青蒿烯在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种化合物的新应用，特别设及青葛締在制备抗肿瘤药物方面的新应 用。
【背景技术】
[0002] 青葛締 (Ademi Sitene)来源于植物黄花葛，其分子式为Cl巧20〇5，化学结构式为
分子量为280.32，不溶于水，可溶于乙醇和乙酸和常用有机溶剂。青葛 締是从菊科艾属植物黄花葛叶中提取分离得到的一种具有过氧桥的倍半祗内醋类化合物， 菊科艾属植物用于治疗追疾，中国古代医术中早有记载。目前，青葛素及其衍生物作为高效 低毒的抗追疾药己经得到了全世界的公认。青葛締 (Artemisitene)是青葛素合成的前体成 分之一，近年来研究发现，青葛素及其衍生物具有明显的抗肿瘤作用。公开号为 CN104825443A的中国专利申请公开了青葛締的抗氧化应用，在世界上首次鉴定青葛締是 化f2的激活子，可作为食品辅助剂广泛应用。在现有技术中，未有实验数据证实青葛締具有 特定的抗肿瘤的药理活性。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供青葛締的用途。
[0004] 实际上，上述青葛締的用途是青葛締在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的青 葛締的化学结构式为下式(I)所示，
[0006] 上述应用中，所述的药物由青葛締和医学上可接受的辅料组成，其中青葛締的重 量含量为0.5~30%。所述药物可W是注射剂，也可W是常见的口服制剂，如片剂和软胶囊。
[0007] 上述注射剂为每1000 ml含有青葛締500mg和氯化钢9g的水溶液，且pH值为3.0~ 5.5 O
[0008] 上述软胶囊的内容物由W下重量份的原料组成:青葛締30份，食用玉米油20份，稀 释剂40份。
[0009] 上述片剂由青葛締和成形剂组成，其中青葛締的重量含量为2.3~2.5%。
[0010] 本发明所述的应用是利用青葛締抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞调亡，来达到 抗肿瘤目的的，因此，本发明所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，具体是指所述的青 葛締在制备肿瘤细胞生长的抑制剂和肿瘤细胞调亡的诱导剂中的应用。
【附图说明】
[00川图巧小鼠肝肾切片肥染色显微照片，其中左边为肝，右边为肾。
【具体实施方式】
[0012] 例1(药理、药效实验）
[0013] 实验一青葛締对人肝癌细胞株化P3B2.1-7皮下移植瘤的抑制实验
[0014] 实验目的:研究青葛締对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。
[001引 1.实验材料
[0016] 1.1实验动物
[0017] 动物6~8周龄的NODSCID小鼠30只，体重18~22g，由北京维通利华实验动物技术 有限公司提供，合格证号：11400700123247。
[001引 1.2试剂
[0019]花生油（广东长兴食品贸易有限公司，批号090407);胎牛血清化yclone公司）；憐 酸盐缓冲液(PBS ,Hyclone公司）。
[0020] 1.3受试药物
[0021] 青葛締:购于天津±兰科技有限公司，批号A777550。取青葛締置于烧杯中，加入花 生油作为溶媒，加热，揽拌使溶解，放冷后加花生油至青葛締在花生油中的质量浓度为5mg/ ml,即得青葛締油溶液。
[0022] 1.4 仪器
[0023] 低速台式自动平衡离屯、机(DT5-3);C02培养箱（170R);倒置相差显微镜(CKX41奥 林己斯）；自动细胞计数仪(ounts化r IC-100);生物安全柜(BSC-1000IIAC)。
[0024] 2.方法
[0025] (1)将人肝癌细胞株化P3B2.1-7传代后，用0.25 %的膜蛋白酶消化细胞，用PBS调 整细胞数至IO7个/ml，得瘤液。
[0026] (2)取30只小鼠（18-22g/只），分别接种步骤1所得的瘤液0.1ml于右上肢皮下后， 被随机分为W下4组：
[0027] 1)青葛締低剂量组:给予青葛締治疗，25mg/kg;
[002引2)青葛締高剂量组组:给予青葛締治疗，50mg/kg;
[0029] 3)阳性对照组:给予顺销(孤P)治疗，20mg/kg;
[0030] 4)空白对照组:花生油腹腔注射。
[0031 ]当移植瘤最大直径巧mm时，认为移植瘤接种成功，株细胞细胞在5天时全部成瘤。 成瘤后腹腔注射给药，青葛締组每日给药一次，连续10天，停药次日称重，解剖后剥离皮下 瘤体，称瘤重；阳性对照组隔日给药，连续五次，停药次日称重，解剖后剥离皮下瘤体，称瘤 重;空白对照组腹腔注射花生油，每日给药一次，连续10天，解剖后剥离皮下瘤体，称瘤重。 按下式计算抑瘤率（％ )=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重X100%。 [003^ 3.结果
[0033]表1青葛締对人肝癌细胞株化p3B2.1-7皮下移植瘤大小的影响
[0035] 结果如表1所示，青葛締对人肝癌细胞株化p3B2.1-7皮下移植瘤的抑制作用随剂 量增加而增大，其抑制肿瘤的效果与DDP相当。
[0036] 实验二青葛締对人肝癌细胞株QGY-7703皮下移植瘤的抑制实验
[0037] 实验目的:研究青葛締对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。
[0038] 1.实验材料
[0039] 1.1实验动物
[0040] 动物6~8周龄的NODSCID小鼠30只，体重18~22g，由北京维通利华实验动物技术 有限公司提供，合格证号：11400700123247。
[OOW 1.2 试剂
[0042] 花生油（广东长兴食品贸易有限公司，批号090407);胎牛血清化yclone公司）；憐 酸盐缓冲液(PBS ,Hyclone公司）。
[0043] 1.3受试药物
[0044] 青葛締:购于天津±兰科技有限公司，批号A777550。取青葛締至烧杯中，加入花生 油作为溶媒，加热，揽拌使溶解，放冷后加花生油至葛締在花生油中的质量浓度为5mg/ml即 得青葛締油溶液。
[0045] 1.4 仪器
[0046] 低速台式自动平衡离屯、机(DT5-3);C02培养箱（170R);倒置相差显微镜(CKX41奥 林己斯）；自动细胞计数仪(〇unts1:ar IC-100);生物安全柜(BSC-1000IIAC);电子分析天平 (北京赛多利斯天平有限公司）；BioTek化X800酶标仪(美国BioTek公司）。
[0047] 2.方法
[004引（1)将人肝癌细胞株QGY-7703传代后，用0.25 %的膜蛋白酶消化细胞，用PBS调整 细胞数至IO7个/ml，得瘤液。
[0049] (2)取30只小鼠（18-22g/只），分别接种步骤1所得的瘤液0.1ml于右上肢皮下后， 被随机分为W下4组
[0050] 1)青葛締低剂量组:给予青葛締治疗，25mg/kg;
[0051] 2)青葛締高剂量组组:给予青葛締治疗，50mg/kg;
[0052 ] 3)阳性对照组:给予顺销(孤P)治疗，20mg/kg;
[0化3] 4)空白对照组:花生油腹腔注射。
[0054]当移植瘤最大直径巧mm时，认为移植瘤接种成功，株细胞在5天时全部成瘤。成瘤 后腹腔注射给药，本化合物组每日给药一次，连续10天，停药次日称重，解剖后剥离皮下瘤 体，称瘤重；阳性对照组隔日给药，连续五次，停药次日称重，解剖后剥离皮下瘤体，称瘤重； 空白对照组腹腔注射花生油，每日给药一次，连续10天，解剖后剥离皮下瘤体，称瘤重。按下 式计算抑瘤率（％ )=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重X 100%。
[005引3.结果
[0056]表2青葛締对人肝癌细胞株QGY-7703皮下移植瘤大小的影响
[0058] 结果如表2所示，青葛締对人肝癌细胞株QGY-7703皮下移植瘤的抑制作用随剂量 增加而增大，其抑制肿瘤的效果与DDP相当。
[0059] 4.讨论
[0060] 本实验采用构建肝癌体外移植瘤小鼠模型，探讨青葛締的抗肿瘤作用。结果显示， 青葛締可明显抑制小鼠皮下移植瘤的生长，且抑瘤率随其剂量的增加而增大。
[0061 ] 例2(药理、药效实验）
[0062] 实验一青葛締对人肝癌细胞株化p3B2.1-7增殖的影响
[0063] 实验目的：研究青葛締对人肝癌细胞株化p3B2.1-7增殖的影响。
[0064] 1.实验材料
[00化]1.1细胞株人肝癌细胞株化p3B2.1-7
[0066] 1.2药材、试剂和仪器青葛締:购于天津±兰科技有限公司，批号A777550。胎牛 血清化yclone公司），MEM培养基(Gibco公司），DMS0(sigma公司），MTT(sigma公司）；膜蛋白 酶(G化CO公司）。倒置相差显微镜（CKX41奥林己斯）；BioTek化X800酶标仪（美国BioTek公 司）；低速台式自动平衡离屯、机(DT5-3)。
[0067] 2.实验方法
[00側 2.1化p3B2.1-7细胞培养生长至指数生长期时，即Wo . 25 %膜蛋白酶消化，1000 X g离屯、3min，细胞沉淀W10%FBS的MEM培养基调整至5 X IO4个/ml，96孔培养板每孔接种 20化1，置于37°C、5%C02及饱和湿度条件下培养24小时。
[0069] 2.2每组设5个复孔，每孔中加入不同浓度的青葛締，上述条件下继续培养24小 时。
[0070] 阴性对照组：即不加药组。
[0071 ]根据所加入的药物将实验分为4组：
[0072] 实验组1:加入青葛締，终浓度为化M。
[0073] 实验组2:加入