477 (1-2):267-83)。
[0133]将VEGF、血管生成素、PDGF-BB, TGFβ 2、TIMP-1和??ΜΡ-2以如下的生理水平加入:VEGF 约 5.0-16ng/mL、血管生成素约 3.5-4.5ng/mL、PDGF 约 100_165pg/mL、TGF β 2 约2.5-2.7ng/mL、TIMP-1 约 0.68 μ g/mL、TIMP-2 约 1.04 μ g/mL。VEGF 可获自 Invitrogen，货号 #PHG0144、PHGO145, PHGO146, PHGO141 或 PHG0143 ;血管生成素可获自 R&D Systems,货号 #265-AN-050 或 265-AN-250 ；PDGF-BB 可获自 Invitrogen，货号 #PHG0044、#PHG0045、#PHG0046、#PHG0041、#PHG0043 ；TGF0 2 可获自 Invitrogen，货号 #PHG9114 ；TIMP-1 可获自R&D Systems，货号 #970-TM-010 ;??ΜΡ_2 可获自 R&D Systems，货号 #971-TM_010。将 VEGF、血管生成素、PDGF-BB, TGF β 2、TIMP-1和??ΜΡ-2加入至一种载体中，所述载体例如生理盐水、PBS、乳酸盐林格溶液、细胞培养基、水或本领域技术人员已知的其他合适水性溶液。
[0134]在用于伤口愈合的标准动物模型中测试PCS组合物，以评价活性(参见上文对用于伤口愈合的标准动物模型的定义)。
[0135]实施例6:生成持续释放的CFS组合物
[0136]SR-CFS组合物如SR-ACCS (包括合并的ACCS)或SR-PCS是通过以下方式产生:将CFS组合物与本文所述的(参见【具体实施方式】)或本领域技术人员熟知的任一持续释放制剂技术相结合。
[0137]实施例7:ACCS在慢性伤口愈合的动物模型中的效应
[0138]将本领域公认的慢性肉芽伤口动物模型用于研宄ACCS对慢性伤口愈合的效应(Hayward PG,Robson MC:Animal models of wound contract1n.1n Barbul A, etal:Clinical and Experimental Approaches to Dermal and Epidermal Repair:Normaland Chronic Wounds.John Wiley & Sons, New York, 1990.)。
[0139]结果:ACCS有效地使组织细菌生物负荷未增殖。ACCS使得肉芽伤口的愈合加速，显著快于未处理的感染对照组。
[0140]实施例8:CFS组合物PCS、SR-ACCS和SR-PCS在慢性伤口愈合动物模型中的应用
[0141]将本领域公认的慢性肉芽伤口动物模型(Hay ward PGj Robson MC:Animal modelsof wound contract1n.1n Barbul A，et al:Clinical and Experimental Approaches toDermal and Epidermal Repair:Normal and Chronic Wounds.John Wiley & Sons, NewYork, 1990)用于研究本发明的CFS组合物PCS、SR-ACCS或SR-PCS对慢性伤口愈合的效应。
[0142]在不背离本发明的主旨和基本属性的前提下，可以其他具体方式实施本发明。任何等价实施方案均旨在被涵盖于本发明的范围内。实际上，从前述说明，除本文中显示和描述的那些之外，对本发明的多种改变对于本领域的技术人员而言是显而易见的。这样的改变也旨在落在随附权利要求的范围内。
[0143]在说明书全文中引用了多篇出版物。每篇出版物均旨在以引用的方式全文纳入本说明书。
【主权项】
1.一种源自胚外细胞的细胞因子溶液组合物，包含生理浓度的: a)选自VEGF、TGFi32、血管生成素和TOGF的至少一种因子；以及 b)选自??ΜΡ-1和??ΜΡ-2的至少一种MMP抑制剂。
2.权利要求1的组合物，其中所述MMP抑制剂为??ΜΡ-1和/或??ΜΡ-2。
3.权利要求1的组合物，包含生理浓度的: a)选自VEGF、TGFβ2、血管生成素和roGF的至少两种因子；以及 b)至少一种MMP抑制剂。
4.权利要求1的组合物，包含生理浓度的: a)选自VEGF、TGFi32、血管生成素和TOGF的至少三种因子；以及 b)至少一种MMP抑制剂。
5.权利要求1的组合物，包含生理浓度的VEGF、TGFβ 2、血管生成素、PDGF和??ΜΡ-1。
6.权利要求1的组合物，包含生理浓度的VEGF、TGFβ 2、血管生成素、PDGF和??ΜΡ-2。
7.权利要求1的组合物，包含生理浓度的VEGF、TGFβ 2、血管生成素、PDGF, TIMP-1和??ΜΡ-2。
8.权利要求1-7的组合物，其中所述含细胞因子溶液组合物是源自羊膜的细胞因子溶液。
9.权利要求8的组合物，其中所述源自羊膜的细胞因子溶液包含生理浓度的VEGF、TGF0 2、血管生成素、PDGF、HMP-1 和 ??ΜΡ-2。
10.一种持续释放组合物，包含权利要求1的源自胚外细胞的细胞因子溶液。
11.权利要求10的持续释放组合物，其中所述源自胚外细胞的细胞因子溶液是源自羊膜的细胞因子溶液。
12.—种制备源自羊膜的细胞因子溶液的方法，包括: a)从胎盘羊膜分离羊膜上皮细胞， b)从所述羊膜上皮细胞选取AMP细胞， c)培养所述AMP细胞直至它们汇合， d)更换培养基， e)在所述培养基中培养所述细胞，以及 f)收集步骤(e)的培养基以得到源自羊膜的细胞因子溶液。
13.权利要求12的方法，其中将步骤(f)重复多次，并将每个步骤(f)中得到的源自羊膜的细胞因子溶液合并以形成合并的源自羊膜的细胞因子溶液。
14.由权利要求13的方法制备的源自羊膜的细胞因子溶液。
15.权利要求14的源自羊膜的细胞因子溶液，其中所述溶液包含生理浓度的因子VEGF, TGF β 2、血管生成素、PDGF, TIMP-1 和 / 或 ??ΜΡ-2。
16.权利要求1-10、14和15的组合物，其中VEGF的生理浓度为约5.0_16ng/mL，血管生成素的生理浓度为约3.5-4.5ng/mL，PDGF的生理浓度为约100_165pg/mL，TGF β 2的生理浓度为约2.5-2.7ng/mL，TIMP-1的生理浓度为约0.68 μ g/ml, TIMP-2的生理浓度为约1.04 μ g/mL0
17.—种生理性细胞因子溶液的组合物，含有基本由生理浓度的以下成分组成的治疗组分: a)选自VEGF、TGF02、血管生成素和TOGF的一种或多种因子， b)至少一种MMP抑制剂；以及 c)载体，其中VEGF的生理浓度为约5.0-16ng/mL，血管生成素的生理浓度为约3.5-4.5ng/mL，PDGF 的生理浓度为约 100_165pg/mL，TGF β 2 的生理浓度为约 2.5-2.7ng/mL，并且其中所述载体为生理盐水、PBS、乳酸盐林格溶液或细胞培养基。
18.权利要求17的组合物，其中所述MMP抑制剂为??ΜΡ-1和/或??ΜΡ-2，并且??ΜΡ-1的生理浓度为约0.68 μ g/ml, TIMP-2的生理浓度为约1.04 μ g/mL。
19.权利要求17的组合物，含有基本由生理浓度的以下成分组成的治疗组分: a)VEGF、TGF02、血管生成素和PDGF，b)TIMP-1 和 / 或 TIMP-2 ；以及 c)载体，其中VEGF的生理浓度为约5.0-16ng/mL，血管生成素的生理浓度为约3.5-4.5ng/mL，PDGF 的生理浓度为约 100_165pg/mL，TGF β 2 的生理浓度为约 2.5-2.7ng/mL, TIMP-1的生理浓度为约0.68 μ g/mL, TIMP-2的生理浓度为约1.04 μ g/mL,并且其中所述载体为生理盐水、PBS、乳酸盐林格溶液或细胞培养基。
20.—种生理性细胞因子溶液的组合物，含有基本上由选自以下的组合物组成的治疗组分和载体:组合物A:VEGF和??ΜΡ-1 ;组合物B:VEGF、血管生成素和??ΜΡ-1 ;组合物C:VEGF、血管生成素、PDGF-BB和??ΜΡ-1 ;组合物D:VEGF、血管生成素、PDGF-BB, TGF β 2和TIMP-1 ;组合物E:VEGF和??ΜΡ-2 ;组合物F:VEGF、血管生成素和??ΜΡ-2 ;组合物G:VEGF、血管生成素、PDGF-BB和??ΜΡ-2 ;组合物H:VEGF、血管生成素、PDGF-BB、TGF β 2和??ΜΡ-2 ；组合物1:VEGF、TIMP-1和??ΜΡ-2 ;组合物J:VEGF、血管生成素、TIMP-1和??ΜΡ-2 ;组合物K:VEGF、血管生成素、PDGF-BB, TIMP-1 和 ??ΜΡ-2 ;组合物 L:VEGF、血管生成素、PDGF-BB,TGF0 2、??ΜΡ-1和??ΜΡ-2 ;组合物M:血管生成素和??ΜΡ-1 ;组合物N:血管生成素、PDGF-BB和??ΜΡ-1 ;组合物O:血管生成素、PDGF-BB, TGF β 2和??ΜΡ-1 ;组合物P:血管生成素和ΤΙΜΡ-2 ;组合物Q:血管生成素、PDGF-BB和??ΜΡ-2 ;组合物R:血管生成素、PDGF-BB、TGF β 2和 ??ΜΡ-2 ;组合物 S:血管生成素、PDGF-BB, TGF β 2、TIMP-1 和 ??ΜΡ-2 ;组合物 T:PDGF-BB和 TIMP-1 ;组合物 U:PDGF-BB、TGF β 2 和 TIMP-1 ;组合物 V:PDGF-BB 和 TIMP-2 ;组合物 W:PDGF-BB, TGF β 2 和 ??ΜΡ-2 ;组合物 X:PDGF-BB, TIMP-1 和 ??ΜΡ-2 ;及组合物 Y:PDGF-BB,TGF0 2、TIMP-1 和 ΤΙΜΡ-2 ;其中 VEGF、血管生成素、PDGF-BB, TGF0 2、TIMP-1 和 ΤΙΜΡ-2为:VEGF 约 5.0-16ng/mL、血管生成素约 3.5-4.5ng/mL、PDGF 约 100_165pg/mL、TGF β 2 约2.5-2.7ng/mL、TIMP-1 约 0.68 μ g/mL、TIMP-2 约 1.04 μ g/mL,并且其中所述载体为生理盐水、PBS、乳酸盐林格溶液或细胞培养基。
21.一种持续释放组合物，包含权利要求17-20的组合物。
22.权利要求21的持续释放组合物，还包含能够实现所述源自胚外细胞的细胞因子溶液的持续释放的药剂，其中所述药剂选自聚合物、聚合物混合物、透明质酸颗粒、微囊化材料或纳米颗粒。
23.一种制备持续释放组合物的方法，包括步骤:将含细胞因子溶液的组合物与能够实现含细胞因子溶液的组合物持续释放的药剂相结合。
24.一种由权利要求23的方法制备的持续释放组合物。
25.—种含有权利要求1-10和14-24任一项的组合物的药物组合物。
【专利摘要】本发明涉及含细胞因子溶液的新组合物(在本文中称为“CFS”组合物)，包括持续释放的含细胞因子溶液的新组合物(在本文中称为“SR-CFS”组合物)；制备这样的新组合物的方法；以及所述组合物的用途。
【IPC分类】A61K45-00, A61K38-18, A61P17-02, A61K38-19, A61K9-00
【公开号】CN104623669
【申请号】CN201510004873
【发明人】V.S.马歇尔, C.A.斯密斯, C.J.特朗博尔, G.L.辛, L.O.帕拉迪诺
【申请人】斯丹姆涅恩有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2008年8月8日
【公告号】CA2696877A1, CN101815531A, CN101815531B, EP2185197A1, EP2185197A4, US8058066, US8088732, US8198239, US8278417, US8283316, US8318665, US8318672, US8530418, US8822415, US20090054339, US20100075905, US20100144604, US20120101036, US20120225048, US20120225815, US20120238495, US20120322731, US20130040880, US20130302307, US20150025007, WO2009025730A1