青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤药的应用的制作方法

本发明涉及医疗卫生领域，具体涉及对人体基本无毒副作用且效果极佳的药物，该药物是指将青蒿琥酯作为白血病肿瘤靶向抑制stat3的化疗药物。

背景技术：

近年来，随着工作压力大、环境、食物、放射性物质等各类内外因素，肿瘤的患者群体数量一直呈高速增长的趋势。白血病（leukemia）是造血干/祖细胞恶性疾病。以骨髓与外周血中原始和幼稚细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等，多数病例病情急重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命。有化疗、诱导分化（全反式维甲酸）、骨髓移植等疗法。

现有治疗方法，多采用放/化疗及骨髓移植，但骨髓移植对人体的损伤极大，不仅还会产生移植物抗宿主等副作用，也即是说有明显的排异反应，即使这样，仍然有复发的可能，而放/化疗的过程不仅会杀死肿瘤细胞，还同时会杀死人体健康细胞，从而使患者体质虚弱免疫力下降，多数白血病患者体内的肿瘤细胞又会死灰复燃，无病生存率低。所以纯西医的方法治疗白血病存在极大的隐患，而治疗过程也极为痛苦，毒副作用比较大。

随着对普通民众对中医药认识的逐步加深，且中药的毒副作用小的特点（合理配伍的情况下，甚至可以做到没有副作用），越来越多的研究者开始研究中医药治疗肿瘤，但中医采用辩证的方法根据人体的不同症状施药治疗，不同的肿瘤，药方不同，药方中作为主治效果的君药也不同，所以就出现同一味药，不同病症的药方中作用不同。例如：甘草，如果是在咳嗽的患者药方中，甘草的作用是润肺止咳的效用，但在多数含有药性较烈的药方中，甘草起的作用是缓和药性、甚至是去除药方毒性的佐或使的作用。中医辩证的过程对医生的要求较高，如果辩证错误，甚至可能导致对人体的极大的损伤。

为解决西药规范化但对人体有害、而中药需一人一方推广有困难的技术问题，所以才有了将中药组方的君药或臣药有效成分提取物进行提取处理，在无极大毒副作用的前提下（微小、对人体无本质伤害的），作用于人体，摒弃君药或臣药中对人体有毒害的成分，可以使对相关病征的某些有效的抑制、灭杀成分直达病灶，这种做法既不会对患者造成较大的操作，还可以利用西医的规范化治疗方法对病征进行及时有效的治疗。这种思路下，既避免现有技术放/化疗手段的对身体的损伤，同时还保证了治疗的效果。将中医和西医结合起来，采用西医的快速精准诊断、标准化给药方式、中药提取物的有效成分区分，合力构成以中药提取物对各病征进行精准、有效治疗。

从西医的角度来讲，肿瘤属于局部组织细胞增生所形成的新生物（neogrowth），因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物。但同样是人，为什么有人患肺肿瘤，但有人却是患肝肿瘤，还有的人是白血病肿瘤。在西医里是不需要分析原因，把坏细胞杀死（可能治疗过程中，把好的细胞也一并杀死了），而中医则讲究究竟是人体的什么地方出了问题从而导致肿瘤的发生，而针对该问题采用什么样的药物，具体到中西医结合时，就是药物中哪些有效组分是起作用的，选用中药针对该病征的有效成分，忽略药物其它成分对人身体起其它作用的，并且应用西医的规范、标准化治疗应用于绝大多数的患者，并且取得较好的治疗效果。而具体采用哪些中药的哪些有效成分应用于哪种病症，就是创新点所在。

据报道，我国各地区白血病的发病率在各种肿瘤中占第六位。尽管目前已使用包括强化疗和造血干细胞移植等治疗方案，其复发率仍接近40-50%，总体预后差，3年无病生存率仅30%。因此研发新的安全、有效且低毒性的药物来改善白血病的预后是非常重要的。

白血病的中医辩证结论如下：（1）气阴两虚症状：神疲乏力，低热，五心烦热，自汗盗汗，衄血或紫斑，时隐时现，面色不华。舌嫩红，苔薄白，脉细数无力。多见于贫血为主的白血病。证候分析：体弱久病或饮食失调而致元气不足，脏腑虚衰，故神疲乏力，面色不华；气虚表卫不固，则自汗；气虚不能统摄，血因之而外溢，或见衄血，或紫斑时隐时现；虚火内扰，可见低热，五心烦热，盗汗等；舌嫩红，苔薄白，脉细数无力，为气阴两虚之征。辨证施治：益气养阴，泻火解毒。（2）热毒炽盛症状：起病急，壮热口渴，骨节疼痛，肌肤灼热，周身出现瘀点，时有肌衄，鼻衄，齿衄，小便黄赤，大便秘结。舌苔垢腻，脉滑数。多见于以发热为主的白血病。证候分析：正气不足，毒邪易侵，热毒由表入里，伤及营阴，营血热炽，故起病急，壮热口渴，肌肤灼热；阴精受损，内热熏蒸，热伤血络，迫血妄行，故见周身瘀点，肌衄，鼻衄，齿衄；累及于肾，而肾主骨，故有关节疼痛；；小便黄赤，大便秘结，舌苔垢腻，脉滑数均为热毒炽盛之象。辨证施治：清热解毒，凉血泻火。（3）痰瘀阻结症状：身微热，面色不华，神疲乏力，颌下、颈部、腋窝痰核，不红不痛，或腹内疤积，骨节疼痛。舌淡紫，苔薄，脉弦滑或弦数。多见于淋巴细胞性白血病。证候分析：精气内虚，毒邪乘虚而入，耗伤气阴，故见身微热，神疲乏力，面色不华；病程稍久，气血亏虚汽滞血瘀，脉络阻塞，结于胁下，形成疤块，留于肢节，可见骨节疼痛；气不化津，聚液成痰，与瘀血交阻，而见颌下、颈部、腋窝痰核；舌淡紫，苔薄，脉弦滑为痰瘀互结之征。辨证施治：清热行瘀，消痰散结。

青蒿琥酯（artesµnate，art）是从菊科植物黄花蒿（artemisiaannual）中提取出来的一种半合成衍生物，是一线的抗疟药物，不良反应轻微，临床应用安全性高。它不仅具有显著的抗疟效应，而且还具有抗病毒、抗炎、抗血管生成、抗癌等多种生物功能。近年来，关于art抗癌作用的研究较多,发现art对多种癌细胞有抗癌效应。art能抑制食管鳞状细胞癌和肝癌细胞hepg2的增殖和迁移；诱导人恶性胶质瘤细胞ln-229和人神经鞘瘤细胞死亡；诱导人乳腺癌细胞自我吞噬；诱导胰腺癌细胞和人肾癌细胞胀亡等。青蒿琥酯是青蒿素衍生物，与青蒿素相比，具有水溶性好、抗疟疗效更强的特点。目前，还有研究表明青蒿素及其衍生物以其独特的抗肿瘤机制，可以选择性地杀伤肿瘤细胞而对正常细胞只有轻微影响，与传统化疗药物不存在交叉耐药；还可通过抑制谷胱甘肽转移酶的活性而逆转肿瘤细胞的多药耐药性，与传统化疗药物同时应用可起到协同增效的作用。

技术实现要素：

为解决现有技术采用西医治疗的白血病肿瘤对人体的损伤、放/化疗效果不佳，治疗后普遍生存时间短的技术问题，本发明提供青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤药的应用，可以大大提高治疗过程中对白血病肿瘤的抑制，提高患者的有治疗有效率、治愈率，延长患者的生存时间，减少治愈后的复发率。

青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤药的应用，其特征在于：所述的青蒿琥酯作为白血病肿瘤靶向抑制stat3的化疗药物。

本发明采用青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤靶向抑制的化疗药物，可以快速、有效的抑制stat3的表达水平，从而实现对白血病的治疗，青蒿琥酯对thp-1细胞增殖有很强的抑制作用，通过流式细胞术检测发现art能诱导thp-1细胞凋亡，进一步用westernblot方法证明了art能显著降低stat3蛋白水平，同时激活caspase8、caspase3蛋白从而诱导细胞凋亡。通过对thp-1细胞移植瘤鼠模型腹腔注射art后发现art能明显抑制肿瘤的生长，并且下调肿瘤组织中的stat3表达水平。这些实验结果表明，art通过下调stat3的表达，同时激活凋亡蛋白caspase8、caspase3从而发挥对thp-1的抗肿瘤效应。

附图说明

图1、stat3蛋白水平在白血病患者中增高实验结果图。

图2、art对thp-1细胞增殖呈剂量依赖性（图中a部分）及时间依赖性（图中b部分）抑制作用实验结果图。

图3、art抑制thp-1细胞中stat3蛋白的表达，同时激活caspase8、caspase3的表达实验结果图。

图4、art通过caspae8和caspase3的活化诱导凋亡实验结果图。

图5、art对stat3在thp-1细胞裸小鼠致瘤性中的抑制作用活体实验解剖的小鼠的肿瘤体积图。

图6、art对stat3在thp-1细胞裸小鼠致瘤性中的抑制作用试验结果统计图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的说明：

青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤药的应用，其特征在于：所述的青蒿琥酯作为白血病肿瘤靶向抑制stat3的化疗药物。

进一步，所述的青蒿琥酯作为白血病肿瘤靶向抑制stat3的化疗药物时，与青蒿琥酯联合用药的还包括化疗药如如阿糖胞苷、柔红霉素、去甲氧柔红霉素、阿霉素、高杉尖酯碱、门冬酰胺酶、培门冬酰胺酶、全反式维甲酸、三氧化二砷、地塞米松，，选用上述的一类或几类与青蒿琥酯形成联合药物。

进一步的，青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤药的应用，其特征在于：所述的抗白血病肿瘤药为一组中药提取物组方，还包括熊果酸。

熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物。研究表明，熊果酸具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应。近年来，还发现熊果酸还具有抗致癌、抗促癌、诱导f9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用。将熊果酸与青蒿琥酯联合用作白血病肿瘤药时，熊果酸起“臣”药的辅助治疗作用，可以有效的延长青蒿琥酯的药物作用时间及效果，减少治疗时间，延长无病生存率有极好的效果。

进一步的，青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤药的应用，其特征在于：所述的抗白血病肿瘤药为一组中药提取物组方，还包括大黄素。

大黄，大黄是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称，也是中药材的名称。茎红色，气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有砂粒感。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖。除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。大黄具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效。大黄素，英文名称：emodin别名：朱砂莲甲素化学名：1'3'8-三羟基-6-甲基蒽醌分子式：c15h10o5分子量：270.23，大黄素是从蓼科植物虎杖的干燥根茎和根、掌叶大黄的根茎中提取而得的。大黄也被称为药中的猛张飞因其药性峻烈，也被称为药中将军，在抗白血病过程中，以大黄的刚猛峻烈，迅速发挥清热、泻火的作用。当白血病发病初期，快速的清热、泻火是治疗各型白血病的首要任务。

进一步的，青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤药的应用，其特征在于：含有大黄素的药在白血病肿瘤治疗中的前5天使用，而不含大黄素，只含熊果酸的中药组方用于后续的常规。大黄素相较于大黄，尽管药性相对温和，但不宜长期使用。

进一步的，所述的中药提取物组方中，青蒿琥酯、熊果酸、大黄素的重量比为1:（0.25-0.45）：（0.05-0.25）。

进一步的，所述的中药提取物组方组方中，青蒿琥酯、熊果酸、大黄素的重量比为1:0.35:0.15。

进一步的，所述的中药提取物组方组方在需要时，可加入药学上可接受的载体，载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂等，制成最终的药物形态为片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂、输液剂等。

stat3蛋白是一类由750~800个氨基酸组成的dna结合蛋白,有αβγ三种亚型,它因可介导细胞的恶性转化而被确认为癌基因,stat3在早期胚胎发育和骨髓细胞的分化中发挥着不可缺少的重要作用,此外它还参与了肿瘤的增殖、分化、血管生成、侵袭转移和免疫逃避等生理功能的调控。与stat3相关的几条信号转导通路特别是jak-stat信号转导通路在白血病肿瘤中呈激活状态,体内外阻断或抑制肿瘤细胞中stat3的信号通路可抑制细胞恶性增殖和存活,并诱导细胞凋亡,而对正常细胞却无影响。

一、体外抗白血病肿瘤活性实验：

实验目的：确定选取青蒿琥酯作为抑制白血病肿瘤成分时的作用原理、机制及效果。

下面的实现中会出现stat3/gapdh，gapdh是（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kda的亚基组成，分子量146kda，检测条带大约在36kda。gapdh基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作westernblot蛋白质标准化的内参。因为gapdh作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用gapdh内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的gapdh含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。

材料和方法

主要试剂及仪器

art购自桂林南药股份有限公司；rpmi1640培养液及胎牛血清均购自美国gibco公司;cck-8试剂盒购自于日本同仁化学试剂研究所；fitcannexinv凋亡试剂盒购于bdpharmingen公司；stat3、caspase3、caspase8抗体均购自美国abcam公司，gapdh抗体购自proteintech公司。

1.1研究对象

选取2015年1月-2016年1月间在我院就诊的治疗前白血病患者30例，其中男性18例，女性12例；中位年龄30（1-45）岁。对照组标本20例，均取自同期住院的非血液系统疾病病人，男性14例，女性6例，中位年龄28（5-50）岁。

1.2细胞培养

人单核细胞白血病细胞系thp-1细胞由馈赠。培养条件：以含10%胎牛血清的rpmi1640培养基培养于37℃、5%co2的培养箱中，每2-3天换液1次。实验时取对数生长期细胞。

1.3细胞增殖的cck-8实验

取对数生长期的thp-1细胞以5×104/孔接种于96孔板，培养液100µl/孔。分别以0、10、25、50、100、200µm干预thp-1细胞。实验分为三组：加药物干预的为实验组、不加药物而加等量药物稀释剂的为对照组、只加rpmi1640培养基的为空白组。培养24h、48h、72h后加入cck-8试剂10µl/孔，继续培养箱中孵育1-2小时，酶标仪450nm波长读取吸光度值。实验均重复3次，取平均值。按下列公式计算生长抑制率：

抑制率=[1-（实验组0d值/对照组od值）]×100%

1.4细胞凋亡检测

收集经不同浓度的art处理48h的thp-1细胞，用预冷的pbs洗涤2次，重悬细胞调整细胞浓度为5×105个/ml，移入5ml流式管中，分别加入5µlannexinv-fitc和5µl碘化啶（pi），轻轻涡旋细胞，室温下避光孵育15min，然后加入200µl结合缓冲液，上流式细胞仪分析。

annexinv－/pi－为有活力细胞，annexinv+/pi－为早期凋亡细胞，annexinv+/pi+为晚期凋亡细胞。

1.5裸鼠成瘤

4周龄雌性裸鼠（aalb/c-nµ）购买于北京华阜康生物科技股份有限公司，动物许可证号：scxk(京)2014-0004，饲养于spf（specific-pathogenfree）级动物实验室内。饲养1周后，取对数生长期的thp-1细胞，pbs漂洗2次，调整细胞浓度为1×107个/ml，每只裸鼠颈部皮下注射细胞量2×10⁶个，对照组注射0.2mlpbs。接种细胞4周后，注射部位成瘤，随机将裸鼠分为3组，生理盐水对照组、art100µm组、art200µm组。待肿瘤大小约0.5cm时开始腹腔注射给药。art粉剂120mg/支，5%nahco3溶液溶解药物后，加入生理盐水稀释至合适浓度，每周给药3次，共4周。

1.6westernblot检测患者骨髓及thp-1细胞中stat3的表达

实验分为两部分：白血病组和对照组分别取300µl骨髓，加入ip裂解液裂解细胞500µl；art作用于thp-1细胞分为5组：对照组、art10µm组、art25µm组、art50µm组、art100µm组。art作用48h后，离心1000rpm5min，弃上清，加ip裂解液裂解细胞，12000g4℃离心25min，取出上清，bca法蛋白定量。调整各组蛋白为相同浓度，加入上样缓冲液。配制10%的聚丙烯酰胺凝胶分离，采用bio-rad湿转系统进行转膜。5%脱脂奶粉室温封闭3小时，tbst稀释一抗，gapdh:1：5000;stat3：1:2000,4℃摇床孵育过夜。tbst洗膜后，加入辣根过氧化物标记的特异性二抗，1:5000比例稀释，摇床孵育1h，tbst洗膜后加入ecl化学发光检测，凝胶成像仪扫描。

实验的结果是基于本段的统计学处理原则：所有数据用spss13.0软件进行统计学处理，数据以均数±标准差(x±s)表示，两两比较采用t检验，p＜0.05表示差异有统计学意义。

图1中表示：stat3蛋白水平在白血病患者中增高。

westernblot检测白血病组及对照组骨髓标本中stat3蛋白的表达，采用灰度分析法计算stat3蛋白的相对表达量，结果发现30例白血病患者stat3蛋白的相对表达量较对照组显著升高（p＜0.05）。

图2中表示：art对thp-1细胞增殖呈剂量依赖性（图中a部分）及时间依赖性（图中b部分）抑制作用实验结果图。

art通过cck-8测定（a和b）分析的thp-1细胞诱导剂量和时间依赖性细胞毒性。art以剂量-（a）和时间-（b）依赖的方式降低细胞活力。将thp-1细胞分别暴露于各种浓度的art（0µ-200m）24h，48h和72h。白色泳道组表示用溶剂（生理盐水和碳酸氢钠注射，等体积的50μmart）处理，溶剂处理的细胞用作随后的实验中的对照，无指示。*p<0.05和**p<0.01，与未处理的细胞相比（0m面板中的第一个条）。

用不同浓度的art（0、10、25、50、100、200m）作用于thp-1细胞24h后，细胞活力明显下降，呈剂量依赖性。空白框表示溶剂组，即加入了50µl溶解青蒿琥酯的溶剂（包括5%碳酸氢钠注射液和生理盐水）组，实验结果显示与未加药组相比较，溶剂组细胞活力并没有明显的下降。于是在随后的实验中，我们将溶剂组设为实验组的对照组。24h半数抑制浓度（halfmaximalinhibitoryconcentration，ic50）约等于27.5m。

图3中表示：art抑制thp-1细胞中stat3蛋白的表达，同时激活caspase8、caspase3的表达实验结果图。

为了研究art诱导thp-1细胞凋亡的机制，将不同浓度的art10m、25m、50m、100m分别作用于thp-148小时，对照组加青蒿琥酯溶剂处理48h，采用westernblot方法检测stat3的表达情况，如图3所示。药物组stat3蛋白水平均较对照组显著下降，药物剂量越大，降低水平越明显（p＜0.05）。这些结果显示，art可能是通过抑制stat3蛋白表达从而诱导细胞凋亡。

图4中表示：art通过caspae8和caspase3的活化诱导凋亡实验结果图。

将thp-1（2×10⁶细胞/孔）接种到6孔板上后，未经处理或用10,25,50m的art处理48h。然后，将细胞固定并用流式细胞仪分析。用指定浓度的art处理thp-1细胞（2×10⁶细胞/孔）48小时。此后，用免疫印迹试验对caspase-8和caspase-3的特异性抗体通过western印迹分析等量的裂解物。相同的印迹被条纹化并用gapdh抗体重新编码以验证相等的蛋白质含量。

thp-1细胞分别使用art10m、25m、50m处理48h，对照组加水处理48h。采用westernblot方法检测caspase3及裂解的caspase3、caspase8蛋白表达水平。我们的数据显示art处理thp-1细胞后，caspase3及裂解的caspase3均增加，且随art浓度增加表达量上调。因此，art诱导thp-1细胞凋亡可能也通过了内在的线粒体介导凋亡通路。

art作用thp-1细胞48h后使用annexinv-fitc和5µl碘化啶（pi）双染法进行细胞凋亡分析。结果显示art对thp-1细胞具有诱导凋亡的作用。westernblot方法检查caspase3、caspase8蛋白表达证实art有诱导thp-1细胞凋亡的作用。

图5中表示：art对stat3在thp-1细胞裸小鼠致瘤性中的抑制作用活体实验解剖的小鼠的肿瘤体积图；

在htp-1、thp-1细胞（1×10⁶细胞/小鼠）诱导的裸小鼠人髓样白血病细胞中的art皮下注射到小鼠的侧腹中。根据肿瘤体积，将thp-1细胞注射4周后，将裸鼠随机分为3组。给予i组无菌水（0.2ml，ip三次/周），组ⅱ给予art（50mg/kg体重，ip，三次/周），组iii给予art（200mg/kg体重，ip，三次/周）。皮下植入骨髓性白血病肿瘤的小鼠的尸检照片。使用游标卡尺在尸体解剖实验的最后一天测量小鼠的肿瘤体积，并使用公式v=4/3πr3（n=5）计算。治疗4周后，检测各组裸鼠皮下瘤块的大小，发现与对照组相比，实验组art100m组、art200m组瘤块明显小于对照组（p＜0.05），提示art在裸鼠体内有抑制thp-1细胞生长的作用。

图6中表示：art对stat3在thp-1细胞裸小鼠致瘤性中的抑制作用试验结果统计图；

为了研究其机制，在结束art腹腔注射后，将对照组、实验组的瘤块研磨，提取总蛋白，进行westernblot实验检测stat3表达水平。结果发现与对照组相比，art100m和art200m组的stat3蛋白水平均有下降（p＜0.05）。

白血病患者中stat3表达情况，明确了在大部分白血病患者中，不管是儿童还是成人，确实存在有stat3的高表达。随后，我们研究了art是否能通过靶向影响stat3从而对单核细胞白血病细胞thp-1发挥抗肿瘤效应。我们采用了体外细胞实验和异种移植小鼠模型来验证这个假设。实验数据表明，在体外，art对thp-1细胞增殖有很强的抑制作用，通过流式细胞术检测发现art能诱导thp-1细胞凋亡，进一步用westernblot方法证明了art能显著降低stat3蛋白水平，同时激活caspase8、caspase3蛋白从而诱导细胞凋亡。通过对thp-1细胞移植瘤鼠模型腹腔注射art后发现art能明显抑制肿瘤的生长，并且下调肿瘤组织中的stat3表达水平。这些实验结果表明，art通过下调stat3的表达，同时激活凋亡蛋白caspase8、caspase3从而发挥对thp-1的抗肿瘤效应。

白血病细胞耐药的发生是白血病治疗成功的一个障碍。近年来，有研究报道持续激活的stat3信号与白血病的恶性程度和药物抵抗有关，抑制stat3信号会在一定程度上缓解白血病和促进白血病细胞的凋亡，因此，在临床上，靶向抑制stat3已成为治疗白血病的一种策略。

m.ilamathi发现art能靶向抑制肝癌细胞中的stat3激活从而发挥抗癌作用。我们的研究首次发现art能明显抑制thp-1细胞的增殖，并且促进thp-1细胞的凋亡，为了进一步阐明art抗白血病细胞的潜在机制，我们研究了art对thp-1细胞中stat3表达的影响，结果发现art能显著降低stat3的表达，其作用与剂量呈正比，这提示art可能是通过影响stat3信号通路从而发挥抗白血病效应。同样，我们采用相同的实验方法检测了art对all中jurkat细胞的影响，结果发现虽然art能抑制jurkat细胞的增殖，但并不能干扰jurkat细胞中stat3的表达，由此说明art可能是一种针对白血病中stat3的靶向药物。

本研究表明art不仅在体外对癌细胞有毒性作用，而且对裸鼠中人类移植瘤亦有明显的抗肿瘤活力，且副作用轻微。鉴于art能在体外抑制thp-1细胞的生长，为了检测art在体内抗白血病情况，我们成功地将thp-1在裸鼠颈部皮下成瘤，腹腔注射art后发现与对照组相比，art能明显抑制肿瘤的生长，且没有明显的不良反应。随后westernblot证明art下调了肿瘤组织中stat3的表达，由此进一步说明art的确具有抗白血病的效应。

细胞凋亡在肿瘤的发病机制中占有重要地位，抗凋亡是肿瘤细胞生存的关键因素。既往研究发现art能在体外诱导多种肿瘤细胞凋亡，但诱导凋亡的机制并不相同。例如，art通过刺激ros（活性氧簇）从而激活白血病t细胞的线粒体凋亡途径；通过激活caspase3和caspase9，同时下调bcl-2和bax的比例从而诱导mds（mds骨髓异常综合征）的skm-1（人骨髓增生异常综合征细胞株）细胞凋亡；通过激活bax、p21以及caspase3等诱导cml中kbm-5细胞凋亡。我们发现art能诱导thp-1细胞凋亡，进一步研究结果提示art能激活thp-1细胞中caspase3和caspase8两种凋亡蛋白。caspase8参与细胞凋亡的起始，caspase3参与细胞凋亡的执行。因此，我们的研究结果显示art诱导thp-1细胞凋亡的机制可能是首先激活caspase8启动凋亡，再进一步激活下游的caspase3执行凋亡。

总之，上述实验结果表明art在白血病细胞中的抗肿瘤效应主要是通过抑制stat3的表达，同时激活caspase8、caspase3的表达实现的。art可以成为白血病靶向抑制stat3的化疗药物。通过实验，加入熊果酸、大黄素的组方药物，效果无病生存率提升10%以上。

本发明的保护范围，不仅限于具体实施方式所公开的技术方案，凡将青蒿琥酯作为抗白血病肿瘤的主要成分，进一步的还包括熊果酸、大黄素作为抗白血病肿瘤的技术方案，以及在上述技术方案内容上的微小改进、等同替换，均属于本发明的保护范围。