二氢黄酮类化合物在制备抗真菌药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药技术领域，具体地说，是二氨黄酬类化合物在制备抗真菌药物组 合中的应用。
【背景技术】
[0002] 真菌病，即由真菌引起的疾病。作为一类广泛存在于自然界中的真核生物，真菌可 感染人体的不同部位。从临床的致病情况上看，真菌病可分为浅部真菌病和深部真菌病两 大类。抗生素滥用等诸多的问题导致细菌和真菌间正常的菌丛共生关系遭到一定的破坏； 其次在临床应用器官移植手术也越来越多的在临床开展，术后当中免疫抑制剂的使用影响 了机体正常的免疫功能，使人体对真菌的抵抗力降低W上问题令深部脏器的真菌感染发病 率越来越高，也越发严重。白色念珠菌是真菌感染的主要病因。但是近年随着来抗真菌药物 的大量使用，真菌对药物的耐药性逐渐增加。对氣康挫有耐药作用的菌株通常会对其他挫 类药物产生交叉耐药作用，使得对于治疗白念珠菌的感染方面的临床药物选择十分困难。 因此，寻找抗真菌药物耐药逆转剂，提高真菌对药物的敏感性，与现有药物产生协同的抗真 菌作用，是一种提高目前现有药物的治疗效果的重要方法。二氨杨梅素（1)、二氨搬皮素
[2] 、二氨山奈酪(3)和抽皮素(4)属于二氨黄酬类化合物，是来源于植物的天然产物，从目 前的研究情况来看，未见有报道二氨黄酬类化合物的抗真菌作用研究。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供二氨黄酬类化合物在制备抗真菌药 物中的应用。
[0004] 本发明的目的是，提供一种抗真菌的药物组合物。
[0005] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案是:二氨黄酬类化合物及其药学上可接 受的盐、溶剂化物、前药在制备抗真菌药物中的应用，所述的二氨黄酬类化合物为二氨杨梅 素、二氨搬皮素、二氨山奈酪或抽皮素，
[0006] 二氨杨梅素的结构式为：
[000引二氨搬皮素的结构式为：
[0010]二氨山奈酪的结构式为：
[0012]抽皮素的结构式为：
[0014] 二氨黄酬类化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药在制备抗真菌药物的 增效剂中的应用，所述的二氨黄酬类化合物为二氨杨梅素、二氨搬皮素、二氨山奈酪或抽皮 素。
[0015] 所述的抗真菌药物为氮挫类抗真菌药物。
[0016] 所述的氮挫类抗真菌药物为氣康挫。
[0017] 所述的真菌为耐药白色念珠菌。
[0018] 为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是:一种抗真菌的药物组合物，所 述的组合物中包含氮挫类抗真菌药物和二氨黄酬类化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化 物、前药，所述的二氨黄酬类化合物为二氨杨梅素、二氨搬皮素、二氨山奈酪或抽皮素。
[0019] 所述的氮挫类抗真菌药物为氣康挫。
[0020] 本发明优点在于：
[0021 ]本发明是在大量实验基础上，提供了二氨杨梅素（1 )、二氨搬皮素(2 )、二氨山奈酪 (3)和抽皮素(4)及药学上可接受的盐、溶剂化物或前药的用途一一用于制备抗真菌药物的 组合。该类化合物可W与挫类抗真菌药物共同使用，可提高耐药菌对挫类药物的敏感性，实 现逆转耐药作用，协同抗真菌作用。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0023] 化合物（1)~(4)为本实验室分离制备得到。也可从商业来源上获得，如，但不限于 Aldrich Chemical Co. (MiIwaukee，Wis.)或Sigma Chemical Co. (St丄ouis，Mo.)、百灵威 化学等公司。
[0024] 实施例1:化合物的协同氣康挫抗耐药真菌作用实验
[0025] 应用棋盘式稀释法体外药敏实验测化合物(1)~(4)协同氣康挫抗耐药真菌作用
[0026] 下述试验实施例中的菌种为临床分离得到的耐药白色念珠菌103菌。所有实验用 菌均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，于30°C培养2周后，分别挑取单克隆再次划 板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，于30°C培养2周后在4°C下保存。培养液为RPMI 1640液体培养液，均按照标准方法进行培养前处理。抗真菌药物氣康挫注射液由大连辉瑞 药业有限公司提供;二甲亚讽(DMSO)购置于中国医药集团上海化学试剂公司。所用的仪器 有Multiskan MK3型酶标检测仪(芬兰Labsystems);隔水式电热恒溫培养箱(上海跃进医疗 器械厂）；MJX型智能菌酶培养箱（宁波江南仪器厂）；THZ-82A台式恒溫振荡器(上海跃进医 疗器械厂）；SW-CT-IF型超净化工作台（苏州安泰空气技术有限公司）；倒置显微镜 (Amersham Pharmacia);微量加样器（芬兰Fin吨ette) ;96孔细胞培养板（丹麦Nunclon公 司）。
[0027]实验步骤：
[00%]真菌悬液的配置
[0029] 实验前，用接种圈从4°C保存的SDA培养基上挑取耐药白色念珠菌103菌少量，接种 至Iml YEPD培养液，于30°C，200巧m振荡培养，活化16h，使真菌处于指数生长期后期。取该 菌液至Iml YEPD培养液中，用上述方法再次活化，1化后，用血细胞计数板计数，WRPMI 1640培养液调整菌液浓度至1 X IO3-S X IO3C即/ml。
[0030] 药敏反应板的制备
[0031] 取无菌96孔板，于每排1号孔加 RPMI 1640液体培养基10化1作空白对照;3-12号孔 各加新鲜配制的菌液10化1; 2号孔加菌液16化1和受试化合物溶液40iU ; 12号孔不含药物， 只加菌液10化1作阳性生长对照。2-11号孔进行倍比稀释，使各孔的最终药物浓度分别为 64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.12扣旨/1111，各孔中0150含量均低于1%。每次配制药敏板 的同时均制备一块质控菌药敏板(质控菌:根据NCXLS M27-A方案的建议，我们采用近平滑 念珠菌ATCC18062为质控菌，每次配制药敏板的同时均制备一块质控菌药敏板，其MIC参考 值如下:氣康挫(。〔2):1眼〇值0.化-1.0蛇/1111;41118:11(：值0.5-2.0蛇/1111。每次试验^此菌株 为参照菌株，只有当其MICso值界于上述范围时，方认为试验操作准确可靠。如同时试验菌株 生长良好，则可认为试验成功，结果可接受。），各药敏板于30°C恒溫箱培养。
[0032] 体外药敏实验方法的选取
[0033] 我们在对本发明公开的化合物协同氣康挫抗耐药真菌作用体外活性评价时，选择 了棋盘式微量稀释法。棋盘式微量稀释法是体外药敏实验的延伸，即合用的两种药物于96 孔板上W二维棋盘的纵(A至H)横(2至11)两方向分别进行二倍的倍比稀释。例如化合物1与 一种抗真菌药物氣康挫合用后，使得氣康挫的终浓度为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25 和0.12扣g/ml，化合物1的终浓度为64、32、16、8、4、2、化g/ml。实验所用试剂、药物、实验操 作步骤同上述体外药敏实验。
[0034] 评价标准
[OO%]部分抑菌浓度指数（fractional inhibitoiT concenhation index,FICI)是评 价联合用药的两药相互作用方式的主要参数。抑菌浓度分数(FIC)，分别为每一种药物联合 抑菌时所需最低抑菌浓度(MIC)与单用时MIC的比值.而FI巧旨数(FICI)则等于两种药物FIC 之和。当MIC值高于检测最高限时W最高限浓度的两倍值用W计算FICI。很多文献报道当 FICI含0.5时两药的相互作用确定为协同作用，且FI巧旨数越小，协同作用越强;0.5<FICI < 1时两药的相互作用确定为相加作用；KFICI含4时为无关作用；当FICIM时两药产生括抗 作用。本专利选用目前国外期刊采用的最新标准：当FICI ^ 0.5时，两药的相互作用确定为 协同作用;0.5<FICI含4时为无关作用；当FICIM时两药产生括抗作用。
[0036] 测试结果
[0037] 化合物(1)~(4)协同氣康挫抗耐药真菌作用的测试结果见表1。
[0038]表1化合物结构与协同氣康挫抗耐药真菌作用
[0040] 实验结论
[0041] 应用棋盘式稀释法体外药敏实验测试化合物（1)~(4)协同氣康挫抗耐药白色念 珠菌103菌的作用，我们发现化合物（1)~(4)均对氣康挫产生耐药的白色念珠菌103菌有明 显的协同抗菌作用，可作为提高氣康挫抗菌谱的增效剂。
[0042] W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明方法的前提下，还可W做出若干改进和补充，运些改进和补充也应视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. 二氢黄酮类化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药在制备抗真菌药物中的 应用，所述的二氢黄酮类化合物为二氢杨梅素、二氢槲皮素、二氢山奈酚或柚皮素， 二氢杨梅素的结构式为：二氢槲皮素的结构式为：二氢山奈酚的结构式为： 柚皮素的结构式为：2. 二氢黄酮类化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药在制备抗真菌药物的增 效剂中的应用，所述的二氢黄酮类化合物为二氢杨梅素、二氢槲皮素、二氢山奈酚或柚皮 素。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抗真菌药物为氮唑类抗真菌药物。4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的氮唑类抗真菌药物为氟康唑。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的真菌为耐药白色念珠菌。6. -种抗真菌的药物组合物，其特征在于，所述的组合物中包含氮唑类抗真菌药物和 二氢黄酮类化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药，所述的二氢黄酮类化合物为二 氢杨梅素、二氢槲皮素、二氢山奈酸或柚皮素。7. 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述的氮唑类抗真菌药物为氟康 唑。
【专利摘要】本发明涉及二氢黄酮类化合物：二氢杨梅素、二氢槲皮素、二氢山奈酚和柚皮素制备抗真菌的药物中的应用。其优点表现在：二氢杨梅素、二氢槲皮素、二氢山奈酚和柚皮素具有较好的协同氟康唑抗耐药真菌的作用。
【IPC分类】A61K31/352, A61K31/4196, A61P31/10
【公开号】CN105663114
【申请号】CN201610060695
【发明人】金永生, 安毛毛, 王元花, 周鹤洋, 姜远英, 张开霞, 张大志
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月28日