本发明涉及一种桃花提取物及其应用，特别涉及一种桃花提取物在抑制透明质酸酶活性中的应用。
背景技术：
透明质酸作为细胞外基质的重要组成部分，除了维持胞外网状结构的完整性、黏弹性并发挥调节细胞渗透压、连接细胞、屏蔽、润滑关节和缓冲应力等机械功能外，还具有调节细胞功能、淬灭自由基等生理活性，在人体许多发育和调控过程如细胞粘附、形态发生、伤口愈合、肿瘤发生、血管形成、疼痛和炎症、变态反应中起重要作用。透明质酸酶(hyaluronidase，ec3.2.1.35)是透明质酸的特异性裂解酶，可将透明质酸降解为寡聚透明质酸，从而改变透明质酸的活性和功能。透明质酸的合成和由透明质酸酶催化的降解之间的慢性失衡可导致关节疾病和其它类型的炎症反应。摄入外源透明质酸酶抑制剂可以阻止人体内透明质酸的降解，从而防止与透明质酸降解有关疾病的发生和发展。
随着世界工业、农业和科技的高速发展，新技术、新材料不断应用，再加上环境的恶化，不可避免地造成了各种各样的变应原，使得变态反应性疾病成为一大类威胁人类健康的常见病和多发病。而病理学研究则表明，对透明质酸酶激活的抑制作用与抗变态反应之间具有密切的相关性。因此，通常将透明质酸酶活性的抑制试验作为基本方法，用于从各种材料和化合物中筛选抗变态反应药物。
在病菌感染引起的炎症反应中，多种细菌、噬菌体、真菌可表达产生透明质酸酶，寄生于链球菌的噬菌体通过合成透明质酸酶而附着于透明质酸丰富的细菌膜表面。这些微生物产生的透明质酸酶不仅在其致病过程中起着重要作用，而且产生的的透明质酸酶会降解透明质酸而使人体易患脑膜炎、滑膜炎牙周疾病、肺炎等炎症反应，而透明质酸酶抑制剂可通过阻止透明质酸的降解缓解这些病症。
我国桃栽培面积和产量均居世界第一。桃树的花量很大，约为需要量的9倍。为了获得较高的产量和优良的果实品质，每年在桃生产中，要疏去晚开花、畸形花、朝天花等，疏花量约为总花量的三分之一。桃花具有美容养颜、减淝轻身、消肿利尿、排毒畅便的功效，在古代即被用做宫廷高档的美容瘦身佳品。桃花可用来浸酒、泡茶、制作保健食品，用于美容养颜和减肥、治疗便秘等，而对桃花及其提取物对于透明质酸酶活性的影响及其在抗炎和抗变态反应方面的应用未见涉及。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种桃花提取物及其应用，该桃花提取物具有抑制透明质酸酶活性的作用。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种桃花提取物，制备方法为：将桃花用溶剂以固液比为1:5-10(kg/l)在常温条件下100-300w超声提取2次，每次30-60min，过滤并合并提取液，将提取液在40-45℃减压浓缩蒸干，即得。
所述的桃花为新鲜桃花或花蕾，或，干燥桃花或花蕾。
所述的溶剂为水或亲水性有机溶剂及其水溶液。
所述的亲水性有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮。
一种桃花提取物在抑制透明质酸酶活性中的应用。
桃花提取物可以抑制透明质酸酶活性，其半抑制剂量ic50为0.25mg/ml，抑制类型为线性混合型竞争性抑制，其抑制作用具有可逆性。
一种桃花提取物在制备透明质酸酶抑制剂中的应用。
一种桃花提取物在制备抗炎和抗变态反应的食品、保健品、化妆品、药品中的应用。
本发明的有益效果：
本发明的桃花提取物是利用水或亲水性溶剂及其水溶液，对桃花进行超声提取，并减压浓缩蒸干后得到的浅黄色或玫红色至深红色的固态产物，可以制成各种制剂、剂型使用。为了验证本发明桃花提取物对透明质酸酶活性的作用效果，本发明将透明质酸酶和桃花提取物组成反应体系，测定反应体系在400nm的吸收值，并根据样品和对照的吸收值计算桃花提取物对透明质酸酶的抑制率。结果显示，本发明制得的桃花提取物对透明质酸酶活性具有明显的抑制作用，并随着应用剂量的增加而增强，具有较好的浓度依赖效应，其对透明质酸酶活性的半抑制剂量(ic50)为0.25mg/ml。
本发明提供了一种从天然食用植物材料中获得的新的透明质酸酶抑制剂及其制备方法，为制备抗炎和抗变态反应食品、保健品、化妆品或药品提供了新的选择和安全的来源，也为桃花提供了新的应用途径。与现有药物相比，桃花提取物具有毒性低，安全可靠，药效作用强，资源丰富，工艺简单，制备成本低的特点，对于提高资源利用率和增加桃树种植效益具有积极的作用，经济效益和社会效益巨大。
附图说明
以下结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1为不同浓度桃花提取物对透明质酸酶活性的抑制效果。
图2为不同浓度桃花提取物对透明质酸酶抑制作用的lineweaver-burk曲线。
图3为不同浓度桃花提取物对透明质酸酶的kmi。
图4为桃花提取物存在时反应速度v对酶浓度([e])关系图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1
一种桃花提取物的制备方法：将桃花用水以固液比为1:5(kg/l)在常温条件下100w超声提取2次，每次30min，过滤并合并提取液，将提取液在45℃减压浓缩蒸干，即得。
实施例2
一种桃花提取物的制备方法：将桃花用甲醇以固液比为1:10(kg/l)在常温条件下200w超声提取2次，每次45min，过滤并合并提取液，将提取液在40℃减压浓缩蒸干，即得。
实施例3
一种桃花提取物的制备方法：将桃花用乙醇以固液比为1:10(kg/l)在常温条件下300w超声提取2次，每次60min，过滤并合并提取液，将提取液在45℃减压浓缩蒸干，即得。
实施例4桃花提取物对透明质酸酶活性抑制作用的测定
用ph6.0的0.2mol/l乙酸-乙酸钠缓冲液(含0.15mol/l氯化钠)分别配制浓度为1mg/ml的透明质酸酶溶液和0.344mg/ml透明质酸钠溶液，分别取45μl透明质酸酶溶液、50μl透明质酸钠溶液和不同量的桃花提取物混合，再用乙酸-乙酸钠缓冲液补足0.5ml，组成桃花提取物浓度不同的反应体系；反应体系在37℃水浴保温反应15min，用2ml质量浓度1％十六烷基三甲基溴化铵(ctab)溶液终止反应，用分光光度计测定反应体系在400nm的吸收值a1，同时测定以灭活的透明质酸酶代替透明质酸酶的反应体系在400nm的吸收值a2。同时分别测定不加桃花提取物，只加透明质酸酶或灭活的透明质酸酶的反应体系在400nm的吸收值a3和a4。抑制率按下式计算：
将抑制率对相应的反应体系中桃花提取物浓度作图，结果见图1。图1结果显示，本发明制得的桃花提取物对透明质酸酶活性具有明显的抑制作用，并随着应用剂量的增加而增强，具有较好的浓度依赖效应。其对透明质酸酶活性的半抑制剂量(ic50)为0.25mg/ml。
实施例5桃花提取物对透明质酸酶抑制类型的确定
用ph6.0的0.2mol/l乙酸-乙酸钠缓冲液(含0.15mol/l氯化钠)分别配制浓度为1mg/ml的透明质酸酶溶液和0.344mg/ml透明质酸钠溶液，分别取透明质酸酶溶液25μl、桃花提取物和透明质酸钠溶液，再用乙酸-乙酸钠缓冲液补足0.5ml，测定反应体系中桃花提取物浓度不同(0-0.3mg/ml)且透明质酸钠浓度变化时(0.014-0.062mg/ml)，反应体系在400nm的吸光值(方法同实施例4)，同时测定以灭活的透明质酸酶代替透明质酸酶的反应体系(对照)在400nm的吸收值，根据样品与对照在a400nm的变化计算酶促反应速率，以反应速率对底物浓度用双倒数作图得到lineweaver-burk曲线(如图2)，并计算酶催化反应的动力学参数kmi和vmax值，通过比较kmi和vmax值的变化来判断桃花提取物对透明质酸酶活性的抑制类型。图2结果表明，加桃花提取物时的酶促反应动力学曲线与无抑制剂时的动力学曲线相交于第二象限，加入桃花提取物后酶促反应的最大反应速度vmax降低，米氏常数kmi升高，且底物抑制的解离常数ksi＞抑制剂的解离常数ki。因此，桃花提取物对透明质酸酶为混合型竞争性抑制。
实施例6不同浓度桃花提取物对透明质酸酶的kmi(竞争性抑制时的米氏常数)
由不同浓度桃花提取物存在条件下的kmi对桃花提取物的浓度([i])作图得到图3，图3结果表明，随着反应体系中桃花提取物浓度的增加，kmi增大，即酶与底物的结合能力下降，活性复合物减少，从而使反应速率下降。另外从图3可以看出，kmi与桃花提取物浓度([i])间的关系为一直线，因此桃花提取物对透明质酸酶为线性混合型竞争性抑制。
将1mg/ml透明质酸酶溶液与5mg/ml桃花提取物乙酸-乙酸钠溶液以体积比9:10的比例混合，37℃保温15min后，取不同体积(5-150μl)混合液加40μl3.44mg/ml透明质酸钠溶液，然后加乙酸-乙酸钠缓冲液至0.5ml，37℃水浴保温反应15min，用2ml质量浓度1％十六烷基三甲基溴化铵(ctab)溶液终止反应，用分光光度计测定反应体系在400nm的吸收值。同时设置不加桃花提取物的体系作为无抑制剂组。同时测定以灭活的透明质酸酶代替透明质酸酶的反应体系(对照)在400nm的吸收值，由样品与对照在a400nm的变化计算酶促反应速率，以反应速度v对酶浓度([e])作图得到图4。由图4可以看出，在有桃花提取物存在条件下，随着酶浓度的增加，反应速度增加，并且最后进入一个平台期。虽有相同浓度的底物，但相同酶浓度时，反应速度均低于无抑制剂时的反应速度。因此，桃花提取物对透明质酸酶为可逆性抑制。
实施例7桃汁低醇饮料
桃汁中加入桃汁质量分数0.3％的桃花提取物，接种经扩培后的酿酒酵母，接种量1-3％、发酵温度17-22℃，发酵一周后过滤，制得发酵醪。以重量百分比计，按照发酵醪40％、桃汁20％、白砂糖10％、柠檬酸0.2％-0.5％、桃子香精0.02％-0.1％，其余为水，经调配、均质、杀菌、灌装制成桃汁低醇饮料，辅助用于改善炎症反应。
实施例8桃花润肤水/霜
(1)桃花润肤水：以重量百分比计，包括桃花提取物0.01-1％、透明质酸0.1-1％、桃花精油0.1-0.5％、甘油1-3％、丁二醇2-5％，其余为水。具有抗炎、美白、保湿等功效。
(2)桃花润肤霜：以重量百分比计，包括桃花提取物0.01-2％、甜杏仁油5-10％、猕猴桃籽油5-10％、桃花精油0.1-0.5％、透明质酸0.1-0.5％、维生素c乙基醚0.5-2.0％、表面活性剂g570.5-2.0％，其余为水。具有抗氧化、淡斑、滋养皮肤和抗炎等功效。
实施例9含有桃花提取物的皮肤外用药
以重量百分比计，包括炉甘石15％、桃花提取物3％、甘油5％，其余为水。将炉甘石、桃花提取物研成细粉后混合均匀，加甘油、少量水研成糊状，然后加全所需水量，制得混悬液；加混悬液重量0.2-1％羧甲基纤维素钠，经充分搅拌溶解后搅匀即可。外用于皮肤表面涂擦，用于皮肤抗炎、止痒作用。
以上所述仅为本发明最佳的实施例，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。