本发明属于药物制剂
技术领域：
，具体涉及一种裸花紫珠涂膜剂及其制备方法。技术背景裸花紫珠(callicarpanudiflorahook.etarn)为马鞭草科紫珠属(callicarpalinn.)植物，又名赶风柴、节节红、百花茶、饭汤叶、亚赛凡等，主要分布于我国海南海南，广西，广东等地，裸花紫珠是海南常用黎药材。主要分布于白沙，五指山琼中等地。裸花紫珠作为药材四季均可收获，取裸花紫珠的地上干燥部分，阴干，去除杂质用药，具有抗菌、消炎解毒、收敛止血、祛风除湿的功效，临床上用于急性传染性肝炎、化脓性炎症、消化道出血等症，外用常用于治烧伤、烫伤及外伤出血等。现代研究表明，裸花紫珠主要含有黄酮、鞣质、萜类和酚类等成分，其中的苯乙醇苷类化合物毛蕊花糖苷(acteoside，as)有显著缩短活化部分凝血活酶时间(aptt)作用，提示裸花紫珠可能是通过影响内源性凝血途径来发挥止血作用，其中毛蕊花糖苷在药材中的含有量很高，可能是裸花紫珠止血的主要活性成分。市场调查发现，目前市场上裸花紫珠制剂已有片剂、胶囊剂、合剂、分散片、栓剂和阴道片剂等剂型，现有技术中裸花紫珠制剂具有一定的毒性不良反应，且存在首关效应，生物利用度低。现有技术缺少用于止血的外用制剂，研制裸花紫珠外用止血制剂不仅可以填补市场的空缺，还能通过贴剂的特点更好发挥裸花紫珠的止血效果。因此，很有必要在现有技术的基础之上，设计研发一种组份配比科学合理，尤其是成膜性好，药物吸收速度快，稳定性好，药理作用强，不良反应低的裸花紫珠涂膜剂。技术实现要素：发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种组份配比科学合理，尤其是成膜性好，药物吸收速度快，稳定性好，药理作用强，不良反应低的裸花紫珠涂膜剂。本发明另一个目的是提供裸花紫珠涂膜剂的制备方法。技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：一种裸花紫珠涂膜剂，它由以下原料制成:裸花紫珠提取物和成膜剂；所述的成膜剂包括a相聚乙烯醇溶液、b相壳聚糖溶液和甘油。作为优选方案，以上所述的裸花紫珠涂膜剂，裸花紫珠提取物的浓度按生药量计为1.0g/ml～2.0g/ml。作为优选方案，以上所述的裸花紫珠涂膜剂，所述的成膜剂的制备方法为：取聚乙烯醇12g，水40ml，乙醇95％60ml，加热回流至聚乙烯醇溶解，得到a相聚乙烯醇溶液；取壳聚糖6g，加水10ml，醋酸1.5ml，搅拌混匀，得到b相壳聚糖溶液；取a相聚乙烯醇溶液和b相壳聚糖溶液，混合均匀，加入甘油3g，混匀，既得。作为优选方案，以上所述的裸花紫珠涂膜剂，所述的裸花紫珠提取物的制备方法为：取裸花紫珠药材，先浸泡1～2h，然后分别加入药材12、10、10倍体积量的水，依次提取3次，每次提取时间为1～2h，合并提取液，浓缩得裸花紫珠药材浸膏；取裸花紫珠药材浸膏，加水稀释，离心，取上部离心水溶液，离心水溶上大孔树脂，先用水洗脱，然后再用体积浓度40～50％乙醇洗脱，合并乙醇洗脱液；加入正丁醇萃取，萃取的正丁醇溶液，减压干燥，即得。一种裸花紫珠涂膜剂的制备方法，包括以下步骤：(1)裸花紫珠提取物的制备取裸花紫珠药材，先浸泡1～2h，然后分别加入药材12、10、10倍体积量的水，依次提取3次，每次提取时间为1～2h，合并提取液，浓缩得裸花紫珠药材浸膏；取裸花紫珠药材浸膏，加水稀释，离心，取上部离心水溶液，离心水溶上大孔树脂，先用水洗脱，然后再用体积浓度40～50％乙醇洗脱，合并乙醇洗脱液；加入正丁醇萃取，萃取的正丁醇溶液，减压干燥，即得；(2)成膜剂的制备(2.1)取聚乙烯醇12g，水40ml，乙醇95％60ml，加热回流至聚乙烯醇溶解，得到a相聚乙烯醇溶液；(2.2)取壳聚糖6g，加水10ml，醋酸1.5ml，搅拌混匀，得到b相壳聚糖溶液；(2.3)取a相聚乙烯醇溶液和b相壳聚糖溶液，混合均匀，加入甘油3g，混匀，既得成膜剂；(3)取步骤(1)制备得到的裸花紫珠提取物和步骤(2)制备得到的成膜剂按重量份数比例混匀，制备得到。本发明所述的裸花紫珠涂膜剂在作为止血药物中的应用。工艺筛选实验：一、裸花紫珠提取工艺的考察1、浸膏得率的测定参照药典，精密量取滤液25ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥24h，迅速精密称定重量。计算浸膏得率。浸膏收率(％)＝浸膏重(g)/生药(g)×100％2、毛蕊花糖苷的测定依照色谱条件，lunac18(2)色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1％醋酸水溶液(15∶85)；体积流量1.0ml·min-1，检测波长332nm；柱温30℃。精密称取毛蕊花糖苷对照品，置25ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成每1ml含毛蕊花糖苷0.1032mg的对照品。取对照品储备液适量，进样2、4、8、10、12、16、20μl，测定毛蕊花糖苷的峰面积，以毛蕊花糖苷的进样量(μg)为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线，得到毛蕊花糖苷的回归方程为y＝1788946.61x-42034.33，r＝1.0000，线性范围为0.2064～2.064μg。取裸花紫珠提取后的浓缩液0.5ml，置25ml量瓶中，加入50％甲醇稀释至刻度。取适量，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，测定，记录色谱图，计算毛蕊花糖苷(as)提取率。3、药材水提取工艺因素与水平裸花紫珠叶中主要苯乙醇苷类成分毛蕊花糖苷易溶于水，因此采用水加热回流提取方法，采用蒸馏水回流提取，考察加水量，浸泡时间，提取时间和提取次数4个因素，每个因素考察3个水平，因素水平见表1。表1裸花紫珠水提取水平因素表4、提取工艺正交实验方法取裸花紫珠地上干燥部分，将叶剪成均一大小，分成9份，每份约20g，依次编号为1-9组。按照表2中l9(34)正交表规定的条件进行回流提取，提取液用200目纱布过滤，浓缩，待浓缩液冷却后，加蒸馏水定容到100ml，摇匀。按照(1)和(2)所述方法测定浸膏得率和毛蕊花糖苷含量。测定结果见表2及表3。表2提取工艺正交试验设计结果注：综合评分＝(浸膏得率/19.60×0.3+as得率/1.77×0.7)×100表3方差分析表方差来源离差平方和自由度fpa94.2120.093>0.05b482.6020.546>0.05c545.7620.632>0.05d2011.8125.376<0.05比较各因素的极差可知，因素d(提取次数)对试验结果影响最大，其次是c、b和a，所以因素对综合评分值指标影响大小排序为d>c>b>a。由方差分析可知，因素d具有显著性差异。根据极差分析各因素的均值，可确定裸花紫珠药材水提取最佳工艺为a2b3c2d3，即药材浸泡时间2h后，提取3次，加水量分别为12，10，10倍量，每次提取时间为1h。5、工艺验证性试验称取裸花紫珠药材3份，每份50g，按上述确定的最佳工艺条件提取，对药材水提取工艺进行验证，测定结果见表4。结果表明，由上述确定的最佳方案提取毛蕊花糖苷的提取率较高，该方案较为稳定。表4水提取验证性试验结果二、聚乙烯醇最佳溶剂筛选本发明设计正交实验，选择聚乙烯醇、水、95％乙醇三因素，每因素选择三个水平，称取一定量的聚乙烯醇至圆底烧瓶中，取适量的水与95％乙醇混合后加入聚乙烯醇，水浴加热至80℃回流搅拌至溶解，室温放置3-5min，过滤，观察其成膜性(以直观成膜和成膜速度为指标，各占5分)，按正交表安排实验。如表5、表6所示。表5聚乙烯醇溶剂筛选水平因素表水平聚乙烯醇(g)水(ml)95％乙醇(ml)1630412840553105068表6聚乙烯醇溶剂筛选正交实验及结果分析表以上实验结果表明:①最佳成膜条件为a1b3c1，即聚乙烯醇为6g，水为50ml，95％乙醇为41ml；因素影响主次为b>c>a，即水的体积对成膜性和成膜时间影响最大,其次是乙醇，影响因素最小的是聚乙烯醇。②聚乙烯醇成膜性较好，但属于水溶性成膜材料，成膜后遇水容易出现皱缩，可进一步改进！三、壳聚糖最佳溶剂筛选针对聚乙烯醇的水溶性，本发明考虑采用不溶于水的成膜材料壳聚糖，选择壳聚糖、水、乙酸三因素，每因素选择三个水平，称取适量的壳聚糖，加入适量水及乙酸，搅拌。观察其成膜性(以直观成膜打分，满分10分)，按正交表安排实验。如表7、表8所示。表7壳聚糖溶剂筛选水平因素表水平壳聚糖(g)水(g)乙酸(g)10.3100.520.512130.7141.5表8壳聚糖溶剂筛选正交实验及结果分析表abc组别壳聚糖(g)水(g)乙酸(g)成膜性10.3100.51.220.31211.730.3141.51.040.5101.53.350.5120.54.060.51412.370.71014.780.7121.53.290.7140.52.5k13.89.27.7k29.78.88.7k310.35.87.8r6.53.41.2以上表7和表8的实验结果表明：①影响因素主次为a>b>c，即壳聚糖的用量对成膜性影响最大，其次是水，影响最小的是乙酸；结果中，7组的成膜性最好。四、聚乙烯醇与壳聚糖混合比例筛选根据正交实验对以上两种成膜材料的比较，对聚乙烯醇与壳聚糖进行不同比例混合，观察其成膜性(以直观成膜打分，满分10分)，按正交表安排实验。如表9、表10所示。表9聚乙烯醇与壳聚糖混合比例筛选水平因素表表10聚乙烯醇与壳聚糖混合比例筛选正交实验表实验号聚乙烯醇(g)壳聚糖(g)甘油(g)成膜性11113.12521222.53133342134.55222562314.573115.58323793326.5k18.62513.12513.125k21414.514k3191414.5r10.3751.3751.375由以上表9和表10的实验结果表明:①最佳比例为a3b2c3，即聚乙烯醇为12g，壳聚糖为6g，甘油为3g；因素影响主次为a>b＝c，即聚乙烯醇的量对成膜性影响最大,其次是壳聚糖和水，且相差较大。②聚乙烯醇与壳聚糖最佳比例为2：1，混合后的成膜性较单独用好。因此，本发明选用重量比为2：1的聚乙烯醇与壳聚糖作为最佳的成膜剂。本发明最佳的成膜剂的制备方法为：(2.1)取聚乙烯醇12g，水40ml，乙醇95％60ml，加热回流至聚乙烯醇溶解，得到a相聚乙烯醇溶液；(2.2)取壳聚糖6g，加水10ml，醋酸1.5ml，搅拌混匀，得到b相壳聚糖溶液；(2.3)取a相聚乙烯醇溶液和b相壳聚糖溶液，混合均匀，加入甘油3g，混匀，既得成膜剂。有益效果：本发明提供的裸花紫珠涂膜剂和现有技术相比具有以下优点：本发明通过大量实验优选原料，制备得到裸花紫珠涂膜剂外用制剂，尤其是通过大量实验筛选得到最佳的裸花紫珠提取物的制备方法和成膜剂的制备方法。本发明制备得到的裸花紫珠涂膜剂，性质稳定，成膜性好，吸收度高，具有很好的止血等活性，制备成外用制剂可避免首关消除，降低不良反应，使用方便。具体实施方式下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。实施例11、一种裸花紫珠涂膜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)裸花紫珠提取物的制备取裸花紫珠药材100g，先浸泡2h，然后分别加入药材12、10、10倍体积量的水，依次提取3次，每次提取时间为1h，合并提取液，浓缩得裸花紫珠药材浸膏；取裸花紫珠药材浸膏，加水稀释，5000rpm离心10min，取上部离心水溶液，离心水溶上大孔树脂，先用水洗脱，然后再用体积浓度50％乙醇洗脱，合并50％乙醇洗脱液，适当浓缩；然后加入1/3乙醇洗脱液体积的正丁醇萃取3次，萃取的正丁醇溶液，减压干燥，即得裸花紫珠提取物；(2)成膜剂的制备(2.1)取聚乙烯醇12g，水40ml，乙醇95％60ml，加热回流至聚乙烯醇溶解，得到a相聚乙烯醇溶液；(2.2)取壳聚糖6g，加水10ml，醋酸1.5ml，搅拌混匀，得到b相壳聚糖溶液；(2.3)取a相聚乙烯醇溶液和b相壳聚糖溶液，混合均匀，加入甘油3g，混匀，既得成膜剂；(3)取步骤(1)制备得到的裸花紫珠提取物加入到步骤(2)制备得到的成膜剂中，使裸花紫珠提取物的浓度按生药量计为2.0g/ml。实施例21、一种裸花紫珠涂膜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)裸花紫珠提取物的制备取裸花紫珠药材100g，先浸泡2h，然后分别加入药材12、10、10倍体积量的水，依次提取3次，每次提取时间为1h，合并提取液，浓缩得裸花紫珠药材浸膏；(2)成膜剂的制备(2.1)取聚乙烯醇12g，水40ml，乙醇95％60ml，加热回流至聚乙烯醇溶解，得到a相聚乙烯醇溶液；(2.2)取壳聚糖6g，加水10ml，醋酸1.5ml，搅拌混匀，得到b相壳聚糖溶液；(2.3)取a相聚乙烯醇溶液和b相壳聚糖溶液，混合均匀，加入甘油3g，混匀，既得成膜剂；(3)取步骤(1)制备得到的裸花紫珠提取物加入到步骤(2)制备得到的成膜剂中，使裸花紫珠提取物的浓度按生药量计为2.0g/ml。实施例31、一种裸花紫珠涂膜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)裸花紫珠提取物的制备取裸花紫珠药材100g，先浸泡2h，然后分别加入药材12、10、10倍体积量的水，依次提取3次，每次提取时间为1h，合并提取液，浓缩得裸花紫珠药材浸膏；取裸花紫珠药材浸膏，加水稀释，5000rpm离心10min，取上部离心水溶液，离心水溶上大孔树脂，先用水洗脱，然后再用体积浓度50％乙醇洗脱，合并50％乙醇洗脱液，适当浓缩；然后加入1/3乙醇洗脱液体积的正丁醇萃取3次，萃取的正丁醇溶液，减压干燥，即得裸花紫珠提取物；(2)成膜剂的制备取聚乙烯醇12g，水40ml，乙醇95％60ml，加热回流至聚乙烯醇溶解，得到a相聚乙烯醇溶液；(3)取步骤(1)制备得到的裸花紫珠提取物加入到步骤(2)制备得到的成膜剂中，使裸花紫珠提取物的浓度按生药量计为2.0g/ml。实施例4药效学评价1、取实施例1至实施例3制备得到的裸花紫珠涂膜剂。2、取成年家兔，随机分为给药组和空白组。将家兔左耳与右耳对齐，于耳缘末端2/3、1/2、1/3处，用一次性采血针对家兔耳缘静脉穿刺1cm，形成静脉出血后立即在出血处敷裸花紫珠涂膜剂，5s观察1次出血情况，直至出血停止。记录出血时间，并称量止血棉垫的质量，计算出血量。结果如表11和表12所示。表11出血时间结果组别数量(只)平均出血时间(秒)空白组332.22±11.48实施例3给药组324.44±11.92实施例2给药组320.83±7.49实施例1给药组38.33±3.45**注：与空白组相比，*p<0.05，**p<0.01表12出血量结果组别数量(只)平均出血量(g)空白组30.721±0.152实施例3给药组30.218±0.234**实施例2给药组30.076±0.056**实施例1给药组30.002±0.0009**注：与空白组相比，*p<0.05，**p<0.01与空白组相比，本发明提供的裸花紫珠涂膜剂可以非常显著地减少出血量(p<0.01)；尤其是本发明实施例1制备得到的给药组与实施例2、实施例3和空白组相比，可以明显地减少出血时间(p<0.05)，表明本发明提供的裸花紫珠涂膜剂具有更好的外用止血作用。实施例5致敏性实验取本发明实施例1制备得到的裸花紫珠涂膜剂涂于30位受试者(男女各半)人体皮肤表面观察30分钟，均未出现过敏反应，表明刺激性低。实施例6体外透皮实验1、雄性sd大鼠3只，体重200±20克，麻醉后用刀片剔除腹部毛发，24小时后再次麻醉取其腹部皮肤，仔细去除皮下组织、血管和脂肪，用生理盐水反复冲洗至无白色浑浊，立即使用。2、采用垂直式franz扩散池进行体外透皮实验，透皮面积2平方厘米，扩散池容积7毫升，接收液为20％乙醇水溶液，水浴温度37摄氏度，搅拌速度250转/分钟，将本发明实施例1制备得到的裸花紫珠涂膜剂，涂于大鼠离体皮肤上并固定在扩散池上，加8毫升接收液，于1、3、4、6、8、10、12、24小时取样250微升，并补充等量等温接收液。依照色谱条件，lunac18(2)色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1％醋酸水溶液(15∶85)；体积流量1.0ml·min-1，检测波长332nm；柱温30℃进行检测。精密称取毛蕊花糖苷对照品，置25ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成每1ml含毛蕊花糖苷0.1032mg的对照品。取对照品储备液适量，进样2、4、8、10、12、16、20μl，测定毛蕊花糖苷的峰面积，以毛蕊花糖苷的进样量(μg)为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线，得到毛蕊花糖苷的回归方程为y＝1788946.61x-42034.33，r＝1.0000，线性范围为0.2064～2.064μg。计算单位面积累积渗透量：q：单位面积累积渗透量；cn、ci：第n个和第i个取样点测得的药物浓度；ν：扩散池体积(8毫升)；ν0：每次取样体积(0.25毫升)；a：扩散面积(2平方厘米)。以单位面积累积渗透量q与时间t进行线性拟合，求出释放方程。具体实验结果见表13、表14。表13毛蕊花糖苷累积渗透量(μg/cm2)成分13468101224毛蕊花糖苷0.322.763.587.6810.1813.7916.2617.56表14毛蕊花糖苷渗透曲线回归方程由以上表13和表14的实验结果表明，本发明提供的花紫珠涂膜剂中有效成分毛蕊花糖苷释放过程符合零级释放方程，拟合结果良好，可以持续、恒速的释放，有利于维持平稳的血药浓度，维持较长的作用时间，减少给药次数，取得了非常好的技术效果。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12