专利名称：4－溴或4－碘苯基氨基苯氧肟酸衍生物及其作为mek抑制剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明提供一些邻氨基苯甲酸化合物的异羟肟酸衍生物，这些化合物可抑制某些参与增殖性疾病如癌症和再狭窄的双重特异性激酶。
背景技术：
增殖性疾病是由细胞内信号传导系统或某些蛋白质的信号传导机制的缺陷引起的。例如，癌症通常是由这些信号蛋白的一系列缺陷引起的，而这些缺陷是由于这些蛋白的内在活性或其细胞浓度的改变所引起的。细胞可以产生与其自身受体结合的生长因子，导致形成自分泌环路，连续地刺激增殖。细胞内信号蛋白的突变或过度表达可导致在细胞内产生假的有丝分裂信号。最常见的突变发生在编码被称为Ras的蛋白质的基因上，该蛋白是一种G-蛋白，当其与GTP结合时被激活，当与GDP结合时则失活。
上述的生长因子受体以及许多其它致有丝分裂的受体，当被激活时，可导致Ras从GDP-结合状态转变成GTP-结合状态。该信号对于大部分细胞类型的增殖是绝对必要的。该信号系统中的缺陷、特别是Ras.GTP复合物灭活的缺陷在癌症中很常见，该缺陷导致Ras下的信号级联长期被激活。
激活的Ras可引起丝氨酸/苏氨酸激酶级联的激活。已知在其自身的激活中需要活性Ras.GTP的一组激酶之一是Raf家族。这些激酶可激活MEK，MEK又可激活MAP激酶。MAP激酶被促分裂原激活似乎是增殖所必需的，该激酶的组成性激活足以引起细胞转化。下游Ras信号传导的阻断，例如通过使用显性失活的Raf-1蛋白质引起的，可以完全抑制有丝分裂作用，无论该有丝分裂作用是由细胞表面受体引起的还是由致癌的Ras突变体引起的。虽然Ras本身不是蛋白质激酶，但其参与Raf和其它激酶的激活，最为可能的是通过磷酸化作用机制。一旦被激活，Raf和其它激酶便可将MEK在两个紧邻的丝氨酸残基(对于MEK-1是S218和S222)磷酸化，这对于MEK这种激酶的激活是必需的。MEK接着又可以将MAP激酶在酪氨酸(Y185)和苏氨酸(T183)残基上磷酸化，所述酪氨酸(Y185)和苏氨酸(T183)间只隔一个氨基酸。该双重磷酸化作用可使MAP激酶的活性增强至少100倍，此时该激酶可以催化大量蛋白质、包括多种转录因子和其它激酶的磷酸化。在这些MAP激酶磷酸化作用中，有许多是对靶蛋白的促分裂性激活，无论该靶蛋白是另一种激酶、是转录因子还是其它细胞蛋白。MEK还可以被除Raf-1之外的许多其它激酶激活，包括MEKK，其本身似乎是一个信号整合激酶。就目前所知，MEK对MAP激酶的磷酸化是高度特异性的。事实上，目前还没有发现除MAP激酶之外的其它MEK的底物，并且MEK不会磷酸化基于MAP激酶磷酸化序列的肽，甚至不会磷酸化变性的MAP激酶。此外，似乎MEK在磷酸化MAP激酶之前与其紧密结合，表明MEK对MAP激酶的磷酸化作用可能事先需要两种蛋白之间强有力的相互作用。这种要求以及MEK的不寻常的特异性均表明在其作用机制上与其它蛋白激酶有很大的差异，因此可能发现特异性的MEK抑制剂，该抑制剂可能通过变构机制而不是通过常见的阻断ATP结合位点来起作用。
本发明提供了作为MEK激酶活性的高度特异性抑制剂的化合物。在酶试验以及完整细胞中，这些化合物均可抑制MEK对MAP激酶的磷酸化作用，从而在Ras级联已被激活的细胞内阻止了MAP激酶的激活。该酶抑制作用的结果包括某些细胞类型的已转化表型的逆转，这是通过转化了的细胞以不依赖于贴壁的方式生长的能力以及某些转化了的细胞系不依赖于外部促分裂剂增殖的能力测得的。
本发明的化合物是苯基氨基苯氧肟酸衍生物，其中的苯环在4-位被溴或碘取代。美国专利5,155,110公开了多种用作抗炎剂的灭酸衍生物，包括某些苯基氨基苯氧肟酸衍生物。该文献没有记载本发明的化合物或其激酶抑制活性。
发明概述本发明提供4-溴和4-碘苯基氨基苯氧肟酸衍生物，这些化合物是激酶抑制剂，因此可用于治疗增殖性疾病如癌症、牛皮癣和再狭窄。该化合物如式I所定义
其中R1是氢、羟基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、卤素、三氟甲基或CN；R2是氢；R3、R4和R5彼此独立地是氢、羟基、卤素、三氟甲基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、硝基、CN或(O或NH)m-(CH2)n-R9，其中R9是氢、羟基、CO2H或NR10R11；n是0-4；m是0或1；R10和R11彼此独立地是氢或C1-C8烷基，或与它们所连接的氮合在一起形成3-10元的环，所述环选择性地含有一个、两个或三个选自O、S、NH或N-C1-C8烷基的其它杂原子；R6是氢、C1-C8烷基、C(＝O)-C1-C8烷基、芳基、芳烷基或C3-C10环烷基；R7是氢、C1-C8烷基、C2-C8链烯基、C2-C8链炔基、C3-C10(环烷基或选择性含有选自O、S或NR9的杂原子的环烷基)；或者R6和R7与它们所连接的N-O合在一起形成5-10元的环，环中选择性地含有一个、两个或三个选自O、S或NR10R11的其它杂原子；其中，前述的烷基、链烯基和链炔基均可以是未取代的或被环烷基(或选择性含有选自O、S或NR9的杂原子的环烷基)、芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代。
优选的化合物具有式II的结构
其中R1、R3、R4、R5、R6和R7如上所定义。特别优选其中R1是甲基或卤素、R3、R4和R5是卤素如氟或溴的化合物。
另一组优选的化合物具有式III的结构
其中R1、R3、R4、R5和R7如上所定义。
首选的化合物是其中R1是甲基或卤素如F、Br、Cl和I，R3是氢或卤素如氟，R4是卤素如氟，R5是氢或卤素如氟或溴的化合物。所述化合物具有下式的结构
本发明所提供的具体化合物包括3，4，5-三氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-氯-3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；5-氯-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4，5-三氟-N-羟基-苯甲酰胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-甲基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4，5-三氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-5-氯-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；
N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲酰胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-乙氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-乙氧基-4-硝基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-4-硝基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-4-氟苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-4-氟苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-异丙基苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲基-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-5-硝基-苯甲酰胺；
2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺(HCl盐)；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丁基甲氧基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(2-二甲基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-苯甲酰胺一盐酸盐；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；5-溴-N-环己基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环戊基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺；和5-溴-N-环丁基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺。
本发明还提供含有式I化合物以及可药用赋形剂、稀释剂或载体的药物制剂。优选的制剂含有前述的优选化合物以及赋形剂、稀释剂或载体。
式I化合物是强的并且是选择性的激酶抑制剂，特别是MEK1和MEK2的选择性抑制剂。因此，它们可用于治疗患有癌症和其它增殖性疾病如牛皮癣、再狭窄、自身免疫疾病和动脉粥样硬化的患者。该化合物特别适用于治疗癌症如乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、皮肤癌和胰腺癌。该化合物还可用于治疗中风、糖尿病、肝肿大、心脏肥大、早老性痴呆、胆囊纤维化和病毒性疾病。本发明提供了抑制MEK酶和前述疾病的方法，该方法包括向患者施用有效量的式I化合物。
发明详述本文所用术语“芳基”是指含有5-12个碳原子的单环、二环或三环芳香环状部分。代表性的芳基的例子包括苯基、萘基和芴基。该芳基可以被一个、两个或三个选自氟、氯、溴、碘、烷基、羟基、烷氧基、硝基或氨基的基团所取代。代表性的取代芳基包括3-氟苯基、3，5-二甲氧基苯基、4-硝基萘基、2-甲基-4-氯-7-氨基芴基等。
术语“芳氧基”是指通过氧原子结合的芳基，例如苯氧基、3-溴苯氧基、萘氧基和4-甲基-1-芴氧基。
“杂芳基”是指含有4-11个碳原子和一个、两个或三个选自O、S或N的杂原子的单环、二环或三环芳香环状部分。其例子包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、三唑基、噻唑基、呫吨基、吡喃基、吲哚基、嘧啶基、1，5-二氮杂萘基、吡啶基和三嗪基。杂芳基可以被一个、两个或三个选自氟、氯、溴、碘、烷基、羟基、烷氧基、硝基或氨基的基团所取代。取代的杂芳基的例子包括氯代吡喃基、甲基噻吩基、氟代吡啶基、氨基-1，4-苯并异噁嗪基、硝基异喹啉基和羟基吲哚基。
杂芳基可以通过氧结合而形成杂芳氧基，例如噻吩氧基、异噻唑基氧基、苯并呋喃基氧基、吡啶氧基和4-甲基异喹啉基氧基。
术语“C1-C8烷基”是指含有1-8个碳原子的直链或支链脂族基团。代表性的C1-C8烷基包括甲基、乙基、异丙基、叔丁基、2，3-二甲基己基和1，1-二甲基戊基。该烷基可以是未取代的或被环烷基、含有选自O、S或NR9的杂原子的环烷基、以上所定义的芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代。芳基和芳氧基取代的烷基的例子苯基甲基、2-苯基乙基、3-氯苯基甲基、1，1-二甲基-3-(2-硝基苯氧基)丁基和3，4，5-三氟萘基甲基。被杂芳基或杂芳氧基取代的烷基的例子噻吩基甲基、2-呋喃基乙基、6-呋喃氧基辛基、4-甲基喹啉氧基甲基和6-异噻唑基己基。环烷基取代的烷基包括环丙基甲基、2-环戊基乙基、2-哌啶-1-基乙基、3-(四氢吡喃-2-基)丙基和环丁基甲基。
“C2-C8链烯基”是指含有一个或多个双键的直链或支链碳链。其例子包括丁-2-烯基、2-甲基-丙-2-烯基、1，1-二甲基-己-4-烯基、3-乙基-4-甲基-戊-2-烯基和3-异丙基-戊-4-烯基。该链烯基可以被芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代，例如3-苯基丙-2-烯基、6-噻吩基-己-2-烯基、2-呋喃氧基-丁-2-烯基和4-萘氧基-己-2-烯基。
“C2-C8链炔基”是指含有2-8个碳原子和至少一个叁键的直链或支链碳链。代表性的链炔基包括丙-2-炔基、2-甲基-己-5-炔基、3，4-二甲基-己-5-炔基和2-乙基-丁-3-炔基。该链炔基可以被芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代，例如4-(2-氟苯基)-丁-3-炔基、3-甲基-5-噻吩基戊-4-炔基、3-苯氧基-己-4-炔基和2-呋喃氧基-3-甲基-己-4-炔基。
链烯基和链炔基可以分别含有一个或多个双键或叁键，或同时含有双键和叁键。例如，同时含有双键和叁键的代表性的基团包括己-2-烯-4-炔基、3-甲基-5-苯基戊-2-烯-4-炔基和3-噻吩氧基-己-3-烯-5-炔基。
术语“C3-C10环烷基”是指含有3-10个碳原子的非芳香环或稠合的环。其例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环辛基、二环庚基、金刚烷基和环己基。该环可选择性地含有一个选自O、S或NR9的杂原子。所述基团包括四氢呋喃基、四氢吡咯基、八氢苯并呋喃基、八氢吲哚基和八氢苯并噻吩基。
R3、R4和R5可以包括式(O或NH)m-(CH2)n-R9定义的基团。所述基团的是氨基甲基、2-氨基乙基、2-氨基乙基氨基、3-氨基丙氧基、N，N-二乙基氨基、3-(N-甲基-N-异丙基氨基)-丙基氨基、2-(N-乙酰基氨基)-乙氧基、4-(N-二甲基氨基羰基氨基)-丁氧基和3-(N-环丙基氨基)-丙氧基。
式I的4-溴和4-碘苯基氨基苯氧肟酸可以从可购买到的原料用有机化学领域技术人员熟知的合成方法制备。典型的合成方法是将4-溴或4-碘苯胺与在2-位带有离去基团的苯甲酸反应得到苯基氨基苯甲酸，然后将苯甲酸苯基氨基衍生物与羟胺衍生物反应。该过程如反应方案1所示。
反应方案1
其中L是离去基团，例如卤素如氟、氯、溴或碘，或活化的羟基如二乙基磷酸酯、三甲基甲硅烷氧基、对硝基苯氧基或苯基磺酰氧基。
苯胺衍生物与苯甲酸衍生物的反应通常通过将苯甲酸与等摩尔量或过量的苯胺在惰性有机溶剂如四氢呋喃或甲苯中，在碱如二异丙氨基锂、正丁基锂、氢化钠和氨基钠的存在下混合来完成。该反应通常在约-78℃至约25℃的温度下进行，通常在约2小时到约4天内完成。产物可以通过例如减压蒸发除去溶剂进行分离，如需要，可通过常规方法如层析法、重结晶或蒸馏进一步纯化。
然后将苯基氨基苯甲酸与羟胺衍生物HNR6OR7在肽偶联剂的存在下反应。可以使用的羟胺衍生物包括甲氧基胺、N-乙基-异丙氧基胺、和四氢噁嗪。典型的偶联剂包括2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)、1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)、溴-三(吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(pyBrOP)和(苯并三唑基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pyBOP)。通常将苯基氨基苯甲酸和羟基氨基衍生物以约等摩尔量在惰性有机溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿或二甲苯中混合，并加入等摩尔量的偶联剂。如需要，可加入碱如三乙胺或二异丙基乙基胺作为酸清除剂。偶联反应通常在约10分钟至2小时后完成，产物很容易通过例如减压蒸除反应溶剂进行分离，并通过常规方法如层析法或用溶剂如丙酮、乙醚或乙醇结晶纯化产物。
另一种制备本发明化合物的方法包括，首先将苯甲酸转变成异羟肟酸衍生物，然后将异羟肟酸衍生物与苯胺反应。该合成过程如反应方案2所示。
反应方案2
其中L是离去基团。两步反应的反应条件与反应方案1中描述的相同。
制备本发明化合物的又一种方法包括，将苯基氨基苯氧肟酸与酯形成基团反应，如反应方案3所示。
反应方案3
其中L是离去基团如卤素，碱是三乙胺或二异丙基胺。
通过以下实施例进一步说明本发明式I化合物的合成。
实施例14-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺(a)4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酸的制备-78℃下、向搅拌中的3.16g(0.0133mol)2-氨基-5-碘甲苯的5mL四氢呋喃溶液中加入10mL(0.020mol)2.0M二异丙氨基锂的四氢呋喃/庚烷/乙基苯(Aldrich)溶液。将形成的绿色悬浮液剧烈搅拌15分钟，然后加入1.00g(0.00632mol)2，4-二氟苯甲酸的10mL四氢呋喃溶液。将反应液的温度缓慢升温至室温，将混合物在该温度下搅拌2天。减压蒸除溶剂将反应混合物浓缩。向浓缩物中加入盐酸(10％)，将溶液用二氯甲烷萃取。将有机相干燥(硫酸镁)，然后在蒸汽浴上浓缩至小体积(10mL)并冷却至室温。通过真空过滤收集所形成的米黄色纤维，用己烷冲洗，然后在真空烤箱(76℃；约10mm Hg)中干燥得到1.10g(47％)所需物质；mp 224-229.5℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.72(s，1H)，7.97(dd，1H，J＝7.0，8.7Hz)，7.70(d，1H，J＝1.5Hz)，7.57(dd，1H，J＝8.4，1.9Hz)，7.17(d，1H，J＝8.2Hz)，6.61-6.53(m，2H)，2.18(s，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ169.87，166.36(d，JC-F＝249.4Hz)，150.11(d，JC-F＝11.4Hz)，139.83，138.49，136.07，135.26(d，JC-F＝11.5Hz)，135.07，125.60，109.32，104.98(d，JC-F＝21.1Hz)，99.54(d，JC-F＝26.0Hz)，89.43，17.52；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-104.00 to-104.07(m)；IR(KBr)1670(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝372.元素分析，计算值C14H11FINO2C，45.31；H，2.99；N，3.77。实测值C，45.21；R，2.77；N，3.64。(b)4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺的制备向搅拌中的4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酸(0.6495g，0.001750mol)、O-(四氢-2H-吡喃-2-基)-羟基胺(0.2590g，0.002211mol)和二异丙基乙基胺(0.40mL，0.0023mol)的在31mL等体积四氢呋喃-二氯甲烷中的溶液中直接加入1.18g(0.00227mol)固体PyBOP([苯并三唑基氧基]三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐，Advanced ChemTech)。将反应混合物搅拌30分钟，然后真空浓缩。将棕色的油用10％盐酸处理。将悬浮液用乙醚萃取。将有机萃取液用10％氢氧化钠洗涤，然后用10％盐酸洗涤，干燥(硫酸镁)并浓缩得到浅棕色泡沫。将该中间体溶于25mL氯化氢的乙醇溶液，将溶液室温放置15分钟。将反应混合物真空浓缩得到棕色油，将其通过快速硅胶层析纯化。用二氯甲烷→二氯甲烷-甲醇(166∶1)洗脱得到0.2284g浅棕色粘稠的油。用戊烷-己烷刮擦并高真空干燥得到0.1541g(23％)米黄色泡沫；mp61-75℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.34(s，1H)，9.68(s，1H)，9.18(s，1H)，7.65(d，1H，J＝1.5Hz)，7.58(dd，1H，J＝8.7，6.8Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.4，1.9Hz)，7.15(d，1H，J＝8.4Hz)，6.74(dd，1H，J＝11.8，2.4Hz)，6.62(ddd，1H，J＝8.4，8.4，2.7Hz)，2.18(s，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ165.91，164.36(d，JC-F＝247.1Hz)，146.78，139.18，138.77，135.43，132.64，130.60(d，JC-F＝11.5Hz)，122.23，112.52，104.72(d，J＝22.1Hz)，100.45(d，JC-F＝25.2Hz)，86.77，17.03；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-107.20 to -107.27(m)；IR(KBr)3307(宽，O-H拉伸)，1636(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝387.元素分析，计算值C14H12FIN2O2C，43.54；H，3.13；N，7.25。实测值C，43.62；H，3.24；N，6.98。
实施例25-溴-3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺(a)5-溴-1，3，4-三氟苯甲酸的制备向冷却至-78℃的、搅拌中的1-溴-2，3，4-三氟苯(Aldrich，99％；5.30g，0.0249mol)的95mL无水四氢呋喃溶液中缓慢加入12.5mL 2.0M二异丙基氨基锂的庚烷/四氢呋喃/乙基苯溶液(Aldrich)。将该混合物搅拌1小时，然后通过套管转移到700mL冷却至-78℃的、搅拌中的饱和二氧化碳乙醚溶液中。移走冷却浴，将反应混合物室温搅拌18小时。向反应混合物中倒入稀盐酸(10％，约500mL)，然后将该混合物在旋转蒸发仪上浓缩得到固体粗品。将固体产物在乙醚(150mL)和盐酸(330mL，pH0)之间分配。将水相用第二部分(100mL)乙醚萃取，然后将合并的乙醚萃取液用5％氢氧化钠水溶液(200mL)和水(100mL，pH12)洗涤。将合并的碱性水萃取液用浓盐酸酸化至pH0。将形成的悬浮液用乙醚(2×200mL)萃取。将合并的有机萃取液干燥(硫酸镁)、真空浓缩，然后抽高真空直至质量恒定，得到5.60g(88％收率)米黄色粉末；mp139-142.5℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ13.97(宽s，1H，8.00-7.96(m，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ162.96，129.34，118.47，104.54(d，JC-F＝22.9Hz)；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-120.20至-120.31(m)，-131.75 to -131.86(m)，-154.95至-155.07(m)；IR(KBr)1696(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝255.元素分析计算值，C74H21BrF3O2C，32.97；H，0.79；N，0.00；Br，31.34；F，22.35。实测值C，33.18；H，0.64；N，0.01；Br，30.14；F，22.75。(b)5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酸的制备-78℃下，向搅拌中的1.88g(0.00791mol)2-氨基-5-碘甲苯的10mL四氢呋喃溶液中加入6mL(0.012mol)2.0M二异丙基氨基锂的四氢呋喃/庚烷/乙基苯(Aldrich)溶液。将形成的绿色悬浮液剧烈搅拌10分钟，然后加入1.00g(0.00392mol)5-溴-2，3，4-三氟苯甲酸的15mL四氢呋喃溶液。然后移走冷却浴，将反应混合物搅拌18小时。将混合物浓缩，将浓缩液用100mL稀(10％)盐酸处理。将形成的悬浮液用乙醚(2×150mL)萃取，将合并的有机萃取液干燥(硫酸镁)并真空浓缩得到橙色固体。将固体用沸腾的二氯甲烷研制，冷却至室温，然后过滤收集。将固体用二氯甲烷冲洗，在真空烤箱(80℃)中干燥得到1.39g(76％)黄绿色粉末；mp259.5-262℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.03(s，1H)，7.99(dd，1H，J＝7.5，1.9Hz)，7.57(dd，1H，J＝1.5Hz)，7.42(dd，1H，J＝8.4，1.9Hz)，6.70(dd，1H，J＝8.4，6.0Hz)，2.24(s，3H)；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-123.40至-123.47(m)；-139.00至-139.14(m)；IR(KBr)1667(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝469.元素分析计算值C14H9BrF2INO2C，35.93；H，1.94；N，2.99；Br，17.07；F，8.12；I，27.11。实测值C，36.15；H，1.91；N，2.70；Br，16.40；F，8.46；1，26.05。(c)5-溴-3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺的制备向搅拌中的5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酸(0.51g，0.0011mol)、O-(四氢-2H-吡喃-2-基)-羟胺(0.15g，0.0013mol)和二异丙基乙基胺(0.25mL，0.0014mol)在20mL等体积四氢呋喃-二氯甲烷中的溶液中直接加入0.6794g(0.001306mol)固体pyBOP(Advanced ChemTech)。将反应混合物于24℃搅拌10分钟，然后真空浓缩至干。将浓缩物悬浮在100mL 10％盐酸中。将悬浮液用125mL乙醚萃取。分出醚层，用75ml 10％氢氧化钠水溶液洗涤，然后用100mL稀酸洗涤。将醚溶液干燥(硫酸镁)并真空浓缩得到0.62g(100％)米黄色泡沫。将泡沫溶于约15mL氯化氢的甲醇溶液。5分钟后，将溶液真空浓缩得到油，将该油通过快速硅胶层析纯化。用二氯甲烷→二氯甲烷-甲醇(99∶1)洗脱得到0.2233g(42％)黄色粉末。将粉末溶于乙醚并用稀盐酸洗涤。将有机相干燥(硫酸镁)并真空浓缩得到0.200g泡沫。将该产物用戊烷研制得到0.1525g粉末并将该粉末通过快速硅胶层析再纯化。用二氯甲烷洗脱得到0.0783g(15％)分析纯的标题化合物，mp80-90℃；1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.53(s，1H)，9.38(s，1H)，8.82(s，1H)，7.70(dd，1H，J＝7.0，1.9Hz)，7.53(s，1H)，7.37(dd，1H，J＝8.4，1.9Hz)，6.55(dd，1H，J＝8.2，6.5Hz)，2.22(s，3H)；19F NMR(376MHz，DMSO)δ-126.24至-126.29(m)，-137.71至-137.77(m)；IR(KBr)3346(宽，O-H拉伸)，1651(C＝O拉伸)cm-1；MS(CI)M+1＝484.元素分析计算值C14H10BrF2IN2O2C，34.81；H，2.09；N，5.80。实测值C，34，53；H，1.73；N，5.52。
下表中的实施例3-12和78-102按照实施例1和2的一般方法制备。
实施例13-77实施例13-77用组合合成方法通过将适宜取代的苯基氨基苯甲酸(例如反应方案1所示)与羟胺(例如HN(-R6)-O-R7)反应制备。以下给出一般方法向金属模块中的0.8mL自动进样器小瓶中加入40μL 0.5M酸的DMF溶液和40μL羟胺(在DMF中的2M Hunig′s碱和1M胺溶液)。向自动进样器的小瓶中加入50μL 0.5M新制备的PyBrop溶液。将反应液放置24小时。
将反应混合物转移至2打兰的小瓶中并用2mL乙酸乙酯稀释。将有机层用3mL蒸馏水洗涤并将水层再次用2mL乙酸乙酯洗涤。将合并的有机层在开放的通风橱内蒸发至干。
将残余物加入2mL 50％乙腈的水溶液中并注射在半制备性反向柱上(10mm×25cm，5μM球形二氧化硅，孔径115A，用C-18衍生化，将样品以4.7mL/分钟洗脱，洗脱剂在8.5分钟内线性变化至100％乙腈。继续用100％乙腈洗脱8分钟)。通过在214nM下监测收集流份。将所需流份用Zymark Turbovap蒸发。将产物溶于氯仿并转移至预先称重的小瓶内，蒸发，再次称重以确定收率。通过质谱证实结构。
实施例3-102实施 化合物 熔点 MS例号(℃)(M-H+)3 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-4-氟-N-羟基-56-57523苯甲酰胺 分解4 5-氯-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯 65甲酰胺 分解5 5-氯-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-62-67N-甲基-苯甲酰胺6 5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氢105-108吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺实施 化合物 熔点MS例号 (℃) (M-H+)7 5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲氧基 64-68苯甲酰胺8 4-氟-N-羟基-2-(4-氟-2-甲基-苯基氨基)-119-135苯甲酰胺9 4-氟-N-羟基-2-(2-甲基苯基氨基)-苯甲酰101-103胺10 4-氟-2-(4-氟-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氢142-146吡喃-2-基氧基)苯甲酰胺11 4-氟-N-羟基-2-(4-氟-2-甲基苯基氨基)-苯 133.5-135甲酰胺12 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲 107-109.5氧基-苯甲酰胺13 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲氧基 399-苯甲酰胺14 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲 417氧基-苯甲酰胺15 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-甲 369氧基-苯甲酰胺16 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-乙氧基-3，4- 342*二氟-苯甲酰胺(M-EtO)17 5-溴-N-乙氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基- 509苯基氨基)-苯甲酰胺18 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-异 445丙氧基-苯甲酰胺19 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-异 397丙氧基-苯甲酰胺实施 化合物 熔点 MS例号 (℃)(M-H+)20 4-氟-N-(呋喃-3-基甲氧基)-2-(4-碘-2-甲 465基-苯基氨基)-苯甲酰胺21 3，4-二氟-N-(呋喃-3-基甲氧基)-2-(4-碘-2- 483甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺22 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(呋 435喃-3-基甲氧基)-苯甲酰胺23 5-溴-3，4-二氟-N-(呋喃-3-基甲氧基)-2-(4- 561碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺24 5-溴-N-(丁-2-烯氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2- 536甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺25 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2- 423炔氧基)-苯甲酰胺26 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙 441-2-炔氧基)-苯甲酰胺27 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(1- 455甲基-丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺28 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(1- 407甲基-丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺29 N-(丁-3-炔氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 455-苯基氨基)-苯甲酰胺30 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-3-炔氧 407基)-3，4-二氟-苯甲酰胺31 5-溴-N-(丁-3-炔氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2- 533甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺32 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3- 517苯基-丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺实施化合物 熔点 MS例号 (℃)(M-H+)33 3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-469苯基-丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺34 3，4-二氟-N-[3-(3-氟-苯基)-丙-2-炔氧基]-5352-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺35 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N- 487[3-(3-氟-苯基)-丙-2-炔氧基]-苯甲酰胺36 3，4-二氟-N-[3-(2-氟-苯基)-丙-2-炔氧基]-5352-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺37 5-溴-3，4-二氟-N-[3-(2-氟-苯基)-丙-2-炔 613氧基]-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺39 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(3-510甲基-5-苯基-戊-2-烯-4-炔氧基)-苯甲酰胺40 N-乙氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨 431基)-苯甲酰胺41 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-乙氧基-3，4- 383二氟-苯甲酰胺42 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-丙氧基 427-苯甲酰胺43 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-丙 445氧基-苯甲酰胺44 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-丙 397氧基-苯甲酰胺45 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-523N-丙氧基-苯甲酰胺实施化合物 熔点MS例号 (℃)(M-H+)46 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-异丙氧 427基-苯甲酰胺47 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-异 445丙氧基-苯甲酰胺48 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-异 397丙氧基-苯甲酰胺49 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)- 523N-异丙氧基-苯甲酰胺50 N-环丁氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯 457基氨基)-苯甲酰胺51 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-环丁氧基-4093，4-二氟-苯甲酰胺52 N-环戊氧基-4-氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨453基)-苯甲酰胺53 N-环戊氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯 471基氨基)-苯甲酰胺54 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-环戊氧基-4233，4-二氟-苯甲酰胺55 N-环丙基甲氧基-4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯 439基氨基)-苯甲酰胺56 N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 457-苯基氨基)-苯甲酰胺57 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-环丙基甲氧 409基-3，4-二氟-苯甲酰胺58 5-溴-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘- 4352-甲基-苯基氨基)实施 化合物 熔点 MS例号 (℃)(M-H+)59 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-苯 505氧基-乙氧基)-苯甲酰胺60 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2- 523苯氧基-乙氧基)-苯甲酰胺61 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(2- 475苯氧基-乙氧基)-苯甲酰胺62 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(噻吩- 4812-基甲氧基)-苯甲酰胺63 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(噻 499吩-2-基甲氧基)-苯甲酰胺64 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(噻 451吩-2-基甲氧基)苯甲酰胺65 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-甲 439基-烯丙氧基)-苯甲酰胺66 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2- 457甲基-烯丙氧基)-苯甲酰胺67 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(2- 410甲基-烯丙氧基)-苯甲酰胺68 N-(丁-2-烯氧基)-4-氟-2-(4-碘-2-甲基苯 439基氨基)-苯甲酰胺69 N-(丁-2-烯氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 457-苯基氨基)-苯甲酰胺70 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧 410基)-3，4-二氟-苯甲酰胺71 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙 441-2-炔氧基)-苯甲酰胺实施 化合物熔点 MS例号(℃)(M-H+)72 N-(丁-3-炔氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 455-苯基氨基)-苯甲酰胺73 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(4，4-二甲基 449-戊-2-炔氧基)-3，4-二氟-苯甲酰胺74 N-(丁-2-烯氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基 457-苯基氨基)-苯甲酰胺75 2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧410基)-3，4-二氟-苯甲酰胺76 N-(3-叔丁基-丙炔-2-基)氧基-4-氟-2-(4-479碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺77 4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲 577*氧基-苯甲酰胺*CI78 4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-N- 油异丙基-苯甲酰胺79 N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲125-127基-苯基氨基)-苯甲酰胺80 4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-N- 44-55甲基-苯甲酰胺81 4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-5- 208-209硝基-苯甲酰胺(玻璃)82 2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-硝基- 199-200苯甲酰胺83 3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四163-165氢-吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺84 3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨 65-75基)-苯甲酰胺实施 化合物 熔点MS例号 (℃)(M-H+)85 3，4-二氟-5-溴-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-95N-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苯甲酰胺86 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)- 167-169N-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺87 2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羟基-苯 165-169甲酰胺(HCl盐)88 2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-(四氢-吡 166-167.5喃-2-基氧基)-苯甲酰胺89 3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丁173-174基甲氧基-苯甲酰胺90 3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(四氢 121-122-吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺91 5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(2-二甲 206-211.5基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-苯甲酰胺一盐 分解酸盐92 5-溴-N-(2-二甲基氨基-丙氧基)-3，4-二氟-95-1052-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)苯甲酰胺93 5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N- 266-280羟基-苯甲酰胺 分解94 5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N- 167.5-169.5(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺95 3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙172.5-173.5基甲氧基-苯甲酰胺96 5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲 171-172.5氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺97 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-173.5-175N-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯甲酰胺实施 化合物 熔点 MS例号 (℃)(M-H+)98 5-溴-N-(2-二乙基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-81(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺分解99 5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-126-128N-异丁氧基-苯甲酰胺100 5-溴-N-环己基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘- 139-1422-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺101 5-溴-N-环戊基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘- 113-1152-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺102 5-溴-N-环丁基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘- 138-1392-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺由于本发明的化合物对双重特异性蛋白激酶MEK1和MEK2的选择性抑制作用，该化合物可用于治疗癌症和其它增殖性疾病。在大量通常用于确立蛋白质和激酶的抑制作用和测定对所述抑制的致分裂和变形应答的生物学试验中评估了本发明化合物。酶试验对MAP激酶途径抑制剂的级联试验在含有p44MAP激酶的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白(GST-MAPK)和含有p45MEK的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白(GST-MEK)的存在下分析在髓磷脂碱性蛋白(MBP)中32P的掺入。分析溶液含有20mMHEPES，pH7.4，10mM MgCl2，1mM MnCl2，1mM EGTA，50μM[γ-32P]ATP，10μg GST-MEK，0.5μg GST-MAPK和40μg MBP，最终体积为100μL。20分钟后，加入三氯乙酸停止反应并用GF/C过滤垫过滤。用1205 Betaplate测定保留在滤纸上的32P。以10μM的浓度测定化合物抑制32P掺入的能力。
为了确定化合物是否可以抑制GST-MEK或GST MAPK，采用两种方案。在第一种方案中，将化合物加入到含有GST-MEK的试管中，随后加入GST-MAPK、MBP和[γ-32P]ATP。在第二方案中，将化合物加入同时含有GST-MEK和GST-MAPK的试管中，随后加入MBP和[γ-32P]ATP。在两种方案中均表现出活性的化合物被归为MAPK抑制剂，而仅在第一种方案中显示活性的化合物被归为MEK抑制剂。体外MAP激酶试验还在直接的试验中证实了抑制活性。对于MAP激酶，将1μgGST-MAPK和40μg MBP一起在30℃下保温15分钟，最终体积为50μL，其中含有50mM Tris(pH7.5)、10μM MgCl2、2μM EGTA和10μM[γ-32P]ATP。加入Laemmli SDS样品缓冲液停止反应并通过在10％聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离出磷酸化的MBP。通过放射自显影法，切下条带并进行闪烁计数测定出掺入MBP中的放射性。体外MEK试验为了评估直接MEK活性，将10μg GST-MEK1和5μg含有在71位有赖氨酸向丙氨酸突变的p44MAP激酶的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白(GST-MAPK-KA)一起保温。该突变消除了MAPK的激酶活性，因此仅保留了加入的MEK所具有的活性。以50μL的最终体积在30℃保温15分钟，其中含有50mM Tris(pH7.5)、10μM MgCl2、2μM EGTA和10μM[γ-32P]ATP。加入Laemmli SDS样品缓冲液停止反应并通过在10％聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离出磷酸化的GST-MAPK-KA。通过放射自显影法，切下条带并进行闪烁计数测定掺入GST-MAPK-KA中的放射性。此外，还使用了含有在218和222位从丝氨酸向谷氨酸的突变的人工激活的MEK(GST-MEK-2E)。当这些位点被磷酸化后，MEK的活性增加。这些位点的磷酸化可以通过丝氨酸残基向谷氨酸的突变来模仿。对于该试验，将5μg GST-MEK-2E与5μg GST-MAPK-KA一起在与上述相同的反应缓冲液中于30℃保温15分钟。如上所述终止反应并进行分析。完整细胞的MAP激酶试验为了测定化合物是否可以在完整的细胞内阻断MAP激酶的激活，采用如下方案将细胞置于多孔板内并生长至汇合。然后将细胞无血清培养过夜。将细胞与所需浓度的化合物或载体(DMSO)接触30分钟，然后加入生长因子，例如PDGF(100ng/mL)。用生长因子处理5分钟后，将细胞用PBS洗涤，然后在由70mM NaCl、10mMHEPES(pH7.4)、50mM磷酸甘油酯和1％Triton X-100组成的缓冲液中溶解。以13,000xg离心10分钟使溶胞产物澄清。将5μg得到的上清液和10μg与蛋白-2结合的微管(Map2)一起于30℃保温15分钟，最终体积为25μL，其中含有50mM Tris(pH7.4)、10mM MgCl2、2mM EGTA和30μM[γ-32P]ATP。加入Laemmli样品缓冲液终止反应。在7.5％丙烯酰胺凝胶上分离磷酸化的Map2，通过放射自显影法，随后切下条带并进行闪烁计数测定掺入的放射性。免疫沉淀和抗磷酸酪氨酸免疫印迹为了测定细胞MAP激酶的酪氨酸磷酸化的状态，将内源性MAP激酶用特异性抗体进行免疫沉淀，然后按照如下方法分析所形成的免疫沉淀中存在的磷酸酪氨酸将融合的细胞无血清培养过夜，然后按照以上描述用化合物和生长因子处理。然后将细胞破碎并以13,000xg离心2分钟。将形成的细胞沉积物重新悬浮并溶解在100μL含有1mM NaVO4的1％SDS中。交替进行煮沸和涡流振荡使细胞蛋白变性，然后加入900μL RIPA缓冲液(50mM Tris(pH7.4)、150mM NaCl、1％Triton X-100、0.1％脱氧胆酸盐和10mMEDTA)。向该混合物中加入60μL与兔免疫球蛋白G偶联的琼脂糖小珠和60μL Pansorbin细胞以澄清非特异性结合蛋白的细胞溶解产物。将该混合物于4℃保温15分钟，然后以13,000xg离心10分钟。将形成的上清液转移到新的试管中并与10μL针对MAP激酶片段产生的多克隆抗血清一起于4℃保温至少1小时。加入70μL与蛋白G和蛋白A偶联的琼脂糖小珠的浆液并于4℃继续保温30分钟。以13,000xg离心5分钟使小珠沉积并用1mL RIPA缓冲液洗涤3次。向最终的小珠沉积物中加入Laemmli样品缓冲液。将混合物煮沸5分钟，然后在10％丙烯酰胺凝胶上分离。将凝胶上的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，膜上的非特异性结合位点已经通过与1％卵白蛋白和1％牛血清白蛋白一起在TBST(150mM NaCl、10mM Tris(pH7.4)和0.05％Tween20)中保温被封阻。然后将膜与市售的针对磷酸酪氨酸的抗体一起保温。通过与125I-蛋白A一起保温并随后进行放射自显影法检测结合在膜上的抗体。细胞生长试验3H-胸苷掺入将细胞置于多孔板内并生长至接近汇合。然后除去培养液并用含有1％牛血清白蛋白的生长培养液代替。无血清培养24小时后，加入化合物和特异性生长因子并继续保温24小时。在最后的2小时内，向培养液中加入3H-胸苷。为了终止培养，除去培养液并将细胞层用冰冷的磷酸缓冲盐水洗涤2次。最后一次洗涤后，加入冰冷的5％三氯乙酸并将细胞室温保温15分钟。然后除去三氯乙酸溶液并将细胞层用蒸馏水洗涤3次。最后一次洗涤后，加入2％十二烷基硫酸钠使细胞层溶解。通过闪烁计数测定该溶液的放射性。
在3T3-L1脂肪细胞中，其中抑制作用可以阻断胰岛素对MAPK的激活(IC50为3μM)，而该化合物在10μM的浓度下对胰岛素刺激的放射标记的2-去氧葡糖的摄取或胰岛素刺激的类脂或糖原的合成均没有影响。这表明了该抑制剂对于胰岛素的致分裂作用和代谢作用之间具有选择性，并且表明了该抑制剂的毒性将低于不具有这种选择性的其它抑制剂。单层生长将细胞以10至20,000细胞/mL置于多孔板内。接种48小时后，向细胞生长培养液中加入化合物并继续保温2天。然后通过与胰蛋白酶一起保温从孔中取出细胞并用Coulter计数器计数。在软琼脂中生长将细胞用含有0.3％琼脂的生长培养基以5至10,000细胞/盘接种在35mm的盘上。冷却使琼脂固化后，将细胞转移至37℃保温箱中。7-10天的生长后，借助解剖显微镜人工计数可见菌落。
加入顺序实验证实了本发明的化合物可以抑制MEK而不抑制MAP激酶。研究MAP激酶的激酶缺陷突变体作为底物(从而没有会使解释复杂化的MAP激酶的自身磷酸化作用)的磷酸化作用的实验表明，该抑制剂抑制MEK的IC50与级联试验中测得的基本相同。
动力学分析表明，本发明的化合物不与ATP竞争。因此，它们不会结合在酶的ATP结合位点上，这也许可以解释为什么这些化合物没有对于大部分激酶抑制剂所常见的非特异性激酶抑制活性，后者的确可与ATP结合位点结合并且是ATP竞争性的。
表1列出了在以上试验中多种代表性式I化合物的体外和体内生物学活性。还列出了多种已知化合物的数据。
表1下列实施例 体外 体内IC50(μM) (细胞培养)的化合物IC50(μM)10.0070.0520.0030.0330.072340.023150.566 ～3060.345 ～3070.221 ＜3087.13 390.4091110.3340.5120.826130.243140.061＞2170.014200.0420.17210.014220.137230.016240.0210.12250.102270.026280.728290.0760.73300.971310.045320.017330.374340.1131.5
表1(续)下列实施例体外体内IC50(μM) (细胞培养)的化合物IC50(μM)36 0.0560.0737 0.00238 0.0770.06539 0.14740 0.0280.12541 0.23642 0.08743 0.0400.10044 0.47545 0.12647 0.0870.1349 0.08550 0.0430.2253 0.14055 0.04756 0.01457 0.18158 0.0180.01459 0.25962 0.08663 0.01964 0.27965 0.05766 0.0160.1368 0.11969 0.01670 0.22471 0.0150.3974 0.035
表1(续)下列实施例 体外体内IC50(μM) (细胞培养)的化合物IC50(μM)77 0.2878 0.08079 0.00880 0.08081 0.01782 0.003 0.0483 0.03184 0.001 0.00585 0.02486 0.04787 ＜0.00188 0.06989 0.005 0.3090 0.05591 0.02092 0.03393 0.010 0.0594 0.03895 0.00196 ＜0.01097 0.01598 0.02599 0.018 0.501000.026 ＞11010.008 ＞11020.004 0.20在前述试验中还评估了以下公开于美国专利5,155,110中的化合物，这些化合物均表现出抑制活性很弱或没有抑制活性。
R6R7体外抑制％H H9，1μM-3，10μMH CH3-8，1μM8，10μMCH3H-5，1μM19，10μMiPrH17，1μM9，10μMCH2-PhH-4，1μM18，10μM
R6R7体外抑制％H H6，1μM-4，10μMH CH3-6，1μM12，10μMCH3H13，1μM19，10μMiPrH-11，1μM7，10μM
实施例103将实施例95的化合物，2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺在植入了鼠结肠肿瘤C26/克隆10的动物中进行评估。在第0天，在雄性CD2F1小鼠(NCICharles River，Kingston)的右腋窝区域皮下植入肿瘤碎片(约30mg)。在植入后的第1-14天，将实施例95的化合物腹膜内(IP)或口服(PO)给药，共给药14天(每组6只小鼠)。用于测试化合物和对照动物的载体是10％乙醇/10％Cremophor-EL(Sigma)/80％H2O，pH5.0。每周3次，通过测量各肿瘤的长度和宽度、记录肿瘤的体积并根据公式(a×b2)/2计算出质量(mg)，其中a和b是肿瘤的长度和宽度。在特定的测量天数，在治疗肿瘤的平均肿瘤体积比对照动物的平均肿瘤体积之比的基础上计算治疗/对照(T/C)百分比。
在实施例95的化合物腹膜内给药的试验中，剂量为200、124、77和48mg/kg/天。在第15天进行评估时，本发明的化合物抑制肿瘤生长达59％至100％。在第15天，对照肿瘤的平均大小为1594mg。表2给出了各治疗组中动物的死亡数、体重的变化、治疗组平均肿瘤体积与对照组相比的百分比以及抑制百分比。
表2剂量 非特异性死亡 体重变化％T/C％(克) (第15天) 抑制2001/6 +2 0 1001241/6 +3 4 96772/5 +2 2 98480/6 +3 41 59在实施例95的化合物口服给药的试验中，剂量为300、186、115和71mg/kg/天。在第17天进行评估时，本发明的化合物抑制肿瘤生长达64％至83％。在第17天，对照肿瘤的平均大小为1664mg。表3给出了各治疗组中动物的死亡数、体重的变化、治疗组平均肿瘤体积与对照组相比的百分比以及抑制百分比。
表3剂量 非特异性死亡 体重变化％T/C ％(克) (第17天) 抑制3000/6 +217 831860/6 +225 751151/6 +221 79710/6 +236 64以上试验表明，式I的本发明化合物特别适用于治疗癌症如结肠癌。这些化合物特别适用于与放射疗法联合来治疗和控制癌症。
本发明的化合物可用于对患有癌症和其它增殖性疾病并需要治疗的患者进行治疗。该化合物可用于治疗牛皮癣、再狭窄、自身免疫疾病和动脉粥样硬化。该化合物通常以药物制剂的形式使用，在所述药物制剂中，式I化合物的含量为约5％至约95％(重量)。可将化合物配制成用于常规的口服、胃肠外、局部、直肠等给药途径的形式。可将化合物用药物中常用的稀释剂、赋形剂和载体配制，例如多元醇如甘油、乙二醇、山梨醇70；乙二醇的单-和二脂肪酸酯。淀粉和糖如玉米淀粉、蔗糖、乳糖等可用于固体制剂。所述固体制剂可以是片剂、锭剂、丸剂、胶囊等形式。还可掺入矫味剂如薄荷、冬青油等。
活性化合物的一般剂量为可在患病的哺乳动物中有效治疗癌症或其它增殖性疾病的量。剂量通常为约0.1mg/kg体重至约500mg/kg体重。所述剂量可以每天1至约4次给药，或者根据需要进行给药，以有效地治疗癌症、牛皮癣、再狭窄或其它增殖性疾病。
本发明化合物的优选给药方法是通过片剂、胶囊、溶液剂或糖浆口服给药。另一方法是胃肠外给药，特别是通过静脉内输注苯并吡喃在等渗盐水或5％葡萄糖水溶液中的溶液进行给药。
以下是本发明的代表性制剂。
实施例10450mg片剂的制备每片 每10,000片0.050g 4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰500g胺0.080g 乳糖 800g0.010g 玉米淀粉(用于混合) 100g0.008g 玉米淀粉(用于成糊) 80g0.002g 硬脂酸镁(1％) 20g0.150g 1500g将苯氧肟酸、乳糖和玉米淀粉(用于混合的)混合至均匀。将玉米淀粉(用于成糊的)悬浮在600mL水中并在搅拌下加热形成糊。将该糊用于使混合的粉末成粒。将颗粒通过8号筛并于120°F下干燥。将干燥的颗粒通过16号筛。将混合物用1％硬脂酸镁润滑并压制成片。该片剂用于对哺乳动物进行给药以抑制MEK酶并治疗再狭窄、动脉粥样硬化和牛皮癣。
实施例105口服混悬液的制备成分 含量5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(甲氧基)-苯甲酰胺 500mg山梨醇溶液(70％NF)40mL苯甲酸钠 150mg糖精 10mg红染料10mg樱桃香精 50mg蒸馏水适量至 100mL
将山梨醇溶液加入到40mL蒸馏水中并将苯氧肟酸衍生物悬浮在其中。加入糖精、苯甲酸钠、矫味剂和染料并溶解。用蒸馏水将体积调至100mL。每毫升糖浆含有5mg本发明的化合物。可将该糖浆对哺乳动物给药用于治疗增殖性疾病，特别是乳腺癌和皮肤癌。
实施例106胃肠外溶液的制备在700mL丙二醇和200mL注射用水中加入20.0g 4-氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(羟基)-苯甲酰胺。加入注射用水将溶液的体积调至1000mL。将制剂加热灭菌，装到50mL安瓿内，每个安瓿内含2.0mL(40mg 4-氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(羟基)-苯甲酰胺)，然后在氮气下密封。
可将由此配制的本发明化合物以对治疗疾病有效的频率和剂量对需要治疗的哺乳动物进行给药，以治疗增殖性疾病如癌症、牛皮癣、再狭窄、动脉粥样硬化和自身免疫疾病。本发明化合物的“抗增殖量”为化合物抑制或降低靶细胞增殖速率的量。可以根据本发明进行治疗的典型的癌症包括乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、皮肤癌等。该化合物特别适用于治疗牛皮癣、再狭窄和动脉粥样硬化；抑制MEK酶、特别是MEK1和MEK2的活性。所需要的只是向哺乳动物施用MEK抑制量的本发明化合物。本发明化合物“MEK抑制量”是指当向哺乳动物给药时可以引起可测量到的MEK酶抑制作用的量。典型的MEK抑制量为约0.1μg至约500mg活性化合物/kg体重。为了治疗上述的增殖性疾病，典型的剂量为约0.1至约50mg/kg，通常每天1至约4次给药。
权利要求
1.式I化合物
其中R1是氢、羟基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、卤素、三氟甲基或CN；R2是氢；R3、R4和R5彼此独立地是氢、羟基、卤素、三氟甲基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、硝基、CN或(O或NH)m-(CH2)n-R9，其中R9是氢、羟基、CO2H或NR10R11；n是0-4；m是0或1；R10和R11彼此独立地是氢或C1-C8烷基，或与它们所连接的氮合在一起形成3-10元的环，所述环选择性地含有一个、两个或三个选自O、S、NH或N-C1-C8烷基的其它杂原子；R6是氢、C1-C8烷基、C(＝O)-C1-C8烷基、芳基、芳烷基或C3-C10环烷基；R7是氢、C1-C8烷基、C2-C8链烯基、C2-C8链炔基、C3-C10(环烷基或选择性含有选自O、S或NR9的杂原子的环烷基)；其中，前述的烷基、链烯基和链炔基均可以是未取代的或被环烷基(或选择性含有选自O、S或NR9的杂原子的环烷基)、芳基、芳氧基、杂芳基或杂芳氧基所取代；或者R6和R7与它们所连接的N-O合在一起形成5-10元的环，环中选择性地含有一个、两个或三个选自O、S或NR10R11的其它杂原子。
2.权利要求1的化合物，其中R1是C1-C8烷基或卤素。
3.权利要求2的化合物，其中R6是氢。
4.权利要求3的化合物，其中R1是是甲基。
5.权利要求4的化合物，具有下式的结构
6.权利要求5的化合物，其中R4是氟，R3和R5是氢。
7.权利要求6的化合物，所述化合物是4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(甲氧基)苯甲酰胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-苯氧基乙氧基)-苯甲酰胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-噻吩基甲氧基)-苯甲酰胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2-烯氧基)-苯甲酰胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(环丙基甲氧基)-苯甲酰胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(环戊氧基)-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-异丙基-苯甲酰胺；和4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲基-苯甲酰胺。
8.权利要求5的化合物，其中R3和R4是氟，R5是氢。
9.权利要求8的化合物，所述化合物选自3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-呋喃基甲氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-乙氧基苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(环丙基甲氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(1-甲基丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-苯基丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-甲基-5-苯基戊-2-烯-4-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(环丁氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-噻吩基甲氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-甲基-丙-2-烯氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-苯氧基乙氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-3-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(环戊氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-(2-氟苯基)-丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丁基甲氧基-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；和3，4-二氟-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-苯甲酰胺。
10.权利要求5的化合物，其中R3和R4是氟，R5是溴。
11.权利要求10的化合物，所述化合物是5-溴-3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(正丙氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-N-(呋喃-3-基甲氧基)-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-(丁-2烯氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-丁氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-甲基-丁-2-烯氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-甲基-戊-2-烯-4-炔氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苄基)-N-[5-(3-甲氧基-苯基)-3-甲基-戊-2-烯-4-炔氧基]-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-[3-(3-甲氧基-苯基)-丙-2-炔氧基]-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(噻吩-2-基甲氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-(2-氟苯基)-丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(乙氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(环丙基甲氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(异丙氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-3-炔氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯甲酰胺；5-溴-N-(2-二乙基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-异丁氧基-苯甲酰胺；5-溴-N-环己基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环戊基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环丁基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(2-二甲基氨基乙氧基)-3，4-二氟-苯甲酰胺一盐酸盐；5-溴-N-(2-二甲基氨基-丙氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；和5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺。
12.权利要求5的化合物，其中R3和R4是氢，R5是卤素。
13.权利要求12的化合物，所述化合物是5-氯-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；5-氯-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-甲氧基苯甲酰胺；4-溴-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲氧基苯甲酰胺；4-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲氧基苯甲酰胺；5-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-碘-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-苯基甲氧基苯甲酰胺；和5-氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺。
14.权利要求4的化合物，具有下式的结构
15.权利要求14的化合物，其中R3和R4是氟，R5是氢。
16.权利要求15的化合物，所述化合物是3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-苯基丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-呋喃基甲氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-噻吩基甲氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-3-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-甲基-丙-2-烯氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(丁-2-烯氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(甲氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(乙氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(环丁氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(异丙氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(2-苯氧基乙氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(环丙基-甲氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(正丙氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(1-甲基-丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(3-(3-氟苯基)-丙-2-炔氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(4，4-二甲基戊-2-炔氧基)-苯甲酰胺；和3，4-二氟-2-(4-溴-2-甲基-苯基氨基)-N-(环戊氧基)-苯甲酰胺。
17.权利要求1的化合物，所述化合物是3，4，5-三氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-氯-3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；5-氯-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4，5-三氟-N-羟基-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-5-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-甲基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4，5-三氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-5-氯-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基苯基氨基)-苯甲酰胺；5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲酰胺；5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-4-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲酰胺；5-氯-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-乙氧基-3，4-二氟苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-乙氧基-4-硝基-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-5-氯-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-4-硝基-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-4-氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-4-氟-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-4-氟-苯甲酰胺；2-(2-溴-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；N-环丙基甲氧基-3，4，5-三氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；4-氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-5-硝基-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-羟基-4-硝基-苯甲酰胺；3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；3，4-二氟-N-羟基-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-羟基-苯甲酰胺(盐酸盐)；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-4-氟-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丁基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-(2-二甲基氨基-乙氧基)-3，4-二氟-苯甲酰胺一盐酸盐；5-溴-N-(2-二甲基氨基-丙氧基)-3，4-二氟-2-(4-碘-2-甲基-苯基氨基)-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-羟基-苯甲酰胺；5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-3，4-二氟-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-苯甲酰胺；2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺；和5-溴-2-(2-氯-4-碘-苯基氨基)-N-环丙基甲氧基-3，4-二氟-苯甲酰胺。
18.含有权利要求1的化合物与可药用赋形剂、稀释剂或载体的混合物的药物制剂。
19.权利要求18的制剂，含有下式化合物
20.权利要求18的制剂，含有下式化合物
21.在哺乳动物中抑制MEK酶的方法，该方法包括施用MEK抑制量的权利要求1的化合物。
22.对患有增殖性疾病并且需要治疗的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括施用抗增殖量的权利要求1的化合物。
23.权利要求21的方法，其中的增殖性疾病是牛皮癣、再狭窄、自身免疫疾病或动脉粥样硬化。
24.权利要求21的方法，其中的增殖性疾病是癌症。
25.对患有中风并且需要治疗的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1的化合物。
26.对患有心力衰竭并且需要治疗的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1的化合物。
27.对患有肝肿大并且需要治疗的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1的化合物。
28.对患有心肥大并且需要治疗的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1的化合物。
29.对患有糖尿病并且需要治疗的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1的化合物。
30.对患有早老性痴呆并且需要治疗的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1的化合物。
31.对患有癌症的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括与常规的放射疗法相结合施用有效量权利要求1的化合物。
32.对患有胆囊纤维化并且需要治疗的哺乳动物进行治疗的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1的化合物。
全文摘要
本发明公开了式(Ⅰ)的苯基氨基苯氧肟酸衍生物,其中R
文档编号A61P9/10GK1261877SQ98806750
公开日2000年8月2日 申请日期1998年6月24日 优先权日1997年7月1日
发明者S·D·巴瑞特, A·J·布里德吉斯, A·M·多赫提, D·T·杜德莱, A·R·萨尔提尔, H·泰克勒 申请人:沃尼尔·朗伯公司