一种罗汉果的提取方法与流程

本发明涉及植物提取技术领域，更具体地说，它涉及一种罗汉果的提取方法。

背景技术：

罗汉果为葫芦科植物罗汉果的干燥果实，常生于山坡林下及河边湿地、灌木丛中。分布于江西、湖南、广东、广西、贵州等地，且具有清热润肺，利咽开音，滑肠通便的功效。

在公开号为cn108743647a的中国发明专利申请文件中公开了一种罗汉果提取物的制备方法，其包括如下步骤：(1)采摘新鲜的罗汉果，放入自动炒料机中进行翻炒，粉碎，得到罗汉果粉；(2)将柠檬、雪梨、白糖、酵母菌、水混合，密封发酵制备提取液；(3)将罗汉果粉加入提取液中，制取罗汉果粗提物；(4)在罗汉果粗提物中加入乙醇，采用超声波辅助提取得到罗汉果粗提液；(5)取罗汉果粗提液进行吸附；采用30％乙醇进行洗脱；(6)将洗脱液进行减压蒸馏浓缩成浸膏，再喷雾干燥，即可得到罗汉果提取物。

上述申请文件中，将新鲜的罗汉果与蛤粉在一定温度下进行翻炒干燥，能够提高罗汉果提取物的药效，并且更利用配合后期提取液的使用，但新鲜的罗汉果在翻炒过程中，其细胞壁容易产生过度的损坏，导致有效成分的流失，进而降低药性，且过度损坏的细胞壁，也容易使罗汉果吸收较多的杂质，不利于进行后续有效成分的分离提取，进而导致该罗汉果提取物的制备方法整体应用效果不佳，因此，需要提出一种新的方案来解决上述问题。

技术实现要素：

针对现有技术中因罗汉果在提取过程中容易过度损伤细胞壁，而导致其整体应用效果不佳的问题，本发明的目的一在于提供一种罗汉果的提取方法，通过将罗汉果原料进行冷冻粉碎处理，以解决上述技术问题，其能够减少罗汉果细胞壁的损伤，有利于避免杂质的引入以及有效成分的流失，且整体具有良好的应用效果。

为实现上述目的一，本发明提供了如下技术方案：

一种罗汉果的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，冷冻粉碎，将罗汉果原料用水浸润后，进行冷冻处理，然后将其进行粉碎，得到冻干粉；

步骤二，石油醚萃取处理，将步骤一得到的冻干粉置于萃取器中，加入2-3倍量的石油醚，进行第一次萃取，过滤取出萃取液，在萃取器中再次加入1.5-2.5倍量的石油醚，进行第二次萃取，过滤取出萃取液，得到萃取后的罗汉果；

步骤三，烘干处理，将步骤二中萃取后的罗汉果进行真空干燥，得到罗汉果粉；

步骤四，微波回流萃取，将步骤三中的罗汉果粉置于微波萃取器中，加入3-4倍量的75-85％乙醇溶液，进行第一次微波萃取，得到第一萃取液；在萃取器中再次加入2-3倍量的75-85％乙醇溶液，进行第二次微波萃取，得到第二萃取液；

步骤五，过滤浓缩，将步骤四中第一萃取液和第二萃取液进行混合，用200-300目筛网进行过滤，得到混合液，然后将混合液在水浴浓缩器中减压浓缩，得到罗汉果提取物。

通过采用上述技术方案，将罗汉果原料用水浸润后，进行冷冻处理，能够有效防止罗汉果中有效成分的流失，且在粉碎过程中，也不易对罗汉果中有效成分造成破坏。同时，在冷冻粉碎过程中，破裂将顺着罗汉果细胞壁形成胞壁纹路破裂，不仅能够避免对细胞壁造成额外的损坏，还能够避免杂质的引入，并有利于在后续提取过程中，实现罗汉果有效成分的快速溶出，进而能够大大提高该罗汉果提取方法的整体应用效果。

在石油醚萃取处理过程中，进行两次萃取处理，能够去除罗汉果中的脂类物质，有利于进行后续有效成分的分离提取。烘干处理，能够去除罗汉果表面粘附的石油醚溶剂。然后进行微波回流萃取，萃取两次，使罗汉果中有效成分(比如罗汉果甜苷ⅴ及ⅳ)能够完全分离出来，然后过滤后经浓缩得到罗汉果提取物，如此操作，使杂质不易对罗汉果造成污染，进而使得到的罗汉果提取物具有较高的品质。

进一步优选为，所述步骤一中，冻干温度为﹣20-﹣50℃，时间为8-12h。

进一步优选为，所述步骤二中，第一次萃取时间为2-3h，第二次萃取时间为1-2h，且萃取过程中的搅拌速度为30-50r/min。

进一步优选为，所述步骤三中，真空干燥的温度为60-80℃，时间为2-3h。

进一步优选为，所述步骤四中，第一次微波萃取时间为3-4h，第二次微波萃取时间为2-3h，且萃取过程中的搅拌速度为40-50r/min。

进一步优选为，所述步骤五中，水浴浓缩器内的温度控制为70-80℃，减压浓缩的真空度为0.085-0.095mpa，且减压浓缩后，混合液和罗汉果提取物的比例为(3-5)：1。

通过采用上述技术方案，选用上述参数控制，在冷冻粉碎过程中，既能对罗汉果起到良好的冷冻效果，也能够保持有效成分的活性，不易损伤罗汉果的整体药性；在石油醚萃取过程中，两次萃取的时间不同，既能够对罗汉果中的脂类物质起到良好的去除效果，还能有效减少整个提取过程中的用时；在烘干过程中，温度和时间的控制，使罗汉果在维持自身稳定性的前提下，能够快速被烘干；在微波回流萃取的过程中，有利于使罗汉果中的有效成分在较短的时间的内完全析出，进而保证整个提取工艺的提取率；在过滤浓缩的过程中，能够得到性能稳定且保存周期较长的罗汉果提取物。

进一步优选为，所述步骤五中，对罗汉果提取物进行微滤处理，具体步骤如下：将微滤设备上的抽料泵启动，将罗汉果提取物抽入到管式微滤膜中，管式微滤膜的规格为0.1-1.0μm，启动加压泵，调节压力至0.1-0.3mpa，收集透过管式微滤膜的滤液a，待罗汉果提取物通过将完时，加入0.5-1倍的透析水，收集通过的滤液b，将滤液a和滤液b进行合并，得到微滤处理后的罗汉果提取物。

通过采用上述技术方案，微滤膜允许大分子有机物和无机盐等通过，但能阻挡住悬浮物、细菌、部分病毒及大尺度的胶体的透过，对罗汉果提取物具有良好的净化处理效果，能够进一步去除罗汉果提取物中的杂质，并使得到微滤处理后的罗汉果提取物具有较高的品质。

进一步优选为，所述步骤五中，对罗汉果提取物进行超滤处理，具体步骤如下：将罗汉果提取物倒入超滤设备的储罐中，开启超滤设备的加压泵，调节压力在1-2mpa，使罗汉果提取物通过截流相对分子质量为40000的膜，收集透过的滤液a，待罗汉果提取物通过将完时，加入0.5-1倍的透析水，收集通过的滤液b，将滤液a和滤液b进行合并，得到超滤处理后的罗汉果提取物。

通过采用上述技术方案，超滤是一种加压膜分离技术，即在一定的压力下，使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到了部分的纯化。对罗汉果提取物进行超滤处理，能够起到一定的纯化效果，进而能够提高罗汉果提取物的整体品质。

进一步优选为，所述步骤五中，对罗汉果提取物进行纳滤处理，具体步骤如下：开启纳滤设备，压力调节至25-35mpa，待混合液达到8-10波美度时，关闭纳滤设备，即可得到纳滤处理后的罗汉果提取物。

通过采用上述技术方案，纳滤用于将相对分子质量较小的物质从溶剂中分离出来，能够进一步去除罗汉果提取物中残留的有机溶剂，并能实现有机物和无机物的分离，能有效地去除罗汉果提取物的色度、硬度和异味，进而使纳滤处理后罗汉果提取物的整体品质大大提高。

进一步优选为，所述步骤五具体设置为，过滤浓缩，将步骤四中第一萃取液和第二萃取液进行混合，用200-300目筛网进行过滤，得到混合液，并在混合液中加入活性炭，煮沸10-15min后，将活性炭过滤去除，然后将混合液在水浴浓缩器中减压浓缩，然后将浓缩产物在冷冻干燥机中进行冻干，即可得到罗汉果提取物。

通过采用上述技术方案，在混合液中加入活性炭，并煮沸一段时间，能够是活性炭对混合液起到良好的吸附和净化作用，有利于提高罗汉果提取物的整体品质，且将浓缩产物在冷冻干燥机中进行冻干，有利于提高罗汉果提取物的活性以及便于后续保存。

综上所述，与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)将罗汉果原料用水浸润后，进行冷冻处理，能够有效防止罗汉果中有效成分的流失，且在粉碎过程中，破裂将顺着罗汉果细胞壁形成胞壁纹路破裂，不仅能够避免对细胞壁造成额外的损坏，还能够避免杂质的引入，且有利于使罗汉果中的有效成分快速溶出，进而能够大大提高该罗汉果提取方法的整体应用效果；

(2)对罗汉果提取物进行微滤、超滤或纳滤处理，均有利于进一步去除罗汉果提取物中的杂质，对罗汉果提取物起到一定的纯化作用，进而能够大大提高罗汉果提取物的整体品质；

(3)在混合液中加入活性炭，并煮沸一段时间，能够是活性炭对混合液起到良好的吸附和净化作用，且将浓缩产物在冷冻干燥机中进行冻干，有利于提高罗汉果提取物的活性以及便于后续保存。

附图说明

图1为本发明中罗汉果的提取工艺流程图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明进行详细描述。

实施例1：一种罗汉果的提取方法，具体包括以下步骤：

步骤一，冷冻粉碎，将罗汉果原料用水浸润后，进行冷冻处理，冻干温度为﹣20℃，时间为12h，然后将其进行粉碎，得到冻干粉；

步骤二，石油醚萃取处理，将步骤一得到的冻干粉置于萃取器中，加入2倍量的石油醚，进行第一次萃取3h，过滤取出萃取液，在萃取器中再次加入1.5倍量的石油醚，进行第二次萃取2h，过滤取出萃取液，得到萃取后的罗汉果，且萃取过程中的搅拌速度为30r/min；

步骤三，烘干处理，将步骤二中萃取后的罗汉果进行真空干燥，真空干燥的温度为60℃，时间为3h，得到罗汉果粉；

步骤四，微波回流萃取，将步骤三中的罗汉果粉置于微波萃取器中，加入3倍量的80％乙醇溶液，进行第一次微波萃取4h，得到第一萃取液；在萃取器中再次加入2倍量的80％乙醇溶液，进行第二次微波萃取3h，得到第二萃取液，且萃取过程中的搅拌速度为40r/min；

步骤五，过滤浓缩，将步骤四中第一萃取液和第二萃取液进行混合，用200目筛网进行过滤，得到混合液，然后将混合液在70℃的水浴浓缩器中减压浓缩，减压浓缩的真空度为0.085mpa，得到罗汉果提取物，且混合液和罗汉果提取物的比例为3：1。

实施例2：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤一中，冻干温度为﹣50℃，时间为8h。

实施例3：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤一中，冻干温度为﹣35℃，时间为10h。

实施例4：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤二中，加入3倍量的石油醚，第一次萃取时间为2h，再次加入2.5倍量的石油醚，第二次萃取时间为1h，且萃取过程中的搅拌速度为50r/min。

实施例5：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤二中，加入2.5倍量的石油醚，第一次萃取时间为2.5h，再次加入2倍量的石油醚，第二次萃取时间为1.5h，且萃取过程中的搅拌速度为40r/min。

实施例6：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤三中，真空干燥的温度为80℃，时间为2h。

实施例7：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤三中，真空干燥的温度为70℃，时间为2.5h。

实施例8：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤四中，加入4倍量的80％乙醇溶液，第一次微波萃取时间为3h，再加入3倍量的80％乙醇溶液，第二次微波萃取时间为2h，且萃取过程中的搅拌速度为50r/min。

实施例9：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤四中，加入3.5倍量的80％乙醇溶液，第一次微波萃取时间为3.5h，再加入2.5倍量的80％乙醇溶液，第二次微波萃取时间为2.5h，且萃取过程中的搅拌速度为45r/min。

实施例10：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤五中，水浴浓缩器内的温度控制为80℃，减压浓缩的真空度为0.095mpa，且减压浓缩后，混合液和罗汉果提取物的比例为5：1。

实施例11：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤五中，水浴浓缩器内的温度控制为75℃，减压浓缩的真空度为0.090mpa，且减压浓缩后，混合液和罗汉果提取物的比例为4：1。

实施例12：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤五中，对罗汉果提取物进行微滤处理，具体步骤如下：将微滤设备上的抽料泵启动，将罗汉果提取物抽入到管式微滤膜中，管式微滤膜的规格为0.5μm，启动加压泵，调节压力至0.1mpa，收集透过管式微滤膜的滤液a，待罗汉果提取物通过将完时，加入0.5倍的透析水，收集通过的滤液b，将滤液a和滤液b进行合并，得到微滤处理后的罗汉果提取物。

实施例13：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤五中，对罗汉果提取物进行超滤处理，具体步骤如下：将罗汉果提取物倒入超滤设备的储罐中，开启超滤设备的加压泵，调节压力在2mpa，使罗汉果提取物通过截流相对分子质量为40000的膜，收集透过的滤液a，待罗汉果提取物通过将完时，加入0.5倍的透析水，收集通过的滤液b，将滤液a和滤液b进行合并，得到超滤处理后的罗汉果提取物。

实施例14：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤五中，对罗汉果提取物进行纳滤处理，具体步骤如下：开启纳滤设备，压力调节至30mpa，待混合液达到8波美度时，关闭纳滤设备，即可得到纳滤处理后的罗汉果提取物。

实施例15：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，步骤五具体设置为，过滤浓缩，将步骤四中第一萃取液和第二萃取液进行混合，用200目筛网进行过滤，得到混合液，并在混合液中加入活性炭，煮沸10min后，将活性炭过滤去除，然后将混合液在水浴浓缩器中减压浓缩，然后将浓缩产物在冷冻干燥机中进行冻干，即可得到罗汉果提取物。

对比例1：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，选用公开号为cn107602653a的发明申请文件中实施例1所公开的一种从鲜罗汉果中提取罗汉果甜苷的方法。

对比例2：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，选用公开号为cn108727456a的发明申请文件中实施例1所公开的一种从罗汉果中提取罗汉果苷iv的方法。

对比例3：一种罗汉果的提取方法，与实施例1的不同之处在于，选用公开号为cn104098641a的发明申请文件中实施例1所公开的一种从罗汉果中提取罗汉果甙v的方法。

注：上述实施例12-14中的微滤设备、超滤设备和纳滤设备均选用济南博纳生物技术有限公司设备型号为bona-gm-18的微滤-超滤-纳滤膜分离实验机。

效果测试

试验样品：选用1800kg的罗汉果原料，且罗汉果原料购自本草网，然后将其随机分成18份，每份100kg，再用实施例1-15和对比例1-3中的提取方法，分别对18份罗汉果进行提取，得到18种罗汉果提取物。

试验方法：对18种罗汉果提取物进行罗汉果皂苷总含量的测定，采用香草醛-硫酸比色法，具体包括如下步骤：取0.5ml的罗汉果提取物(空白取0.5ml的蒸馏水)，加入10％香草醛乙醇溶液0.5ml，摇匀，在冰浴下加入75％硫酸溶液5ml，摇匀，于50℃水浴中加热20min后取出，立即放在冰浴中冷却10min后,在600nm波长处测定其吸光度，然后按下式计算罗汉果皂苷的含量。a＝kc；式中：a为吸光度；c为罗汉果皂苷的浓度(mg/ml)；k为经验系数，即1.0635。同时，计算罗汉果提取物得率。

试验结果：实施例1-15和对比例1-3的测试结果如表2所示。由表1可知，由实施例1和对比例1-3的测试结果可得，将罗汉果原料用水浸润后，进行冷冻处理再粉碎，能够有效提高罗汉果皂苷的含量，并使得到的罗汉果提取物具有较高的得率。由实施例1和实施例1-11的测试结果可得，本发明所采用的参数控制，均适用于罗汉果的提取方法，并能使罗汉果皂苷含量和罗汉果提取物得率保持稳定。由实施例12、13、14分别和实施例1的测试结果对比可得，对罗汉果提取物进行微滤、超滤或纳滤处理，均能够提高罗汉果皂苷含量和得率。由实施例15和实施例1的测试结果对比可得，在混合液中加入活性炭，并煮沸一段时间，且进行冻干处理，能够大大提高罗汉果皂苷含量和得率。

表1实施例1-15和对比例1-3的测试结果

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。