专利名称：纤维蛋白原复合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及纤维蛋白原复合物，特别是一种利用哺乳动物血液为原料的纤维蛋白原复合物及其制备方法。
纤维蛋白原复合物是可吸收性生物止血胶的主要成分之一，它的作用机制是效仿血液凝固的最后阶段，使纤维蛋白原在凝血酶和钙离子的作用下，转变为纤维蛋白网，再在第XIII因子的作用下，变为稳定的纤维蛋白网。从而发挥其止血功效。普通的纤维蛋白原复合物是由汇集的人血浆制备，其制备方法是在无菌技术下采集人全血，用离心法、沉淀法或过滤法获取血浆，而后利用各种化学试剂如聚乙二醇、乙醚、乙醇、硫酸铵或甘氨酸，借助低温沉淀和沉淀而从人血浆中浓缩纤维蛋白原复合物。其整个制备过程须在无菌条件下进行，否则难以用常规的方法(如过滤法、加热法、气体灭菌法、化学消毒法)将浓缩的纤维蛋白原复合物中的微生物去除。采用人血制备的纤维蛋白原复合物，其不足之处在于原料来源馈乏，成本昂贵，易导致人类血源性疾病(如乙型肝炎，丙型肝炎，爱滋病等)的传播。因此常规的纤维蛋白胶至今未获美国FDA的批准。有关采用哺乳动物血制备纤维蛋白原复合物及其制备方法，目前无特别报道，文献上也未见有关用哺乳动物血纤维蛋白原复合物配制的可吸收性生物止血胶的医学基础及临床应用研究报道。
本发明的目的是提供一种原料来源广泛、成本低廉，能避免人类血源性疾病传播的哺乳动物血液来源的纤维蛋白原复合物及其制备方法。
本发明的技术解决方案是纤维蛋白原复合物是采用哺乳动物(猪、牛、羊、狗、马)的血液，在严格的无菌技术下或不采用无菌技术，或部分过程采用无菌技术进行采集、血浆的分离、提取、储存和分装而制成的，对这种来源于动物血的纤维蛋白原复合的灭菌法，是采用钴60辐射灭菌法，该灭菌法可在纤维蛋白复合物水溶液状态下或冻干粉剂状态下实施，其辐射剂量为5万至240万拉德。
本发明的制备方法是将采集的动物血液导入一装有抗凝剂为1∶9之3.8％枸橼酸纳的密闭无菌容器内，将血以3000RPM离心30分钟，获得血浆，再利用冷沉淀法在无菌容器中制取浓缩的动物纤维蛋白原复合物，溶于生理盐水中，浓度为20～200毫克/毫升，分装2毫升/瓶，冷冻干燥，经钴60照射，辐射剂量分别为5、10、20、40、60、80、100、120、140、160、200、220、240万拉德，经上述照射后，作需氧及厌氧菌菌检，经10万拉德以上剂量辐照的纤维蛋白原复合物未发现有细菌生长。将该复合物用2毫升生理盐水溶解后，加入等量含40毫摩尔氯化钙，500国际单位凝血酶溶液，观察纤维蛋白凝胶形成情况，经160万拉德以下辐射剂量处理的纤维蛋白原复合物在15秒内形成半透明乳白色凝胶样物，该凝胶状物可对手术术野的渗血和静脉性出血发挥有效的止血功效。
本发明可制成冻干粉剂或水溶液，还可将其粘附于其它高分子生物材料，如明胶海棉、胶原蛋白膜及聚四氟乙烯膜等。
本发明是一种可吸收性生物止血胶，是一种生物卫生材料。它的作用机制是效仿血液凝固的最后阶段，使纤维蛋白原在凝血酶和钙离子的作用下转变为纤维蛋白网，再在第XIII因子的作用下变为稳定的纤维蛋白网，从而发挥其止血功效。本发明作为一种局部止血剂在临床上可广泛用于普通外科，神经外科、心脑血管外科、泌尿外科、妇产科、整形外科、五官科烧伤科等领域。对手术术野的渗血和静脉性出血实施有效地止血作用。本发明不仅原料来源广泛，价格低廉，同时还可有效地避免各种人类血源性疾病的传播。
下面对来源于猪血的纤维蛋白原复合物及其制备方法加以说明。
实施例一对原料猪作全身清洗后，再用1∶1000新洁尔灭溶液对猪体表实施消毒10分钟。在洁净度为10万级的车间内经穿刺采集猪血，将猪血导入一密闭无菌容器(抗凝剂1∶9之3.8％枸橼酸钠)。在上述车间内将猪血以3000PRM离心30分钟，获取血浆。利用冷沉淀法在无菌容器中制取浓缩的猪纤维蛋白原复合物，溶于生理盐水中，浓度为20-200毫克/毫升，优选浓度为70-140毫克/毫升。分装2毫升/瓶；冷冻干燥，钴60照射，辐射剂量分别为5、10、20、40、60、80、100、120、140、160、200、220、240万拉德。经上述照射后，作需氧及厌氧菌菌检。经10万拉德以上剂量辐照的纤维蛋白原复合物未发现有细菌生长时。将该复合物用2毫升生理盐水溶解后，加入等量含40毫摩尔氯化钙，500国际单位凝血酶生理盐水溶液，观察纤维蛋白凝胶形成情况。经160万拉德以下辐射剂量处理的纤维蛋白原复合物在15秒内形成半透明乳白色凝胶样物。该凝胶样物对大白鼠、家兔、恒河猴及人类手术创面的渗血和静脉性出血具有特处的止血效果。
实施例二从屠宰场获取新鲜猪血。以1∶9之3.8％枸橼酸钠抗凝。将猪血以3000RPM离心30分钟，获取血浆。利用冷沉淀法制取浓缩的猪纤维蛋白原复合物。溶于生理盐水中，浓度为20-200毫克/毫升，优选浓度为70-140毫克/毫升，分装2毫升/瓶，冷冻干燥，钴60照射，辐射剂量分别为5、10、20、40、60、80、100、120、140、160、200、220、240万拉德。经上述照射后，作需氧及厌氧菌菌检。经30万拉德以上剂量辐照的纤维蛋白原复合物未发现有细菌生长。将该复合物用2毫升生理盐水溶解后，加入等量含40毫摩尔氯化钙，500国际单位凝血酶生理盐水溶液，观察纤维蛋白凝胶形成情况。经160万拉德以下辐射剂量处理的纤维蛋白原复合物在15秒内形成半透明乳白色凝胶样物。该凝胶样物对大白鼠、家兔、恒河猴及人类手术创面的渗血和静脉性出血具有特处的止血效果。
权利要求
1.一种纤维蛋白原复合物，其特征在于该复合物是采用哺乳动物(猪、牛、羊、狗、马)的血液，在严格的无菌技术下；或部分过程采用无菌技术，部分过程不采用无菌技术；或整个过程不采用无菌技术进行采集、血浆的分离、提取、储存和分装而制成的，其中对这种动物血来源的纤维蛋白原复合物的灭菌方法是采用钴60辐射灭菌法。该灭菌法可在纤维蛋白复合物水溶液状态下或冻干粉剂状态下实施。其辐射剂量为5万至240万拉德。
2.根据权利要求1所述的纤维蛋白原复合物，其特征在于采用严格无菌技术制备的纤维蛋白原复合物辐射灭菌法的最佳辐射剂量为10万至50万拉德；对未采用无菌技术或部分过程采用无菌技术制备的纤维蛋白原复合物的最佳辐射剂量为60万至100万拉德。
3.一种制备权利要求1的方法，其特征在于将采集的动物血液倒入一装有抗凝剂为1∶9之3.8％枸橼酸钠的容器内，将血以3000RPM离心30分钟，获得血浆，再利用冷沉淀法制取浓缩的动物纤维蛋白原复合物，溶于生理盐水中，浓度为20～200毫克/毫升，分装2毫升/瓶，冷冻干燥，经钴60照射，辐射剂量分别为5、10、20、40、60、80、100、120、140、160、200、220、240万拉德，经上述照射后，作需氧及厌氧菌菌检。经10万拉德以上剂量辐照的纤维蛋白原复合物未发现有细菌生长时，将该复合物用2毫升生理盐水溶解后，加入等量含40毫摩尔氯化钙，500国际单位凝血酶溶液，观察纤维蛋白凝胶形成情况，经160万拉德以下辐射剂量处理的纤维蛋白原复合物在15秒内形成半透明乳白色凝胶样物。
4.根据权利要求3所述的纤维蛋白原复合物的制备方法，其特征在于利用冷沉淀法制取浓缩的动物纤维蛋白复合物，溶于生理盐水中的优选浓度为70～140毫克/毫升。
5.根据权利要求1所述的纤维蛋白原复合物，其特征在于该纤维蛋白原复合物为冻干粉剂。
6.根据权利要求1所述的纤维蛋白原复合物，其特征在于该纤维蛋白原复合物为水溶液。
7.根据权利要求1所述的纤维蛋白原复合物，其特征在于该复合物可粘附于其它高分子生物材料，如明胶海棉、胶原蛋白膜及聚四氟乙烯膜。
全文摘要
本发明公开了一种纤维蛋白原复合物及其制备方法。是利用哺乳动物血液为原料制备的蛋白复合物。可替代人血来源的纤维蛋白原复合物，作为可吸收性生物止血胶的主要成分，能对各种手术术野的渗血和静脉性出血实施有效的止血。该发明是在严格的无菌技术下进行动物血的采集血浆的分离，提取，储存和分装而制得的。用该法制得的纤维蛋白复合物采用钴60辐射灭菌，制成半透明乳白色凝胶样纤维蛋白原复合物。该发明不仅大大拓宽了纤维蛋白原复合物的原料来源，降低制作成本，同时避免了人类血源性疾病的传播。
文档编号A61K38/39GK1138483SQ95106859
公开日1996年12月25日 申请日期1995年6月22日 优先权日1995年6月22日
发明者杨莉 申请人:杨莉, 广州倍特生物技术有限公司