本发明属于高分子药物载体领域，具体涉及一种顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物及其制备方法。
背景技术：
顺铂是一种广谱抗癌药物，由于其四周有2个氯原子和2个氨分子，具有双官能团烷化剂的性质。在人体内，氯可被水解下来，形成活泼的带正电的水化分子，当顺铂进入细胞体内后，经过水解，一个氯缓慢被水分子取代，形成了高度活泼的铂络合离子[ptcl(h2o)(nh3)2]+，其中的水分子很容易脱离，使铂与dna碱基一个位点（鸟嘌呤或者腺嘌呤碱基的n7原子）发生配位。然后进一步水解掉另一个氯原子，顺铂与dna的另一条单链内两点或双链发生交叉联结。顺铂和dna的结合物然后被结构域蛋白基团（hmg）发生紧密联接，导致dna链纠缠，无法修复，最后使细胞发生凋亡。顺铂在临床上多以注射剂使用，但其在体内很快与蛋白质结合而失效，且顺铂半衰期长，体内存在严重的肾毒性、神经毒性、骨髓抑制等毒性和不良反应，临床应用受到限制。为了提高顺铂的治疗效果、降低药物毒副作用及靶向性输送药物到肿瘤组织，研究人员进行了很多有关高分子材料作为顺铂药物载体的研究，例如微球，微胶囊，脂质体，纳米粒子和水凝胶等。其中，纳米粒因其具有优益的尺寸优势、良好的生物相容性、生物可降解性、靶向性等优点备受关注。其中，具有靶向作用的纳米粒由于其进入人体后可随血液循环靶向到达病灶部位而不需要外科手术，减轻患者的痛苦，方便快捷等优点越来越受到科研工作者的关注。
透明质酸是广泛分布在软结缔组织细胞外基质中的主要蛋白多糖，具有良好的生物相容性和生物降解性，在临床医学中具有广泛的应用。研究发现，透明质酸与某些实体肿瘤和转移淋巴细胞表面存在的大量cd44受体亲和力很强。透明质酸作为抗肿瘤药物的靶向载体，可将较小的药物分子黏附在透明质酸的网状结构中或者将药物分子接枝到透明质酸类药物载体上，自组装形成纳米粒。由于透明质酸纳米粒具有良好的尺寸效应及随血液循环的能力，且能与肿瘤细胞表面的cd44受体靶向结合，使更多的药物分子进入肿瘤组织，增加了抗肿瘤药在肿瘤和淋巴结中的吸收和滞留时间，从而提高药物的疗效，降低了药物的毒副作用。
技术实现要素：
本发明的目的旨在提供一种顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物及其制备方法。本发明所需原料简单，制备工艺纯熟，制备周期短，易于操作，不需要昂贵的仪器，且制备的纳米复合物尺寸适中、生物相容性好、载药量大、具有良好的主动靶向作用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
醛基化透明质酸的制备：将透明质酸溶于双蒸水中，加入高碘酸钠，避光反应6h使其氧化。反应完成后，加入乙二醇反应30min，以终止氧化反应。然后将溶液转移至透析袋（mwco3500）中，在室温条件下透析3d，每隔6h换一次水，随后冷冻干燥3d，即得醛基化透明质酸。其中，透明质酸与双蒸水的质量比为：1:100，透明质酸的重复单元与高碘酸钠的摩尔比为：1:2，乙二醇与高碘酸钠的摩尔比为：1:1。
顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物的制备：将顺铂和醛基化透明质酸在37℃分别溶于双蒸水中，配成2mg/ml的顺铂溶液和10mg/ml的醛基化透明质酸溶液。在37℃超声作用下，将上述顺铂溶液逐滴滴加到醛基化透明质酸溶液中，然后室温搅拌2d，即可形成顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物。将所得纳米复合物溶液置于透析袋（mwco2000）中透析6h除去未反应的顺铂，之后进行预冻，再转入真空冷冻干燥箱中冷冻干燥3d，即得干燥的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物，其粒径为170-200nm。所述醛基化透明质酸与顺铂质量比为：1:0.1-0.5。
本发明的显著优点在于：本发明所制备的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物，顺铂是通过与醛基化透明质酸上的醛基和羧基发生席夫碱反应或离子配位反应，形成以亚胺键或配位键连接的顺铂透明质酸复合物，复合物再通过自组装形成顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物。通过此种方式的纳米复合物，用于静脉注射给药时，顺铂以稳定方式负载，具有一定的缓释效果，不易发生突释，且纳米复合物中透明质酸对肿瘤细胞具有靶向作用，减少了顺铂在正常组织的聚集，更多的作用于肿瘤部位，达到在肿瘤治疗中高效减毒的目的。
附图说明
图1是顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物载药体系扫描电镜图（醛基化透明质酸与顺铂的质量比为1:0.4）。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不仅仅限于这些实施例。
实施例1
1）取1.000g透明质酸于100ml双蒸水中，磁力搅拌充分溶解；
2）称取0.563g氧化剂高碘酸钠加入步骤1）得到的溶液中，避光反应6h；
3）在步骤2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反应30min，以终止氧化反应；
4）将步骤3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室温下透析3d，期间每隔6h换一次水；
5）将步骤4）透析后得到的溶液真空冷冻干燥3d得到醛基化透明质酸固体；
6）称取1.000g醛基化透明质酸，加入100ml双蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明质酸溶液；
7）称取100mg顺铂，加入50ml双蒸水中，于37℃充分溶解得到顺铂溶液；
8）超声作用下将步骤7）得到的顺铂溶液逐滴滴加至步骤6）得到的醛基化透明质酸溶液之后转移至磁力搅拌器上室温搅拌2d；
9）将步骤8）制得的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物转移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）将步骤9）中透析后的纳米复合物转移至玻璃皿中进行预冻，再转入真空干燥箱中冷冻干燥3d，得到干燥的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物固体。
实施例2
1）取1.000g透明质酸于100ml双蒸水中，磁力搅拌充分溶解；
2）称取0.563g氧化剂高碘酸钠加入步骤1）得到的溶液中，避光反应6h；
3）在步骤2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反应30min，以终止氧化反应；
4）将步骤3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室温下透析3d，期间每隔6h换一次水；
5）将步骤4）透析后的得到溶液真空冷冻干燥3d得到醛基化透明质酸固体；
6）称取1.000g醛基化透明质酸，加入100ml双蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明质酸溶液；
7）称取200mg顺铂，加入100ml双蒸水中，于37℃充分溶解得到顺铂溶液；
8）超声作用下将步骤7）得到的顺铂溶液逐滴滴加至步骤6）得到的醛基化透明质酸溶液之后转移至磁力搅拌器上室温搅拌2d；
9）将步骤8）制得的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物转移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）将步骤9）中透析后的纳米复合物转移至玻璃皿中进行预冻，再转入真空干燥箱中冷冻干燥3d，得到干燥的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物固体。
实施例3
1）取1.000g透明质酸于100ml双蒸水中，磁力搅拌充分溶解；
2）称取0.563g氧化剂高碘酸钠加入步骤1）得到的溶液中，避光反应7h；
3）在步骤2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反应30min，以终止氧化反应；
4）将步骤3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室温下透析3d，期间每隔6h换一次水；
5）将步骤4）透析后的得到溶液真空冷冻干燥3d得到醛基化透明质酸固体；
6）称取1.000g醛基化透明质酸，加入100ml双蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明质酸溶液；
7）称取300mg顺铂，加入150ml双蒸水中，于37℃充分溶解得到顺铂溶液；
8）超声作用下将步骤7）得到的顺铂溶液逐滴滴加至步骤6）得到的醛基化透明质酸溶液之后转移至磁力搅拌器上室温搅拌2d；
9）将步骤8）制得的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物转移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）将步骤9）中透析后的纳米复合物转移至玻璃皿中进行预冻，再转入真空干燥箱中冷冻干燥3d，得到干燥的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物固体。
实施例4
1）取1.000g透明质酸于100ml双蒸水中，磁力搅拌充分溶解；
2）称取0.563g氧化剂高碘酸钠加入步骤1）得到的溶液中，避光反应6h；
3）在步骤2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反应30min，以终止氧化反应；
4）将步骤3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室温下透析3d，期间每隔6h换一次水；
5）将步骤4）透析后的得到溶液真空冷冻干燥3d得到醛基化透明质酸固体；
6）称取1.000g醛基化透明质酸，加入100ml双蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明质酸溶液；
7）称取400mg顺铂，加入200ml双蒸水中，于37℃充分溶解得到顺铂溶液；
8）超声作用下将步骤7）得到的顺铂溶液逐滴滴加至步骤6）得到的醛基化透明质酸溶液之后转移至磁力搅拌器上室温搅拌2d；
9）将步骤8）制得的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物转移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）将步骤9）中透析后的纳米复合物转移至玻璃皿中进行预冻，再转入真空干燥箱中冷冻干燥3d，得到干燥的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物固体。
实施例5
1）取1.000g透明质酸于100ml双蒸水中，磁力搅拌充分溶解；
2）称取0.563g氧化剂高碘酸钠加入步骤1）得到的溶液中，避光反应6h；
3）在步骤2）得到的溶液中加入0.163g乙二醇反应30min，以终止氧化反应；
4）将步骤3）得到的溶液置于mwco3500的透析袋中于室温下透析3d，期间每隔6h换一次水；
5）将步骤4）透析后的得到溶液真空冷冻干燥3d得到醛基化透明质酸固体；
6）称取1.000g醛基化透明质酸，加入100ml双蒸水中，于37℃溶解得到醛基化透明质酸溶液；
7）称取500mg顺铂，加入250ml双蒸水中，于37℃充分溶解得到顺铂溶液；
8）超声作用下将步骤7）得到的顺铂溶液逐滴滴加至步骤6）得到的醛基化透明质酸溶液之后转移至磁力搅拌器上室温搅拌2d；
9）将步骤8）制得的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物转移至mwco2000透析袋中避光透析6h；
10）将步骤9）中透析后的纳米复合物转移至玻璃皿中进行预冻，再转入真空干燥箱中冷冻干燥3d，得到干燥的顺铂-醛基化透明质酸纳米复合物固体。
以上所述仅为本发明的制备方法，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。