细胞组分参与的气管慢性炎症性疾病，常伴有反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状。哮喘发作时，气管异常收缩，无法舒张，使患者呼吸困难，从而威胁患者生命。与COPD相比，哮喘疾病不仅本身不容易完全根治，而且还会引发多种其他疾病，比如：自发性气胸、肺部感染、呼吸衰竭、慢性支气管炎、肺气肿、肺心病等等。哮喘的周期性发作会导致患者失眠、疲劳、活动量减小，严重影响正常的学习工作。近年来，随着我国空气质量的恶化以及雾霾天气的频繁出现，哮喘的患病率和死亡率正逐年升高，目前，全世界约有三亿哮喘患者，中国约有一千万左右哮喘患者，哮喘已然成为一种严重威胁人类健康的慢性呼吸系统疾病。目前的医疗水平仍然不能根治哮喘，只能通过药物控制哮喘发作以及减缓哮喘发作时的症状。因为哮喘发病的病理基础是气管慢性炎症，所以治疗哮喘的基本原则是抗炎。哮喘发作时可通过药物缓解哮喘症状，周期性的吸入固醇类药物可以控制哮喘的发展。容易复发的哮喘患者必须坚持长期规律性的服用药物来控制气管慢性炎症，控制哮喘病情的恶化。所以从患者和社会的角度来看，控制哮喘的花费是很高的。哮喘有三个重要的特征：气管平滑肌收缩性增强、气管高反应(AirwayHyperReactivity，AHR)以及气管重塑(AirwayRemodeling)。气管平滑肌的异常收缩是哮喘患者发病时呼吸困难的主要原因。因此，可以从舒张气管平滑肌着手，寻找能更安全有效的治疗哮喘的药物。哮喘治疗应采取综合治疗手段，包括：避免接触过敏原及其他哮喘触发因素，规范化的药物治疗，特异性免疫治疗等等。治疗哮喘的药物可以分为控制药物和缓解药物。其中控制药物是指需要长期每天使用的药物。这些药物主要通过抗炎作用使哮喘维持临床控制或者是通过舒张气管平滑肌、降低微血管的通透性、增加气道上皮纤毛的摆动等，缓解哮喘症状。其中包括吸入糖皮质激素(简称激素)全身用激素、白三烯调节剂、长效β2-受体激动剂(长效β2-受体激动剂，须与吸入激素联合应用)、缓释茶碱、抗IgE抗体等。哮喘治疗的目标是实现控制哮喘，吸入糖皮质激素(inhaledcorticosteroids，ICS)是长期控制哮喘的首选药物。[1]此种方式要求患者主动按时吸入药物，且具有一定的副作用，比如：糖皮质激素可抑制机体的免疫功能，长期服用可诱发感染或加重感染；长期大量应用糖皮质激素可引起物质代谢和水盐代谢紊乱，出现类肾上腺皮质功能亢进综合征；还可能诱发高血压和动脉粥样硬化等。白三烯作为哮喘病理生理过程中的主要脂溶性炎症介质，是哮喘治疗的重要靶点之一。[2]白三烯调节剂也已用于哮喘治疗，但治疗效果不如吸入糖皮质激素。虽然有文献报告接受这类药物治疗的患者可出现Churg-Strauss综合征，但其与白三烯调节剂的因果关系尚未肯定。药物治疗最大的弊端是接受治疗的患者容易产生耐药性，导致药物的剂量增加药效减弱。并且哮喘不能根治，需长期用药，所以昂贵的医疗费用也使很多患者无法承受。茶碱缓释片可适用于支气管哮喘、喘息型支气管炎。阻塞性肺气肿等，缓解患者的喘息症状。但是茶碱缓释制剂不适用于持续性哮喘或急性支气管痉挛发作的患者。茶碱的有效血浓度安全范围很窄，容易发生中毒。已有研究发现，氨茶碱血药浓度大于20μg/mL时可能引起心率加快、恶心、呕吐等不良反应。[3]如果选用天然植物，从中提取有效成分，可以舒张气管平滑肌，价格低廉，毒副作用小，则该有效成分有望开发为治疗哮喘和COPD等能够通过舒张平滑肌而治疗的高效药物。箬叶，俗称粽子叶，拉丁学名：CommonAspidistra，为多年生常绿草本，它的地下部具有粗状根茎，叶柄直接从地下茎上长出，一柄一叶，带有挺直修长叶柄的片片绿叶拔地而起，故名一叶兰。主要分布于长江以南各省区，在中国此植物使用广泛，还可以用来加工制造箬竹酒、饲料、造纸及提取多糖等。目前，针对箬叶的研究限于箬叶单糖、多糖及其衍生物、总黄酮的提取相关方面。而且利用箬叶或其提取物舒张气管平滑肌治疗疾病诸如哮喘方面的研究，尚未见国内外有相关报道。参考文献：[1]中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南(支气管哮喘的定义、诊断、治疗和管理方案)[J].中华结核和呼吸杂志,2008,31(3)：177-185.[2]Peter-GoldenM,HendersonJrWR.Leukotrienes[J].NEnglJMed,2007,357(18):1841-1854.[3]袁晓春,杨丽君,邓银华,等.氨茶碱治疗支气管哮喘的血药浓度监测与疗效分析[J].医学临床研究,2007,24(10):1807-1808.技术实现要素：为解决现有技术的不足，通过大量的实验，本发明的发明人发现箬叶提取物能够舒张由氯化钾或乙酰胆碱诱导的预收缩的小鼠气管平滑肌，进而本发明提供了一种用于舒张平滑肌，治疗、预防、缓解或改善能够通过舒张平滑肌而治疗、预防、缓解或改善的个体的疾病，或降低个体患有能够通过舒张平滑肌而治疗、预防、缓解或改善的疾病的风险的药物，所述药物以箬叶、箬叶植株其他部位或箬叶植株不同部位的混合物为药用材料、以箬叶提取物为活性成分、或以箬叶提取物为唯一活性成分。在一些实施方案中，所述平滑肌是气管平滑肌。在一些实施方案中，所述平滑肌是人气管平滑肌或小鼠气管平滑肌。在一些实施方案中，所述个体为人。在一些实施方案中，所述疾病选自：哮喘、慢性阻塞性肺病COPD。在一些实施方案中，所述箬叶提取物是箬叶的氯仿提取物。在一些实施方案中，所述箬叶提取物的提取步骤如下：取箬叶粉，浸泡于乙醇溶液中，加热回流；将所得滤液蒸干，得到箬叶的乙醇浸膏；用水将所述箬叶的乙醇浸膏全部溶解，用石油醚萃取；用氯仿萃取，将所得氯仿萃取液蒸干得到浸膏，即得到箬叶提取物。在一些实施方案中，所述箬叶提取物的提取步骤如下：将干箬叶粉碎成粉末；取所得箬叶粉，浸泡于80-90％乙醇溶液中，其中料液比为1:15-25，70-90℃回流1-5小时；收集所得滤液，将收集的所述滤液蒸干，得到箬叶的乙醇浸膏；用水将箬叶的乙醇浸膏全部溶解，用石油醚萃取1-5次；用氯仿萃取1-5次，将所得氯仿萃取液蒸干得到浸膏，即得到箬叶提取物。在一些实施方案中，所述箬叶提取物的提取步骤如下：用中药粉碎机将干箬叶粉碎成粉末；取250g所得箬叶粉，浸泡于5L85％乙醇溶液中，85℃回流3小时；收集所得滤液，用旋转蒸发器蒸干，得到箬叶的乙醇浸膏；用适量超纯水将箬叶的乙醇浸膏全部溶解，用石油醚萃取3次，每次300mL；用氯仿萃取3次，每次300mL，所得氯仿萃取液用旋转蒸发仪蒸干得到浸膏，即得到箬叶提取物。本发明还提供了一种箬叶提取物的提取方法，所述方法包括如下步骤：将干箬叶粉碎成粉末；取所得箬叶粉，浸泡于80-90％乙醇溶液中，其中料液比为1:15-25，70-90℃回流1-5小时；收集所得滤液，将收集的所述滤液蒸干，得到箬叶的乙醇浸膏；用水将箬叶的乙醇浸膏全部溶解，用石油醚萃取1-5次；用氯仿萃取1-5次，将所得氯仿萃取液蒸干得到浸膏，即得到箬叶提取物。在一些实施方案中，所述箬叶提取物的提取步骤如下：用中药粉碎机将干箬叶粉碎成粉末；取250g所得箬叶粉，浸泡于5L85％乙醇溶液中，85℃回流3小时；合并所得滤液，用旋转蒸发器蒸干，得到箬叶的乙醇浸膏；用适量超纯水将箬叶的乙醇浸膏全部溶解，用石油醚萃取3次，每次300mL；用氯仿萃取3次，每次300mL，所得氯仿萃取液用旋转蒸发仪蒸干得到浸膏，即得到箬叶提取物。在不存在技术障碍的情况下，上述各个特征之间是可以组合的。本发明的有益效果：通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测，发现箬叶提取物具有高效的舒张气管平滑肌的作用，有望应用于缓解哮喘患者发作时气道阻塞的症状。而我们选用天然植物，从中提取有效成分，可以舒张气管平滑肌，价格低廉，毒副作用小，有望开发为治疗哮喘和COPD等能够通过舒张平滑肌而治疗的高效药物。附图说明图1示出了箬叶提取物舒张高钾诱导的气管平滑肌的预收缩情况。图2示出了DMSO对高钾诱导的预收缩的气管平滑肌的影响情况。图3示出了箬叶提取物舒张乙酰胆碱诱导的气管平滑肌的预收缩情况。具体实施方式为了更好的解释本发明的技术方案，下面结合附图详细介绍本发明的实施例。以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的固定或限制。若未特别指明，实施例中所用的技术特征可以替换为具有在不背离发明构思前提下等同或相似功能或效果的其他本领域已知的技术特征。1.箬叶成分的提取将未经任何化学方法处理的新鲜箬叶(产地：湖北利川)直接晒干，然后用中药粉碎机将其粉碎成粉末。取250g所得箬叶粉，浸泡于5L85％乙醇溶液中，即料液比为1:20，85℃回流3小时。收集所得滤液，用旋转蒸发器蒸干，得到箬叶的乙醇浸膏。用适量超纯水将箬叶的乙醇浸膏全部溶解，用石油醚萃取3次，每次300mL，以去除色素、油脂等不期待的物质。然后用氯仿萃取3次，每次300mL，所得氯仿萃取液用旋转蒸发仪蒸干得到浸膏，约为原材料干重的0.32％。即得到箬叶提取物。箬叶提取物溶解于10％的DMSO(用PSS溶液将纯DMSO稀释成10％的DMSO)中用于舒张气管平滑肌的实验检测。其中，称取100mg箬叶提取物溶于1mL的10％DMSO中，即得到用于实验的100mg/mL的箬叶提取物母液。2.小鼠气管的体外分离术雄性成年的BALB/c小鼠颈椎脱臼法处死，将小鼠腹部朝上固定在解剖板上，剪开胸腔，暴露出心肺组织，移除心脏之后取下从喉结至肺部的一整段组织，将取下的组织马上浸泡于PSS溶液(NaCl135mM，KCl5mM，MgCl21mM，CaCl22mM，HEPES10mM，Glucose10mM，用NaOH调pH至7.4)中，然后将取下的组织转移至胶板上进行进一步分离。在体视显微镜下用维纳斯剪小心去除气管外周的结缔组织及内腔中的残留血液，分离出5-7mm左右的主气管环。3.箬叶提取物舒张高钾诱导的气管平滑肌的预收缩实验用HV-4型离体组织器官恒温灌流系统测定离体小鼠气管平滑肌肌张力，将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器(JH-2型)后置于内有6mLPSS并持续通氧的37℃的恒温水浴槽中。前负荷调至300mg，开始平衡。平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用80mM高钾溶液(H-K，成分为氯化钾)溶液进行预刺激，充分刺激组织活性后更换新的PSS溶液洗脱掉刺激物氯化钾，至张力恢复至基线。30min后即可开始试验。使用80mM高钾溶液(H-K)溶液再次进行刺激，然后按照浓度梯度加入10％DMSO溶解的箬叶提取物母液，使箬叶提取物在测试体系中的浓度梯度为0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL，其随时间的变化情况见表1。观察箬叶提取物对预收缩的气管环的舒张情况。采用未溶解箬叶提取物的DMSO做对照试验，其他步骤的原理与上述实验相同。上述实验所用母液为含100mg/mL的箬叶提取物的10％DMSO溶液，浓度梯度中最大值为3mg/mL箬叶提取物，该浓度下相当于约含有0.3％DMSO。采用最大浓度，即0.3％DMSO来检测其对经氯化钾预收缩的小鼠气管平滑肌舒张的影响，实验结果如图2所示。实验结果如图1所示，参见左图，离体小鼠气管环在80mM高钾溶液中发生稳定持续的预收缩，浓度依赖性地加入箬叶提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，直至降到收缩前的基线水平。箬叶提取物舒张氯化钾预收缩的气管平滑肌的百分比的变化情况参见图1右图，其具体数值参见表1。表明箬叶提取物可完全舒张高钾引起的气管平滑肌收缩，且该药物作用呈现浓度依赖性。通过对照试验结果可以发现，DMSO对氯化钾诱导预收缩的气管平滑肌没有明显的舒张作用，这可以说明图1所示对氯化钾诱导预收缩的气管平滑肌起舒张作用的活性成分为箬叶提取物。表1：箬叶提取物舒张氯化钾预收缩的气管平滑肌的百分比加药浓度(mg/mL)舒张百分比(％)Sem(标准误)0.11.340.500.59.181.03128.071.601.562.822.57287.223.082.596.532.54398.611.484.箬叶提取物舒张乙酰胆碱诱导的气管平滑肌的预收缩实验用HV-4型离体组织器官恒温灌流系统测定离体小鼠气管平滑肌肌张力，将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器(JH-2型)后置于内有6mLPSS并持续通氧的37℃的恒温水浴槽中。前负荷调至300mg，开始平衡。平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用100μM乙酰胆碱(ACh)溶液进行预刺激，充分刺激组织活性后更换新的PSS溶液洗脱掉刺激物乙酰胆碱，至张力恢复至基线。30min后即可开始试验。使用100μM乙酰胆碱(ACh)溶液再次进行刺激，然后按照浓度梯度加入10％DMSO溶解的箬叶提取物母液，使箬叶提取物在测试体系中的浓度梯度为0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL，其随时间的变化情况见表。观察箬叶提取物对预收缩的气管环的舒张情况。实验结果如图3所示，参见左图，离体小鼠气管环在100μMACh溶液中发生稳定持续的预收缩，浓度依赖性地加入箬叶提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，直至降到收缩前的基线水平。箬叶提取物舒张乙酰胆碱预收缩的气管平滑肌的百分比的变化情况参见图3右图，其具体数值参见表2。表明箬叶提取物可完全舒张乙酰胆碱引起气管平滑肌收缩，且该药物作用呈现浓度依赖性。表2：箬叶提取物舒张乙酰胆碱预收缩的气管平滑肌的百分比加药浓度(mg/mL)舒张百分比(％)Sem(标准误)0.57.680.9219.852.271.517.792.78238.194.682.562.573.53380.873.183.592.692.11497.511.62综合比较图1和图3的曲线可以看出，箬叶提取物能够以相似的模式舒张由氯化钾或乙酰胆碱诱导的预收缩的小鼠气管平滑肌。这能够说明箬叶提取物舒张小鼠气管平滑肌不是直接拮抗氯化钾或乙酰胆碱而引起的，不具有氯化钾或乙酰胆碱诱导的依赖性，而是通过固有的机制舒张小鼠气管平滑肌，至少可以用于治疗、预防、缓解或改善能够通过舒张平滑肌而治疗、预防、缓解或改善的小鼠的疾病，或降低小鼠个体患有能够通过舒张平滑肌而治疗、预防、缓解或改善的疾病的风险。鉴于人与小鼠遗传基础与生理病理的相似性，箬叶提取物还可以用于治疗、预防、缓解或改善能够通过舒张平滑肌而治疗、预防、缓解或改善的人的疾病，或降低人个体患有能够通过舒张平滑肌而治疗、预防、缓解或改善的疾病的风险。植株不同部位存在主要成分的类型相同，只是含量不同，因此箬叶植株其他部位或箬叶植株不同部位的混合物或它们各自的提取物，均会存在上述相同或部分相同的作用。其他平滑肌与气管平滑肌有共同的生理基础，因此，本发明的箬叶提取物必然对其他部位的平滑肌也就有不同程度的舒张作用。植物不同提取方法提取的成分有交差重叠，因此，本领域常用的提纯方法提取的箬叶提取物，比如根部的提取物，只要能够舒张平滑肌，均落入本发明的实质，落入本发明的保护范围。根据本领域常规技术手段所制备的以箬叶或其提取物为主要活性成分或唯一活性成分的不同剂型，只要能够舒张平滑肌，均落入本发明的实质，落入本发明的保护范围。以上各个实施例只是用于进一步说明本发明，并不是用来限制本发明的保护范围，凡是基于本发明的构思所作出的等同变换及对本发明的各个技术方案显而易见的改进，均落入本发明的保护范围。当前第1页1 2 3