具有美白抗皱活性的糙叶五加提取物制备方法及在化妆品中的应用与流程

本发明涉及糙叶五加提取物制备方法，该提取物具有美白和抗皱的功效，可以应用于美白抗皱化妆品中。

背景技术：

皮肤衰老是机体的自然发展规律。随着对皮肤衰老机体的深入研究，人们不断的研究和总结预防和延缓皮肤衰老的有效途径和方法。中草药因其独特机理和美容效果已被广泛应用于护肤类化妆品中。肤美白抗衰老是现代化妆品的主题，具有皮肤美白抗皱功能的化妆品是最受消费者青睐的主流化妆品之一。现代科学研究证明，皮肤衰老是一个非常复杂的过程，受到多种因素的影响，其中黑色素的生成和自由基引起皮肤弹性纤维的变性是两大主要因素。

现今，美白化妆品市场发展十分迅速，美白剂的开发研究也不断推出。近年来，在化妆品中使用的美白剂主要有对苯二酚(氢醌)、l-抗坏血酸(维生素c)、曲酸和熊果苷等化合物。但这些美白剂存在着诸多缺陷，如氢醌的刺激性非常大，维生素c非常不稳定，曲酸对光、热及金属离子不稳定，而且皮肤吸收性差，熊果苷作用单一和效果不佳等。所以开发具有良好安全性、稳定性，抑制效果明显，性价比良好的天然美白剂，已成为当前医药和化妆品行业的主要研究方向之一，具有非常好的发展前景。

糙叶五加是湖南省特色植物资源，其根皮亦作为“五加皮”收载于《湖南省中药材标准》，主要用于治疗风湿痹痛、拘挛麻木、筋骨疲软、水肿、跌打损伤、疝气腹痛等症，在湖南娄底新化地区，民间也常用来作为食材和酿制药酒。但是其茎叶、果实被大量丢弃。目前，国内外专家对糙叶五加的研究与应用不断深入。但是，糙叶五加的应用大多在药用方面，而对于其在化妆品中的研究还是很少，尤其将其应用于美白抗皱化妆品中的研究尚未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种糙叶五加提取物在制备美白抗皱化妆品中的应用，活性的及其制备方法，该糙叶五加提取物具有抗自由基氧化、抑制黑色素合成和上调胶原蛋白水平的功效，可应用于美白抗皱化妆品中。

本发明的技术解决方案是：

具有美白抗皱活性的糙叶五加提取物的制备方法如下：

(1)将干燥的糙叶五加粉碎，过40-80目筛；

(2)将糙叶五加粉末置于圆底烧瓶中，按每1g粉末加入6ml～25ml石油醚脱脂；

(3)将步骤(2)中的滤渣按每1g粉末加入6ml～25ml乙醇溶液，乙醇的质量浓度介于10％～90％，在30℃～90℃条件下加热浸泡提取3次，每次0.5～3h，合并提取液，提取液浓缩回收溶剂后即得到糙叶五加粗提物；

(4)将步骤(3)中的糙叶五加粗提物经分子筛脱色后即得糙叶五加提取物。

上述糙叶五加为糙叶五加的干燥根、茎、叶、果实或其混合物。

本发明的另一个目的是将糙叶五加提取物用于美白抗皱化妆品中，制备出效果良好、绿色健康、性质稳定的美白抗皱化妆品。化妆品的剂型没有特别的限制，可以是乳液、溶液、膏状、粉状等。

本发明的有益效果是通过对羟自由基氧化作用、黑色素合成的抑制作用以及对胶原蛋白上调作用等试验来验证糙叶五加提取物具有皮肤美白和抗皱功效。

附图说明

图1糙叶五加提取物抑制黑色素细胞中黑色素合成试验结果

图2糙叶五加提取物对i型胶原蛋白合成的影响结果

具体实施方式

本发明从糙叶五加中提取美白抗皱活性成分，具有抗自由基氧化、抑制黑色素合成和上调胶原蛋白水平的功效，因此可以应用于具有美白抗皱活性的化妆品中。

本发明从糙叶五加中提取具有美白抗皱活性成分的方法包括以下步骤：

将糙叶五加粉碎，过40-80目筛，经石油醚脱脂后用溶液提取，提取液浓缩回收溶剂后即得到粗提物；粗提物经分子筛脱色后即得糙叶五加提取物。

采用上述方案获得的活性物具有良好的稳定性，研究人员对最终制成的浸膏，进行抗自由基、抑制黑色素合成和胶原蛋白水平的测试，发现该提取物具有较高的活性。其功效检测方法如下：

一、提取物抗自由基能力的体外检测方法

称取适量dpph(1，1-二甲基苄基苯肼)，用无水乙醇定容于250ml容量瓶中，浓度为2*10-4mol/l；实验组分别加入10、50、100μg/ml糙叶五加提取物样品，阳性对照组加入50μg/ml维生素c，空白对照组加入相应的提取溶剂。混合均匀后，室温下(25℃或水浴25℃)反应10min后，测定520nm波长下的吸光度值。根基下面公式计算清除率：清除率(％)＝(1-at/a空白)×100％(at：样品在520nm波长下的吸光度值；a空白：空白对照在520nm波长下的吸光度值)。

结果表明，糙叶五加提取物有较强的dpph自由基清除能力，其活性与vc相当。

二、抑制黑色素细胞中黑色素合成试验

将bf16黑色素瘤细胞以1*105个/ml的密度接种于96孔板中，每孔90μl，co2孵箱中孵育24小时后，每孔加入样品溶液。同时设立培养基和细胞的空白对照组。

将培养板置于孵箱中孵育72小时后，弃去上清液，pbs洗涤两遍，然后每孔加入0.5ml胰酶消化细胞3min，每孔加入2ml维持液终止消化。混匀后，每种浓度取出0.5ml做细胞计数。其余细胞悬液以2500r/min离心分离5min，弃去上清液，于沉淀中加入naoh溶液，加热使黑色素溶解，选择490nm波长在酶联免疫检测仪下测定吸光度值。按下式计算样品对黑色素合成抑制率。

实验结果如图1所示，表明糙叶五加提取物有较强的酪氨酸酶活性抑制能力，其活性亦与vc相当。

三、对i型胶原蛋白合成的影响

将成纤维hs68细胞培养于dmem培养基(含10％fbs，1％青霉素链霉素溶液)，传至3代备用。将上述样品配制成不同浓度的样品溶液备用。将生长至80％左右的成纤维hs68细胞回收至离心管汇总，按照1.0*104个细胞每孔接种至96孔细胞培养板中，每一质量分数设置6个处理孔，置于培养箱(37℃，5％co2)中培养24h后，除去培养基，用pbs清洗3次，向空白对照组和实验组添加相应溶液，放置于细胞培养箱中培养24h。除去样品溶液，用pbs清洗3次，加入cck-8检测液培养3h。用酶标仪于450nm处测定各检测液的吸光度(a)。

实验结果如图2所示，表明糙叶五加提取物对i型胶原蛋白合成具有促进作用，因此可以判断其具有一定程度的抗皱作用。

四、提取液的美白效果测试：

取上述方法中糙叶五加提取液三份，各8g，并分别用甘油稀释至50g，备用；

选健康正常的志愿受试者90人，分成3组，每组30人，并用uva照射手腕内侧区域，使该区域局部晒黑；

用上述样品分别给3组受试者涂抹，一天2次，涂抹30天，每次只涂抹皮肤晒黑的一半。

检测结果：30天后，每组受试者局部晒黑区域涂抹提取液稀释液的一半均较原来未经晒黑的皮肤更白，而晒黑区域未涂抹提取液稀释液的一半较原来未经晒黑的皮肤明显黑一些。

试验结果表明，本发明的糙叶五加提取物对人的皮肤具有良好的美白效果。

以上实施例显示和描述了本发明的基本原理和主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例和实验例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，而不是以任何方式限制本发明的范围，在不脱离本发明范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的范围内。