本发明属于医药领域，具体涉及一种斑蝥素衍生物用作mmp-9抑制剂和用于制备脑保护药物的应用。
背景技术：
mmp-9为血清基质金属蛋白酶-9，又名明胶酶b。基质金属蛋白酶(mmps)是一种内源性钙锌依赖性内切酶家族，因其辅助因子为钙离子、锌离子而得名。目前已发现其家族有28个成员，分离鉴别编号为mmp-1～mmp-28，根据功能不同将其分为5大类：胶原酶、明胶酶、基质水解酶、膜型mmps及其他mmps。其中mmp-9能够特异地水解细胞外基质(ecm)和基底膜(bm)的化学成分ⅳ型胶原、ⅴ型胶原、黏连蛋白等，其结构域从羧基端至氨基端依次为类血红素结合蛋白酶区、富含脯氨酸铰链区、催化活性区、前肽区和信号肽区等。
研究表明，mmp-9在血脑屏障损伤中发挥了重要作用，抑制mmp-9有助于维持血脑屏障完整性，减少不利刺激对脑部损伤(参考文献：mmp-2、mmp-9在血脑屏障损伤中的作用，中国医学装备2008年第5卷第5期；vegf和mmp-9与缺血性脑卒中关系的研究进展，中国临床药理学与治疗学2015年第20卷第3期)。mmp-9抑制剂可用于制备成脑保护的药物。
斑蝥素是广泛存在于1500多种斑蝥体内中的一种天然防御性毒素。斑蝥属芫青科昆虫，性寒味辛，为剧毒中药材，除具有抗癌活性外，尚有抗病毒、壮阳、升高白细胞等多种活性。我国是世界上最早认识斑蝥药用价值的国家，在《本草纲目》中就其形态、习性及用法有详细的记载。临床观察表明，斑蝥素有明显的抗癌作用，对肝癌、食道癌、胃癌、肺癌等均有抑制效果。由于斑蝥素毒性强烈，口服斑蝥素会导致严重的胃肠溃疡，泌尿器官小管的上皮内层溃疡以及腹膜内腔毛细管充血，继而出现严重的肝充血和水肿，世界范围内对斑蝥素进行了多种结构衍生化研究，以期望对其“减毒增效”。曾文南等于2006年较为系统地介绍了斑蝥素及其衍生物的研究进展(参考文献：斑蝥素及其衍生物的合成与活性研究进展，有机化学2006年第26卷第5期)。斑蝥素化学结构式如下：
斑蝥素及其衍生物的活性研究还在不停的研究，不断有新的研究成果问世。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种斑蝥素衍生物用作mmp-9抑制剂和用于制备脑保护药物的应用。
本发明的技术方案如下：
如下斑蝥素衍生物用作mmp-9抑制剂的医药用途，化学结构式如下：
上述斑蝥素衍生物用于制备保护血脑屏障的药物的医药用途。
上述斑蝥素衍生物用于制备脑保护的药物的医药用途。
一种脑保护药物制剂，活性成分为上述斑蝥素衍生物，还含有药学上可以接受的辅料。
优选地，所述辅料包括液体辅料、固体辅料或半固体辅料等。
有益效果：
本发明提供的斑蝥素衍生物可以通过抑制mmp-9表达维持血脑屏障的完整性，因而具备制成脑保护药物的前景；现有技术没有报道过上述斑蝥素衍生物具备该作用，也不存在技术启示，对于本领域技术人员而言是非显而易见的，具备专利法规定的创造性。
附图说明
图1为斑蝥素及其衍生物对mmp-9活性的影响；
图2为斑蝥素及其衍生物对血脑屏障基底膜collagenⅳ表达的影响；
图3为斑蝥素及其衍生物对血脑屏障通透性的影响。
具体实施方式
下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容。动物实验方法参照文献方法(高兰等，丁苯酞对脑缺血再灌注损伤大鼠mmp-9活性和血脑屏障通透性的影响，中风与神经疾病杂志2012年2月第29卷第2期)。
实施例1：
一、实验材料
健康雄性wistar大鼠，体重250±10g，购自南京青龙山实验动物基地。
mmp-9兔多克隆抗体购自武汉艾美捷科技有限公司，collagenⅳ兔多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。
斑蝥素衍生物1～5化学结构式如下，自制或购买，纯度不低于95％。
另设斑蝥素作为对比组。
二、实验方法
1、分组、造模及给药方法
大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、药物治疗组(斑蝥素衍生物1～5治疗组、斑蝥素对比组)。各组分别在缺血再灌注24h各取5只大鼠进行血脑屏障通透性的研究，同时各组另各取5只大鼠进行mmp-9、collagenⅳ型胶原免疫组化测定。
参照zealonga线栓法，并加以改进制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。10％水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉后，仰卧固定，常规消毒，取颈部正中切口，分离并暴露左侧颈总及颈内、外动脉。小心分离迷走神经，结扎左侧颈总及颈外动脉根部，由左侧颈总动脉分叉处剪一小口插入头端烧圆涂蜡呈钝形的直径为0.245mm的尼龙鱼线，线栓插入深度约18～20mm感有轻微阻力时停止，扎紧并固定栓线，缝合皮肤，阻断血流2h后，抽提栓线至颈总动脉内实现再灌注。假手术组除不插入尼龙鱼线外，其余步骤同手术组。选择苏醒后右上肢屈曲、行走时向右侧旋转或右侧肢体瘫痪的大鼠造模成功者进行后续实验。
假手术组不给药。药物治疗组于再灌注同时给予腹腔注射斑蝥素衍生物1～5或斑蝥素50mg/kg，模型组再灌注同时给予等剂量生理盐水。
2、免疫组织化学方法测定mmp-9蛋白及collagenⅳ型胶原
缺血再灌注24h后用10％水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，剪开胸腔暴露心脏，0.9％生理盐水250ml心内灌注冲洗，同时剪开右心耳至液体变清亮为止。后用4％多聚甲醛溶液灌注固定，取脑，多聚甲醛溶液固定72h，常规脱水，石蜡包埋，冠状切片。具体操作步骤参考说明书。每张组织切片在缺血侧选5个不重复视野，100倍镜下观察，400倍下计数。记录其中胞浆被染成棕黄色的mmp-9阳性细胞数及collagenⅳ阳性微血管个数。位于视野边缘处的不完整细胞或微血管按照在视野中的面积进行估算统计。
3、伊文思兰方法标本采集
各组动物在预订时间点处死前30min经舌下静脉注射伊文思蓝(2ml/kg，eb)。大鼠全身迅速变蓝。30min后相应时间点处死大鼠，0.9％生理盐水心脏灌注至右心房流出清亮液，断头取脑，放置于2ml无菌冻存管中，液氮中保存备用。
4、血脑屏障通透性的测定
用甲酰胺浸泡法测脑组织eb量。电子天平分别把各组标本称重后置于甲酰胺溶液(每100mg脑组织加入1ml甲酰胺)中，45℃水浴24h，1000r/min离心5min，用吸管轻轻吸出上清液，可见光分光光度计(λ＝632)测定上清液od值，甲酰胺做空白比色，按公式计算脑组织eb含量:脑组织eb含量(μg/g)＝待测样品eb含量(μg/ml)×甲酰胺容量(ml)÷脑湿重(g)，待测样品eb含量系根据标准曲线回归方程求得。
5、统计学方法
采用spss19.0统计软件。计量资料均以均数±标准差(χ±s)表示，多组数据比较采用单因素方差分析，任意两组之间的比较采用lsd检验，p＜0.05有统计学差异。
三、实验结果
1、斑蝥素及其衍生物对mmp-9活性的影响
与假手术组相比，缺血再灌注组脑内mmp-9阳性细胞数显著升高；与缺血再灌注组相比，斑蝥素对比组脑内mmp-9阳性细胞数无显著变化(p＞0.05)，斑蝥素衍生物1～5治疗组脑内mmp-9阳性细胞数显著降低(p＜0.05)。结果见表1和图1。
表1斑蝥素及其衍生物对mmp-9活性的影响
2、斑蝥素及其衍生物对血脑屏障基底膜collagenⅳ表达的影响
与假手术组相比，缺血再灌注组collagenⅳ阳性血管计数显著降低；与缺血再灌注组相比，斑蝥素对比组collagenⅳ阳性血管计数无显著变化(p＞0.05)，斑蝥素衍生物1～5治疗组collagenⅳ阳性血管计数显著升高(p＜0.05)。结果见表2和图2。
表2斑蝥素及其衍生物对血脑屏障基底膜collagenⅳ表达的影响
3、斑蝥素及其衍生物对血脑屏障通透性的影响
与假手术组相比，缺血再灌注组eb含量显著升高；与缺血再灌注组相比，斑蝥素对比组eb含量无显著变化(p＞0.05)，斑蝥素衍生物1～5治疗组eb含量显著降低(p＜0.05)。结果见表3和图3。
表3斑蝥素及其衍生物对血脑屏障通透性的影响
上述结果表明，本发明提供的斑蝥素衍生物可以通过抑制mmp-9表达维持血脑屏障的完整性，因而具备制成脑保护药物的前景。