1000 X g离屯、 Smin，细胞沉淀W10 %FBS的DMEM培养基调整至5 X IO4个/ml，96孔培养板每孔接种20化1， 置于37°C、5 % C02及饱和湿度条件下培养24小时。
[0239] 2.2每组设5个复孔，每孔中加入不同浓度的青葛締，上述条件下继续培养24小 时。
[0240] 阴性对照组：即不加药组。
[0241] 根据所加入的药物将实验分为4组：
[0242] 实验组1:加入青葛締，终浓度为化M。
[0243] 实验组2:加入青葛締，终浓度为如M。
[0244] 实验组3:加入青葛締，终浓度为10測。
[0245] 实验组4:加入青葛締，终浓度为20iiM。
[0246] 2.3细胞培养24小时后，吸走培养基，每孔加入10化1的MTT(四甲基偶氮挫盐)试 剂，37°C，5%C〇2及饱和湿度条件下继续培养4小时。
[0247] 2.4小屯、吸去孔内液体，每孔加入150ul二甲基亚讽，置摇床上低速振荡lOmin，使 结晶充分溶解。
[0248] 用酶标仪测定在波长为450nm处的吸光度值(0D)，570nm作为参考波长，细胞生长 抑制率按公式:抑制率=(对照孔OD值-实验孔OD值)/对照孔OD值）X 100%计算。
[0249] 3.实验结果：
[0250] 表10青葛締对HK2细胞增殖的影响
[0252] 结果如表10所示，青葛締对人肾小管上皮细胞(HK2)无毒性。
[0253] 实验四青葛締对人支气管上皮细胞(beas-化)增殖的影响
[0254] 实验目的:研究青葛締对人支气管上皮细胞(beas-化)增殖的影响 [0巧日]1.实验材料
[0256] 1.1细胞株人支气管上皮细胞(beas-化）
[0257] 1.2药材、试剂和仪器青葛締:购于天津±兰科技有限公司，批号A777550。胎牛 血清化yclone公司），MEM培养基(Gibco公司），DMS0(sigma公司），MTT(sigma公司）；膜蛋白 酶(G化CO公司）。倒置相差显微镜（CKX41奥林己斯）；BioTek化X800酶标仪（美国BioTek公 司）；低速台式自动平衡离屯、机(DT5-3)。
[025引2.实验方法
[0巧9] 2.1 beas-化细胞培养生长至指数生长期时，即WO . 25 %膜蛋白酶消化，1000 X g 离屯、3min，细胞沉淀W10 %FBS的1640培养基调整至5 X IO4个/ml，96孔培养板每孔接种200 ，置于37°C、5%C02及饱和湿度条件下培养24小时。
[0260] 2.2每组设5个复孔，每孔中加入不同浓度的青葛締，上述条件下继续培养24小 时。
[0%1 ]阴性对照组：即不加药组。
[0262] 根据所加入的药物将实验分为4组：
[0263] 实验组1:加入青葛締，终浓度为1測。
[0264] 实验组2:加入青葛締，终浓度为如M。
[02化]实验组3:加入青葛締，终浓度为10測。
[0266] 实验组4:加入青葛締，终浓度为20iiM。
[0267] 2.3细胞培养24小时后，吸走培养基，每孔加入10化1的MTT(四甲基偶氮挫盐)试 剂，37°C，5%C〇2及饱和湿度条件下继续培养4小时。
[0268] 2.4小屯、吸去孔内液体，每孔加入150ul二甲基亚讽，置摇床上低速振荡IOmin，使 结晶充分溶解。
[0269] 用酶标仪测定在波长为450nm处的吸光度值(0D)，570nm作为参考波长，细胞生长 抑制率按公式:抑制率=(对照孔OD值-实验孔OD值)/对照孔OD值）X 100%计算。
[0270] 3.实验结果：
[0271] 表11青葛締对beas-2b细胞增殖的影响
[0273] 结果如表11所示，青葛締对人支气管上皮细胞(beas-化)无毒性。
[0274] 实验五青葛締对人正常肝细胞(L0-2)增殖的影响
[0275] 实验目的:研究青葛締对人正常肝细胞(L0-2)增殖的影响
[0276] 1.实验材料
[0277] 1.1细胞株人正常肝细胞(L0-2)
[0278] 1.2药材、试剂和仪器青葛締:购于天津±兰科技有限公司，批号A777550。胎牛 血清化yclone公司），MEM培养基(Gibco公司），DMS0(sigma公司），MTT(sigma公司）；膜蛋白 酶(G化CO公司）。倒置相差显微镜（CKX41奥林己斯）；BioTek化X800酶标仪（美国BioTek公 司）；低速台式自动平衡离屯、机(DT5-3)。
[02巧]2.实验方法
[0280] 2.1 L0-2细胞培养生长至指数生长期时，即WO. 25 %膜蛋白酶消化，1000 X g离屯、 Smin，细胞沉淀W10 %FBS的DMEM培养基调整至5 X IO4个/ml，96孔培养板每孔接种20化1， 置于37°C、5 % C〇2及饱和湿度条件下培养24小时。
[0281] 2.2每组设5个复孔，每孔中加入不同浓度的青葛締，上述条件下继续培养24小 时。
[0282] 阴性对照组：即不加药组。
[0283] 根据所加入的药物将实验分为4组：
[0284] 实验组1:加入青葛締，终浓度为化M。
[02化]实验组2:加入青葛締，终浓度为如M。
[02化]实验组3:加入青葛締，终浓度为10測。
[0287] 实验组4:加入青葛締，终浓度为20iiM。
[0288] 2.3细胞培养24小时后，吸走培养基，每孔加入10化1的MTT(四甲基偶氮挫盐)试 剂，37°C，5%C〇2及饱和湿度条件下继续培养4小时。
[0289] 2.4小屯、吸去孔内液体，每孔加入150ul二甲基亚讽，置摇床上低速振荡lOmin，使 结晶充分溶解。
[0290] 用酶标仪测定在波长为450nm处的吸光度值(0D)，570nm作为参考波长，细胞生长 抑制率按公式:抑制率=(对照孔OD值-实验孔OD值)/对照孔OD值）X 100%计算。
[0巧1] 3.实验结果：
[0292]表12青葛締对L0-2细胞增殖的影响
[0294]结果如表12所示，青葛締对人正常肝细胞(L0-2)无毒性。
[02巧]3.结论
[0296] 青葛締既可W抑制肿瘤细胞的增殖，又对正常细胞无毒副作用，从而表现出良好 的抗肿瘤的作用。其抑制作用与其浓度之间存在名西安的剂量-效应关系，随着青葛締浓度 增大，其抑制肿瘤细胞增殖的能力增强。本实验采用体内外结合的方法，从体外细胞和体内 小鼠实验验证青葛締的抗肿瘤作用。
【具体实施方式】
[0297]
[029引例1(注射剂）
[0299] 取青葛締500mg，加入氯化钢9g，加水至1000ml，用Imol/ml氨氧化钢溶液调整pH至 3.0-5.5，过滤，滤液灌封在2、5或1 Oml的安飯中，100°C灭菌30min，得到注射液。注射用于肿 瘤特别是肝癌患者。本品可静脉注射或肌肉注射，每次1~50ml，一日1~3次，10~20天为一 疗程，可连续使用2~3疗程。
[0300] 例2(软胶囊）
[0301] 取青葛締30g与食用玉米油20g混合，充分揽匀，加入稀释剂40g制成内容物，W适 量的液状石蜡作为润滑剂，采用旋转模压法，将内容物装入自动旋转制囊机中，压制出规格 为每粒含青葛締60mg的软胶囊500粒，每粒净重0.18g;其中所述的稀释剂由质量比为明胶： 甘油:水=1:0.5:1的明胶、甘油和水制成。口服适用于肿瘤特别是肝癌患者。每次1~3粒， 一日3次，10~20天为一疗程，可连续使用2~3疗程。
[0302] 例3(片剂）
[0303] 取青葛締40g，加入乳糖480g、淀粉IlOOg混合均匀，用7%的淀粉浆300g作为粘合 剂湿法制粒，烘干，加入硬脂酸儀16g混合，压制成每片含青葛締4mg的片剂10000片，每片净 重〇.17g。口服适用于肿瘤特别是肝癌患者。每次3~9片，一日3次，10~20天为一疗程，可连 续使用2~3疗程。
【主权项】
1. 青蒿烯在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的青蒿烯的化学结构式为下式（I)所 示，2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物由青蒿烯和医学上可接受的辅 料组成，其中青蒿烯的重量含量为0.5~30%。3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的药物是注射剂或常见口服制剂。4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的注射剂为每1000ml含有青蒿烯 500mg和氯化钠9g的水溶液，且pH值为3.0~5.5。5. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的口服制剂为软胶囊，该软胶囊的内 容物由以下重量份的原料组成:青蒿烯30份，食用玉米油20份，稀释剂40份。6. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的口服制剂为片剂，该片剂由青蒿烯 和成形剂组成，其中青蒿烯的重量含量为2.3~2.5%。
【专利摘要】本发明涉及青蒿烯在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明所述的药物由青蒿烯和医学上可接受的辅料组成，其中青蒿烯的含量为0.5～30％。本发明所述的药物是注射剂或常见口服制剂。本发明所述的青蒿烯可抑制肿瘤细胞生长，诱导肿瘤细胞凋亡，不仅具有较强的抑制肿瘤的作用，而且对正常细胞无毒副作用。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/366
【公开号】CN105663120
【申请号】CN201610053766
【发明人】徐洋, 崔可, 李文娟
【申请人】广东省中医院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月26日