紫杉烷类组合物及方法

专利名称：紫杉烷类组合物及方法
技术领域：
本发明涉及安全性、溶解性和稳定性提高的紫杉醇和有关的紫杉烷类化合物的制剂，以及制备这类制剂的方法。
参考文献Arbuck，S.G.，和Blaylock，B.A.，在“紫杉醇科学与应用(TaxolScience and Applications)”，(Suffness，M.编)CRCpress，纽约，NY，379-415页(1995)。
Straubinger，R.M.，在“紫杉醇科学与应用”(Suffness，M.编)CRC press，纽约，NY，237-258页(1995)。
背景技术：
紫杉醇(Taxol)，亦称作太平洋紫杉醇(paclitaxel)，是一种由短叶紫杉(Taxus brevifolia)树皮中萃取而得的化合物。紫杉醇以作为抗肿瘤的药剂使用而知名。以紫杉醇治疗那些经顺铂或长春花属生物碱(vinca alkaloid)治疗无效的卵巢癌和乳癌病人，显示有良好的反应。紫杉醇亦被研究用来治疗各种其它的癌症，如黑色素瘤(melanoma)、淋巴瘤(lymphoma)和肺癌。
紫杉醇的主要问题在于它在水基溶剂中的溶解度低。因为紫杉醇缺乏在药理上可接受的范围内能够离子化的官能基，所以控制改变其pH值并无法增加其溶解性，做成盐类或加入带电荷的络合剂亦不适用(Straubinger，第238页，1995)。因此，如何将紫杉醇配制在一种生物相容的载体中成为其治疗发展上的一项挑战。
在关于改善紫杉醇制剂的溶解性和毒性的探索中，曾研究过一些药物载体(vehicles)。一般而言，这些载体包括助溶剂，如乙醇、二甲亚砜或低分子量的聚乙二醇(例如PEG 400)，加或不加油类或表面活性剂，例如一种聚氧乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯(如“TWEEN80”，亦称作polysorbate 80)，聚乙氧基化的蓖麻油(如“CremophorEL”)，大豆油或甘油三乙酸酯。但是这些制剂不是遇到低溶解性(特别是在生理食盐水中稀释以进行静脉内给药时)，就是遇到高毒性的问题。高毒性的问题是由油类或表面活性剂所引起。特别是当服用为增溶高浓度的紫杉醇所需数量的“TWEEN-80”时，临床上会引起胸膜积液(pleural effusions)及水肿(edema)，而“Cremophor EL”则可导致严重甚至致命的过敏(hypersensitivity)反应(Straubinger，第241及244页，1995)。
因此，亟需改善紫杉醇制剂，使其在保持长期储存稳定性的前提下，能具有低毒性。
发明概述本发明的一方面包括一种作为药物使用的紫杉烷类储存液，该储存溶液中含有(a)一种药学上纯形式的紫杉烷化合物；(b)聚氧乙烯脱水山梨醇的脂肪酸单酯；(c)聚乙氧基化的蓖麻油；以及(d)乙醇；在此溶液中，单酯和聚乙氧基化蓖麻油共存，其量能有效地将溶液的毒性降至比聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯或聚乙氧基化蓖麻油各自单独使用时的溶液毒性低。该储存溶液的pH值以在约1～8之间为佳。紫杉烷类化合物优选是紫杉醇或紫杉德(docetaxel)。
在一项优选的实施方案中，溶液另外还含有一种低分子量的聚乙二醇，例如PGE 300。
溶液中还可以包含一种药学上可接受的酸作为缓冲剂，其中pH保持为约4-约6。在一项优选的实施方案中，该储存溶液中含有4毫克/毫升至8毫克/毫升的紫杉烷类化合物(例如紫杉醇)、20至30％(v/v)聚乙氧基化蓖麻油、5至15％(v/v)聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯、15至30％(v/v)乙醇和40至60％(v/v)的低分子量聚乙二醇。
本发明的又一方面包括一种治疗哺乳类动物癌症的方法。在此方法中，提供了一种根据以上说明的紫杉烷类储存液。将该储存溶液用适合静脉内给药的稀释剂稀释，制成紫杉烷稀溶液。随后向患者施用能抑制患者癌变生长的药学上可接受数量的该溶液。在优选的实施方案中，此方法被用于治疗卵巢癌或乳癌。
本发明还包括一种制备用于静脉内给药的紫杉烷类溶液的方法。在该方法中，将上述类型的紫杉烷储存溶液用适合静脉内给药的稀释剂稀释，制成紫杉烷稀溶液。这种紫杉烷稀溶液可以如上所述按照治疗癌症的方法给药。
在另一方面，本发明包括一种用于向患者传送非极性药物(例如紫杉醇)的药用载体。该载体包含聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯和聚乙氧基化蓖麻油。该单酯和聚乙氧基化蓖麻油的用量有效地使载体毒性比单酯或聚乙氧基化蓖麻油单独使用时降低。在必须使用增溶剂将非极性药物溶于溶液中，而单独使用聚氧乙烯脱水山梨醇单酯或者聚乙氧基化蓖麻油所产生的毒性限制了可以服用的药物数量的情况下，这种载体有用。在一项优选的实施方案中，载体中还另外含有低分子量的聚乙二醇，例如PEG 300。本发明还包括一种药物组合物，该组合物含有一种在刚刚提到的那类载体中的非极性药物。
下面更全面地叙述这些及其它的目的和特点。发明详述I.定义以下所用术语，其意义如下“紫杉烷类”意指任何以下化合物(a)具有紫杉醇6-8-6稠环骨架，包括紫杉醇活性所必需的附加的取代基或键(例如，9-酮基或9-羟基、4，5-氧杂环丁烷环、4-乙酰氧基、以及2-苯甲酰氧基；还参看上面引用的“紫杉醇科学与应用”一书第13章关于紫杉烷结构-活性关系，特别是第339页)，和(b)可抑制微管的解聚。紫杉烷类化合物的实例为紫杉醇(paclitaxel)和紫杉德(“TAXOTERE”)。
“聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯”意指一种具有脱水山梨醇核心(1，4-山梨醇环醚)的化合物，其中2，3，5-羟基上各自有一或多个环氧乙烷单体衍生物，并且6-羟基上有一或多个末端为脂肪酸酯基的环氧乙烷单体衍生物。此化合物中，环氧乙烷单体的数目一般在10至50之间，而以10至30为佳。聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯的实例为“TWEEN 80”，亦称为聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯，其中“(20)”是指接在脱水山梨醇核心上的环氧乙烷单体总数为20。
“脂肪酸”意指C-16至C-22的羧酸，它可以是完全饱和的脂肪族或可包含一或多个碳-碳双键。脂肪酸的实例包括棕榈酸(C-16)、硬脂酸(C-18)、以及油酸(顺-9-十八烯酸)。
“聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯及聚乙氧基化蓖麻油共存，其数量能使溶液的毒性比聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯或聚乙氧基化蓖麻油各自单独使用时观察到的毒性要低”意指此单酯及蓖麻油共存，而且在达到对紫杉烷类化合物相同程度增溶的用量下比较，使用单酯/油组合物比如果只用单酯化合物或只用油化合物代替该组合物时，紫杉烷类储存液(在用于静脉内给药稀释后)的毒性降低。
“低分子量聚乙二醇”意指具有200至3000道尔顿(daltons)平均分子量的聚乙二醇(PEG)。
“哺乳动物患者”为其传统上的含意，包括例如猫、狗、羊、马，以及特别是人类。II.紫杉烷类储存溶液本发明涉及一种改进的组合物和用毒性减小的载体向癌症患者传送高剂量紫杉烷类的方法。本发明部分是基于以下发现，即，利用聚氧乙烯山梨醇脂肪酸单酯和聚乙氧基化蓖麻油作为紫杉烷类化合物的增溶剂，可有效地提高紫杉醇的溶解度和稳定性，且具有较低的毒性。
本发明的储存溶液包含一种医药品级纯度的紫杉烷类化合物，它用聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯和聚乙氧基化蓖麻油以高浓度增溶在乙醇基料中。该紫杉烷类化合物的浓度优选约为2毫克/毫升到约20毫克/毫升，一般约为4毫克/毫升至约8毫克/毫升。
上述单酯与聚乙氧基化蓖麻油以一定数量共存，与聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯或是聚乙氧基化蓖麻油各自单独使用时相比，其毒性可有效降低。聚乙氧基化蓖麻油可得自任何医药上可接受的来源。一种适宜的制品可由BASF(Wyandotte，MD)得到，其商标为“CREMOPHOR EL”通常聚乙氧基化蓖麻油是以大约10％到大约40％(v∶v)的浓度存在，优选的浓度为在大约20％到约30％之间。
聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯通常以大约5％到大约20％(v∶v)的浓度存在，优选在大约5％到15％之间。一种优选的聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯为“TWEEN 80”。
聚乙氧基化蓖麻油和聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯在储存液中的总浓度在大约15％到大约60％，优选为大约25％到45％(v∶v)。除此之外，聚乙氧基化蓖麻油和聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯的混合比例为(蓖麻油∶脱水山梨醇脂肪酸单酯，v∶v)大约0.5到6，优选的比例为大约1.3到6，更优选的比例为大约2到3。应该指出，聚乙氧基化蓖麻油和聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯不但可增加紫杉烷类的溶解度，同时可增加紫杉烷类使用于治疗恶性肿瘤时的抗癌效果。依据本发明的一重要特色，利用聚乙氧基化蓖麻油和聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯共存，结果使它们产生的毒性比只有聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯或是只有聚乙氧基化蓖麻油存在时所产生的毒性低。
本发明的储存溶液，也可以包含一种低分子量的聚乙二醇(PEG)，其平均分子量为大约200到3000道尔顿(dalton)，优选为约200到1000道尔顿。这种PEG制品最好是在15℃以上的温度下为液体，例如，平均分子量在约200至约1000道尔顿之间，优选在约200至约500之间。聚乙二醇可任选地包含在储存液中，以改善紫杉烷类化合物的溶解度和稳定性。最好是，聚乙二醇的浓度为大约10％到60％(v∶v)，更优选在约40％到60％(v∶v)之间。
储存溶液中也可任选地包含一种缓冲剂，维持储存溶液的pH在大约1到大约8之间，优选为大约4到大约6之间。缓冲剂优选为药学上可接受的酸，更优选为一种羧酸，例如柠檬酸、醋酸、顺丁烯二酸、丁二酸、乳酸、抗坏血酸、谷氨酸，或是天冬氨酸。其中尤以无水柠檬酸为佳。缓冲剂可存在的浓度在大约2到大约200mM之间，一般是在大约5到大约20mM之间。储存液的其余部分优选由乙醇构成。储存液中最好不含水。
本发明的储存溶液可以任何适合增溶紫杉烷类化合物组分的方法制备，包括利用超声波和加热。在实施例1中提供了一种配制本发明溶液的典型方法。此溶液可在室温下储存，但优选储存于4℃或更低的温度下。溶液最好经过一过滤膜，例如大小为0.22μm的过滤膜，以除去颗粒物。该溶液亦可用氮气吹洗以除去氧气。
本发明中储存液的稳定性将用实施例2与实施例3中所述的研究加以说明。在实施例2中所述的研究中，将本发明的两份储存溶液放置在一高压灭菌器内，在加压下于250℃加热20分钟。样品经由乙腈稀释，以高效液相层析仪(HPLC)分析，未检测到紫杉醇发生降解。
在实施例3所述的研究中，样品溶液在37℃培养12周，定时取出少量溶液，利用高效液相层析仪分析紫杉醇的降解情况。受测试的样品溶液包含实施例1中的制剂1、2和一包含紫杉醇的聚乙氧基化蓖麻油和乙醇以1∶1比例混合的溶液(制剂3)。由实施例3的结果可看出，本发明的紫杉醇溶液至少和制剂3一样稳定，在12周内的降解比例少于2％。
依照本发明的另一重要特点，本发明的储存液适合于稀释成用于静脉内给药的标准溶液。在实施例4所说明的研究中，将实施例1中的制剂以生理食盐水(0.9％氯化钠水溶液)稀释之，稀释量为5倍、10倍、25倍和50倍，在1小时、2小时、4小时、8小时、24小时和48小时后，检查溶液是否有沉淀或是混浊。结果发现两种制剂的所有稀释液在头24小时都保持澄清，且制剂1在48小时后仍保持澄清。由此结果显示，本发明的储存溶液适合静脉内给药。
在实施例5中所述的研究中，单独的储存载体(无紫杉醇的储存溶液)，和一由聚乙氧基化蓖麻油和乙醇以1∶1比例混合的溶液(剂型3)比较其相对毒性，在一项实验中，2或3只老鼠为一组，施用一剂未稀释形式的试验制剂，观察老鼠在21天内因服药所引起的不耐性(intolerance)。不耐性的迹象包括任何以下情况(1)明显的体重减轻(＞20％)，(2)竖毛(piloerection)，(3)长期虚脱(prolongedprostration)和(4)死亡。记录不会产生不耐性的最高剂量体积(MTD，最大容忍剂量)。由实施例5A的结果看出，依本发明所配制的制剂，其最大容忍剂量是单独使用聚乙氧基化蓖麻油而不含脱水山梨醇单油酸酯的制剂的两倍。
当同样的制剂以小体积/剂量在5天内每6小时给药一次时，亦可得到和上述相近的结果。同样，依本发明所配制的制剂，其最大容忍累积剂量是单独使用聚乙氧基化蓖麻油者的两倍。这些结果显示，和单独使用聚乙氧基化蓖麻油而不含脱水山梨醇单油酸酯者相比较，本发明的载体具有较低的固有毒性(inherent toxicity)，因此可容许较大的紫杉烷类用药量；或是在如前所述使用等量紫杉烷类的条件下，其毒性副作用较轻。由此可知，先前的紫杉醇类制剂中载体本身的毒副作用限制了可以施用的紫杉烷类给药量，本发明则有明显的改进。III.治疗方法(Treatment Method)另一方面，本发明包括一种治疗哺乳类动物癌症的方法。在此方法中，提供了一种符合以上说明的紫杉烷类储存溶液。将该储存溶液用适合静脉内给药的稀释剂稀释，形成稀的紫杉烷溶液。随后将该溶液以能有效抑制患者癌变生长的药学上可接受的数量对患者施用。
施用稀的紫杉烷类化合物溶液以治疗紫杉烷能有效抑制或摧毁其生长的癌症。这类癌症可以包括如卵巢癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、黑色素癌和淋巴瘤癌等。
在本发明中使用的稀释剂，可为任何适用于静脉内给药的稀释剂。一般而言，此稀释剂中将含有氯化钠，以建立选定的生理渗透摩尔浓度(physiological osmolarity)，例如0.9％(重量/体积)氯化钠溶液。此稀释剂可另外含有合适的补加剂，例如葡萄糖和/或抗生素，例如青霉素或四环素。此溶液最好以未增塑的容器承装，以免塑化剂浸沥入溶液中。此稀释的紫杉烷类制剂以选定的速度给药，直到已施用了所需要的药量。此制剂以定期的方式给药，直到获得缓解，或是目标癌症的扩散得到抑制。在癌症手术后也可以服用本发明制剂一段时间，直至它足以表明癌变已被成功地切除，以防止癌症复发。利用紫杉醇和紫杉醇衍生物来治疗癌症病人的剂量范围是工艺上已知的，在例如S.G.Arbuckand B.A.Blaylock的文章(1995)中有说明，该文被引用作为参考。
应该理解，本发明的储存溶液可与其它适用于癌症病人的抗癌药物合并使用。例如，它可与顺铂(cisplatin)，亚达去散(edatrexate)，必塞宁亚砜(L-buthionine sulfoxide)，三唑呋灵(triazofurin)，硝酸镓(gallium nitrate)，阿霉素(doxorubicin)，鬼臼乙叉甙(etoposide)或环磷酰胺(cyclophosphamide)一起使用，亦可和放射线治疗结合使用。不仅如此，虽然先前的讨论描述的是本发明载体在紫杉醇应用上的优点，但本发明已考虑到将该载体应用于其它非极性紫杉醇/紫杉烷类衍生物(例如docetaxel)，无论其为合成物或天然产物。
以下实施例系用以举例说明本发明，而并非是以任何方式限制本发明。实施例1紫杉醇制剂仿照以下比例配制了两种制剂，以作为以下研究之用。
为了制备以上的制剂，将PEG 300、柠檬酸和乙醇利用高速混合器或搅棒混合，直到柠檬酸完全溶解为止。必要的话，混合液可加热至50℃或利用超声波使其完全溶解。随后向混合物中加入“CremophoreEL”和“Tween 80”，所形成的混合物以高速搅拌器搅拌30分钟。将紫杉醇加入混合液中，继续搅拌直到紫杉醇完全溶解。所形成的溶液以干燥氮气吹洗并经过0.22微米过滤器(“MILLIPACK”200)过滤。以上两制剂中紫杉醇的最终浓度为6毫克/毫升。实施例2 温度稳定性制剂1和制剂2各取200微升，置入一2毫升琥珀小瓶中，以干燥氮气吹洗后，使用包有聚四氟乙烯的橡皮塞塞住，然后利用铝箔密封。此密封的小瓶置入高压灭菌器，在压力下于华式250度加热20分钟。经过高压灭菌的样品，以HPLC级的乙腈稀释(1∶20)，利用WatersC8 Novapak管柱，以高效液相层析仪分析(8mm内径×10cm，缓冲溶液A乙腈/水/三氟乙酸＝20/80/0.1；缓冲溶液B乙腈/水/三氟乙酸＝80/20/0.1；以45％B溶液无梯度洗脱；230nm下检测)。高效液相层析仪分析结果显示，紫杉醇没有降解的迹象。实施例3制剂长期稳定性的比较制剂1、制剂2和制剂3(包括6毫克/毫升紫杉醇，在1/1的“CREMOPHOR EL”和乙醇混合液中)各取200微升置入一2毫升琥珀小瓶中，以干燥氮气吹洗后密封，置入一37℃的加热箱。在1，3，6和12周时分别取出50微升样品，以HPLC级乙腈稀释(1∶20)，利用高效液相层析仪分析。结果列出如下时间(周) 制 剂紫杉醇残余百分比#1 #2#31100 100 100698.898.8 98.712 98.798.8 97.8实施例4紫杉醇制剂的稳定性依照制剂1和制剂2所配制的储存溶液，以0.9％食盐水稀释5、10、25和50倍，得到紫杉醇的浓度分别为1.2、0.6、0.24和0.12毫克/毫升。这些溶液分别在1、2、4、8、24和48小时查看是否有沉淀或混浊。
所有制剂1的稀释溶液，在48小时内都保持澄清，没有沉淀和混浊的迹象。所有制剂2的稀释溶液，在24小时内都保持澄清，但在48小时后都有一些沉淀或混浊的迹象，其中稀释5倍的制剂2沉淀最多。实施例5紫杉醇制剂毒性的比较A.未稀释样品的毒性紫杉醇制剂1、2和3的未稀释样品以Balb/c老鼠测试急性毒性。以重18-20g的2或3只鼠为一组，静脉内施用一定体积的样品。在用药的21天内观察老鼠不耐性的迹象。不耐性的迹象包括(1)明显的体重减轻(＞20％)，(2)竖毛(piloerection)，(3)长期虚脱(prolonged prostration)和(4)死亡。结果列在下表。最大容忍剂量(MTD)以毫升/千克为单位。
制剂 最大容忍剂量(毫升/千克) 老鼠数目#1 5.0 2#2 5.0 3#3 ＜2.53B.长期用药的毒性试验制剂1、2和3的样品以生理食盐水1∶1稀释，以静脉内给药的方式对18至20克之Balb/c老鼠一天施用4次，共五天。在用药后21天内观察老鼠不耐性的迹象。最大容忍累积剂量列于下表制剂 最大容忍剂量(毫升/千克)老鼠数目#1 10 5#2 10 5#3 5.0 5以上参照具体方法和实施方案对本发明作了说明，但是应该理解，在不偏离本发明的情况下可以作出各种改动。
权利要求
1.一种医药用的紫杉烷类储存溶液，其中含有(a)一种药学上纯形式的紫杉烷类化合物；(b)聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯；(c)聚乙氧基化蓖麻油；以及(d)乙醇；在此溶液中，单酯和聚乙氧基化蓖麻油共存，其量足以使紫杉烷类化合物的毒性比单独使用单酯或者聚乙氧基化蓖麻油时观察到的毒性要低，且该储存溶液的pH值在约1～约8之间。
2.权利要求1的溶液，其中还含有一种低分子量的聚乙二醇。
3.权利要求1或2的溶液，其中还含有一种药学上可接受的酸，且溶液的pH值在大约4到6之间。
4.权利要求3的溶液，其中该酸是无水柠檬酸。
5.权利要求1的溶液，其中含有4-8mg/ml的紫杉烷类化合物、20至30％(v/v)聚乙氧基化蓖麻油、5至15％(v/v)聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯、15至30％(v/v)乙醇和40至60％(v/v)的低分子量聚乙二醇。
6.权利要求1-5中任一项的溶液，其中该紫杉烷类化合物系紫杉醇。
7.一种制备用于静脉内给药的紫杉烷溶液的方法，该方法包括形成权利要求1的紫杉烷类储存溶液和用适合静脉内给药的稀释剂稀释此储存溶液，制成稀的紫杉醇溶液。
8.权利要求7的方法，其中该储存溶液还含有一种低分子量的聚乙二醇。
9.权利要求7或8的方法，其中该储存溶液还含有一种医药上可接受的酸，溶液的pH值在大约4到约6之间。
10.权利要求9的方法，其中的酸系无水柠檬酸。
11.权利要求7的方法，其中的紫杉醇储存溶液含有4-8mg/ml紫杉醇，20-30％(v∶v)聚乙氧基化蓖麻油，5-15％(v∶v)聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯，15-30％(v∶v)乙醇和40-60％(v∶v)低分子量的聚乙二醇。
12.权利要求7-11中任一项的方法，其中的紫杉烷类化合物是紫杉醇。
13.一种治疗哺乳动物患者癌症的方法，其中包括形成权利要求1-6中任一项的紫杉烷类储存溶液，用适合静脉内给药的稀释剂稀释该储存溶液，制成稀的紫杉醇溶液，和向患者施用能抑制患者体内癌变生长的药学上可接受数量的紫杉醇稀溶液。
14.权利要求13的方法，其中该储存溶液还包含一种低分子量的聚乙二醇。
15.权利要求13或14的方法，其中该储存溶液还含有一种医药上可接受的酸，溶液的pH值在大约4到约6之间。
16.权利要求15的方法，其中该酸系无水柠檬酸。
17.权利要求13的方法，其中该储存溶液含有4-8mg/ml紫杉醇，20-30％(v∶v)聚乙氧基化蓖麻油，5-15％(v∶v)聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯，15-30％(v∶v)乙醇和40-60％(v∶v)低分子量聚乙二醇。
18.权利要求17的方法，其中的pH在大约4到约6之间。
全文摘要
本发明提供一种溶解性和毒性得到改进的紫杉烷类储存溶液。该溶液中含有一种药学上纯形式的紫杉烷类化合物,例如紫杉醇或紫杉德(docataxel),一种聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸单酯,聚乙氧基化蓖麻油和乙醇。聚氧乙烯脱水山梨醇酯和聚乙氧基化蓖麻油的存在量足以有效地使紫杉烷类的毒性比聚氧乙烯脱水山梨醇酯或聚乙氧基化蓖麻油各自单独使用时观察到的毒性低。本发明还公开了一种用此溶液进行治疗的方法和可以用在该方法中的一种载体。
文档编号A61K9/00GK1209059SQ96199939
公开日1999年2月24日 申请日期1996年12月19日 优先权日1995年12月21日
发明者B·阿尔马斯安, W·曹伊 申请人:基因实验室技术有限公司