乙型肝炎病毒核心蛋白和表面抗原蛋白以及包含其的疫苗的制作方法
【专利说明】こ型肝炎病毒核心蛋白和表面抗原蛋白以及包含其的疫苗 发明领域
[0001] 本发明涉及编码こ型肝炎病毒（HBV)核心蛋白、表面抗原蛋白及其片段和组合的 核酸序列；涉及こ型肝炎病毒（HBV)核心蛋白、表面抗原蛋白及其片段和组合；涉及改进的 HBV疫苗；涉及用于诱导针对HBV的免疫反应的改进方法；以及涉及用于预防性地和/或治 疗性地使个体针对HBV免疫的改进方法。
[0002] 背景
[0003] こ型肝炎是全球范围内流行的常见感染，其导致了肝硬化、肝功能衰竭以及肝细 胞癌的发展。显著数量的肝炎病例未被报道出来是因为所述疾病的无症状特性。虽然如此， 毎年仍报道了约3. 5亿慢性こ型肝炎病例。大部分肝炎感染的人群是在不发达国家或者发 展中国家。
[0004] 所述病毒基于其包膜蛋白上存在的抗原表位而被分为四种主要血清型（adr、adw、 ayr、ayw)。根据基因组序列的变化，HBV存在至少八种基因型（A-H)。HBV的替代基因型具 有流行的地理分布。
[0005] 表1示出HBV基因型的地理分布。
[0006] 表IHBV的地理分布
【主权项】
1. 一种疫苗，其包含： (a) 编码一种或多种选自由以下组成的组的蛋白质的核酸分子：SEQ ID NO :10、SEQ ID NO: 14、在SEQ ID NO: 10的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上95 %相同的蛋白质和 在SEQ ID NO :14的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上95%相同的蛋白质；或 (b) 编码一种或多种选自由以下组成的组的蛋白质的核酸分子：SEQ ID N0:12、SEQ ID NO: 16、在SEQ ID NO: 12的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上95 %相同的蛋白质和 在SEQ ID NO : 16的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上95%相同的蛋白质。
2. 如权利要求1所述的疫苗，其还包含： (c) 编码一种或多种选自由以下组成的组的蛋白质的核酸分子：SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4 和 SEQ ID NO :6。
3. 如权利要求1所述的疫苗，其包含： (a) 编码一种或多种选自由以下组成的组的蛋白质的核酸分子：SEQ ID NO :10、SEQ ID NO: 14、在SEQ ID NO: 10的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上95 %相同的蛋白质和 在SEQ ID NO : 14的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上95%相同的蛋白质； (b) 编码一种或多种选自由以下组成的组的蛋白质的核酸分子：SEQ ID N0:12、SEQ ID NO: 16、在SEQ ID NO: 12的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上95 %相同的蛋白质和 在SEQ ID NO : 16的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上95%相同的蛋白质；以及 (c) 编码一种或多种选自由以下组成的组的蛋白质的核酸分子：SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4 和 SEQ ID NO :6。
4. 如权利要求3所述的疫苗，其中所述核酸分子包含一个或多个选自由以下组成的组 的核苷酸序列：SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :11、 SEQ ID NO : 13 和 SEQ ID NO : 15。
5. 如权利要求1所述的疫苗，其中所述核酸分子是质粒。
6. 如权利要求1所述的疫苗，其中所述核酸分子被并入病毒颗粒中。
7. 如权利要求1所述的疫苗，其还包含佐剂分子。
8. 如权利要求7所述的疫苗，其中所述佐剂是IL-12、IL-15、IL-28或RANTES。
9. 一种诱导针对HBV抗原的免疫反应的方法，所述方法包括向受试者施用如权利要求 1所述的疫苗。
10. -种保护受试者免受HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要 求1所述的疫苗。
11. 一种保护已诊断有HBV感染的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用如 权利要求1所述的疫苗。
12. -种核酸分子，其包含编码选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质的编码序列： 包含SEQ ID NO :2的蛋白质；在SEQ ID NO :2的全长氨基酸序列的整个氨基酸序列长度上 95%相同的蛋白质；包含SEQ ID NO :2的蛋白质的为至少20个氨基酸的免疫原性片段；以 及在SEQ ID NO :2的氨基酸序列的整个长度上95%相同的蛋白质的为至少20个氨基酸的 免疫原性片段。
13. 如权利要求12所述的核酸分子，其进一步包含连接至所述蛋白质的N末端的信号 肽。
14. 如权利要求12所述的核酸分子，其编码一种或多种选自由以下组成的组的蛋白 质：SEQ ID NO :2 ;SEQ ID NO :4 和 SEQ ID NO :6。
15. 如权利要求12所述的核酸分子，其包含一个或多个选自由以下组成的组的序列： 包含SEQ ID NO :1的核酸序列；在SEQ ID NO :1的氨基酸序列的整个长度上98%相同的 核酸序列；其片段，所述片段包含编码免疫原性片段的核酸序列，所述免疫原性片段包含由 SEQ ID NO: 1编码的至少20个氨基酸；以及其片段，所述片段包含编码免疫原性片段的核 酸序列，所述免疫原性片段包含在由SEQ ID NO :1编码的蛋白质的氨基酸序列的整个长度 上98%相同的蛋白质的至少20个氨基酸。
16. 如权利要求12所述的核酸分子，其进一步包含连接至所述核酸序列的5'末端的信 号肽。
17. 如权利要求12所述的核酸分子，其包含一个或多个选自由以下组成的组的核苷酸 序列：SEQ ID NO :1 ;SEQ ID NO :3 ;以及 SEQ ID NO :5。
18. 如权利要求12所述的核酸分子，其中所述核酸分子是质粒。
19. 如权利要求12所述的核酸分子，其中所述核酸分子是表达载体，并且编码所述一 种多种蛋白质的序列可操作地连接至调控元件。
20. 如权利要求12所述的核酸分子，其中所述核酸分子被并入病毒颗粒中。
21. 如权利要求12所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含编码一种或多种选自由以 下组成的组的蛋白质的编码序列：包含SEQ ID NO :2的蛋白质的为至少60个氨基酸的免 疫原性片段；以及在SEQ ID NO :2的氨基酸序列的整个长度上98%相同的蛋白质的为至少 60个氨基酸的免疫原性片段。
22. 如权利要求12所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含编码一种或多种选自由以 下组成的组的蛋白质的编码序列：包含SEQ ID NO :2的蛋白质的为至少120个氨基酸的免 疫原性片段；以及在SEQ ID NO :2的氨基酸序列的整个长度上98%相同的蛋白质的为至少 120个氨基酸的免疫原性片段。
23. 如权利要求12所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含编码一种或多种选自由以 下组成的组的蛋白质的编码序列：包含SEQ ID NO :2的蛋白质的为至少180个氨基酸的免 疫