标志。通常在感染病毒后2-6个 月，血清转氨酶还未上升时，便可在血清中测到阳性。急性乙肝患者绝大多数可以在病程初 期转阴，但慢性乙肝患者会持续阳性。表面抗体是体内对乙肝病毒免疫和保护性抗体，多在 恢复期出现阳性。与此同时，接受乙肝注射疫苗者，绝大多数也呈阳性。e抗原通常在乙肝 病毒感染后，表面抗原阳性同时，或其后数天便可测得阳性。e抗体阳性在抗原转阴后数月 出现。核心抗体一般在表面抗原出现后3-5周，乙肝症状出现前便会在血清中检查出来。
[0054] 本发明中，对于乙肝的治疗主要针对于逆转乙肝五项等乙肝病毒相关指标，包括 (但并不限于）：乙肝表面抗原、乙肝表面抗体、乙肝e抗原、乙肝e抗体、乙肝核心抗体、乙 肝病毒DNA，和ALT。
[0055] 脂肪
[0056] 自体脂肪是整形和抗衰老治疗的优良来源，脂肪组织材料可以来源于腰部、臀部、 腹部、大腿、上臂等部位。本领域技术人员可采用通用的技术方法获得自体脂肪组织，包括 (但不限于）抽吸、手术分离等方法。
[0057] 在本发明中，脂肪组织或脂肪原料没有特别限制，可以是来源于动物或人的任何 部位的脂肪组织，优选人的脂肪组织。较佳地，脂肪组织可以是腰部、臀部、腹部、大腿、上臂 等部位的组织。
[0058] 脂肪间充质祖细胞（Human adipose derived mesenchymal progenitor cells)
[0059] 脂肪来源的间充质祖细胞（Human adipose derived msenchymal progenitor cells, haMPCs):不含CD34+细胞，SVF培养P3-P10代纯化扩增获得。
[0060] 在本发明中，脂肪间充质祖细胞的制备方法可以包括步骤：洗涤脂肪组织，然后用 胶原酶消化，离心分离基质血管成分，除去油脂和胶原酶，培养原代细胞，得到传代后的脂 肪间充质祖细胞。
[0061] 脂肪间充质祖细胞的抗原检测
[0062] 用本发明使用的脂肪间充质祖细胞具有很高的纯度，基本上不含有其他类型的细 胞或干细胞。这可通过细胞表面抗原的检测加以验证。
[0063] 脂肪间充质祖细胞具有多种特异性抗原和受体，主要有⑶3、⑶13、D29、⑶34、 CD45、CD49e、CD59、CD73、CD90、CD105、HLA-ABC 等。
[0064] ⑶34抗原是一种高度糖基化I型跨膜蛋白，它选择性的表达于人类造血干细胞 (HSC)，祖细胞（PC)和血管内皮细胞（EC)表面，带有CD34的脂肪间充质祖细胞在总干细胞 的比例优选为彡0. 2%，更佳地，彡0. 2%。
[0065] ⑶45存在于所有造血细胞的表面，包括造血干细胞和破骨细胞。带有⑶45的脂肪 间充质祖细胞在总干细胞的比例优选为< 〇. 1%。
[0066] ⑶29、⑶73、⑶49d、⑶90等主要存在于脂肪间充质干细胞表面。
[0067] 带有⑶29的脂肪间充质祖细胞在总干细胞的比例优选为> 30%，更佳地> 32%，最 佳地彡35%。
[0068] 带有⑶73的脂肪间充质祖细胞在总干细胞的比例优选为> 50%，更佳地> 60%，最 佳地彡70%。
[0069] 带有⑶49d的脂肪间充质祖细胞在总干细胞的比例优选为> 85%，更佳地> 90%， 最佳地> 95%。
[0070] 带有⑶90的脂肪间充质祖细胞在总干细胞的比例优选为> 55%，更佳地> 60%，最 佳地> 65%。
[0071] 本领域内技术人员可以使用通用的方法检测脂肪间充质祖细胞的纯度和分化程 度，如流式细胞仪法。检测时，加入不同的与有针对性的特异抗体，抗体可以是完整的单克 隆或多克隆抗体，也可以是具有免疫活性的抗体片段，如Fab'或（Fab) 2片段；抗体重链； 抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子（Ladner等人，美国专利No. 4, 946, 778);或嵌合抗 体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。加入抗体与细胞表面的 抗原结合一定时间，用流式细胞仪对细胞进行自动分析和分选。
[0072] 药物组合物
[0073] 本发明还提供了一种药物组合物，它含有有效量的脂肪间充质祖细胞，以及药学 上可接受的载体。
[0074] 通常，可将脂肪间充质祖细胞配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体 介质中，如生理盐水中，其中pH通常约为5-8,较佳地，pH约为7-8。
[0075] 如本文所用，术语"有效量"或"有效剂量"是指可对人和/或动物产生功能或活 性的且可被人和/或动物所接受的量。
[0076] 如本文所用，"药学上可接受的"的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良 副反应（如毒性、刺激和变态反应）的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语"药学上 可接受的载体"指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。
[0077] 本发明的药物组合物含有安全有效量的脂肪间充质祖细胞以及药学上可接受的 载体。这类载体包括（但并不限于）：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。通 常药物制剂应与给药方式相匹配，本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理 盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。所述的药物组合物宜在无 菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量。本发明的药物制剂还可制成缓释制剂。
[0078] 本发明所述脂肪间充质祖细胞的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重 程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定（例 如通过临床试验）。所述的因素包括但不限于：所述药代动力学参数例如生物利用率、代 谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径 等。
[0079] 本发明的药物组合物优选为皮下或静脉注射试剂。在另一优选例中，所述的 皮下或静脉注射试剂中脂肪间充质祖细胞的浓度为IX l〇3-2X IO6个/ml，较佳地为 I X IO4-I X IO6 个 /ml，更佳地为 I X 105-5 X IO5 个 /ml。
[0080] 本发明的主要优点：
[0081] (1)脂肪间充质祖细胞对于肝炎（特别是乙肝）有显著的预防或治疗作用，特别是 表现为乙肝表面抗原、乙肝表面抗体、乙肝e抗原、乙肝e抗体、乙肝核心抗体等乙肝病毒相 关指标的逆转；
[0082] (2)脂肪间充质祖细胞使乙肝细胞多种表面抗原下降，病毒DNA显著减少，并减低 谷丙转氨酶ALT ;
[0083] (3)脂肪间充质祖细胞可以促进肝功能的修复。
[0084] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
[0085] 实施例1脂肪间充质祖细胞的培养
[0086] 1.无菌手术器械及耗材
[0087] (1)无菌长柄手术镊子5把
[0088] (2)无菌100目滤网
[0089] (3)灭菌40目滤网
[0090] (4) 50ml 离心管
[0091] (5)T175、T75 培养瓶
[0092] (6) TlOml、T25ml 移液管
[0093] (7)宽口吸头移液管
[0094] 2.无菌试剂：
[0095] (I)StemPro 〇 RMSC SFM 培养基（life)
[0096] (2) I型胶原酶（现配现用）：0. 1%胶原酶I配制方法：称取0.1 g胶原酶I粉末溶 解于100mL未加任何因子的培养基中，用之前37°C进行预热。
[0097] (3)氯化钠注射液
[0098] (4) 0· 125%Trypsin_0.0 P/oEDTA 溶液
[0099] 实施方案
[0100] 1.接收脂肪组织，用75%的酒精擦拭装脂肪组织的容器外壁；
[0101] 2.分装脂肪组织，每一个T175培养瓶分装脂肪组织为50ml。IOml移液管，去吸 头，于脂肪采集瓶中先吸取下层红色液体弃掉，剩余上层脂肪混匀后进行分装。
[0102] 3.洗涤脂肪组织，除去血细胞。向T175培养瓶中加入100mL氯化钠注射液，拧紧 盖子，剧烈晃动3分钟以充分洗涤脂肪组织，接着静止3-5分钟，使不同相分离，吸去下层水 相；重复以上操作三次，直到下层液变为清澈。
[0103] 4.胶原酶I消化：加入等量新配制的预热（提前半小时于37°C的气浴摇床预热） 的胶原酶I溶液，封口膜封口，剧烈晃动培养瓶5~10秒，置于振动气浴锅中，37°C，70rpm， 消化60分钟，每隔15分钟剧烈晃动培养瓶5~10秒，直到看起来较为平滑。
[0104] 5.分离基质