石斛提取物在制备降胆固醇药物中的应用的制作方法

本发明涉及制药领域，尤其涉及石斛提取物在制备降胆固醇药物中的应用。

背景技术：

胆固醇属于一种固醇类化合物，是机体代谢所不可缺少的，尤其在细胞膜的组成及激素的合成中发挥重要作用。胆固醇主要来自机体自身的合成，部分来自于食物。人体可以在肝脏中合成胆固醇，也可以通过饮食摄食外源性胆固醇。在冠心病和动脉粥样硬化症中，粥样斑块是由胆固醇等脂质沉积而成。在机体内，胆固醇与蛋白质结合，主要以脂蛋白的形式存在，主要以高密度脂蛋白胆固醇（highdensitylipoproteincholesterol,hdl和低密度脂蛋白胆固醇（lowdensitylipoproteincholesterol,ldl-c两种形式在体内进行转运。其中，hdl-c被称为好胆固醇，因为研究表明，血清hdl-c水平升高具有清洁动脉粥样硬化的功效，对心血管具有保护作用。与之相反，ldl-c水平升高，易造成脉粥样硬化，对心血管造成危害，导致冠心病发病的危险性增加，因此，相对于hdl-c，ldl-c就被称为坏胆固醇。

霍山石斛，俗称米斛，是兰科石斛属的草本植物，为中国特有，国家一级保护植物。[1]茎直立，肉质，不分枝，具3-7节，淡黄绿色，有时带淡紫红色斑点，干后淡黄色。叶革质，2-3枚互生于茎的上部，斜出，舌状长圆形。总状花序1-3个，从落了叶的老茎上部发出，具1-2朵花；花淡黄绿色，开展；花瓣卵状长圆形，先端钝，具5条脉；唇瓣近菱形，长和宽约相等。花期5月。

中国国家地理标志产品。主产于大别山区的安徽省霍山县，大多生长在云雾缭绕的悬崖峭壁崖石缝隙间和参天古树上，生于山地林中树干上和山谷岩石上。霍山石斛能大幅度提高人体内sod（延缓衰老的主要物质）水平，对经常熬夜、用脑、烟酒过度，体虚乏力的人群，经常饮用非常适宜。霍山石斛有明目作用，也能调和阴阳、壮阳补肾、养颜驻容，从而达到保健益寿的功效，目前没有任何文献和报道提及石斛提取物在制备降胆固醇药物中的应用，而且现有的很多治疗胆固醇的药物都为西药，我们知道胆固醇时需要长期服用药物的，但是长期服用一种药物，会有药物毒性，会对患者后期带来隐患。

技术实现要素：

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的石斛提取物在制备降胆固醇药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

石斛提取物在制备降胆固醇药物中的应用，所述霍山石斛提取物包括霍山干石斛水提物、霍山鲜石斛水提物和霍山霍山石斛醇提物。

优选的，所述霍山石斛提取物通过抑制β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶的活性来实现降低胆固醇水平的作用。

优选的，所述调控β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶表达的关键调控因子即为固醇调节元件结合蛋白，固醇调节元件结合蛋白与固醇调节元件特异性结合，所述固醇调节元件是低密度脂蛋白受体和β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶这些基因的增强子，固醇调节元件结合蛋白刺激含有固醇调节元件的基因表达增强，激活β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶基因表达，降低胆固醇水平。

优选的，所述霍山石斛提取物增加清道夫受体b类i型的表达，所述清道夫受体b类i型防止游离胆固醇过多堆积造成动脉粥样硬化，所述sr-bi与高密度脂蛋白结合，使过剩的胆固醇回到肝脏进一步代谢，促进胆固醇降解。

优选的，所述霍山石斛提取物治疗低密度脂蛋白胆固醇下降不充分的患者，使低密度脂蛋白受体降解，血浆低密度脂蛋白胆固醇水平升高，降低胆固醇水平。

优选的，所述霍山石斛提取物增加低密度脂蛋白的表达，低密度脂蛋白经溶酶体酶作用，其中的胆固醇酯水解成游离胆固醇和脂肪酸。

优选的，所述霍山石斛提取物增加高密度脂蛋白的表达，具有将胆固醇逆转运回肝脏的作用。

本发明的有益效果为：霍山干石斛水提物、霍山鲜石斛水提物和霍山霍山石斛醇提物不仅对胆固醇的合成有抑制作用，还对胆固醇的代谢降解有促进作用，应用于药物中，不仅仅治疗胆固醇的效果好，而且可以避免长期使用西药带来的药物毒性。

附图说明

图1为本发明的霍山石斛提取物对β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶（hmgcr），固醇调节元件结合蛋白，胆固醇敏感器（scap），insig2基因的mrna表达水平。

图2为本发明的霍山石斛提取物对卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（lcat），低密度脂蛋白受体（ldlr），前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin9型（pcsk9），清道夫受体b类i型（srb1）的mrna表达水平。

图3为本发明的阳性对照组。

图4为本发明的无关对照组。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

参照图1-4，石斛提取物在制备降胆固醇药物中的应用，所述霍山石斛提取物包括霍山干石斛水提物、霍山鲜石斛水提物和霍山霍山石斛醇提物，霍山石斛提取物通过抑制β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶（hmg-coa还原酶）的活性来实现降低胆固醇水平的作用，调控β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶表达的关键调控因子即为固醇调节元件结合蛋白，固醇调节元件结合蛋白与固醇调节元件（sre-1）特异性结合，所述固醇调节元件（sre-1）是低密度脂蛋白受体（ldlr）和β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶这些基因的增强子，固醇调节元件结合蛋白刺激含有固醇调节元件（sre-1）的基因表达增强，激活β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶（hmgcr）基因表达，降低胆固醇水平，霍山石斛提取物增加清道夫受体b类i型（srb1）的表达，所述清道夫受体b类i型（srb1）防止游离胆固醇过多堆积造成动脉粥样硬化，所述清道夫受体b类i型（srb1）与高密度脂蛋白（hdl）结合，使过剩的胆固醇回到肝脏进一步代谢，促进胆固醇降解，霍山石斛提取物治疗低密度脂蛋白胆固醇（ldl-c）下降不充分的患者，使低密度脂蛋白受体（ldl-r）降解，血浆低密度脂蛋白胆固醇（ldl-c）水平升高，降低胆固醇水平霍山石斛提取物增加低密度脂蛋白（ldl）的表达，低密度脂蛋白（ldl）经溶酶体酶作用，其中的胆固醇酯水解成游离胆固醇和脂肪酸霍山石斛提取物增加高密度脂蛋白（hdl）的表达，具有将胆固醇逆转运回肝脏的作用。

实施例1：

石斛提取物在制备降胆固醇药物中的应用，霍山石斛提取物对huh7cells胆固醇合成的影响

huh7细胞复苏后，用含10％fbs的dmem（高糖）培养液转入培养皿中，在37℃、5％co2条件下培养，细胞同步化6-12h，随机分成6组，即：①空白对照组；②无关对照组：乙醇；③阳性对照组：辛伐他汀；④霍山干石斛水提物组；⑤霍山鲜石斛水提物组；⑥霍山霍山石斛醇提物组。给药：换无血清培养同步化12h后，给药组分别预给药12h，然后空白对照组、无关对照组、阳性对照组、霍山干石斛水提物组、霍山鲜石斛水提物组和霍山霍山石斛醇提物组均加入或不加入胆固醇，作用24h后，吸去培养基，停止刺激，进行相关检测。测定的相关指标：β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶（hmgcr），固醇调节元件结合蛋白，胆固醇敏感器（scap），insig2的mrna表达。实验数据统计：干石斛的水提物对β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶（hmgcr）基因的mrna表达水平抑制作用明显，呈浓度依耐性。霍山鲜石斛水提物对β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶（hmgcr）、胆固醇敏感器（scap）基因的mrna表达水平抑制作用明显，浓度依耐性。霍山霍山石斛醇提物对insig2基因的mrna表达水平抑制作用明显，可以抑制胆固醇合成。

实验结果后得到干石斛水提取物对huh7细胞胆固醇代谢相关基因的影响、鲜石斛水提取物对huh7细胞胆固醇代谢相关基因的影响和霍山霍山石斛醇提物对huh7细胞胆固醇代谢相关基因的影响的柱状图1，所述的霍山石斛提取物对胆固醇诱导的huh7细胞内胆固醇合成有抑制作用。

实施例2

石斛提取物在制备降胆固醇药物中的应用，霍山石斛提取物对huh7cells胆固醇代谢的影响

huh7细胞复苏后，用含10％fbs的dmem（高糖）培养液转入培养皿中，在37℃、5％co2条件下培养，细胞同步化6-12h，随机分成6组，即：①空白对照组；②无关对照组：乙醇；③阳性对照组：辛伐他汀；④霍山干石斛水提物组；⑤霍山鲜石斛水提物组；⑥霍山霍山石斛醇提物组。给药：换无血清培养同步化12h后，给药组分别预给药12h，然后空白对照组、无关对照组、阳性对照组、霍山干石斛水提物组、霍山鲜石斛水提物组和霍山霍山石斛醇提物组均加入或不加入胆固醇，作用24h后，吸去培养基，停止刺激，进行相关检测。测定的相关指标卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（lcat），低密度脂蛋白受体（ldlr），前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin9型（pcsk9），清道夫受体b类i型（srb1）的mrna表达。实验数据统计：干石斛的水提物对低密度脂蛋白受体（ldlr）基因的mrna表达水平增强作用明显，呈浓度依耐性。霍山鲜石斛水提物对低密度脂蛋白受体（ldlr）基因的mrna表达水平抑制作用明显，浓度依耐性。霍山霍山石斛醇提物对卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（lcat）、低密度脂蛋白受体（ldlr）和清道夫受体b类i型（srb1）基因的mrna表达水平增强作用明显，可以促进胆固醇代谢降解。

实验结果后得到干石斛水提取物对huh7细胞胆固醇代谢相关基因的影响、鲜石斛水提取物对huh7细胞胆固醇代谢相关基因的影响和霍山霍山石斛醇提物对huh7细胞胆固醇代谢相关基因的影响的柱状图2，所述的霍山石斛提取物对胆固醇诱导的huh7细胞内胆固醇代谢降解有增强作用。

对比图3中的阳性对照和图4中的无关对照，本发明对：β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶（hmgcr），固醇调节元件结合蛋白，胆固醇敏感器（scap），insig2基因的mrna表达水平的抑制作用明显，卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（lcat），低密度脂蛋白受体（ldlr），前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin9型（pcsk9），清道夫受体b类i型（srb1）的mrna表达水平的增强作用明显。

本发明的有益效果为：霍山霍山石斛提取物可以抑制胆固醇的合成，可以促进胆固醇的代谢降解。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。