一种注射用乌头提取物的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种注射用乌头提取物的制备方法，其包括提取、萃取、反相色谱纯化和水解炮制过程；乌头药材采用乙醇提取，有机相萃取和反相色谱纯化，得到单酯型和双酯型生物碱组分；将该组分中的双酯型生物碱在碱性条件下水解转化，去除毒性，冷冻干燥，即得到淡黄色的乌头提取物。本发明的制备工艺重复性好，自动化程度高，操作工艺简便，适合于大规模工业化生产；得到的乌头提取物有效的去除了色素等大量杂质，提高了药效成分单酯型生物碱的含量，控制了毒性成分双酯型生物碱的含量，经适当的药效学和毒性评价，可作用乌头注射剂的原料。
【专利说明】一种注射用乌头提取物的制备方法
【【技术领域】】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，可用于一种注射用乌头提取物的制备方法。
【【背景技术】】
[0002]乌头(Aconitum carmichaeli Dibx)属于毛茛科乌头属植物，目前世界上已发现超过300个品类，我国是主要的产区之一。乌头具有祛风除湿，胜湿止痛的功效，临床上主要用于抗炎、镇痛、镇静、解热、免疫抑制、抗肿瘤作用及强心、降血压、扩张血管等作用，具有较高的药理活性和药用价值。
[0003]乌头注射剂是从乌头中提取出的总生物碱制剂，临床上主要用于癌症晚期的镇痛、抗炎和抗癌作用，给药方式主要有肌肉注射和静脉注射。传统的肌肉注射通过皮下血管吸收，起效慢，而且很容易造成局部组织痉挛；此外，肌肉注射的剂量小，需多次给药，给病人带来痛苦的同时药效也不显著，为临床应用带来巨大的局限性，所以，乌头注射剂正在向静脉注射的方向发展。
[0004]乌头的有效成分为二萜类生物碱，主要包括胺醇型生物碱，单酯型生物碱，双酯型生物碱和脂肪族生物碱，其中双酯型生物碱的含量最高，毒性也最大，在制备注射剂的过程中需要经过水解炮制，去除毒性。《中国药典》对炮制后的乌头中双酯型生物碱的含量有明确的规定，不得超过0.04%，以保证用药的安全性。
[0005]乌头注射剂传统的制备工艺比较简单，采用乙醇冷浸提取，药渣水煮，合并提取液后直接酸性条件下水煮炮制，活性炭脱色后再水煮的方法。此制备工艺没有明确的除杂过程，得到的乌头提取物中杂质含量较高，颜色较深；此外，该工艺在酸性条件下炮制效率不高，产物中还有部分毒性成分双酯型生物碱残留。因此，可以针对乌头药材建立一种乌头提取物的制备工艺，该工艺有效地去除了色素等杂质，提高了药效成分单酯型生物碱的含量，控制了毒性成分双酯型生 物碱的含量，再经过适当的药效学和毒性评价，可作用乌头注射剂的原料，目标是改善乌头注射剂的安全性和稳定性。
【
【发明内容】
】
[0006]本发明的目的在于克服现有技术的不足，开发了一套完整的注射用乌头提取物的制备方法。
[0007]本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
[0008]一种注射用乌头提取物的制备方法，其具体步骤为:
[0009](I)超声提取:将乌头药材粉碎后加入乙醇水溶液超声提取两次，合并两次提取液，蒸至无醇味；
[0010]所述的乙醇水溶液的体积浓度为75~100%，用量为6~10倍量(w: v)，w: v是指乌头药材的质量和乙醇水溶液的体积比；
[0011]所述的提取时间为每次I~3小时；
[0012](2)有机相萃取:直接向步骤(1)所得的提取液中加水补充至固体充分溶解，滴加氨水调碱性；加入有机溶剂萃取，合并有机相溶液蒸干；
[0013]所述的碱性条件为pH8~10，有机溶剂为乙酸乙酯，环己烷，二氯甲烷等弱极性溶剂；
[0014]所述的有机相与水相体积比为1:1~1: 1.5，萃取2~4次；
[0015](3)反相色谱纯化:将步骤(2)所得的固体残余物加入有机溶剂和水的混合溶液重溶，进行反相色谱纯化；上样量与填料的质量比为1: 30~1: 100;依次用洗脱液进行三次梯度洗脱，每次洗脱体积为2~4倍柱体积；取第二次洗脱液减压浓缩，得到生物碱组分；
[0016]所述的有机溶剂可为甲醇、乙醇或者乙腈等；
[0017]所述的洗脱液有机相的体积分数为第一次10~20%，第二次20~60%，第三次100% ；
[0018]所述的反相色谱填料粒径为5~60 μ m ;
[0019](4)水解炮制:直接向步骤(3)所得的生物碱组分中加水，超声至固体完全溶解，滴加氨水调碱性，回流煮沸，冷却，冷冻干燥得到注射用乌头提取物；
[0020]所述的水溶液用量为400~600倍量(w: v)w: V是指生物碱组分的质量和水溶液的体积比。
[0021]所述 的水解炮制碱性条件为pH8~10 ；
[0022]所述的水解温度为60~100°C恒温环境，水解时间为20min~3h ；
[0023]所述的注射用乌头提取物采用外标法，测得单酯型生物碱含量以苯甲酰乌头碱，苯甲酰中乌头碱和苯甲酰次乌头碱的总量计大于20%，双酯型生物碱含量以乌头碱，中乌头碱和次乌头碱的总量计小于4%。另有水解生成的胺醇型生物碱和中间产物焦乌头碱。
[0024]淡黄色的乌头提取物，采用外标法测得乌头提取物中单酯型生物碱含量大于20%，双酯型生物碱含量小于4%，换算到药材中双酯型生物碱含量小于0.005%，优于《中国药典》中制川乌和制草乌项下毒性成分双酯型生物碱的质量标准。
[0025]与现有技术相比，本发明的积极效果是:
[0026](I)杂质含量少，水解过程稳定:本发明通过乙醇超声得到乌头生物碱提取液，采用有机相萃取除去了强极性杂质，反相色谱纯化除去了弱极性杂质，避免了水解炮制过程副反应的发生，为水解过程的稳定性和高效性提供了有力的保障。
[0027](2)毒性成分双酯型生物碱含量低:本发明采用碱性水解炮制方法，得到产物用外标法测定双酯型生物碱含量以乌头碱，中乌头碱和次乌头碱总量计小于4%，控制了毒性成分双酯型生物碱的含量；
[0028](3)方法简单易行，操作简便:本发明涉及到的注射用乌头提取物的制备方法，仪器自动化程度高，操作方法简便，可适用于大规模生产。
【【具体实施方式】】
[0029]以下提供本发明一种注射用乌头提取物的制备方法的【具体实施方式】。
[0030]实施例1
[0031]生川乌500g，粉碎，加入10倍量95%乙醇超声提取2次，每次lh，合并乙醇提取液，蒸至无醇味；加水定容至IOOmL,滴加ImL氨水(pH9~10,溶液颜色加深),加入IOOmL乙酸乙酯溶液萃取3次，合并乙酸乙酯层，蒸干；加入100mL20%甲醇溶解，分三次过20gC18反相色谱填料，每次上样33mL，再用3倍柱体积20%甲醇水溶液、3倍柱体积40%甲醇水溶液和100%甲醇溶液洗脱，取40%甲醇水洗脱液蒸干；加入600倍量的水溶解(滴加氨水调pH8-9)，80°C油浴水煮lh，冷却，冷冻干燥，得到川乌提取物质量为0.32g。采用高效液相色谱法外标法测得单酯型生物碱含量以苯甲酰乌头碱，苯甲酰中乌头碱和苯甲酰次乌头碱的总量计约为20.6%，双酯型生物碱含量以乌头碱，中乌头碱和次乌头碱的总量计约为
3.5%。
[0032]实施例2
[0033]生川乌500g，粉碎，加入8倍量75%乙醇超声提取2次，每次lh，合并乙醇提取液，蒸至无醇味；加水定容至IOOmL,滴加氨水调pH8~9,加入IOOmL乙酸乙酯溶液萃取4次，合并乙酸乙酯层，蒸干；加入100mL20%甲醇溶解，分三次过20g C18反相色谱填料，每次上样33mL，再用2倍柱体积20%甲醇水溶液、3倍柱体积50%甲醇水溶液和100%甲醇溶液洗脱，取50%甲醇水洗脱液蒸干；加入500倍量的水溶解(滴加氨水调pH8-9)，70°C油浴水煮2h，冷却，冷冻干燥，得到川乌提取物质量为0.33g。采用高效液相色谱法外标法测得单酯型生物碱含量以苯甲酰乌头碱，苯甲酰中乌头碱和苯甲酰次乌头碱的总量计约为20.5%，双酯型生物碱含量以乌头碱，中乌头碱和次乌头碱的总量计约为3.9%。
[0034]本发明的制备工艺重复性好，自动化程度高，操作工艺简便，适合于大规模工业化生产；得到的乌头提取物有效的去除了色素等大量杂质，提高了药效成分单酯型生物碱的含量，控制了毒性成分双酯型生物碱的含量，经适当的药效学和毒性评价，可作用乌头注射剂的原料。 [0035]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。
【权利要求】
1.一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，其具体步骤为: (1)超声提取:将乌头药材粉碎后加入乙醇水溶液超声提取两次，合并两次提取液，蒸至无醇味； (2)有机相萃取:直接向步骤(1)所得的提取液中加水补充至固体充分溶解，滴加氨水调碱性；加入有机溶剂萃取，合并有机相溶液蒸干； (3)反相色谱纯化:将步骤(2)所得的固体残余物加入有机溶剂和水的混合溶液重溶，进行反相色谱纯化；上样量与填料的质量比为1: 30~1: 100 ;依次用洗脱液进行三次梯度洗脱，每次洗脱体积为2~4倍柱体积；取第二次洗脱液减压浓缩，得到生物碱组分； (4)水解炮制:直接向步骤(3)所得的生物碱组分中加水，超声至固体完全溶解，滴加氨水调碱性，回流煮沸，冷却，冷冻干燥得到注射用乌头提取物。
2.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤⑴中，所述的乙醇水溶液的体积浓度为75~100%，用量为6~10倍量(w: V); 所述的提取时间为每次I~3小时。
3.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤⑵中，所述的碱性条件为pH8~10，有机溶剂为乙酸乙酯，环己烧，二氯甲烷中的一种； 所述的有机相与水相体积比为1:1~1: 1.5，萃取2~4次。
4.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的有机溶剂可为甲醇、乙醇或者乙腈中的一种。
5.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的洗脱液有机相的体积分数为第一次10%~20%，第二次20%~60%，第三次100%。
6.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的反相色谱填料粒径为5~60 μ m。
7.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤⑷中，所述的水溶液用量为400~600倍量(w: V)。
8.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤⑷中，所述的水解炮制碱性条件为PH8~10。
9.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤⑷中，所述的水解温度为60~100°C恒温环境，水解时间为20min~3h。
10.如权利要求1所述的一种注射用乌头提取物的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(4)中，所述的注射用乌头提取物采用外标法，测得单酯型生物碱含量以苯甲酰乌头碱，苯甲酰中乌头碱和苯甲酰次乌头碱的总量计大于20%，双酯型生物碱含量以乌头碱，中乌头碱和次乌头碱的总量计小于4%。另有水解生成的胺醇型生物碱和中间产物焦乌头碱。
【文档编号】A61K36/714GK103768173SQ201410024866
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年1月20日 优先权日:2014年1月20日
【发明者】周彬彬, 金郁, 柯燕雄, 傅青 申请人:华东理工大学