专利名称：N-苯基-2氰代-3-羟基巴豆酰胺衍生物及其作为免疫调节药物的用途的制作方法
在美国专利4061767中叙述了羟亚乙基氰代乙酰胺，它具有抗炎和止痛作用。
N-(4-三氟甲苯基)-2-氰代-3-羟基-巴豆酰胺已知作为药物用于治疗移植物抗宿主疾病和全身性红斑狼疮(EP-A-0219206)。
对于具有炎症抑制作用以及对免疫疾病过程有有利影响的药物有这样的要求，即基于其较优良的作用样式，一方面对机体有较好的耐受性和良好的存留时间，另方面对炎症过程有较多的治本作用，但与已知的药物相区别。对此，这样的药物显示出有成功希望的出发点，即大大阻止了前炎症的白三烯的过量生成，使作为炎症调节剂的能引起风湿性关节炎发生持久性细胞和组织损伤的高反应活性的氧自由基失活，以及(或者)修复受损伤的免疫系统。
令人意外地发现式Ⅰ的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺衍生物有能满足上述要求的药理性质，因此，突出地适于治疗例如风湿病，自体免疫疾患或器官接受者对移植器官的排斥反应。
本发明化合物对受损伤的免疫系统有良好的干预作用，如同经抑制阿尔图斯反应和用弗洛伊德佐剂诱发的关节炎的病理模型，本发明化合物可使受抑制的免疫活性正常化。此外，这些化合物对受试机体的代谢有较短的存留时间。
因此，本发明涉及至少一个式Ⅰ的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少一个它的生理可接受盐，用于制备治疗风湿疾患、自体免疫疾患或器官接受者对移植器官的排斥反应的药剂。
式中R1是a)氢原子，或
b)直链或支链(C1-4)-烷基，R2是如下的一个基团a)W(CH2)nCX3W是1)氧原子，或2)硫原子，X是卤素，如氟、氯或碘，n是整数1-3，b)WCX3，c)CX3，d)(CH2)nCX3，e)卤素，如氟、氯、或碘，f)CN，或g)NO2，R3是下面的一个基团a)直链或支链的(C1-C4)-烷基，(C3-C6)-环烷基，c)氰基或d)
R4是
1)氢原子，2)直链或支链(C1-C4)-烷基，或3)(C3-C6)-环烷基。
优选使用的至少是一个式Ⅰ的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少一个它的生理可接受盐，其中R1是氢原子，R2是下面的一个基团a)CN，b)卤素，如氟，氯或碘，c)CX3，X是卤素，如氟，氯或碘，或d)NO2，R3是下面的一个基团a)CH3，b)CN，或c)
特别是用如下的式Ⅰ化合物或其生理可接受盐N-(3-甲基-4-硝基苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氰代苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氟苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，胺，N-(3-甲基-4-氟苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氯苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-碘苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，或N-(3-甲基-4-三氟甲苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺。
式Ⅰ的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺的适宜的生理可接受盐例如是碱金属、碱土金属或铵盐，还包括那些生理可接受的有机胺盐。
本发明还涉及式Ⅰ的新的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少一个它的生理可接受盐
R1是a)氢原子或b)直链或支链的(C1-C4)-烷基，
1)氧原子，或2)硫原子，X是卤素，如氟，氯或碘，n是整数1-3，b)WCX3，c)CX3，d)(CH2)nCX3，e)卤素，如氟，氯或碘，f)CN，或g)NO2，R3是(C3-C6)-环烷基或
R4是1)是氢原子，2)直链或支链的(C1-C4)-烷基，或3)(C3-C6)-环烷基。
式Ⅰ的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少一个生理可接受盐优选的是R1是氢，R2是下面中的一个基团
a)CN，b)H卤素，如氟，氯或碘c)CX3，X为氟，氯或碘，或d)NO2，R3是a)环丙基，或
R4是环丙基式Ⅱ的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺可以按例如下述的方法制备。
式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物反应，生成的化合物在碱性介质的存在下生成式Ⅰ的相应化合物。
式中R1，R2和R3的含义与式Ⅰ所述的相同，Z是卤原子，优选为氯或溴。
制备式Ⅰ化合物的上述反应按已知方法(US4061767;EP-A-O217206)的标准条件下进行。
本发明的式Ⅰ化合物及其相应的盐以其有价值的药理特性同时具有优良的可耐受性，并以独特的方式适用于作为治疗风湿性炎症药品中的有效成分。它们或者单独应用，例如以微型胶囊形式，以相互混合形式或者与适宜的辅料和(或)载体合并加工成制剂。
本发明还涉及用至少一个式Ⅰ的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺或至少一个它的生理可接受盐制备药品以治疗自体免疫疾病，例如全身性红斑性狼疮，或慢性移植物抗宿主疾患，或器官接受者对移植器官的排斥反应。
关于器官这一概念，是指哺乳动物，特别是人的所有器官，例如肾，心脏，皮肤，肝脏，胰脏，肌肉，骨骼，肠，或胃，也可以是血液或毛发。排斥反应意指接受者机体的全部防御措施，会最后导致移植器官的细胞或组织的坏死，或者损伤了移植器官的存活力。这种应用是在器官接受者和(或)损赠者的器官移值之前，当中和之后进行。
至少有一个式Ⅰ的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少它的一个酸加合盐构成的药剂，或者除了至少一个这种有效成分外，还含有药用生理可接受的适宜的载体，稀释剂和(或)辅料的药剂也是本发明的内容。
本发明的药剂可以口服，局部应用，直肠用药或任选地也可肠胃道外应用，优选的用法是口服。
适宜的固体或液体格林制剂例如是颗粒剂，粉剂、锭剂，片剂(微型)胶囊剂、栓剂，糖浆剂，浆剂，悬浊剂，乳剂、滴剂或注射液，以及有效成分的缓释制剂，在制备后者时用常规的辅料如载体，崩解剂，结合剂，包衣剂，膨润剂，滑动剂或润滑剂，矫味剂，生甜剂或溶剂。常用的辅料例如有碳酸镁，二氧化钛，乳糖，甘露醇和其它糖类，滑石，乳蛋白，明胶，淀粉，纤维素及其衍生物，动物和植物油，聚乙二醇和溶剂，如灭菌水和一元或多元醇，如甘油。
药物制剂最好以剂型单元制成并给药，每个单元含有作为有效成分的固定剂量的至少一个式Ⅰ的化合物和(或)至少一个它的相应的酸加合盐。固体的剂型单元如片剂，胶囊剂，锭剂或栓剂，含有的剂量为大约300mg，优选为100～200mg。
治疗患有炎性风湿病的成年患者每日的口服剂量-根据式Ⅰ化合物或其相应盐的作用强度-大约是5～300mg有效成分，优选为大约25～100mg。根据病情可以增加或降低每日剂量，每日给药剂量既可以只给一次的单个剂型单元，也可以多次较小的剂型单元，也可以在固定间隔中多次给划分的剂量。
最后，式Ⅰ化合物及其相应的酸加合盐在制备上述格林制剂时还可以与其它的适宜的有效成分配伍，例如与抗尿酸病药，血栓聚集抑制剂，止痛剂和其它的甾类或非甾类抗炎药制成制剂。
下述化合物经元素分析，红外和′H-核磁谱确定了结构。
实施例1.N-(3-甲基-4-硝基苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺氰代乙酸(1.5g，17.6mmol)和五氯化磷(4.1g，19.4mmol)于二氯甲烷(40ml)中加热回流1h.加入3-甲基-4-硝基苯胺(1.6g，10.6mmol)，再加热回流1小时，冷后，滤出固体物质，再与水搅拌1h，过滤，滤液于减压下蒸干。得到2-氰代-N-(3-甲基-4-硝基苯基)-乙酰胺(1.4g，64%)。
2-氰代-N-(3-甲基-4-硝基苯基)-乙酰胺(0.61g，2.8mmol)溶于四氢呋喃(30ml)中，加入氢化钠(80%油悬浊物，0.21g，7mmol)，于25℃搅拌15分钟后于5分钟内滴入1-乙酰咪唑(0.46g，4.2mmol)，再搅拌15分钟，加入2ml乙酸，25℃搅拌1h，最后与冰冷的水(100ml)振摇，过滤，用浓Hcl调节此溶液使pH1，过滤，用水洗涤，减压蒸干，得到N-(3-甲基-4-硝基苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺。收得量0.65g(88%)，熔点231～233℃。
C12H11N3O4分子量＝261.24用类似上述实施例的方法制备下面的式Ⅰ化合物。
实施例2N-(3-甲基-4-氰代苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺熔点239～240℃C13H11N3O2分子量＝241.25
实施例3N-(3-甲基-4-氟苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺熔点167.5～168℃C12H11FN2O2分子量＝234.23实施例4N-(3-甲基-4-氯苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺熔点184℃C12H11ClN2O2分子量＝250.69实施例5N-(3-甲基-4-碘苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺熔点117-178℃C12H11IN2O2分子量＝342.14实施例6N-3-(甲基-4-三氟甲苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺熔点182～184℃C13H11F3N2O2分子量＝284.23药理试验及结果本发明的式Ⅰ化合物对炎症的抑制试验和对免疫病理过程影响的试验用如下所述的动物模型进行。
动物模型1.角叉胶-爪水肿试验本试验按Winter等方法(J.Pharmacol.exp.Ther.141，369(1963))进行。
试验动物为体重160～180gCFHB雄性大鼠，饥饿17小时，每只动物足蹠下(左爪)注射0.2ml0.5%角叉胶于0.9%Nacl的悬浊液，在注射部位的周围发生水肿，用体积描记仪测定其大小。给角叉胶前1小时经灌胃针头灌胃受试物质于羧甲基纤维素的悬浊液(CMC-悬浊液)，体积为1ml/100kg体重，给药3小时后测定爪体积。下肢蹠关节的着色标记作为浸润深度的标准，每个剂量的试验动物数n＝6-12。
动物模型2 小鼠爪水肿的延迟超过敏性试验体重25-30g雄性CD-1小鼠8～10只，皮下注射1mg甲基牛血清白蛋白(MBSA)于0.2ml生理完全的弗氏佐剂(FCA)的乳液，使动物致敏。对照细注射生理FCA。致敏7日后于右后爪注射0.1mgMBSA于0.05ml的生理盐水溶液。24h后测定爪水肿程度。左爪注射生理盐水作为对照。本发明化合物经口给药。给药是在第4，5，6天和第7天(两次给药)在再注射MBSA之前1小时和之后6小时给药。
动物模型3 大鼠爪水肿的延迟超过敏性试验体重160～180g雄性DFHB大鼠8-12只，按试验2的方法尾部注射，使动物致敏，但与试验2的区别是在第7天给0.4mg分支杆菌结核菌抗原于0.2ml生理食盐水溶液，其它试验条件同试验2所述。
上述的动物模型的判断标准是将后爪体积与对照组的加以比较。对后爪体积增加的抑制作用用百分数表示。
表1列出了结果，括弧中是受试化合物的用药剂量mg/kg。
4.佐剂诱发的多关节炎本试验按Pearson和Perper[Pearson，C.M.and Wood，F.D，Arth Rheum 2，44(1959);Perper，R.J.等Proc.Soc.exp Biol.Med.137，506(1971)]的方法进行。实验动物用体重160～200g雄性Wistar-Lewis大鼠(Mollegaard，丹麦)。大鼠右后爪注射0.1ml弗氏佐剂(大约为6mg乳酪分枝杆菌悬浊液，Difco实验厂/底特律，每ml分散于石腊油中，默克/达姆史达特)以诱发多关节炎。注射后产生免疫病理过程，在10～14天内发生慢性炎症，在机体的其它部位和右后爪出理多关节炎和关节周炎症候群。
受试物质于CMC悬浊液中经口给药，注入量为每只大鼠每100g体重为1mg，佐剂注射开始后连续12天给本发明化合物，注射21天后，测定两后爪的体积，对照组给CMC悬浊液。
后爪体积与对照组的加以比较作为判断标准，对后爪体积增加的抑制作用用百分数表示。表2列出了结果;括弧中为本发明化合物的剂量mg/kg。
体内破坏时间受试物质于CMC-悬浊液中经口给药，给药体积大鼠为100g体重1mg，小鼠为100g体重3mg。对照物用N-(4-三氟甲苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，口服给药后测定血清中对照物质与受试物质的浓度。
表3列出了结果
权利要求
1.式Ⅰ的至少一个N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少一个它的生理可接受盐在制备治疗风湿性疾患、自体免役性疾患或器官接受者对移植器官的排斥作用的药剂中的用途，
式中，R1是a)氢原子，或b)直链或支链的(C1-C4)-烷基，R2是下面的一个基团a)W(CH2)nCX3，W是1)氧原子，或2)硫原子X是卤素，如氟氯或碘，n是整数1-3b)WCX3，c)CX3，d)(CH2)nCX3，e)卤素，如氟，氯或碘，f)CN，或g)NO2，R3是下面的一个基团a)直链或支链的(C1-C4)-烷基，b)(C3-C6)-环烷基，c)CN，或
R4是1)氢原子，2)直链或支链的(C1-C4)-烷基，3)(C3-C6)-环烷基，
2.按照权利要求1的用途，其特征是，至少使用式Ⅰ的一个N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和或至少一个它的生理可接受盐，其中R1是氢，R2是下面的一个基团a)CN，b)卤素，如氟，氯或碘，c)CX3，X是卤素，如氟，氯或碘，或d)NO2，R3是下面的一个基团a)-CH3，b)-CN，或c)
3.以下化合物及其生理可接受盐在制备治疗风湿性疾患、自体免疫疾患器官接受者对移植器官排斥作用的药剂中的用途，N-(3-甲基-4-硝基苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氰代苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氟苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氯苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-碘苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，或N-(3-甲基-4-三氟苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，
4.制备式Ⅰ的一个N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少一个它的生理可接受盐的方法，式中，R1是a)氢原子，或b)直链或支链的(C1-C4)-烷基，R2是下面的一个基团a)W(CH2)nCX3，W是1)氧原子，或2)硫原子X是卤素，如氟氯或碘，n是整数1-3b)WCX3，c)CX3，d)(CH2)nCX3，e)卤素，如氟，氯或碘，f)CN，或g)NO2，R3是(C3-C6)-环烷基，或
R4是1)氢原子，2)直链或支链的(C1-C4)-烷基，3)(C3-C6)-环烷基，该方法的特征是，a)将式Ⅱ的化合物与式Ⅲ的化合物反应，
式Ⅱ中R1，R2和R3的定义同式Ⅰ中所述;式Ⅲ中Z为卤原子，如氯或溴，b)得到的化合物于碱性介质中反应。
5.按照权利要求4的方法，其特征是，制备权利要求4的式Ⅰ的一个N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少一个它的生理可接受盐，式中R1是氢原子，R2是下面的一个基团a)CN，b)卤素，如氟，氯或碘，c)CX3，X是卤素，如氟，氯或碘，或d)NO2，R3是a)环丙基，或b)
R4是环丙基，
6.一种药剂的制备方法，其特征是，将有效量的式Ⅰ的至少一种N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和(或)至少一个式Ⅰ的生理可接受性盐与生理可接受的载体甚至适宜的有效物质或辅料，制成适宜的药物剂型，式Ⅰ中R1是a)氢原子，或b)直链或支链的(C1-C4)-烷基，R2是下面的一个基团a)W(CH2)nCX3，W是1)氧原子，或2)硫原子X是卤素，如氟，氯或碘，n是整数1-3b)WCX3，c)CX3，d)(CH2)nCX3，e)卤素，如氟，氯或碘，f)CN，或g)NO2，R3是下面的一个基团a)直链或支链的(C1-C4)-烷基，b)(C3-C6)-环烷基，c)CN，或d)
R4是1)直链或支链的(C1-C4)-烷基，2)(C3-C6)-环烷基，或3)氢原子，
7.按照权利要求6的方法，其特征是，加入权利要求6的式Ⅰ的至少一个N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺和或至少一个它的生理可接受盐，式Ⅰ中，R1是氢，R2是下面的一个基团a)CN，b)卤素，如氟，氯，溴或碘，c)CX3，X是氟，氯溴或碘，或d)NO2，R3是下面的一个基团，a)-CH3，b)-CN，或c)
8.按照权利要求6或7的方法，其特征是，加入有效量的N-(3-甲基-4-硝基苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氰代苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氟苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-氯苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，N-(3-甲基-4-碘苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，或N-(3-甲基-4-三氟甲苯基)-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，和(或)其生理可接受盐。
9.按照权利要求6-8中一个或多个权项中包含的药剂，用于治疗风湿性疾患、自体免疫性疾患或器官接受者对移植器官的排斥反应。
全文摘要
本发明叙述了式I的N-苯基-2-氰代-3-羟基巴豆酰胺，和(或)其生理可接受盐，用于治疗风湿性疾忠、自体免疫性疾患以及器官接受者对移植器官的排斥反应。式中R
文档编号A61K31/277GK1071833SQ92112459
公开日1993年5月12日 申请日期1992年10月23日 优先权日1991年10月23日
发明者R·施乐热巴赫, R·R·巴特勒特, E·A·阔, E·J·里特勒 申请人:赫彻斯特股份公司