本发明涉及护肤品领域，具体涉及一种含菊花细胞提取物的祛皱护肤组合物及其制备方法。
背景技术：
：护肤是全球美容以及个人护理行业中重要的细分市场，而抗衰老护肤品在其中备受关注。自古以来，人类一直致力于寻找具有抗衰老作用的活性物质。造成皮肤衰老的原因主要有：1)紫外线的照射导致胶原蛋白流失，从而加速皮肤老化；2)体内氧自由基的攻击导致皮肤损伤；3)皮肤中的成纤维细胞自然老化。在市面上的抗衰老护肤品中，主要通过添加激素和植物提取物等对皮肤进行抗皱处理，然而激素的滥用容易导致副作用，植物提取物副作用小，但抗衰老短期效果不明显，需要长期使用，无法从根本上达到抗衰老的效果。植物干细胞是植物体内未分化的细胞，是生长发育的源泉和信号调控中心，具有很强的自我更新和持续分裂能力。研究表明，某些植物干细胞具有强大的抗氧化和抗衰老活性，可以作为人体干细胞的激活剂，为人类抗衰老祛皱提供一个新方法。皮肤的抗衰祛皱是个长期的过程，而在市面上的抗衰祛皱产品，具有突释效应，在很短时间内完全释放或者释放出大部分活性成分，缓释效果较差，不具备持久抗衰老祛皱的效果，而且活性成分的突释往往导致皮肤负担过重，另一方面也造成活性成分的浪费。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种含菊花细胞提取物的祛皱护肤组合物。本发明的另一个目的在于提供一种含菊花细胞提取物的祛皱护肤组合物的制备方法。为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：一种含菊花细胞提取物的祛皱护肤品，由以下重量份数的组分制成：a相：菊花细胞提取物0.5～2.0份、苹果提取物1.2～3.0份、麦芽提取物0.6～2.5份和迷迭香提取物0.1～1.8份；b相：介孔硅5～8份和表面活性剂3～9份；c相：保湿剂3～5份和去离子水40～60份：d相：氢化椰油3～8份和羊毛脂0.5～2.0份。上述祛皱护肤品中，菊花细胞提取物、苹果提取物、麦芽提取物和迷迭香提取物为祛皱活性成分，能够促进肌肤新陈代谢，三者配合使用具有良好的抗衰祛皱效果，可减少肌肤细纹；介孔硅通过氧原子与两亲性表面活性剂的亲水端形成氢键，在油水界面处形成一层保护层，延缓活性成分的释放，达到缓释和长效祛皱的效果，避免造成活性成分的浪费。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的优选实施方式，由以下重量份数的组分制成：a相：菊花细胞提取物1.0～1.5份、苹果提取物1.8～2.4份、麦芽提取物1.2～2.0份和迷迭香提取物0.5～1.0份；b相：介孔硅5～8份和表面活性剂3～9份；c相：保湿剂3～5份和去离子水40～60份：d相：氢化椰油3～8份和羊毛脂0.5～2.0份。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的优选实施方式，由以下重量份数的组分制成：a相：菊花细胞提取物1.2份、苹果提取物2.0份、麦芽提取物1.5份和迷迭香提取物0.8份；b相：介孔硅5～8份和表面活性剂3～9份；c相：保湿剂3～5份和去离子水40～60份：d相：氢化椰油3～8份和羊毛脂0.5～2.0份。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的优选实施方式，所述保湿剂为甘油、丙三醇、丙二醇、1,2-丁二醇、氨基酸、乳酸钠、尿囊素、硫酸软骨素中的至少一种。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的优选实施方式，所述表面活性剂为吐温-80、椰油酸二乙醇酰胺、烷基糖苷、油酸单甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油中的至少一种。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的优选实施方式，所述菊花细胞为菊花植株愈伤组织细胞。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的优选实施方式，所述介孔硅为六方介孔硅。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的优选实施方式，所述介孔硅的粒径为10～40nm。本发明还提供了上述含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法，包括以下步骤：(1)合成介孔硅；(2)制备菊花细胞提取物；(3)按比例称取各组分原料；(4)将b相组分充分搅拌混合，超声分散形成混合乳化剂；(5)将a相与c相在45℃加热搅拌，充分混合形成水相；(6)将d相搅拌加热至70℃～80℃，充分混合形成油相；(7)将步骤(4)得到的混合乳化剂与步骤(6)得到的油相混合，搅拌均匀后加入水相中，混合均匀，得到所述祛皱护肤品。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，将培养菊花细胞后的菊花细胞培养基和菊花细胞的裂解物混合，冷冻干燥，得到冻干粉。作为本发明所述的含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法的优选实施方式，所述冻干粉过200目筛。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明的祛皱护肤品中菊花细胞提取物、苹果提取物、麦芽提取物和迷迭香提取物都具有良好的抗氧化祛皱效果，能够促进肌肤新陈代谢，三者配合使用具有良好的抗衰祛皱效果，可减少肌肤细纹；介孔硅通过氧原子与两亲性表面活性剂的亲水端形成氢键，在油水界面处形成一层保护层，延缓菊花细胞提取物、苹果提取物、麦芽提取物和迷迭香提取物活性成分的释放，达到缓释和长效祛皱的效果，避免造成活性成分的浪费。具体实施方式为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。苹果提取物、麦芽提取物和迷迭香提取物购自西安优硕生物科技有限公司。实施例1本发明含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法为：(1)合成介孔硅；1)以十二烷基胺作为模板剂，溶于乙醇溶液中，并在搅拌下加入正硅酸乙酯，室温下反应20h；2)在45℃和80℃分别反应1h；3)将反应产物置于90℃的烘箱下1h，得到尺寸为10～40nm的六方介孔硅颗粒。(2)制备菊花细胞提取物1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；其中，诱导培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/l)、蔗糖(20g/l)和琼脂(10g)；2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；其中，增殖培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、激动素(1.5mg/l)、蔗糖(20g/l)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；5)收集培养菊花细胞后的增殖培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分，并将培养菊花细胞后的增殖培养基和菊花细胞的裂解物混合，冷冻干燥，获得冻干粉；6)将冻干粉过200目筛获得菊花细胞提取物。(3)按一下重量比例称取各组分原料a相：菊花细胞提取物1.2份、苹果提取物2.0份、麦芽提取物1.5份和迷迭香提取物0.8份；b相：介孔硅6份、吐温-803份、烷基糖苷1份和油酸单甘油酯2份；c相：甘油1份、丙三醇2份、氨基酸0.5份和去离子水50份：d相：氢化椰油5份和羊毛脂1.2份。(4)将b相组分充分搅拌混合，超声分散形成混合乳化剂；(5)将a相与c相在45℃加热搅拌，充分混合形成水相；(6)将d相搅拌加热至80℃，充分混合形成油相；(7)将步骤(4)得到的混合乳化剂与步骤(6)得到的油相混合，搅拌均匀后加入水相中，混合均匀，得到所述祛皱护肤品。实施例2本发明含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法为：(2)合成介孔硅；1)以十二烷基胺作为模板剂，溶于乙醇溶液中，并在搅拌下加入正硅酸乙酯，室温下反应20h；2)在45℃和80℃分别反应1h；3)将反应产物置于90℃的烘箱下1h，得到尺寸为10～40nm的六方介孔硅颗粒。(2)制备菊花细胞提取物1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；其中，诱导培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/l)、蔗糖(20g/l)和琼脂(10g)；2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；其中，增殖培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、激动素(1.5mg/l)、蔗糖(20g/l)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；5)收集培养菊花细胞后的增殖培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分，并将培养菊花细胞后的增殖培养基和菊花细胞的裂解物混合，冷冻干燥，获得冻干粉；6)将冻干粉过200目筛获得菊花细胞提取物。(3)按一下重量比例称取各组分原料a相：菊花细胞提取物1.2份、苹果提取物2.0份、麦芽提取物1.5份和迷迭香提取物0.8份；b相：介孔硅8份和椰油酸二乙醇酰胺4份、油酸单甘油酯3份、聚氧乙烯蓖麻油2份；c相：1,2-丁二醇2份、乳酸钠0.5份、尿囊素0.5份和去离子水40份：d相：氢化椰油6份和羊毛脂0.9份。(4)将b相组分充分搅拌混合，超声分散形成混合乳化剂；(5)将a相与c相在45℃加热搅拌，充分混合形成水相；(6)将d相搅拌加热至80℃，充分混合形成油相；(7)将步骤(4)得到的混合乳化剂与步骤(6)得到的油相混合，搅拌均匀后加入水相中，混合均匀，得到所述祛皱护肤品。实施例3本发明含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法为：(3)合成介孔硅；1)以十二烷基胺作为模板剂，溶于乙醇溶液中，并在搅拌下加入正硅酸乙酯，室温下反应20h；2)在45℃和80℃分别反应1h；3)将反应产物置于90℃的烘箱下1h，得到尺寸为10～40nm的六方介孔硅颗粒。(2)制备菊花细胞提取物1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；其中，诱导培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/l)、蔗糖(20g/l)和琼脂(10g)；2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；其中，增殖培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、激动素(1.5mg/l)、蔗糖(20g/l)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；5)收集培养菊花细胞后的增殖培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分，并将培养菊花细胞后的增殖培养基和菊花细胞的裂解物混合，冷冻干燥，获得冻干粉；6)将冻干粉过200目筛获得菊花细胞提取物。(3)按一下重量比例称取各组分原料a相：菊花细胞提取物1.2份、苹果提取物2.0份、麦芽提取物1.5份和迷迭香提取物0.8份；b相：介孔硅5份和吐温-803份；c相：甘油2份、硫酸软骨素1份和去离子水55份：d相：氢化椰油4份和羊毛脂1.5份。(4)将b相组分充分搅拌混合，超声分散形成混合乳化剂；(5)将a相与c相在45℃加热搅拌，充分混合形成水相；(6)将d相搅拌加热至75℃，充分混合形成油相；(7)将步骤(4)得到的混合乳化剂与步骤(6)得到的油相混合，搅拌均匀后加入水相中，混合均匀，得到所述祛皱护肤品。实施例4本发明含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法为：(4)合成介孔硅；1)以十二烷基胺作为模板剂，溶于乙醇溶液中，并在搅拌下加入正硅酸乙酯，室温下反应20h；2)在45℃和80℃分别反应1h；3)将反应产物置于90℃的烘箱下1h，得到尺寸为10～40nm的六方介孔硅颗粒。(2)制备菊花细胞提取物1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；其中，诱导培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/l)、蔗糖(20g/l)和琼脂(10g)；2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；其中，增殖培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、激动素(1.5mg/l)、蔗糖(20g/l)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；5)收集培养菊花细胞后的增殖培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分，并将培养菊花细胞后的增殖培养基和菊花细胞的裂解物混合，冷冻干燥，获得冻干粉；6)将冻干粉过200目筛获得菊花细胞提取物。(3)按一下重量比例称取各组分原料a相：菊花细胞提取物1.2份、苹果提取物2.0份、麦芽提取物1.5份和迷迭香提取物0.8份；b相：介孔硅5份、吐温-802份和椰油酸二乙醇酰胺4份；c相：丙二醇3份、氨基酸1份、尿囊素1份和去离子水40份：d相：氢化椰油8份和羊毛脂0.5份。(4)将b相组分充分搅拌混合，超声分散形成混合乳化剂；(5)将a相与c相在45℃加热搅拌，充分混合形成水相；(6)将d相搅拌加热至70℃，充分混合形成油相；(7)将步骤(4)得到的混合乳化剂与步骤(6)得到的油相混合，搅拌均匀后加入水相中，混合均匀，得到所述祛皱护肤品。实施例5本发明含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法为：(5)合成介孔硅；1)以十二烷基胺作为模板剂，溶于乙醇溶液中，并在搅拌下加入正硅酸乙酯，室温下反应20h；2)在45℃和80℃分别反应1h；3)将反应产物置于90℃的烘箱下1h，得到尺寸为10～40nm的六方介孔硅颗粒。(2)制备菊花细胞提取物1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；其中，诱导培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/l)、蔗糖(20g/l)和琼脂(10g)；2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；其中，增殖培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、激动素(1.5mg/l)、蔗糖(20g/l)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；5)收集培养菊花细胞后的增殖培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分，并将培养菊花细胞后的增殖培养基和菊花细胞的裂解物混合，冷冻干燥，获得冻干粉；6)将冻干粉过200目筛获得菊花细胞提取物。(3)按一下重量比例称取各组分原料a相：菊花细胞提取物1.2份、苹果提取物2.0份、麦芽提取物1.5份和迷迭香提取物0.8份；b相：介孔硅7份和油酸单甘油酯3份；c相：甘油4份和去离子水60份：d相：氢化椰油3份和羊毛脂2.0份。(4)将b相组分充分搅拌混合，超声分散形成混合乳化剂；(5)将a相与c相在45℃加热搅拌，充分混合形成水相；(6)将d相搅拌加热至80℃，充分混合形成油相；(7)将步骤(4)得到的混合乳化剂与步骤(6)得到的油相混合，搅拌均匀后加入水相中，混合均匀，得到所述祛皱护肤品。对比例1本发明含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的祛皱护肤品的制备方法为：(1)制备菊花细胞提取物1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；其中，诱导培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/l)、蔗糖(20g/l)和琼脂(10g)；2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；其中，增殖培养基为ms基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/l)、激动素(1.5mg/l)、蔗糖(20g/l)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；5)收集培养菊花细胞后的增殖培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分，并将培养菊花细胞后的增殖培养基和菊花细胞的裂解物混合，冷冻干燥，获得冻干粉；6)将冻干粉过200目筛获得菊花细胞提取物。(2)按一下重量比例称取各组分原料a相：菊花细胞提取物1.2份、苹果提取物2.0份、麦芽提取物1.5份和迷迭香提取物0.8份；b相：吐温-803份、烷基糖苷1份和油酸单甘油酯2份；c相：甘油1份、丙三醇2份、氨基酸0.5份和去离子水50份：d相：氢化椰油5份和羊毛脂1.2份。(3)将b相组分充分搅拌混合，超声分散形成混合乳化剂；(4)将a相与c相在45℃加热搅拌，充分混合形成水相；(5)将d相搅拌加热至80℃，充分混合形成油相；(6)将步骤(3)得到的混合乳化剂与步骤(5)得到的油相混合，搅拌均匀后加入水相中，混合均匀，得到祛皱护肤品。祛皱护肤品功效测定一、缓释功效测定以实施例1和对比例1制备的祛皱护肤品分别作为实验组和对照组。采用透析袋法评价实验组和对照组的缓释功效，以生理盐水作为释放介质，定时取样检测透析袋外的溶液总黄酮的累积释放率，结果如表1所示。表1祛皱护肤品总黄酮的累计释放率时间/h0248121624实施例1037.646.457.866.371.174.6对比例1021.527.636.242.5.47.953.0由表1可知，实验组的释放明显低于对照组，介孔硅通过氧原子与两亲性表面活性剂的亲水端形成氢键，在油水界面处形成一层保护层，延缓祛皱活性成分的释放，达到缓释和长效祛皱的效果。二、羟自由基清除测定将实施例1～5制备的祛皱护肤品分别配制成浓度为50mg/ml的水溶液。取0.1ml分别加入0.6ml反应缓冲液(含2.67mmol/l脱氧核糖和0.13mmol/ledta的0.2mol/lph＝7.4的磷酸盐缓冲液)，0.4mmol/l硫酸亚铁0.2ml，2.0mmol/l抗坏血酸0.05ml，以及20mmol/l的h2o20.05ml，37℃温浴15min，取出后加入1％硫代巴比妥酸1ml和2％三氯乙酸1ml，沸水浴15min，取出后在冰上冷却，在酶标仪532nm下测吸光值，根据公式(2)计算羟自由基清除率，结果如表2所示。羟自由基清除率＝(1－样品管a532/对照管a532)×100％(2)表2羟自由基作为活性氧自由基，是造成生物有机体过氧化损伤的主要因素。表2的羟自由基清除结果表明，实施例1～5制备的祛皱护肤品具有较高的羟自由基清除率，本发明制备的祛皱护肤品的羟自由基的清除作用和抗氧化作用，有利于皮肤祛皱抗衰老。(3)皮肤祛皱测定实施例1～5和对比例1制得的祛皱护肤品，每组分别选100名年龄在35～55岁的女性志愿者，这些志愿者面部具有细纹或者某些部位皱纹明显，志愿者每日早、晚洁面后在脸上涂抹本发明制备的祛皱护肤品，连续使用6个月。评价标准：肉眼直接观察皮肤纹理。有效：皮肤纹理明显变得细腻，细纹减少，皱纹变浅；无效：皮肤纹理和细纹数量没有任何变化。结果如表3所示。表3由表3结果可知，实施例制备的祛皱护肤品祛皱效果明显优于对比例。本发明制备的祛皱护肤品具有良好的长效祛皱效果，可以使皮肤光滑细腻，明显减少皱纹。最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。当前第1页12