用于治疗乙肝的脂肪间充质祖细胞的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及脂肪干细胞应用领域，具体地，本发明提供了一种脂肪干细胞用于治 疗乙肝的用途。
【背景技术】
[0002] 肝病分为病毒性肝病和非病毒性肝炎。病毒性肝炎主要包括甲、乙、丙、丁、戊型病 毒性肝炎，非病毒性肝病主要包括酒精性肝病、药物或毒物性肝病、新陈代谢异常性肝病、 脂肪性肝病。慢性乙型肝炎呈全球分布，可能导致包括肝功能失代偿、肝硬化以及肝细胞癌 等疾病。活动性乙肝病毒（HBV)复制是肝损伤和疾病进展的主要驱动因素。
[0003] 重型乙型肝炎是感染HBV后导致的重型肝炎，其发病凶险，进展迅速，绝大部分患 者预后不良，可迅速出现大面积肝细胞坏死导致肝功能严重受损，肝脏代谢、排泄和解读的 功能减退。从而导致机体免疫能力下降，造成恶性循环。目前临床上缺乏有效的治疗手段， 主要是血浆置换和肝移植，但由于供体缺乏，很多患者在等待移植供体期间死亡。因此，及 时有效的肝功能支持和促进肝细胞再生可能帮助肝功能衰竭患者无需肝移植而自行恢复 或者度过等待移植的难关。
[0004] 传统药物α干扰素能够有效地抑制病毒复制，疗效相对持久，但其适用的人群范 围窄，不良反应发生率较高。而新一代的干扰素-聚乙醇化干扰素，它的疗效略优于普通干 扰素，但其仍然具有使用患者群窄，不良反应发生率较高，价格较贵的缺点。拉夫米定是第 一个核苷类似物，能够快速、持久抑制病毒复制，改善肝功能，延缓乙肝疾病进展的药物，但 其HBeAg血清转阴率低。文献报道服用拉米夫定1年HBeAg血清转阴率为16%左右，停药 后容易复发、病毒不能彻底清除随治疗时间延长，病毒耐药突变的发生率增高（第1、2、3、4 年分别为14%、38%、49%、66%)。阿德福韦酯长期治疗耐药发生率低，对拉米夫定耐药者仍有 效，但其抗病毒作用较弱，起效慢，有潜在的肾毒性。恩替卡韦的抗病毒作用强，耐药率低， 在动物实验发现致癌性，且价格较贵。替比夫定抗病毒作用强，HBeAg转换率高，但其变异率 较高，有肌酸激酶升高等副作用，上市时间短，抗病毒作用，长期疗效和安全性都有待证实。 核苷（酸）类似药物均不能随便停药，长期服用乙肝病毒轻易发生变异耐药，也会出现像流 感样、厌食、恶心、腹泻、抑郁、心绞痛等副作用。而且，抗病毒治疗只能抑制HBV复制，不能 彻底清除病毒，也无法修复肝炎导致的肝细胞坏死。
[0005] 目前，乙肝的治疗主要是抗病毒治疗。而现阶段的抗病毒药物只能抑制HBV复制， 尚不能彻底清除病毒，也无法修复肝炎导致的肝细胞坏死。因此感染乙肝病毒后容易形成 慢性乙肝，有可能导致肝硬化、肝癌等发生。
[0006] 综上所述，本领域尚缺乏一种能够有效治疗乙型肝炎，特别是能够彻底清除乙肝 病毒，修复肝炎导致的肝细胞坏死的手段。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种能够有效治疗乙型肝炎，特别是能够彻底清除乙肝病 毒，修复肝炎导致的肝细胞坏死的手段。
[0008] 本发明的第一方面，提供了一种脂肪间充质祖细胞的用途，其特征在于，用于制备 治疗乙肝的药物组合物。
[0009] 在另一优选例中，所述的脂肪间充质祖细胞是传代培养的脂肪间充质祖细胞。
[0010] 在另一优选例中，在所述组合物中，主要活性成分仅为脂肪间充质祖细胞。
[0011] 在另一优选例中，所述的组合物中，所述脂肪间充质祖细胞的含量为IXlO5/ ml-lX108/ml。
[0012] 在另一优选例中，所述的药物组合物包括：脂肪间充质祖细胞，和药学上可接受的 载体。
[0013] 在另一优选例中，所述的载体是输液剂载体和/或注射剂载体。
[0014] 在另一优选例中，所述的治疗包括选自下组的一项或多项指标改善：
[0015] 乙肝表面抗原、乙肝表面抗体、乙肝e抗原、乙肝e抗体、乙肝核心抗体、乙肝病毒 DNA，和 ALT。
[0016] 在另一优选例中，所述的脂肪间充质祖细胞具有选自下组的任一或多种特征：
[0017] ⑴80%以上的细胞具有表面抗原⑶29 ;
[0018] (ii) 70%以上的细胞具有表面抗原⑶73 ;
[0019] (iii)60%以上的细胞具有表面抗原⑶105 ;
[0020] (iv) 70%以上的细胞具有表面抗原⑶90。
[0021] 在另一优选例中，90%以上的细胞具有表面抗原⑶29。
[0022] 在另一优选例中，80%以上的细胞具有表面抗原⑶73。
[0023] 在另一优选例中，70%以上的细胞具有表面抗原⑶105。
[0024] 在另一优选例中，80%以上的细胞具有表面抗原⑶90。
[0025] 在另一优选例中，所述的脂肪间充质祖细胞具有选自下组的任一或多种特征：
[0026] (V)在细胞群中，10%以下的细胞具有表面抗原⑶34 ;
[0027] (vi)在细胞群中，10%以下的细胞具有表面抗原⑶45。
[0028] 在另一优选例中，5%以下的细胞具有表面抗原⑶34。
[0029] 在另一优选例中，5%以下的细胞具有表面抗原⑶45。
[0030] 在另一优选例中，1%以下的细胞具有表面抗原⑶34。
[0031] 在另一优选例中，1%以下的细胞具有表面抗原⑶45。
[0032] 本发明的第二方面，提供了一种用于预防或治疗肝炎的药物组合物，所述的药物 组合物包括：有效量的脂肪间充质祖细胞，以及药学上可接受的载体。
[0033] 在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体包括（但并不限于）：盐水、缓冲液、 葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。
[0034] 在另一优选例中，所述的药物组合物为静脉注射试剂。
[0035] 在另一优选例中，所述的静脉注射试剂中脂肪间充质祖细胞的浓度为 0. 1-100 X IO4 个 /ml，较佳地为 1-10 X IO4 个 /ml，更佳地为 2-5 X IO5 个 /ml。
[0036] 在另一优选例中，所述的注射试剂的体积为30_70ml。
[0037] 本发明的第三方面，提供了一种预防或治疗肝炎的方法，包括步骤：给需要的对象 施用脂肪间充质祖细胞或脂肪间充质祖细胞群、或含有脂肪间充质祖细胞或脂肪间充质祖 细胞群的药物组合物。
[0038] 在另一优选例中，所述的对象为人或非人哺乳动物。
[0039] 在另一优选例中，所述的非人哺乳动物为鼠、兔、牛、羊、猪等。
[0040] 在另一优选例中，所述的施用方式为静脉回输。
[0041] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附图说明】
[0042] 图1脂肪细胞分化的油红0染色；
[0043] 图2脂肪细胞分化的油红0染色对照组（阴性）；
[0044] 图3成骨细胞分化茜素红染色检测；
[0045] 图4成骨细胞分化茜素红染色检测对照组（阴性），未分化的细胞染色为阴性；
[0046] 图5流式检测试验图谱。
【具体实施方式】
[0047] 本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现，脂肪间充质祖细胞具有极其优异 的预防或治疗肝炎（尤其是乙型肝炎）的作用。具体地，给需要的对象施用本发明的含有 脂肪间充质祖细胞的药物组合物，对于肝炎有显著的预防或治疗作用，可以使多种表面抗 原下降，病毒DNA显著减少，并减低ALT，促进肝功能的修复。在此基础上，发明人完成了本 发明。
[0048] 术语
[0049] 如本文所用，术语"以上"和"以下"包括本数，例如"95%以上"指彡95%，"0. 2%以 下"指彡0· 2%。
[0050] 乙型肝炎
[0051] 乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒（HBV)感染机体后所引起的疾 病。
[0052] 乙肝病毒宿主范围狭窄，且具有明显的嗜肝性，体外培养难度大。乙型肝炎模型涉 及乙肝病毒感染及感染后机体免疫反应，因此在治疗过程中不仅需要修复肝脏受损细胞， 还需要抑制体内病毒复制及调节免疫反应，与非病毒性肝炎有较大的区别。目前，动物模型 主要利用免疫缺陷的动物制成人HBV动物模型。其要求主要是与人临床肝炎特征相似，病 毒血症以及血液中免疫学指标维持一定时间，在最大程度上还原乙肝病毒感染人体的疾病 状态。而非病毒性肝炎模型，例如酒精性肝病模型、药物性肝炎模型等直接通过饮食或药物 进行干预，损伤动物肝脏细胞功能，模拟人体肝炎的临床表现。
[0053] 常见的乙肝检测指标"乙肝五项"包括乙肝表面抗原、乙肝表面抗体、e抗原、e抗 体、核心抗体。表面抗原是乙肝病毒的外壳蛋白质，自身不具有传染性，但它的出现常伴随 着乙肝病毒的存在，因此它的阳性为已经感染乙肝病毒的