用于治疗代谢综合征的新的洋蓟(Cynara Scolymus)、咖啡属(Coffea spp.)和油橄榄 ...的制作方法
【专利说明】用于治疗代谢综合征的新的洋莉（GynaraScolymus)、咖啡 属（Coffeaspp.)和油橄榄（OleaEuropaea)的提取物
[0001] 发明简述
[0002] 本发明涉及洋蓟（CynaraScolymus)、油撤榄（OleaEuropaea)和咖卩非（Coffea spp.)提取物的新组合，其可用于预防和治疗血脂异常、高血糖、炎症和高血圧，所述參数是 代谢综合征和2型糖尿病两者的特征。所述參数的正常化也通过激素调整的间接机制而影 响了伴随所述综合征的体重増加，从而降低了心血管风险，所述间接机制与酶系统相互作 用的生物化学有关。
[0003] 关于脂质方面，已证实这些提取物的组合显著増加具有低于平均的參数值的患者 的HDL胆固醇值，有利地改变LDL/HDL比，特别是在处于具有不同病因学的血脂异常的心脏 病发作的风险中的患者。
[0004] 还已经证实了通过油橄榄（OleaEuropaea)提取物中的多酚进行的与促进促炎细 胞因子释放的脂肪组织的生物化学机制的相互作用。所述分子被认为是通过改变血管内皮 来促使动脉粥样硬化斑块形成的过程的引发剂。所述活性是除了減少影响cLDL水平的氧 化过程以外的额外活性。 现有技术
[0005] 如从文献中已知的那样，已知朝鲜蓟（artichoke)(洋蓟，Cynarascolymus)提取 物具有促胆汁分泌、利胆、降血糖、抗消化不良和温和的降胆固醇作用；许多临床试验中报 道的胆固醇降低是适度的，从未超过10%，由子方案质量和所用提取物的组成而在各研究 之间有变化。根据文献，活性成分的种类有咖啡酰基奎尼酸，其执行促胆汁分泌、降血糖和 护肝作用；类黄酮，其执行与胆固醇合成有关的降脂质作用；和菜蓟苦素，其由于与核因子 NFkB和TNF-a相互作用而执行抗炎作用。
[0006] 橄榄油一直被认为是地中海饮食的基本成分，还已知其是预防代谢综合征的最天 然形式。科学研究的不断进展已经证实：属于多酚化学种类的一系列微量营养素（存在 于特级初搾油中，甚至超过脂肪酸中的组成）通过抗氧化活性和调节多种酶活性而协同作 用，以保护动脉血管内皮。代谢综合征（其在西方国家归因于不正确的营养和久坐的生活 方式）经常导致血脂异常和肥胖，对于心脏循环器官具有明显不利的后果。生长的脂肪组 织被释放促炎细胞因子和炎症介质如C0X-2和iNOS的巨噬细胞、白细胞所浸润；另外，循环 脂肪酸通过TLR-4受体充当脂肪细胞的信使，TLR-4受体通过活化NF-kB或JNK而诱导炎 症介质的表达。该事件级联产生了称为"静态炎症（silentinflammation)"的状态，其对 血管内皮的侵袭作用引起作为动脉粥样斑块侵袭的部位的损伤，动脉粥样斑块主要引起构 成心血管疾病的基础的动脉粥样硬化和血栓形成症状。
[0007] 在20世纪90年代早期，已经鉴定出植物的次级代谢产物多酚化学种类具有抗氧 化能力，并且已经观察到富含这些化合物的饮食与心血管疾病的低发病率和组织衰老有 关。特别地，在油橄榄（Oleaeuropaea)果实的水溶性部分中存在的两种多酚--毛蕊花 糖苷和羟基酪醇一一不仅在体外试验中被证实有效，而且在临床试验中也给出了令人鼓舞 的结果。羟基酪醇已经获得来自EFSA的有利观点作为LDL氧化抑制剂用于适应症，LDL氧 化是引起动脉粥样斑块形成的继发现象之一。所述两种多酚以不同的量和比例存在于各种 橄榄载培品种中，使它们或多或少地适于产生富集的提取物。
[0008] 获得长久以来在传统和对抗疗法医学中已知的洋蓟（Cynarascolymus)和油橄榄 (Oleaeuropaea)的提取物所需的方法主要存在可重现性和活性成分含量（其结果是临床 数据游走）的问题和当与目前药物相比时治疗有用性低的问题。
[0009] 由未烤制豆制备的咖卩非属（Coffeaspp.)、优选小果咖卩非（Coffeaarabica)提取 物存在与对洋蓟（Cynarascolymus)所报道类似的问题，因为没有提供药物可重现性的标 准方法。提取物的可重现性低取决于多种因素，例如植物生物质及其干燥条件的选择。生 物质的生产构成了该方法的关键阶段，因为对于保持活性成分含量而言关键的干燥条件取 决于植物的生长期。
[0010] 大量的药理学和临床文献主张了朝鲜蓟、橄榄和咖啡的多种有益健康的活性，但 是未充分地描述所用的提取物；实际上，朝鲜蓟存在与ー些活性成分家族降解有关的组成 问题。
[0011] 橄榄提取物的组成受到使用的载培品种和不同的油副产物的影响，而在咖啡提取 物中是否存在咖啡因涉及与所述化合物的经常是相矛盾的活性有关的问题。
[0012] 发明描述
[0013] 本发明涉及组合物，其含有：
[0014] a.菜蓟属（Cynara)提取物，具有30-45%重量的咖啡酰基奎尼酸含量、8-16%重 量的类黄酮含量和10-18%重量的菜蓟苦素含量；
[0015] b.咖啡属（Coffeaspp.)提取物，具有40% -80 %重量的咖啡酰基奎尼酸含量；
[0016]c?油橄榄（Oleaeuropaea)提取物，具有30%-40%的多酚含量，其中毛蕊花糖苷 含量超过5%和羟基酪醇含量超过1. 5%。
[0017] 菜蓟属（Cynarasp.)提取物优选具有35±2%的咖啡酰基奎尼酸含量、12±2% 的类黄酮含量和13±2%的菜蓟苦素含量。
[0018] 咖啡属（Coffeaspp.)提取物优选具有60 ±2 %重量的咖啡酰基奎尼酸含量。
[0019] 咖卩非属（Coffeaspp.)提取物和菜蓟属（Cynarasp.)提取物的重量比为0?5至 2、优选为1。菜蓟属（Cynara)提取物、小果咖卩非（Coffeaarabica)提取物和油橄榄（Olea europaea)提取物的量为100至300mg〇
[0020] 所选的朝鲜蓟载培品种、优选洋蓟（Cynarascolymus)或刺菜蓟（Cynara cardunculus)，更优选洋蓟（Cynarascolymus)用于制备本发明的提取物。WO2007/006391 和WO2008/107183报道了制备提取物的方法。
[0021] 富含毛蕊花糖苷和羟基酪醇的油橄榄（Oleaeuropea)提取物可以在提取油性基 质后通过涉及水-醇提取、在树脂上用水-醇洗脱阶段和最终干燥阶段的制备方法由橄榄 浆（US6358542)制备。制成品呈现出超过30%的最终多酚浓度，并且毛蕊花糖苷含量超过 5%和羟基酪醇含量超过1. 5%。Coratina载培品种的使用是优选的。已经在体外和在志愿 者中证实商品名为Oleaselect?的终产品具有优良的活性，使组织损伤參数处于控制下， 尤其是在富含脂肪的餐食（其为主要危险因素）期间[CerlettiC?等人，SINUTCongress 2010，米兰]。
[0022] 通过用脂族醇、优选こ醇对压碎的豆进行水-醇提取而制备了咖啡提取物，将其 在按照实施例中所述方法用こ酸こ酯反萃取除去咖啡因后在真空中浓缩至干。
[0023] 将小果咖啡（Coffeaarabica)豆用こ醇水溶液提取直到耗尽多酚，将部分提取 物合并并在真空中浓缩至水中；过滤除去不溶性物质后，将水溶液用碳酸氢钠碱化，并用こ 酸ZJ旨/己烷的9:1混合物反萃取以除去咖啡因。酸化至PH2后，将水溶液吸附在聚苯こ 烯吸附树脂上，其中将其用こ醇洗脱。收集最终提取物，并在真空中浓缩至干。获得含有 40-80%、通常为60%的咖啡酰基奎尼酸的提取物。作为使用こ醇作为溶剂从树脂洗脱咖啡 酰基奎尼酸的供选方案，可以有利地使用在氮气存在下的KOH在水中的ImM溶液直到完全 回收咖啡酰基奎尼酸；用阳离子树脂将该弱碱性洗脱液中和至PH5,在真空中浓缩至干。
[0024]供选地，咖啡酰基奎尼酸可以不是通过吸附树脂分离，而是通过用穿过有机膜的 微孔过滤在酸性PH下进行反萃取和用穿过陶质膜的纳滤进行浓缩至预期浓度而分离，然 后在雾化器中干燥。
[0025]合并的提取物已经证实对降低总胆固醇、LDL胆固醇和血糖具有相当大的活性。还 已经出人意料地观察到cHDL増加、炎症參数调控和心血管危险因素減少。
[0026] 根据本发明的一个优选方面，将一部分朝鲜蓟提取物与一部分咖啡提取物混合， 以在最终提取物中获得绿原酸的所有异构形式，绿原酸是多酚家族的主要化合物并且是二 咖啡酰基衍生物。类黄酮来源于木犀草素和菜蓟苦素，其发挥显著的降脂质作用，还通